Ferrer de La Cruz, Martin Ronald (FILEminimizer)

Biblioteca Digital - Oficina de Tecnologias de la Información
A S
A RI
CU
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
PE
UNT
RO
AG
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
AS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGRONÓMICA

CI
EN
TÍTULO
CI
“Medios de cultivo para enraizamiento in vitro de Ananas comosus L.

DE
Merrill var. Roja Trujillana en Trujillo, La Libertad.”
TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE

CA
INGENIERO AGRÓNOMO
TE
IO
AUTOR: Ferrer De La Cruz, Martin Ronald

BL
BI
ASESOR: Dr. Luján Salvatierra, Ángel Pedro
TRUJILLO-PERÚ
2023
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú.
Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
DEDICATORIA
A mis padres, Ronald y Clenie, por su dedicación y motivación, sus valores, su apoyo en
cada etapa de mi vida, por formarme profesionalmente y por su amor incondicional.
S
A mis hermanas, Diana, Elena y Teresa, y mi sobrino Diego por estar en toda etapa de mi
A
vida.
A RI
A mi abuela Gertrudis por su paciencia y consentimiento desde pequeño. A mi tío William y
CU
a mi abuelo Maximiliano Q.E.P.D y Q.D.G.E. que en todo momento velaron porque
completara mi educación.
PE
A mi Lizbeht por su amor incondicional y leal, y a mis hijos Ariana y Sebastián orgulloso
RO
de tener la dicha de ser su padre.
AG
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iii
AGRADECIMIENTOS
A mis padres, por su amor incondicional, apoyo en toda mi formación profesional y en las
metas que me he propuesto.
S
A mis hermanas por estar presentes en todo momento de mi vida.
A
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A mi asesor de tesis, Dr. Ángel Pedro Luján Salvatierra, por la motivación, sus consejos,
A
conocimientos y orientaciones, por su apoyo en el desarrollo y culminación de esta
CU
investigación.
A los profesores de la facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad Nacional de
PE
Trujillo, por todos los años de estudios en el cual hicieron posible mi formación profesional.
RO
A todas aquellas personas que de una u otra manera han contribuido con el desarrollo de esta
tesis. AG
FERRER DE LA CRUZ, MARTIN RONALD
AS
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iii
ÍNDICE GENERAL
DEDICATORIA .................................................................................................................. ii
AGRADECIMIENTOS ..................................................................................................... iii
PRESENTACIÓN ............................................................................................................. vii
S
RESUMEN ........................................................................................................................ viii
A
RI
ABSTRATC ........................................................................................................................ ix
A
CAPÍTULO I: .................................................................................................................... 10
CU
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................. 10
PE
CAPITULO II .................................................................................................................... 17
MATERIAL Y MÉTODOS .............................................................................................. 17
RO
CAPÍTULO III .................................................................................................................. 27
AG
RESULTADOS Y DISCUSIÓN ....................................................................................... 27
CAPÍTULO IV................................................................................................................... 39
AS
CONCLUSIONES ............................................................................................................. 39
CI
CAPÍTULO V: RECOMENDACIONES ........................................................................ 40

EN
CAPITULO VI................................................................................................................... 41
CI
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................................ 41
ANEXOS………………………………………………………………………………….
DE
CA
TE
IO
BL
BI
iv
INDICE DE TABLAS
Tabla 1. Tratamientos de estudio......................................................................................... 19

Tabla 2.Cuadro de concentraciones de soluciones stock MS (g) RMA .............................. 21
Tabla 3. Sales Minerales necesarias para la preparación de la solución stock MS - RMA a
S
una concentración de 10x .................................................................................................... 22
A
Tabla 4. Vitaminas necesarias para la preparación de medio MS - RMA a una concentración
RI
de 10x .................................................................................................................................. 22
A
Tabla 5.Cantidades de medio de cultivo MS y agua destilada empleadas en la preparación
CU
de los tratamientos de estudio.............................................................................................. 23
Tabla 6. ANOVA de la Longitud de raíz............................................................................. 27
PE
Tabla 7. Comparación múltiple de Tukey de la variable Longitud de raíz. ........................ 27
RO
Tabla 8. ANOVA del número de raíces .............................................................................. 29
Tabla 9. Comparación múltiple de Tukey de la variable número de raíces ........................ 29
AG
Tabla 10.ANOVA del diámetro de raíz ............................................................................... 31
Tabla 11. Comparación múltiple de Tukey de la variable diámetro de raíz ........................ 31
AS
Tabla 12.ANOVA del número de hojas .............................................................................. 33

