UNIVERSIDAD AUTONOMA DE

COAHUILA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

Laboratorio de Biología Celular

Dr. Gerardo de Jesús Sosa Santillán

Practica 2: “MANEJO Y CUIDADO DEL MICROSCOPIO

COMPUESTO”

Equipo 4:
➢ De la Garza Gonzales Erika
➢ Pérez Arredondo Kimberly
➢ Ramírez Barrera Melissa
➢ Riojas Arredondo Darian Michelle

Realización:21 de febrero del 2023 Entrega:6 de marzo del 2023

Objetivos
1. El alumno experimentará los conceptos del uso y manejo del microscopio
compuesto.
2. El alumno conocerá las partes ópticas, lumínicas y mecánicas del microscopio
compuesto.
3. El alumno aprenderá la iluminación de Kölher.
4. El alumno pondrá en práctica los cuidados y limpieza del microscopio compuesto.
5. El alumno aprenderá sobre los diferentes tipos de microscopios existentes.

Introducción
El estudio de los microorganismos inicio con Antonio van Leeuwenhoek cuando en 1683
describió miles de miembros de la flora microbiana en diversas muestras de origen ambiental.
Su afición por el pulido de lentes le permitió construir microscopios simples y eficaces con
los que hizo posible que la humanidad descubriera un mundo encantador de “animalículos”
de todas las formas y tamaños. El microscopio óptico compuesto es un instrumento
fundamental para el estudio de las células; cuenta con tres sistemas: mecánico, de
iluminación y óptico. En el sistema mecánico encontramos piezas como los tornillos para
desplazamiento micrométrico y macrométrico, platina, brazo, pie o base, dispositivo de
desplazamiento de muestras o “carro”, tubo, diafragma de condensador y de base, etc. En el
sistema de iluminación se encuentra la lámpara que puede ser de diversos materiales y
longitudes de onda, el condensador y, en algunos modelos antiguos, el espejo. El sistema
óptico cuenta con los oculares de diversas graduaciones, los objetivos que generalmente son
tres (10x ó seco débil, 40x ó seco fuerte y 100x u objetivo de inmersión) y la lente del
condensador.
Para ciertos modelos (K-7 de la marca Zeizz y otros que cuentan con diafragma en la base y
condensador móvil) es necesario realizar el enfoque de Khöler que consiste en hacer coincidir
el hexágono de luz proveniente de la lámpara, modificado por el diafragma del pie, con el
condensador cerrado del microscopio para obtener una imagen más centrada y nítida de la
muestra.
CUIDADOS QUE SE DEBERÁN TENER AL USAR EL MICROSCOPIO.
1. Maneje el microscopio con mucho cuidado, llévelo utilizando ambas manos en posición
derecha y no deje que se golpee.
2. Limpie los lentes expuestos cada vez que se use, hágalo con un material adecuado.
3. Nunca coloque el microscopio cerca del borde de la mesa del laboratorio. Asegúrese de
colocar el cordón eléctrico fuera de cualquier pasada y en una posición en la cual
no pueda ser jalado y tirar el microscopio al suelo.
4. Use sólo papel seda para limpiar las lentes. Usar los dedos, un pañuelo u otro material
podría rayar o dañar las lentes.
5. Siempre comience las observaciones con el objetivo de aumento más bajo (10x) y al
terminar la práctica deje el mismo.
6. Nunca use el tornillo de movimientos rápidos (macrométrico) con el objetivo de mayor
aumento (100x).
7. Conserve siempre los portaobjetos y los cubreobjetos limpios para evitar interpretaciones
erróneas.
8. Cuando finalice sus observaciones apague la iluminación y rote el objetivo de menor poder
hacia la posición de observación. Nunca guarde un microscopio con el objetivo de mayor
poder en posición de observación.
9. Nunca juegue con el microscopio ni pretenda hacerle reparaciones.
10. No utilice microscopios defectuosos ni procedimientos equivocados.
El microscopio es una de las herramientas que los biólogos utilizan para estudiar la vida. Es
igualmente útil para el estudiante que está aprendiendo conceptos biológicos.
El microscopio de luz es básicamente un sistema óptico para magnificar y un sistema de
iluminación para poder hacer visible el objeto. El microscopio compuesto consiste de por lo
menos un par de sistemas de lentes: a) ocular: lente por donde se mira, (b) objetivos: son
lentes que están más cerca del espécimen y que tienen valores de magnificación entre 4x y
100x.
La microscopía envuelve tres conceptos básicos: magnificación, resolución y contraste.
Magnificación es el grado en que la imagen de un espécimen es agrandada. La resolución es
la habilidad de distinguir dos puntos como puntos separados, por lo tanto, a mejor resolución
más clara la imagen. El contraste es la habilidad de ver un detalle en particular contra un
trasfondo. Se utilizan tintes para aumentar el contraste.
El ojo humano funciona como un sistema de lentes. El ojo normal no puede enfocar un objeto
que esté a menos de 10 cm de distancia. Esto quiere decir que se pueden distinguir dos puntos
en un objeto que estén separados por 0.1mm. El microscopio te capacita para observar de
1.0mm a 0.001mm. Para observar objetos más pequeños se utiliza el microscopio electrónico.
La mayoría de las células son microscópicas y por eso dependemos del microscopio para su
observación. El microscopio compuesto es un instrumento delicado y costoso que consiste
de partes mecánicas que permiten movimientos precisos para ajustar la distancia entre el
espécimen y los lentes.
Principio de la iluminación de Kölher:
Consiste en regular la marcha de rayos de luz, concentrando la mayor intensidad de luz y
cubriendo exactamente el diámetro frontal de cada lente objetiva en su apertura numérica
específica, y de esta manera aprovechar al 100% la luz emitida por la fuente emisora.
Materiales y equipos
- Microscopio óptico compuesto (1 por equipo)
-Papel seda
-Trapo de limpieza (franela)
-Papel higiénico

