Biofabricas

lunes, 27 de marzo de 2023 09:51 a. m.

Terminos a conocer

Herencia: paso de caracterizticas (fisicas,mentales,fisiologicas, etc) de una generacion a otra

Gen: Unidad basica de herencia ---> hay distintas definiciones de gen según su profesion (bioquimica, biologia mol, genetica, etc)
Estructura del ADN: semiconservativa(Tiene una hebra madre y una hebra hija, se conserva una y la otra es nueva),
complementariedad(adenina con uracilo/guanina), polinucleotidos de doble cadena.
Dogma central: DNA-->replicacion/duplicacion RNA-->Proteina

Purinas: Adenina y Guanina

Pirimidas : Tinina, Citocina y Uracilo

Alelos: diferentes presentaciones de un gen (ej. Chícharo arrugado y chícharo liso)

Gne dominante: se representa con letra mayuscula
Gen recesivo: Se representa con letra minuscula

Homocigoto: Organismo que tiene el mismo alelo para un locus (Ej. AA/aa)
Heterocigoto: Organismo que tiene 2 alelos distintos( Ej.Aa/Bb
Codigo Genetico
Locus/loci:Donde se ubica el gen y la información genética, se "empaqueta"
1865 Gregor Mendel descubrimiento de los genes

Gameto: Celulas reproductivas y son haploides (ovulo y espermatozoide en seres humanos)

Cromosoma: empaquetado del ADN
Ploidía

Haploide:

Cuadro de Punnet

Diploide:
Triploide:

Genes autosómicos: cromosomas del 1-22

Genes sexuales: cromosoma 23 ya sea mujer xx u hombre xy, implica los genes que se heredan de manera distinta entre hombres y
mujeres(teóricamente el hombre puede definir el sexo del producto)
Enfermedades relacionadas al sexo Autosómica
Herencia ligada al sexo = Relacionada a los Genes Sexuales , enfermedades ligadas al sexo los hombres no pueden ser portadores,
las mujeres si

Ley de la uniformidad:
Si se cruzan 2 líneas puras (padres puros homocigotos) para un determinado carácter, sus descendientes serán iguales entre si
fenotípica y genotípicamente, y son fenotípicamente iguales a uno de los progenitores-8de genotipo dominante),
independientemente de la dirección del cruzamiento (no importa cuál sea el macho y cual la hembra)

Ley de la segregación
Ley que establece que durante la formación de los gametos cada alelo de un par se separa de otro miembro para determinar la
constitución genética del gameto filial

Ley de la Trasmisión independiente de alelos

Mendel concluyo que diferentes rasgos son heredados independientemente unos de otros, no existe relación entre ellos, por lo
tanto el patron de herencia de un rasgo no afectara al patrón de herencia de otro

Existen execpciones de lo anterior ya que se recombinan los cromosomas pero no es común, es un proceso que genera variabilidad
genetica

Realizar glosario

Operón: hay un promotor, operador (prender o apagar el gen según se necesite), genes y sistemas regulatorios
En la meiosis se forman los gametos Eucariota : sistema proximales, factores regulatorios y los genes de eucariotas son normalmente de un solo gen --> exonitron: tiene regiones
Equilibrio Hardy-Weinberg que se codifican y otras que no se codifican

Código genético : Como se lee el ADN en aminoácidos para convertirse en proteínas

Las moléculas que se generan con los genes son las proteínas y algunos RNAs funcionales
Poliploidía Procariota: no tiene núcleo(no tiene organelos ), Isis trónica
Eucariota: si tiene núcleo (tiene organelos)
No todas las células son diploides Marco de lectura: existen 3 marcos de lectura en una cadena por que se lee en tripletes por lo que en el ADN existen 6

