UNIVERSIDAD CATÓLICA DE SANTA MARÍA

Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Bioquímicas y Biotecnológicas

Escuela Profesional de Ingeniería Biotecnología

CURSO: MICROBIOLOGÍA II PRÁCTICAS - GRUPO 5

DOCENTE: Shaneri Marcilla Truyenque

PRACTICA N°12: CULTIVO DE MICROALGAS

PRESENTADO POR:

Alferez Jacobo, Milagros Valerie

Cuervo Quispe, D’Alessandra

Delgado Gutierrez, Daniela Fernanda

Tupacyupanqui Gutierrez, Uriel Fernando

Valencia Apolinario, Dulce Stefanny

FASE III - MAYO 2023

 PRACTICA N°12: CULTIVO DE MICROALGAS

1. Resumen:
El cultivo de microalgas abarca varios aspectos o escalas que van desde la obtención de las
especies, al cultivo en laboratorio con el objeto de amplificar y purificar la población, su
caracterización para averiguar las condiciones de cultivo óptimas. En esta práctica nuestro
objetivo es centrarnos en el cultivo de estas en diferentes medios y observar los resultados en
cada uno, para lo cual para empezar a sembrar primero se preparara un medio el cual es el
Bristol, mezclando este y nuestra muestra de microalga (Chlorella Vulgaris), una vez teniendo
nuestro medio se procedió a la inoculación en tubo y placa en donde en ambos casos al
finalizar su inoculación se dejaron a temperatura ambiente bajo luz led con iluminación de
500 a 800, para finalizar y poder observar al microscópica se realizó una tinción en fresco
logrando así observar los resultados.

Palabras clave: Chlorella Vulgaris, microalgas, cultivo

2. Objetivos:
- Establecer la metodología de cultivo de microalgas.
- Determinar las condiciones óptimas para el cultivo de microalgas.
- determinar el medio de cultivo más adecuado para el cultivo de microalgas.

3. Introducción:
La industria del cultivo de microalgas ha experimentado un crecimiento significativo en los
últimos años debido a su potencial como fuente de productos biotecnológicos valiosos,
incluyendo biocombustibles, productos químicos, alimentos y piensos. El cultivo de
microalgas ofrece numerosas ventajas, como su alta tasa de crecimiento, capacidad de
adaptación a diferentes condiciones ambientales y la capacidad de aprovechar nutrientes y
gases de desecho para su crecimiento.[1]
El cultivo de microalgas ha ganado un interés creciente debido a su capacidad para producir
una amplia gama de compuestos valiosos, como lípidos, proteínas, pigmentos y compuestos
bioactivos. Este cultivo puede llevarse a cabo tanto a nivel industrial como en pequeña escala,
en sistemas cerrados o al aire libre, dependiendo de las necesidades y los objetivos del
cultivo.[2]
Uno de los factores cruciales para el éxito del cultivo de microalgas es el medio de cultivo
utilizado. El medio de cultivo proporciona los nutrientes esenciales, como nitrógeno, fósforo,
carbono, minerales y vitaminas, necesarios para el crecimiento y la reproducción de las
microalgas. Existen diferentes tipos de medios de cultivo que pueden adaptarse a las
necesidades específicas de cada especie de microalga y a las condiciones de cultivo.[3]
4. Metodología:
4.1.Instrumentos:
● Placas de petri
● Matraz
● Bagueta
● Micro pipetas
● Gradillas
● Tubos de ensayo
● Porta objetos
● Cubre objetos
● Asa de siembra
4.2.Equipos:
● Hot plate
● Balanza analítica
● Autoclave
● Mechero Bunsen
● Microscopio
● Incubadora
4.3.Insumos:
● Medio bristol
● Medio agar
● Inoculo de microalgas

4.2. Procedimiento:
4.2.1. Preparación del medio :
a) Se extrajeorn 130 ml de medio bristol con ayuda de una pipeta, fue traspasado a un matraz
limpio y esteril.

Figura N°1: Medio Bristol.

b) Luego, se pesaron 1.95 de caldo nutritivo en una balanza analítica y se colocó en el matraz
que contiene el medio bristol.
 Figura N°2: caldo nutritivo

c) Se llevó a calentar el matraz, hasta que el agar se aclare, finalmente se llevará a autoclavar.