Tabla 13. Comparación múltiple de Tukey de la variable número de hojas ....................... 33
CI
Tabla 14.ANOVA del peso fresco ....................................................................................... 35

EN
Tabla 15. Comparación múltiple de Tukey de la variable peso fresco................................ 35

Tabla 16.ANOVA del peso seco ......................................................................................... 37
CI
Tabla 17. Comparación múltiple de Tukey de la variable peso seco .................................. 37

DE
CA
TE
IO
BL
BI
v
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1 Ubicación de los tratamientos completos al azar.. ............................................... 25
A S
Figura 2 Longitud de raíz promedio por tratamiento. ........................................................ 28
RI
Figura 3. Número de raíces promedio por tratamiento. ...................................................... 30
A
Figura 4. Diámetro de raíz promedio por tratamiento. ....................................................... 32
CU
Figura 5 Número de hojas promedio por tratamiento. ....................................................... 34
Figura 6.Peso fresco promedio por tratamiento. ................................................................ 36
PE
Figura 7.Peso seco promedio por tratamiento. ................................................................... 38
RO
AG
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
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BI
vi
PRESENTACIÓN
S
SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO:
A
A RI
CU
En cumplimiento a las disposiciones vigentes contenidas en el Reglamento de Tesis
Universitaria de la Escuela Profesional de Agronomía, someto a su elevado criterio la tesis
PE
titulada: “Medios de cultivo para enraizamiento in vitro de Ananas comosus L. Merrill var.
RO
Roja Trujillana en Trujillo, La Libertad.”, con el propósito de optar el Título Profesional de
Ingeniero Agrónomo.
AG
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CI
EN
Br. Ferrer De La Cruz, Martin Ronald

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vii
“Medios de cultivo para enraizamiento in vitro de Ananas comosus L. Merrill var. Roja
Trujillana en Trujillo, La Libertad.”
Autor: Br. Martin Ronald Ferrer De La Cruz (martinferrerdlc@gmail.com)
Asesor: Dr. Ángel Pedro Luján Salvatierra (pedrolujansalvatierra@hotmail.com)
A S
RI
RESUMEN
A
El presente trabajo de tesis, tuvo como objetivo evaluar el efecto de diferentes medios de
CU
cultivo para el enraizamiento in vitro de Ananas comosus L. Merrill var. Roja Trujillana,
con el fin de comparar y determinar el medio de cultivo más efectivo en el enraizamiento de
PE
plántulas in vitro de Ananas comosus L. Merrill Var. Roja Trujillana. Se realizó en las
RO
instalaciones del Laboratorio de Biotecnología de la Facultad de Ciencias Agropecuarias, en
la Universidad Nacional de Trujillo, el cual proporcionó las plántulas in vitro de piña var.
AG
Roja Trujillana. Se utilizó un diseño completamente aleatorizado DCA, con 16 tratamientos
incluido el testigo, que estuvieron conformados por distintas concentraciones del medio de
AS
cultivo y de ácido indolbutirico (IBA). Los resultados determinaron fue el tratamiento 9 con
una concentración de Sales MS al 95%, agua destilada al 5% y ácido indolbutirico a 0.08
CI
ppm, ya que con este tratamiento se logró obtener mayor número de raíces (30.16 como
EN
media general) en comparación a los demás tratamientos, considerando el número de raíces

CI
como factor principal que demuestra el enraizamiento de una plántula in vitro. La tasa de
enraizamiento fue de 1.01, determinado por el número de raíces promedio del tratamiento 9
DE
entre 30 dias que duró el experimento.

CA
TE
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Palabras clave: Acido indolbutirico, micropropagación, cultivo invitro.