Metodología
1. Observar las partes fundamentales del microscopio identificándolas en los tres sistemas.
2. Limpiar el microscopio usando papel seda para la partes ópticas y papel higiénico para las
mecánicas y lumínicas.
3. Conectar los microscopios a una fuente de energía apropiada (110 v).
4. Encender los microscopios y practicar la iluminación según Kölher.
a) Acercar el condensador a la platina.
b) Cerrar el diafragma del pie.
c) Con el revolver, mover los objetivos de manera que el de 10x se enfrente a la luz del pie.
d) Acercar el objetivo 10x con la platina.
e) Cerrar el diafragma del condensador.
f) Observar si el hexágono de luz está centrado y si se observa nítido.
g) Si no es así, mover el diafragma lateralmente mediante los tornillos de nivelación que
tiene éste de manera simultánea y observándolo por los oculares.
h) Una vez nivelado, el haz de luz deberá ser nítido y centrado, procediendo a abrir los
diafragmas e iniciar la observación de las muestras.
5. Iniciar el enfoque de las muestras proporcionadas por el maestro.
6. Para el enfoque se procederá de la siguiente manera:
a) Alejar el objetivo de 10x de la platina lo suficiente para insertar en el carro la laminilla a
observar.
b) Abrir los diafragmas del sistema de iluminación.
c) Centrar el lente (si lo tiene) del condensador.
d) Acercar el condensador a la platina. En los modelos K-4 y similares este paso no se
realiza pues el condensador es fijo.
e) Observar lateralmente el acercamiento del objetivo de 10x a la laminilla mediante el
uso del tornillo macrométrico, cuidando con ello que la lente no se estrelle con la preparación.
f) Una vez acercado el objetivo a la laminilla, proceder a observar en los oculares y alejar el
objetivo de la preparación lentamente mediante el tornillo de ajuste grueso o macrométrico
hasta la observación de manchas con formas poco definidas.
g) Continuar el enfoque moviendo suavemente el tornillo macrométrico hasta la observación
nítida de la muestra.
h) Hacer modificaciones con la entrada de luz moviendo el diafragma del condensador y, si
lo tiene, el dial del botón de encendido de manera que no lastime los ojos.
i) Modificar la distancia entre oculares acomodándola a sus ojos.
7. Hacer dibujos de lo observado haciendo énfasis en el tipo de aumento, objetivo,
colores, formas, etc.
8. Cambiar el objetivo mediante el revolver usando ahora el de 40x. Hacer las
observaciones.