El codigo genetico es degenerado

debido a que se va degenerando la
importancia de las bases por la
determinación ya que importa si es
purina, metina etc.
El codigo genetico no es universal ya
que la mayoria de los organismos
usan este cogido genetico pero tiene
otros organismos un codigo genetico
con variaciones.
Tipos de mutaciones
Somatica: No pasan a la desendencia por que son en las celulas somaticas
De linea germinal: Heredable en las celulas sexuales --> no es igual a la herencia ligada al sexo (enfermedades hereditarias)
Mutaciones genica: afectan al gen supresor de tumores (cambian letras en el gen)
Mutacion cromosomica: son comúnmente sindromes como sindrome de down, puede faltar pedasos de cromosomas, tener un cromosoma
mas o que te falte un cromosoma (un pedazo de cromosoma se ve afectado y puede afectar a mas de un gen)

Diferencia de genetica y genomica

La genetica se encarga de buscar un gen en específico y la genómica estudia todos los genes en general

Meiosis 1 recombinacion
Meiosis 2 disminucion cromosomica (separacion de los cromosomas)

Meto génesis:
proceso en donde
pasa de la meiosis
a formar
espermatozoide u
ovulo según el
sexo xx o xy

Reto
Subclonacion de un minigen para la
generacion de un modelo de pez
cebra con exprecion ectopica de la
distrofia miotonica tipo 1
La distrofia que se va a trabajar afecta
musculos y organos
Congenita: de nacimiento
Tipo 1: Gen afectado DMPK
Tipo 2: CNBP
Hay un fenómeno de anticipación
Gen de esta distrofia esta en el 19 y es
autosómico en una expansión de
tripletes CTG
Macromoléculas: Ácidos Nucleicos y Proteínas.
La biosfera es toda la materia viva que hay en la tierra
Se parte de átomos se vuelve moléculas (organelos que contienen su propio ADN que a lo largo del proceso evolutivo de la vida se fueron
dividiendo en mitocondria y cloroplasto), las enzimas tienen función catalítica, y de moléculas se vuelven células (la célula es la molécula
básica estructural de los seres vivos), las celulas forman tejidos (estos tejidos se vuelven órganos o huesos) el conjunto de organos forman
un sistema y el sistema un individuo, cuando hay varios individuos similares se le considera especie.
Los biónicos da un ecosistema y el conjunto de ecosistema da un paisaje
Proseso de reduccion de cromosomas
Meiosis
Competencia intraespecífica: de la misma especie, ej. 2 elefantes peleando por territorio Alelo: Diferente representación de un gen10
aparatos que son común en laboratorio de
Puntualísimo: es una relación de ganar- ganar biología molecular , que se comparte con
otros laboratorios, que se hace, y que equipo
Parasitismo: una se muere y la otra se beneficia (forma de depredación) es exclusivo para el lab de biología molecular
Autosomico:
Comensalismo: una especie le da igual y la otra se beneficia
SRT: desarrolla testiculos
El mejor parasito es el que no mata a su hospedero.
En sistema biológico los mejores parásitos son los gusanos
Por otro lado los peores parásitos son aquellos que matan a su huésped porque tienen que buscar a otro

Amensalismo: uno le da igual y el otro pierde

Neutralismo: una relación neutralista es igual a que no hay relación

Competencia: ambos pierden

Existen 4 macromoléculas, no depende de un flujo genico o una relacion directa en carbohidratos y lipidos, 1 unidad=monosacar idos, son
importantes en el proceso de glucolisis ya que se rompe la molecula y se vuelve en 2 piruvatos

Litotoficos son bacterias que no funcionan con glucosa La lactosa es importante por el operón de la azúcar
Lactosa: azúcar de la leche El tipo de sangre se difiere por el antígeno que es un polisacárido.
Alimentos mas nutritivos es la leche y los huevos De igual forma hay polisacáridos Estructural, glucanos, y quitina.
Hay 3 tipos de mamiferos Celulosa es el constituyente más abundante en la pared celular de las
Monotremas plantas
Marsupiales Las plantas tienen 3 constituyentes.
Asentados Hemicelulosa, lignina(da soporte y da protección contra insectos o
microorganismos como hongos) y celulosa.