BI
viii
“Culture media for in vitro rooting of Ananas comosus L. Merrill var. Trujillan red in
Trujillo, La Libertad.”
Author: Br. Martin Ronald Ferrer De La Cruz (mferrerdlc@gmail.com)
Advisor: Dr. Ángel Pedro Luján Salvatierra (pedrolujansalvatierra@hotmail.com)
A S
RI
ABSTRATC
A
This thesis work aimed to evaluate the effect of different culture media for the in vitro rooting
CU
of Ananas comosus L. Merrill var. Trujillan red, in order to compare and determine the
most effective culture medium in rooting seedlings in vitro of Ananas comosus L. Merrill
PE
var. Trujillan red. It was carried out at the Biotechnology Laboratory facilities of the Faculty
RO
of Agricultural Sciences, at the National University of Trujillo, which provided in vitro
seedlings of pineapple var. Trujillan red. A randomized complete design was used, with 16
AG
treatments including the control, which were made up of different concentrations of the
culture medium and of indolbutyric acid (IBA). The results determined that the most
AS
effective means of rooting seedlings in vitro of Ananas comosus L. Merrill var. Trujillan
red, was treatment 9 with a concentration of MS salts at 95%, distilled water at 5% and
CI
indolbutyric acid at 0.08 ppm, since with this treatment it was possible to obtain a greater
EN
number of roots (30.16 as a general average) compared to the other treatments, considering
CI
the number of roots as the main factor that demonstrates the rooting of a seedling in vitro.
The rooting rate was 1.01, determined by the average number of roots of treatment 9 within
DE
30 days of the experiment.

CA
TE
IO
BL
Keywords: Indolbutyric acid, micropropagation, invitro culture

BI
ix
CAPÍTULO I:
INTRODUCCIÓN
S
El cultivo de piña representa en la zona tropical, uno de los rubros más rentables y de mayor
A
importancia nutricional y que debido a la facilidad de adaptación y manejo lo convierten en
RI
un cultivo de subsistencia en muchas partes de Latinoamérica, (FAO, 2017).
A
CU
Según el ADEX (2020), las exportaciones peruanas de piñas frescas, deshidratadas y en
conserva llegaron a USD 4.05 millones, cifra que significó un alza de 283,2% respecto a lo
PE
alcanzado el año previo. El informe detalló que las piñas tropicales frescas y secas de Perú
crecieron 135,9%, alcanzando los USD 1.93 millones, por los mayores envíos de piña
RO
deshidratada convencional y orgánica.
AG
De igual forma el Centro de Investigación de Economía y Negocios Globales de la
Asociación de Exportadores (CIEN-ADEX) comunicó que en 2020 los principales destinos
AS
de exportación fueron, según el informe, América del Norte (89,2%), seguido de Asia (4,4%)
y Europa (3,9%). EE.UU. fue el principal país de exportación con USD 4 millones (88,1%
CI
del total), las cuales se incrementaron en 561,3% en 2020 (ADEX, 2020).

EN
En el Perú para el año 2018, la producción nacional de piña fue de 548 465 toneladas,
CI
mientras que en La Libertad se reportó para la campaña 2018, un rendimiento promedio de

19.3 t.ha-1 y una producción total de 21 734 toneladas, siendo las principales provincias
DE
productoras Trujillo, Bolívar, Otuzco, Pataz y Virú (Minagri, 2019).

CA
Según el Minagri (2019), el distrito de Poroto es tiene como principal actividad

socioeconómica a la agricultura, teniendo cerca del 90% de la población dedicada a esta
TE
actividad, y que tiene como principales cultivos a la piña y caña de azúcar. Así mismo, la
producción de piña de Poroto representa el 23% de la producción de piña de la costa peruana.
IO
BL
Mejía (2017), indica que el cultivo de la piña en Poroto, constituye en la actualidad la

