UNIVERSIDAD NACIONAL

PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

INFORME DE PRACTICA 6

Germinación de semillas de soja in vitro.

Alumno: Joel Gamonal Rimarachin

Código: 164003C

Curso: Biotecnología

Docente: Mcblgo. MSc. Jhon W. García López

Febrero; 2022
 Germinación de semillas de soja in vitro.

I. MARCO TEÓRICO

La soya [Glycine max (L.) Merrill] es la oleaginosa de mayor

importancia a nivel mundial porque de sus granos, que constituyen la
principal fuente de proteína vegetal, se obtienen diversos productos
esenciales en la alimentación humana y animal, convirtiéndola en uno de los
cultivos más comercializados y al que se dedica una gran parte del área
productiva del planeta. Por eso, los genetistas buscan métodos para optimizar
sus características. Como la aplicación satisfactoria de la biotecnología en el
mejoramiento genético de los cultivos priorizados como la soya se basa en
un eficiente protocolo de regeneración o también de germinación in vitro
(Soto et al., 2013; Costales et al., 2020).

La germinación in vitro de semillas nos permite generar un gran número

plántulas en un espacio reducido en condiciones controladas. El medio de
cultivo es sólido y su composición puede variar según las condiciones pero
en general se suele utilizar el medio MS (Murashige & Skoog), que contiene
todos los nutrientes y reguladores del crecimiento necesarios para estimular
la germinación de las semillas, así como para garantizar su desarrollo inicial
para aclimatarla posteriormente en otro recipiente con otro sustrato. Como
hemos indicado en el apartado de generalidades, es necesario mantener unas
condiciones de asepsia y esterilidad para evitar la contaminación
(PortalFruticola, 2020).

La germinación in vitro tiene ventajas respecto a la producida en

condiciones naturales, ya que puede solucionar casos de inhibición total de la
germinación, aumentar la tasa de germinación, reducir el tiempo y
homogeneizar la germinación (Zurita et al., 2014).

Las fitohormonas repercuten en la germinación in vitro como el ácido

giberélico (GA) y ácido abscísico (ABA) controlan antagónicamente la
germinación de semillas, de tal manera que los niveles de GA favorecen la
germinación de semillas, mientras que altos niveles de ABA dificultan este
proceso (Xiong et al., 2018).

Para lograr una germinación de semillas exitosa, un mayor crecimiento y

desarrollo de las plántulas es esencial que los factores abióticos (como la
temperatura y la luz), los métodos de esterilización, la composición de los
medios basales y la suplementación con aditivos orgánicos y reguladores del
crecimiento de las plantas sean los adecuados (Teixeira et al., 2015).

Durante la germinación de las semillas se dan muchos cambios en su

composición, debido al utilización de sus reservas (carbohidratos, proteínas
 y lípidos) para el desarrollo de su eje embrionario. Las variantes que tienen
mayor influencia dentro del procesos son humedad y temperatura (Chaparro
et al., 2010).

Los roles físicos y fisiológicos de las propiedades de las semillas

regularmente se descuidan durante el cultivo de tejidos vegetales; estas
propiedades determinan el nivel de actividad y rendimiento de las semillas,
lo que comúnmente se conoce como vigor de la semilla (Mangena, 2021).

El control preciso de la liberación de la latencia y la germinación es

fundamental para el establecimiento exitoso de las plántulas (Zhang et al.,
2019).

II. OBJETIVO
Que el estudiante conozca el medio, procedimiento y los factores físicos
y químicos que se requieren para poder hacer germinar una semilla de soja in
vitro.

III. MATERIALES
❖ 1 sobre de gelatina sin sabor o colapiz, cantidad para 1 litro de gelatina.
❖ 20 g de azúcar blanca refinada.
❖ 750 ml. de agua caliente
❖ Mechero de Bunsen
❖ 2 botellas de litro de vidrio resistente al calor, con tapa

EQUIPO
❖ Autoclave
❖ Cocina eléctrica

IV. PROCEDIMIENTO
➢ Dividir el agua en dos botellas de litro de vidrio y agregar la gelatina
sinsabor de forma equitativa en los dos frascos.
➢ Agregar en cada frasco 10 g de azúcar y mezclar hasta que la mezcla
quede homogénea.
➢ Esterilizar en olla a presión durante 20 minutos con las tapas de los
frascos flojas.
Nota: si las botellas están cerradas corren riesgo de explosión. Nunca llenar
las botellas por completo con el medio de cultivo porque se derramará y
además no alcanzará la temperatura de esterilización necesaria.
➢ Apagar el fuego y dejar que se iguale la presión interna de la olla con el
exterior.
➢ Abrir la olla y cerrar las botellas.

4.1. PREPARACIÓN DE MATERIAL DE VIDRIO PARA DISTRIBUIR

EL MEDIO DE CULTIVO
  Distribuir 50 o 100 ml de medio de cultivo, preparado y esterilizado, en
los frasquitos (según el volumen de los mismos).
 Realizar este procedimiento por delante de un mechero prendido, abriendo
los frascos y botella cerca de la llama (no hablar ni soplar para no
contaminar).
 Distribuir e inmediatamente cerrar los frascos también cerca de la llama.
 Dejar que la preparación se solidifique y enfríe.