Biofabricas página 1
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 Existen 4 macromoléculas, no depende de un flujo genico o una relacion directa en carbohidratos y lipidos, 1 unidad=monosacar idos, son
importantes en el proceso de glucolisis ya que se rompe la molecula y se vuelve en 2 piruvatos

Litotoficos son bacterias que no funcionan con glucosa La lactosa es importante por el operón de la azúcar
Lactosa: azúcar de la leche El tipo de sangre se difiere por el antígeno que es un polisacárido.
Alimentos mas nutritivos es la leche y los huevos De igual forma hay polisacáridos Estructural, glucanos, y quitina.
Hay 3 tipos de mamiferos Celulosa es el constituyente más abundante en la pared celular de las
Monotremas plantas
Marsupiales Las plantas tienen 3 constituyentes.
Asentados Hemicelulosa, lignina(da soporte y da protección contra insectos o
microorganismos como hongos) y celulosa.

Lipid related molecules: Los fenómenos que tienen una función y de repente cambian se les
llama EXAPTACION
Carotenoides: plantas y algas Ej. La pluma antes era para protección térmica y actualmente se usa
Esteroides: adolesencia en cambios secundarios para vuelo en la naturaleza
Corias: dispersores de semillas (otra especie)
Los lípidos no se mezclan son insolubles, función nutricional, glicéridos
Para los aminoacidos el grupo R caracteriza si son grupos polares o triglicéridos
O no polares (+o-) Fosfolípidos son estructurales.
HAY MAS DE 20 AMINOACIDOS

PH bajo= muchos protones en el medio

En la campana a la mitad se puede pensar que esta el equilibrio eléctrico
Una proteína debajo de su punto isoeléctrico tiene cargas negativas y arriba tiene cargas positivas (debido a que se protonan y se
desprotonan)
Las proteinas negativas se movía a las proteinas positivas y viceversa hasta que llegaban a su punto isoeléctrico, ahí dejaba n de moverse

CABLES
Rojo + Negro -

En le isoelectroenfoque

Geles de 2 dimensiones: ya que se corrió por carga, ahora se corre por tamaño, y se expresa como "puntos" en el gel
El splicyalternativo hace que el genoma sea menor que el protioma

En el gel se coloca un marcador de proteinas con un punto isoelectrico determinado, se toma una muestra de proteina y depend iendo del
punto isoeléctrico se va a parar (por carga)
Con una navaja se corta la proteína "problema" y se vuelve a correr en otro gel pero en este gel se divide por tamaño mediant e una malla
en donde las moleculas pequeñas se expresan mas lejos que las moleculas grandes debido al tamaño

SDS envuelve a la proteina en una burbuja de cargas isoelectricas *

Geles en donde las proteinas estan desnaturalizadas

Zimógeno: activa o inactiva (las proteínas no necesariamente tienen que estar emparejados con algún zimógeno), ya que si se l legara a
romper podria afectar al punto isoelectrico real alterandolo

Enlaces peptidos¿cos se da entre el grupo OH N con el Gpo amino NH3

El primer amino s ele llmana amino terminal y el ultimo carboxilo se le llama carboxyl terminal --> siempre es del amino al carboxilo

El plegamiento de las proteinas se da en el momemnto que se estan traduciendo

Dogma Central de la Biologia Molecular

cDNA: es una particularidad del RNA donde se utiliza para complementar al DNA
DNA --> proteina se puede hacer por computadora

Genoma: el conjunto del todo el material genético

Genotipo: lo que el genoma tiene

Fenotipo: lo que se observa en el individuo

Proteoma: conjunto de todas las proteínas que se sintetizan pero depende de las condiciones ambientales