principal actividad económica del distrito, brindando trabajo a la mayor parte de los
BI
productores locales. Desde la siembra hasta la cosecha demanda una alta inversión en
fertilizante, mano de obra y control fitosanitario.
10
En la costa norte y principalmente en región La Libertad las variedades que se cultivan son
“cayena lisa” y “roja trujillana, destacando esta última por ser la más producida, todas
designadas dentro del país (Mejía, 2017).
En los campos de cultivo de piña Roja Trujillana en Poroto, se observan deficiencias que se
S
podrían atribuir a la falta de nitrógeno o a la poca absorción de este nutriente ya que se
A
presenta color amarillo en el follaje, las hojas de menor tamaño, angostas y poco numerosas.
RI
El desarrollo de la planta es lento, el fruto es pequeño, con corona pequeña y ausencia de
A
hijuelos. Sin embargo, los campos de piña están siendo fertilizados con fuentes de nitrógeno,
CU
fosforo y potasio más aplicaciones foliares, persistiendo aun así la característica de
amarillamiento de la planta llamado localmente “la gringa” (Mejía, 2017).
PE
Los problemas presentes en la producción de frutales como la piña, generalmente se
RO
presentan en etapas diferentes, debido a que no existe un programa de producción de semilla
de calidad de piña, obliga a que el agricultor utilice hijuelos producto de su misma cosecha
AG
repercutiendo en la calidad de la planta y en su producción. Es por ello que, el productor
debe de buscar alternativas para mejorar la calidad dela planta, y una de ellas puede ser
AS
mediante el uso de plantas obtenidas por micropropagación (Mejía, 2017).

CI
De acuerdo con Clava y Perez (2005), el cultivo in vitro o micropropagación se refiere a un

EN
conjunto de métodos para cultivar células, tejidos u órganos vegetales en condiciones

estériles, controladas y libres de microorganismos basados en el principio de totipotencia
CI
celular.
DE
Según George y Debergh (2008), el propósito de la propagación de plantas vía

micropropagación, es la de obtener clones. El cultivo de tejidos comienza a partir de piezas
CA
pequeñas de tejido u órganos de plantas llamados explantes obteniendo así microplantas.

TE
El cultivo in vitro mejora la eficiencia de la propagación del cultivo de piña, permite obtener
un material de alta calidad genética y fitosanitaria; y debido a que genera un costo beneficio
IO
postivo, ha impulsado la investigación en cultivo de tejidos, donde se han obtenido

BL
resultados positivos en el mejoramiento de la producción, aumento de la tasa de crecimiento

BI
y plantas libres de enfermedades (Mejía, 2018).
El cultivo de piña en la región La Libertad esta mayormente concentrado en los lugares de

Simbal, Poroto y Laredo. Este cultivo es ampliamente conocido y del mismo modo es un
producto alimenticio en la dieta de la población liberteña. En los lugares mencionados, se
11
cultiva en todo el año, resaltando la Var. Roja Trujillana por su rendimiento mayor entre
otras variedades, por presentar tolerancia a problemas de suelo y buena adaptación a las
condiciones climáticas de la región La Libertad (Mejía, 2017).
En el Perú, el cultivo de piña, está concentrado en ceja de selva y en Costa central, pero el
S
precio se incrementa cuando estas son colocadas en mercado liberteño, ocasionando niveles
A
bajos de aceptación en el consumo de la población, por lo que la producción de píñar Var.
RI
Roja Trujillana se mantiene de forma estable (Mejía, 2017).
A
En un recorrido a nivel de zonas y productores en Poroto, donde se puede apreciar la des
CU
uniformidad de plantas en las áreas cultivadas, en número de macollos, producción de cepas
PE
y también el factor más importante en cuanto a calidad de fruto. Uno de las posibles causales
de esta situación se debe a que no hay hasta la fecha un programa nacional de producción de
RO
semillas de piña, que le permita al agricultor acceder a materiales de calidad, a su vez instalar
nuevas áreas de cultivo con semilla de calidad (Mejía, 2017). AG
Según Garcia (2005), la piña es la planta más conocida de las 2,700 especies agrupadas en
AS
56 géneros de la familia Bromeliaceae, siendo principalmente cultivada como alimento, es