4.2. DESINFECCIÓN DE GRANOS O POROTOS DE SOJA

4.2.1. Materiales:
- Granos de soja comercial
- Alcohol 70% (70 ml de alcohol diluido en 30 ml de agua)
- Lejía al 20% (20 ml de lejía comercial diluida en 80 ml de agua)
- Agua estéril (esterilizar de la misma forma que el medio de cultivo)
- Pinza de metal
- Recipientes bien limpios para desinfectar las semillas

4.2.2. Procedimiento
 Usando una pinza estéril, pasar los granos de soja durante un minuto por
una solución de alcohol 70%.
 Luego sumergirlos en lejía al 20% durante 15 minutos y por último, darles
4 lavados en agua estéril.

4.3. SIEMBRA
▪ Sembrar con pinza estéril 4 granos por frasco de modo que el hilio (punto
oscuro) quede hundido en el medio de cultivo y el resto del grano por
encima del mismo.
▪ Asegurarse de que los porotos queden firmes o agarrados al medio, pero no
totalmente hundidos (por lo menos la mitad del poroto debe salir hacia la
superficie, de lo contrario no germinará).

Nota: Esta etapa se realizará cerca del mechero. Esterilizarla pinza cada vez
que tomo un nuevo grano
▪ Tapar cada frasco con papel film (el de envolver alimentos) y dejar a una
temperatura entre 24 º y 26º (no debe ser menor a 20ºC), en un lugar donde
reciba luz directa durante el día.

V. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La siembra in vitro se realizó caseramente usando mechero (fig. 1),
pasados los 10 días ningún recipiente se contaminó (fig. 2), sin embargo,
ninguna semillla germinó, sólo algunas estaban a punto de germinar en unos
días. Concuerdo con PortalFruticola (2020) que indica que la siembra
normalmente se realiza en cámara de flujo de aire laminar o/y a la llama de
un mechero para evitar contaminaciones. Luego se deposita el recipiente
cerrado (comúnmente se sella con una tira de parafilm para evitar
contaminaciones) en la cámara de cultivo con el fotoperiodo y la humedad
relativa adecuada hasta su germinación.
Figura 1.
Siembra casera in vitro de soja.

Figura 2.
Diez días después de la siembra.

Costales et al. (2020) a sus semillas de soya embebieron durante una

hora en soluciones de quitosano, y obtuvieron mejores resultados; el
porcentaje de germinación después de 72 horas mostraron valores superiores
(82 y 87 %) respecto a las embebidas en agua (76,2 %). Y las longitudes de
la raíz oscilaron entre 5,3 cm y 5,7 cm de largo.

La germinación de las semillas de soya es más instantánea cuando son

frescas que si su almacenamiento se prolonga durante meses como
indica Mangena (2021), quien concluye que el vigor de la semilla podría ser
un obstáculo importante para la germinación eficiente de plantas in vitro.
Respecto a la germinación precoz de soya, a pesar de ser un antiguo
trabajo, Obendorf y Wettlaufer (1984) demostraron que la germinación
precoz y otros crecimientos anormales de tejido pueden prevenirse mediante
 concentraciones altas de sacarosa o manitol en el medio o mediante la
adición de ácido abscísico. Ellos cultivaron semillas inmaduras de soya y las
maduraron en medio líquido a 25°C bajo luz fluorescente, en un medio
estándar que contenía minerales, 146 mM de sacarosa y 62,5 mM de
glutamina (osmolalidad 0,24), rara vez se producía una germinación precoz
con un tamaño de semilla inicial de menos de 300 miligramos de peso
fresco. Aseguraron que la frecuencia de la germinación precoz aumentó con
el aumento del tamaño inicial de la semilla; y que la concentración de
sacarosa afectó fuertemente la germinación precoz mientras que la
concentración de glutamina no tuvo efecto.
Manoharlal y Saiprasad (2019) demostraron que la germinación de la
soja mejoró significativamente con el cebado con Eth (Ethp). Y la
cuantificación de fitohormonas mostró niveles relativamente mejorados de
giberelina A 4 (GA 4) endógena concomitante con biogénesis alterada y
señalización de auxina, a saber ., ácido indol acético (IAA) y ácido abscísico
(ABA).

VI. CONCLUSIONES
 El medio para cultivo in vitro es MS enriquecido con vitaminas y
hormonas, pero caseramente se puede usar colapiz con azúcar como
medio.
 Las semillas primero se desinfectan, luego se procede a siembra
cerca al mechero para evitar contaminación ya que este cultivo se
caracteriza por la asepsia.
 Los factores más influyentes son la humedad y la temperatura,
además de la ausencia de luminosidad para la germinación.

VII. REFERENCIAS

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%20trav%C3%A9s%20de%20la%20micropropagaci%C3%B3n.