Surface: Una reacción quimica se da por la probabilidad de que las 2 cosas que reaccionaran se encuentren
Pilly: pequeños tubos que permiten que las células puedan compartirse material genético en forma de
plásmidos. Proteina FTsZ sensibles a la temperatura, es como el "citoesqueleto" de las células procariotas.
Ej. Resistencia a un antibiótico
DNA: acidos nucleicos (Desoxirribonucleico) A,G,T,C
El detergente rompe enlaces peptídicos por lo que al colocarlo en las células rompe los fosfolípidos, el
tiempo en el que el jabon tiene Pronúcleo/ pseudonucleo : No tiene un verdadero nucleo
Flagelo: son los propulsores que se encuentran en la parte de atrás de la células, gira como una propela
en direccion contra las manecillas de reloj, giro Olicodial Polimorfismos de un solo nucleotido, donde un nucleotido de DNA cambia
La polimerasa es una enzima que replica el DNA y RNA
Las aqueas tienen pseudopeudicano PCR: desnaturalizacion del ADN, reaccion de cadena d ela polimerasa que con cierta temperatura se
Hami: son "Ganchos" para agarrarse con otra celula puede separar
Cannula: aparece para conectar las células despues de la divison Termofilos Acuaticos: resistente a altas temperaturas, se uso la polimerasa que resite el calor y funciono
para producir su propia polimerasa
Citoplasma: El plasma celular , liquido interno en el que se dan als reacciones bioquimicas, tienen un
citoesqueleto (matriz estracelular) Para modificar el DNA se necesita una enxima que corte el DNA: enzimas de restricción
80% agua Ej. Pirojenos
20% proteinas, carbohidratos, lipidos, iones inorganicos y moleculas compuestas con peso ligero Eco-c1
Se encontro que los plasmidos tenian genes que funcionaban, asi como las ligasas que pueden volver a
Se creia que las procariotas no tenian citoesqueleto, pero ahora se sabe que posee algo similar al unir el DNA
citoesqueleto de la celula eucariota
La ingenieria genetica se uso parala creacion de medicamento: como la insulina (R -Insulona insulona
recombinante)
CRISPR-Cas9 vienen de arqueas, ya que es su sistema de defensa, cuando un virus llega y ataqua a un
arquea, ella lo identifica, lo corta, lo quita y vuelve a poner su DNA
El nucleoide esta compuesto el 60% de DNA y una pequeña parte de RNA y proteina
Ribozimas están echas de ácidos nucleicos principalmente de RNA

Helicasas (desenrolla) y topoisomerasas ( hace pequeños cortes para liberar presión) se necesitan para
separar las cadenas de ADN
El DNA se enrolla para "empaquetarse"

En los eucariotes se enrrolla el DNA y las proteinas

Histonas: generan un "carrete" y el DNA se enrrolla sobre ese carrete donde se generan "empaques" entre varios carretes de histonas

Procariotes: Haploide 1 juego de DNA

Eucariotes: Diploides 2 copias de DNA y poliploides varias copias de DNA

Los procariotes presentan plasmidos

Los eucariotes rara vez presentan plasmidos

En los procariontes el 12% del DNA "no se sabe para que sirve"
En los eucariotes eñ 98% del DNA "no se sabe para que sirve"

Division Celular: Proceso en donde las celulas se dividen generando de celulas madres celulas hijas

Procariontes si se dividen y dan una Fisión Binarias

Eucariontes: se dividen pero presentan 2 secciones la meiosis y la mitosis (división de celular diploide) Telomerasa: estructura en las orillas de los cromosomas que sirve para engancharse