una especie auto-incompatible puesto que no presenta semilla y se propaga vegetativamente
CI
por brotes laterales y el enraizado de las hojas que se encuentran en la parte superior del
EN
fruto. Su fruto es denominado como baya (infrutescencia estéril) puede llegar a pesar
aproximadamente 2kg y de un sabor dulce y jugoso.
CI
Es una planta perenne, auto estéril y herbácea, la forma de propagación es por vía vegetativa,
DE
sin embargo, existen técnicas de reproducción sexual. La planta productora de piña tiene
como características principales en su etapa adulta: altura entre 1 a 2 metros y un ancho de
CA
1 a 2 m. Siendo su carga genética de 2n = 50. Desarrolla raíces numerosas, gruesas y

turgentes en suelos fértiles y de buena aireación, además de desarrollar raices absorbentes
TE
(Figueroa, 1970) teniendo la característica de distribuirse de manera superficial entre los

IO
primeros 20 a 30 cm de profundidad, puede alcanzar algunas veces profundidades más

BL
profundas dependiendo de la variedad. El sistema radicular llega a alcanzar un ancho entre

1 a 2 m lateralmente y 0,85 m en profundidad. El número de raíces producidas dependerá
BI
del peso del hijuelo vástago (Bartholomew, 2003).
El volumen de producción total en el Perú, llegó a bordar las 548 465 tm, de las cuales el
72% fue procedente de la región Junín (328 671 tm). De igual manera, las regiones de La
12
libertad (23 878 tm), San Martín (17 642 tm), Loreto (16 907 tm), Puno (16847 tm), Huánuco
(13 150 tm) y Amazonas (9 778 tm) fueron de gran importancia dentro de la producción
nacional. El cultivo de piña se realiza durante todo el año, en todas las regiones mencionadas,
mostrando incrementos en los meses finales del año (entre octubre y diciembre) en las
regiones orientales, en diferencia con la Libertad, así como también con el resto de regiones
A S
de la costa norte, cuya producción ocurre en los primeros meses del entre enero y marzo.
RI
(Ministerio de Agricultura y riegos, 2018).
A
En el Perú el rendimiento promedio llega a las 28,6 𝑡. ℎ𝑎 −1 siendo los rendimientos más
CU
altos los que posee la región Junín con 51.6 t/ha, a su vez Puno con 23.4 t/ha, Ucayali con
22.7 t/ha y La Libertad con 20.1 t/ha. Las regiones de Loreto y Amazonas son las que tienen
PE
los rendimientos más bajos en el país con un promedio de 8.7 𝑡. ℎ𝑎−1 (Ministerio de
RO
Agricultura y riegos, 2018).
Además, Mejía (2017), afirma que en la libertad la producción de piña está concentrada en
AG
los distritos de Poroto, Laredo y Simbal, destacando las variedades “Roja Trujillana” y
“Cayena Lisa”. La cultivo y producción de piña se realiza durante todo el año, siendo los
AS
primeros meses del año entre enero y marzo donde se muestran mayores incrementos
CI
La Variedad “Roja Trujillana” es una variedad cultivada en la región de La Libertad. Las

EN
plantas presentan un vigor y porte mediano, las hojas lisas, no presentan espinas y son de
color verde oscuro-rojizo; el fruto de características de tamaño medio, con una corona
CI
simple, en su mayoría con una forma de cilindro, presenta bulbillos basales y menor cantidad
DE
de hijuelos. La parte externa del fruto presenta una coloración rojiza muy vistosa cuando
llega a la madurez, la pulpa presenta buena consistencia y un color blanco cremoso; “ojos”
CA
de tamaño medio y plano (Manual de piña, 2012).
Según Indacochea et.al (2018) la micropropagación o técnica de cultivo in vitro, es una

TE
alternativa atractiva para la multiplicación masiva de cultivares, permiten incrementar los

IO
coeficientes de multiplicación y a su vez la obtención de material vegetal, permitiendo

BL
obtener plantas libres de enfermedades fitosanitarias.