Figura N°3: calentamiento del agar

4.2.2. Inoculación en tubo y placa:

a) Inoculacuón en tubo de Chlorella Vulgaris:
- El primer paso que se realizó fue la desinfección del area de trabajo y se procedió a encender
el mechero Bunsen para mantener el ambiente estéril.
- Para la producción de biomasa de Chlorella Vulgaris se tomó 1 ml de inóculo de microalgas
con ayuda de una micropipeta estéril y se agregó en dos tubos de ensayo, seguido de ello se
procedió a agregar 4 ml del medio de cultivo Bristol con otra pipeta estéril.
 a) b)
Figura N°4: a) inóculo de chlorella vulgaris y b) adición de 1 ml del inóculo al tubo de ensayo

- Estos cultivos estarán a temperatura ambiente, bajo una luz led con iluminación de 500 a 800
Lux y homogeneización interdiaria.

Figura N°5: Tubo inoculado con Chlorella Vulgaris.

b) Inoculación en placa de Chlorella Vulgaris:

- Una vez que el medio salga del autoclave, se esperó a que el medio baje de temperatura y se
procedió a plaquear en dos placas petri.
 a) b)
Figura N°6: a) agar nutritivo más medio bristol y b) plaqueo del medio.

- Una vez solidificado el medio, se procedió a sembrar el inóculo de Chlorella Vulgaris con un
asa de siembra haciendo una estría simple.

Figura N°7: Siembra de Chlorella Vulgaris en Bristol en agar.

- Estos cultivos estarán a temperatura ambiente, bajo una luz led con iluminación de 500 a 800
Lux.

Figura N°8: Siembra de Chlorella Vulgaris en Bristol en agar.

4.2.3. Observación en microscopio: Se realizó una tinción en fresco.

- Se tomó un poco del inóculo de microalgas con ayuda de un gotero, y se colocaron unas gotas
en el medio del portaobjetos, seguido de ello se procedió a cubrir la muestra con un
cubreobjeto.
 a) b)
Figura N°9: a) toma de muestra y b) muestra en portar objeto
- Una vez lista la muestra, fue llevada al microscopio.

5. Resultados y Discusión:

Figura N°10: Chlorella vulgaris vista por microscopio

Como observamos Chlorella vulgaris es una especie de alga verde unicelular que se puede
observar al microscopio a partir de un aumento de 40X. Algunas características distintivas
que podemos apreciar son, que tiene forma esférica y su tamaño varía entre 2 y 10
micrómetros de diámetro, se puede observar una pared celular que rodea a la célula de
Chlorella vulgaris, esta es relativamente delgada y transparente.
Tiene un resaltante color verde debido a los cloroplastos, son los orgánulos responsables de la
fotosíntesis en las células vegetales. En Chlorella vulgaris, los cloroplastos son de color verde
intenso debido a la gran presencia de clorofila.
 Figura N°11: Chlorella vulgaris
Como vemos después de 2 semanas expuestos a iluminación de 5000 a 8000 Lux
obtenemos un crecimiento considerable en los tubos de caldo de cultivo inoculados con
Chlorella vulgaris, incluso se observa que parte de la biomasa formada se está asentando al
fondo del tubo.

(a) (b)
Figura N°12: Donde a) y b) observamos crecimiento de Chlorella vulgaris
Como vemos después de 2 semanas en agar Bristol también conseguimos un crecimiento
uniforme alrededor de toda la placa, en la parte superficie vimos una acumulación de
biomasa formada de células de Chlorella vulgaris porque esa es la parte que estuvo más
expuesta a la iluminación constante.
6. Conclusiones:
Chlorella vulgaris es de fácil cultivo el cual entre sus características más importantes, al ser
visualizada en un microscopio, son sus células redondeadas con presencia de cloroplastos de
color verde, posee una alta tasa de crecimiento puesto que en 2 semanas aumento
significativamente su biomasa (que a su vez es un buen indicativo de un crecimiento
adecuado). En caso que hubiera estado en una situación de estrés esta microalga hubiera
contenido lípidos en sus células y la presencia de colonias.

7. Referencias:
[1] A. Hernández, J.Labbé. Microalgas, cultivo y beneficios. Revista de Biología Marina y
Oceanografía. [Internet] [Citado el 30 de junio de 2023] Disponible en:
https://scielo.conicyt.cl/pdf/revbiolmar/v49n2/art01.pdf
[2] Revista de Biología Marina y Oceanografía. ¿Qué son las microalgas? Interés y uso.
Fundación cajamar. Grupo cooperativo cajamar. [Internet] [Citado el 30 de junio de 2023]
Disponible en: https://www.cajamar.es/storage/documents/microalgas-1444391623-ca345.pdf
[3] C. Bennouna. Los diferentes medios de cultivo para microalgas. Synoxis algae.
[Internet] [Citado el 30 de junio de 2023]
https://www.synoxis-algae.com/los-diferentes-medios-de-cultivo-para-microalgas/