En la reproducción sexual esta la meiosis

A=Ԑ C l (Absorbancia)
Organización de espacio
Bradford/lowry
C(mg/ml) BSA
Se utilizan lupas para visualizar mejor insectos como la mosca de fruta para observación y análisis
Congelador -20 °C
0
Refri 4°C
0.2
Encubadora 18°C
0.4
0.6
Bi destilada (agua que paso 2 veces por el proceso de purificación)
0.8
Destilada (agua que paso 1 vez por el proceso de purificación)
1.0
Los agentes cancerígenos se lleva el epitelio (tejido que cubre los órganos)
Se mide la absorbancia de esos valores
Cancer biologico --> Virus
Posteriormente se grafica
Se obtiene la ecuación de la gráfica y R^2
Wet Lab: soluciones
La correlación es siempre menor a 1
Ej. Colocar 150 ml de ácido, posteriormente se coloca menos a
Se realiza un ajuste con los mínimos cuadrados
gua ej 100 ml
¿Extrapolo o interpolo? --> La grafica lo determina
0.1-1 Absorbancias arriba de 1 se está determinando mal
%V/V o % W/V

DISOLUTO + DISOLVENTE
M
N
% W/V O V/V
C1 V1 = C2 V2
C1=Concentración más alta

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 ¿Extrapolo o interpolo? --> La grafica lo determina
0.1-1 Absorbancias arriba de 1 se está determinando mal
%V/V o % W/V

DISOLUTO + DISOLVENTE
M
N
% W/V O V/V
C1 V1 = C2 V2
C1=Concentración más alta
NaCl 5 g/L 150 ml NaCl 0.9%

0.9g/100ml (1000ml/x)
V1=( 9g/L /15g/L) (150ml)
El volumen tiene que ser menor en relación al volumen total

PH medida de concentración de iones

Refleja la acidez o basicidad de una concentración

BUFFER (acelera la reacción)

Pka= concentración del ácido y su base PH =PKa

conjugada donde son iguales

Tiene una unidad arriba y una unidad debajo FORMULA Pka

de su Pka ej. Buffers cercanos a un Pka 5
PH=Pka + log ([Base]/[Acido])
Se utiliza un buffer o un amortiguador para Buffer de acetatos muy usados en
evitar tener alteraciones de las proteínas en biologia molecular
Curvas de crecimiento su PH CH3 COOH/CH3COONa
N
N Stationary Ej Pka=4.7
Punto de inflexión=momento en donde
cambian las cosas
Lag Death ---------------------------------------------------------- Entonces:
PH=4.7
Lag T CH3 COOH = 0.5M Pka=4.7
T CH2 COONa =0.2M 4.7=4.7 + log [b]/[a]
1800--> 0=0 log [b]/[a]
C1 V1= C2 V2 10 ^0=1 [b]/[a]
0.5M V1=0.033 * 250ml Acido 1=[b]/[a]
[b]=[a]
Relación del volumen
Primero agua luego base y finalmente acido, se Ej. PH = 5
coloca el potenciómetro y se afora con agua Pka= 4.7
Va= 16.5ml resultado
5=4.7 + log[b]/[a]
Ahora si: 0.3= log [b]/[a]
Hay mas variabilidad genética en procariontes que en eucariontes 0.5M V1= 0.067 *250ml Base 1.99=[b]/[a]
Vb=33.5ml
Cigoto= union de espermatozoides y óvulos para formar un producto Si CT=0.1 M entonces
Modula= conjunto de celula grande que tiene muchas celulas 0.1=[b]+[a]
[b]=0.1-[a]
E+S <-> ES->E+P
K1 K2 1.99=0.1-[a]/[a]
k-1 1.99[a]=0.1-1[a] (se juntan las a )
2.99[a]=0.1
La igualdad de una y otra se da lo que se conoce como estado estacionario [a]=0.1/2.99
[a]=0.033
Muchas enzimas se aproximan a este modelo pero no es el unico [b]=0.1-0.033
Vel formación= Vel ruptura del complejo enzimático [b]=0.067

(82g CH2 COONa / 1 mol)(0.25 L)=?