Actividades
1. Investigar y hacer un resumen de la historia de los microscopios (desde los primeros
que se construyeron, las modificaciones que han sufrido y los que se utilizan
actualmente). Describir los tipos de microscopios existentes en la actualidad.
En 1665, Robert Hooke vio una sección delgada de corcho a través de una lente y descubrió
que el material era poroso. Fue la primera persona en examinar tejido vivo bajo un
microscopio. A mediados del siglo XVII, el holandés Anton van Leeuwenhoek fue el primero
en describir los protozoos, las bacterias, los espermatozoides y los glóbulos rojos utilizando
un sencillo microscopio casero. Microscopista sin formación científica, Leeuwenhoek puede
ser considerado el fundador de la bacteriología. Él mismo talló su lupa en una pequeña esfera
de vidrio, cuyo diámetro no llegaba al milímetro (su campo de visión era muy limitado,
décimas de milímetro). Con estas distancias focales cortas, logramos un aumento de 275x.
Se centró en las células sanguíneas, las bacterias y los protozoos. Primero estudió los
glóbulos rojos y descubrió que el semen contiene espermatozoides. Nunca reveló sus
métodos secretos durante su vida y, a su muerte en 1723, se donaron 26 dispositivos a la
Royal Society de Londres. Durante el siglo XVIII, el progreso continuó y se logró una lente
acromática mediante la unión de Chris Neros y Flint Crown, adquirida por H. M. Hall en
1740 y mejorada por John Drond. Los estudios de Isaac Newton y Leonhard Euler datan de
este período. Los objetivos acromáticos superiores se introdujeron en el mercado en el siglo
XIX cuando se descubrió que la dispersión y la refracción podían alterarse mediante la
combinación adecuada de dos o más medios ópticos. Durante el siglo XVIII, el microscopio
experimentó varios avances mecánicos que aumentaron su estabilidad y facilidad de uso,
pero en ese momento no se habían desarrollado mejoras ópticas. La mejora más importante
en óptica se produjo en 1877 cuando Ernst Abbe publicó su teoría de la microscopía,
reemplazando a Carl Zeiss con aceite de cedro para reemplazar el agua, mejorando así la
microscopía de inmersión y rompiendo el límite.Para la microscopía de luz, se han logrado
estos aumentos, pero no más allá 500X o 1000X. Sin embargo, había un deseo científico de
observar las estructuras celulares (núcleo, mitocondrias, etc.) en detalle. El microscopio
electrónico de transmisión (TEM) fue el primer microscopio electrónico desarrollado. Utiliza
un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra, logrando un aumento de
100.000x. Desarrollado en Alemania en 1931 por Max Knoll y Ernst Ruska. Luego, en 1942,
se desarrolló el microscopio electrónico de barrido.Hay tres tipos principales de
microscopios: ópticos, electrónicos y de sonda local.:
● Microscopios ópticos: están dotados de una fuente de luz que ilumina la muestra y de un
sistema de lentes ópticas capaz de formar la imagen de tal muestra. Los microscopios ópticos
permiten utilizar diversas técnicas de observación gracias a la configuración de diversos
parámetros, como el tipo de iluminación, la polarización, el filtrado espectral y el filtrado
espacial. Los microscopios digitales son un tipo de microscopio óptico que, en lugar de tener
un ocular, poseen una cámara que envía la imagen a una pantalla. La microscopía óptica
permite aumentar la muestra en 1.000x.
● Microscopios electrónicos: la muestra es atravesada por un haz de electrones, Los
microscopios electrónicos se dividen a su vez en dos tipos principales: los microscopios
electrónicos de transmisión (TEM) y los microscopios electrónicos de barrido (SEM).
● Microscopios de sonda de barrido: se utiliza una sonda que recorre la superficie de la
muestra para determinar la topografía. Algunos microscopios ofrecen una resolución espacial
que alcanza la escala atómica. Es el caso, por ejemplo, de los microscopios de fuerza atómica
(AFM) y los microscopios de campo cercano (SNOM).
2. Hacer una breve descripción de las partes que forman un microscopio señalándolas
en el dibujo anexo.
3. Contestar las siguientes preguntas:
a) ¿Cuál es el aumento total resultante de un objeto visto a través de un microscopio
con oculares 10x en cada uno de los siguientes objetivos: 10x, 40x, 100x?
10x=100 veces aumentado, 40x400 veces aumentado y 100x1000 veces aumentado
b) Explique la diferencia entre aumento y resolución.
El aumento es una medida de la capacidad del microscopio de agrandar una imagen mientras
que la resolución es una medida de la capacidad del microscopio para separar los diferentes
puntos de una imagen.
c) ¿Qué parte del microscopio es más importante para determinar el poder de
resolución? ¿Por qué? La apertura numérica (A. N.) porque determina el poder de
resolución de un objetivo, pero la resolución total del sistema de microscopia también
depende de otros componentes como la A. N.
d) Usted está interesado en comprar un microscopio. El vendedor le muestra varios de
ellos, cada uno con alguno de los siguientes objetivos. ¿cuál desearía Usted comprar y
por qué? Porque viene con su apertura numérica y medio de inmersión de acuerdo a su
objetivo (40x)