TBE Y TAE (electroforesis) Se necesita la densidad del ácido

Se utiliza el TAE cuando se requiere para clonación, se ve mejor para bandas grandes acético debido a que es liquido
TBE es para ver mejor resolución para bandas mas pequeñas
2% es bueno para bases pequeñas
Se utiliza elq ue se pose a en laboratorio Características del plásmido
TAE + económico - Moléculas pequeñas que se pueden ingresar fácilmente en una célula
Buffer= Tapón o amortiguador - Son fáciles de manipular
- Fáciles de replicar (Autorreplicable)
Escalera Molecular: moléculas que tienen diferentes bandas de tamaños predefinidos y nos sirven como - Estables
referencias - Funcional en diversas especies de aplicaciones
Escaleras= Bacteriofambolanda--> virus que mataba las bacterias fragmentaba el genoma y lo dejaba en - Posee un gen de resistencia a los antibióticos para que no se muera las bacterias que tienen
tamaños predefinidos el plásmido( hacer preselección)
- Promotor: indica que se tiene que transcribir
Si se tienen dos bandas con un tamaño muy similar lo que se puede hacer es: - MCS: Sitio de replicacion multiple que tiene entre 30-40 bases por lo que tiene 30-40 pares
Cambiarla concenrracion del buffer, hacer mas grande el gel para correrlas de clonacion (No es necesario que sea múltiple)
- Origin: origen de replicacion
A la hora de derretir la agarosa se recomienda colocar 10% mas debido a que se pierde al calentarlo - AB resistance:Resistencia a antibioticos
para mezclarlo

Electroforesis capilar en lugar de generar un gel se generan unas bases (fragmentos) que pasan por un
capilar, el capilar tiene un detector que detecta los fragmentos que pasan y es más precisa Ampicilina TET
se quita la resistencia de tetracilina

Poliacrilamida en lugar de agarosa se usa en la electroforesis de proteínas se mide en dalton (masa

molecular)

---> Aquí esta la modificacion, debido

Generacion parental-->P que se quito el gen de tetracilina por
Generacion Filial-->Fn lo que el plasmido no crecio en esta
Locus--> posicion especifica en un cromosoma ocupado por un alelo zona
Homozygous Homocigotos (linea pura)--> organismo diploide donde un genotipo contiene 2 alelos
identicos en un determinado locus
Heterozygous Heterocigotos--> 2n organismos con diferentes alelos Si un plasmido posee "PolyA signal"
Un gen tiene que ser a fuerzas homocigoto para ver el alelo recesivo OriC (Origen de replicacion) en el origen de replicacion todos los plasmidos tienen un origen de
Homocigoto AA/aa replicacion bacteriano(Procariontes) y Eucariontes., sirve para sacar copias de ADN.
Heterocigoto Aa
Sitio de Clonacion Multiple: Downstring en direccion a 3´ y Upstring es a direccion de 5´
MITOSIS MEIOSIS
Marcador de selección: es la resitencia a antibioticos mas comun es la ampicilina, kanamicina,
Se produce: clorafenicol y estreptomicina, las bacterias todo el tiempo muta por lo que es importante poseer
Gametos estas resistencias para sectores medicos, siempre y cuando esten reguladas ya que si se presenta
Esporas varias resistencias puede presentarse enfermedades como la supergonorrea

"Tren de Aterrizaje"
Vectores de…
- Expresión: Se utiliza un vector de expresión cuando se quiere introducir un gen especifico a
un plásmido (si se puede utilizar para clonación pero es menos eficiente, menos estable y
produce menos cantidad)
- Clonación: Es una pieza pequeña de DNA que puede mantenerse estable

OPERON: Secuencia de ADN

"Cepillo de Dientes"
Promotores: T7--> virus de bacterias (los virus técnicamente no están vivos)
Célula Diploide y heterocigota
Lac: se induce con lactosa