e) La resolución del objetivo de un microscopio depende de la apertura numérica. ¿Es

mejor la resolución con una apertura numérica alta o baja? ¿por qué? 40/0.50 160/0.16
43/0.20 160/0.16 40/0.70 160.016 (a) (b) (C) 4
Una lente con una apertura numérica grande será capaz de visualizar más detalles que una
lente con una apertura numérica más baja no podrá. Además, las lentes con aperturas
numéricas grandes aceptan más luz y dan una imagen más brillante.
f) Suponga que su objetivo 10x tiene una apertura numérica de 0.25 y Usted está usando
un filtro verde que limita la longitud de onda de la luz incidente en el objetivo a 560 nm.
¿Cuál es el poder de resolución de este objetivo? ¿qué dimensiones tiene su respuesta?
Este es un valor teórico para la resolución, suponga que =260 , ¿cuál sería la resolución
verdadera de su sistema?
d= (0.61 * λ) / NA = (0.61 * 560)/0.25=1366.4
d=poder de resolución = x
λ= longitud de onda= 560nm
NA= apertura numérica= 0.25
g) ¿Qué entiende Usted por “diámetro de campo”? ¿qué pasa con el diámetro de campo
para cada aumento resultante al cambiar del objetivo 10x al 40x
medición del campo visual y el diámetro se expande de acuerdo al objetivo seleccionado
haciendo más grande

Conclusiones
Para concluir, el microscopio es de suma importancia al no poder observar a simple vista los
microorganismos. Los diferentes objetivos del instrumento nos brinda la posibilidad de
conocer el mundo microbiano en diferentes puntos, de igual manera, el aceite de inmersión
brinda protección al microscopio y a la muestra. También, complementando el manejo, se
logró apreciar y recalcar que la iluminación también afecta como se observa la muestra. Se
espera seguir trabajando y mejorar el uso de los microscopios, de igual manera, usar
diferentes microscopios al transcurso de los proyectos esperados para así saber en un futuro
cual será mejor para el análisis. Sin más que agregar, los objetivos planteados fueron logrados
y se aprendió el manejo.

Referencias
• Leogervasio. (2008). Kölher ILUMINATION-DR.Othon Gervasio. Septiembre 19,
2022 de:Youtube.
• Ramos, E (2006). Manual del laboratorista de instrumentación básica. Septiembre 19,
2022 de Universidad Veracruzana.