Inducible: si se prende un gen es inducible

Consitutivo: se expresa el gen de manera constitutiva

Reprimible: se produce de manera constante hasta que ya no se requiera

Regulado: se expresa cuando se ordena que se requiere expresión de ciertos factores
Un vector de clonación no se debe usar como vector de expresión *

-------> Promotores inducible: se le da un estímulo a la bacteria con algún químico que "prende" ese
promotor

Factores de Yamanaca: Factores de transcripcion mas famoso

REPORTEROS: se puede agregar y da informacion (BLUE/WHITE), SISTEMA BUENO PARA VER EL

INCERTO (no se pinta), azul no interesa la blanca si interesa por que posee el gen

Complete Linkage -->no croosing over takes places

P: M D m d
------------------ --------------------
------------------ -------------------
M D m d

M--> "normal" leaves

D--> Tall plant
m--> spotted leaves
d--> "drarf"

Inestabilidad genetica: se pasa la enfermedad de

generacion en generacion

La patologia tiene repetido CTG

Mayor numero de repetidos la calidad disminuye en PCR
Sistema de electroforesis capilar: secuenciador automatico (para detectar repeticiones grandes)
NO HAY CURA pero es tratable
Gen de la DMPK en la celula miotica
Wenster blot se identifica proteinas por lo que la proteina de DMPK se ve disminuida, esto es debido a
que no sale del nucleo y no pasa a traduccion
Fosinucleares: agregados nucleares (algo que se acumula en este caso genes en el nucleo)
RNA toxico que se origina: el RNA en el nucleo forma estructuras tridimencionales las cuales tiene la
capacidad de secuestrar proteinas nucleares
Si no hay proteinas que puedan hacer el splicing se obtienen isoformas Martes 2 mayo 1 pm CIE
Se forman formas fetales, por lo que no da lo que se necesita para un individuo adulto ya que es
deficiente

Sub clonación de 960 repetidos del gen….

Clonar en un vector que sirva de expresión en el pez cebra
Se realizara un analisis de restricción
Enzimas de restricción incluidas
Como validarían el modelo
No Crossing Over vs Crossing Over Si es mendeliano es 1/4- 1/4- 1/4- 1/4
Análisis sinsilico, analizas porque no se dio lo que se esperaba
Mas del 50% --> no es recombinante
Ataxie ..> enfermedad

50

Aa Bb x aa bb
| ab
B AB | Aa Bb
A< | Aa bb
b Ab |
B aB |aa Bb
a< |
b ab |aa bb 1/4 (25)

NO RECOMBINANTE
50 50

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 b Ab |
B aB |aa Bb
a< |
b ab 1/4 (25)
|aa bb

NO RECOMBINANTE
50 50
1/4 (25)

Triple primer PCR

Polimorfismo: variacion de una proteina

Una forma sencilla de encontrarlos es haciendo cortes que se pueda dar siempre y cuando haya
polimorfismos

Ya que se hicieron los cortes con ECO R1(enzima)

https://www.quimica.es/enciclopedia/EcoRI.html
se tiene que poner un fragmento con las adaptadas

El ecor1 siempre corta en el mismo lugar y deja extremos iguales en el cromosoma seleccionado que
posee el problema
Se diseñan adaptadores que se peguen en las orillas y primers que se adapten al adaptador y al
cromosoma para que genere fragmentos y se puedan cortar posteriormente

Eco R1 (Ecoli) las bacterias son susceptibles a tener un ataque genómico por lo que poseen enzimas que
corten esos fragmentos que puedan dañar a la bacteria (cortan DNA exógeno)

Crsisper cars 9 se encontro en arquea

RFLP Madreen y Grissel (2020)
Se puede usar en celulas humanas para evitar enfermedades, si hay una infección viral corta los lados
AFLP https://www.scielo.cl/scielo.php? para sacarla y el adn une sus pares y lo edita, actualmente se puede hacer eso para agregar un gen que
script=sci_arttext&pid=S0365-28072000000400002 se desee

ALFP…..> sensibles para detectar polimorfismos genéticos, lo que permite un
escaneo rapido para el genoma
Si no se sabe que cosa es en el PCR se puede agregar algo que se realizó
artificialmente
Es una tecnica molecular basada en PCR que necesita sitios de restriccion para
amplificarse los cuales provienen de una mezcla compleja de fragmentos de
ADN obtenidos tras la digestion de ADN genomico con endonucleasas de
restriccion
PCR de Colonias:
PCR para una población completa
SE utiliza para detectar colonias de levaduras o bacterias que ya transformaron para buscar cual podria
quedar con el plásmido de forma adecuada
Se requiere saber si la bacteria se va a incorporar a la ecoli, no se ve tanto en ADN
"pica colonias", no hay producto que encuentre pequeños pedazos o producto
Si se dan los resultados se coloca una banda si no no se expresa
Se puede planquear si esta o no el plasmido pero no se sabría si se pegó o no el gen

PROBLEMA: genera enormes cantidades de informacion que pueden necsitar insert- specific dara resultado si se pego
de analisis automatizados y d eigual forma requiere grandes cantidades de ADN Backbone-specific: dara resultado independientemente de si si entro o no el gen al plasmido
de alta calidad y tiene dificultades en el análisis de mezclas Orientation-specific: te dira si se pego el gen al plasmido y en la dirección adecuada

➢ Es una reacción estándar, se toma la bacteria y se mete a su mezcla, se calienta/ lisa y se

libera el ADN del plásmido y se agrega una pequeña muestra a la reacción de PCR

COLD PCR:
Se usa cuando hay mutaciones de algo que apenas se está estudiando y la presencia de ADN es muy
Ejemplo de Casos baja.

CUIDADO CON :
No escojas una colonia demasiado grande. Demasiadas
bacterias pueden inhibir su reacción de PCR
Tenga cuidado con los falsos positivos. El hecho de que
obtenga el producto de PCR del tamaño esperado no
significa que no haya mutaciones en su inserto.
Asegúrese de enviar varios clones positivos para la
secuenciación a fin de verificar la secuencia de inserción
antes de continuar con el experimento.

In situ PCR :
In situ significa "en el lugar original"

Multiplex PCR:
Los plasmidos que utilizamos vienen de bacterias, se les quita las proteínas de virulencia
Es de 10 a 100 veces mas sensible dependiendo del DNA

Nested PCR

A medida de que aumenta el tamaño del ampliación la diferencia entre TM y TC disminuye

25% P1
50% P
25% P2
Fr. R tabla chi 2 (sirve para ver si la proporción es mendeliana o no)

50% R 25% R1

25% R2 Manipulación genética por mutagénesis inducida

Empleada en S. XX
Modificaciones al azar
PCR transcriptasa reversa
Agentes mutagenicos:
--> Fisicos: radiacion (UV o Rayos X )
--> Quimicos: Analogos de base nitrogenada, agentes intercalantes, agentes alquilantes, metales (Bio logicos)

50% P1
100% P
50% P2
O

0% R 0% R1

0% R2
PCR en tiempo real (PCR Cuantitativa)

E1 E2
A------> B ------> C

2 TIPOS DE BACTERIAS (Con o sin capsulas)

El fenotipo sin capsula era rugoso (no dañinas)
El fenotipo con capsula era liso (patogenas y virulentas)
Posteriormente las "matan" con fuego y se inyectaba al raton siendo ya no dañinas

Transformación Bacteriana
Proceso d transferencia genetica horizontal (HGT)
se lleva a cabo la captacion de material genetico, como los plasmidos efectuado por celulas competentes
mecanismos de HGT:
Conjugacion--> Plasmido F+ (fertility factor) por contacto derecto entre bacterias (pilus sexual)
Transduccion--> Bacteriofagos

CICLO LICTICO

Biofabricas página 7
Biofabricas página 8