BI
Además, Llanos (2015), afirma que la micropropagación in vitro es una técnica elaborada
que para su realización requiere de laboratorios especializados. Sin embargo, este método
puede ser usado no solo para la producción de plantas libres de enfermedades y de óptima
13
calidad, a su vez también, cuando se presenta una disminución del material genético para la
instalación de la plantación.
El cultivo de tejidos in vitro comprende, en su definición general, como un grupo de

diferentes técnicas mediante las cuales un explante se cultiva en condiciones asépticas, en
S
un medio químico de composición definida y se incuba en condiciones ambientales
A
controladas. (Mogrinski y Roca, 1990).
RI
En segundo término, los objetivos perseguidos con la utilización del cultivo in vitro de
A
tejidos vegetales son numerosos y diferentes, pudiéndose aplicar para estudios básicos de
CU
fisiología, genética, bioquímica, para la bioconversión y producción de compuestos útiles,
PE
en el incremento de la variabilidad genética, para la obtención de plantas libres de patógenos,
propagación de plantas y para la conservación e intercambio de germoplasma (Mogrinski y
RO
Roca, 1990).
AG
Los medios de cultivo son una parte importante del cultivo in vitro, dentro de la composición
de estos medios se pueden encontrar las sustancias necesarias para el crecimiento y
AS
desarrollo de los tejidos vegetales. El medio de cultivo es una solución acuosa en la que se
disuelven sales minerales que aportan elementos esenciales de macronutrientes y
CI
micronutrientes (Navarro,1979).
EN
Según Navarro (1979), es necesaria una fuente de carbono como la sacarosa, donde suele ser
CI
importante debido a la baja actividad fotosintética de los tejidos in vitro. Además, el medio
puede llegar a ser enriquecido con aminoácidos, vitaminas y reguladores del crecimiento.
DE
Los medios de cultivo se preparan a partir de soluciones de concentración 10x o 100x

(soluciones stock o stock). Se pueden mezclar varias sales minerales en la solución madre
CA
siempre que no haya problemas de precipitación, siendo uno de estos el caso del hierro en la
que se utilizan en forma de quelatos para estar disponibles durante el cultivo invitro, además
TE
de ello señala que existen diferentes tipos de medios de cultivo, pudiendo ser de forma
IO
líquida o sólida utilizando el agar como un gelificante.

BL
Actualmente se cuenta con información detallada acerca de las diferentes técnicas de cultivo
BI
in vitro, y con los protocolos de muchas especies vegetales (Dixon, 1985; Vidalie, 1986;
Conger, 1987; Bajaj, 1988; Pollard & Walker, 1990; Roca & Mroginski, 1991), sin embargo,
existen especies en las cuales el establecimiento, multiplicación y/o enraizamiento de los
cultivos es dificultoso y por tanto requiere de la realización exhaustiva de distintos
14
experimentos para lograr su micro propagación o para la obtención de callos o suspensiones

capaces de producir los explantes deseados.
El cultivo in vitro de piña ha sido estudiado por DeWald et al (1988) para determinar la
eficiencia del cultivo de brotes axilares, para la rápida propagación de varios cultivares
S
distintos, además la técnica ha sido utilizada para maximizar la tasa de éxito de varios pasos
A
en la producción de plantas de piña y para una rápida multiplicación en masa de plántulas.
RI
Para desarrollar una mejor tasa de las fases de multiplicación y enraizamiento es necesario
A
el uso de reguladores de crecimiento, Salisbury y Ross (1994), afirman que a medida que se
CU
identificaron cada vez más los reguladores de crecimiento y se estudiaron sus efectos y
PE
concentraciones; cada uno de ellos no sólo influye en las respuestas de muchas partes de la
planta, sino que dichas respuestas dependen de la especie, el órgano o etapa de desarrollo,
RO
así como de las concentraciones endógenas y exógenas; además de las interacciones entre
los reguladores del crecimiento y factores ambientales diversos. AG
Dentro de los reguladores de crecimiento, se encuentran las auxinas, que son aquellos
AS
compuestos que regulan el desarrollo de las plantas, además de tener la función de estimular
el crecimiento y desarrollo vegetativo, afectando la división celular, el crecimiento y la
CI
formación de raíces (Weaver, 1976).

EN
Las auxinas son las que tienen mayor efecto sobre la formación de raíces adventicias, esto
CI
debido a que las hojas jóvenes y brotes activos son la principal fuente de auxinas endógenas,
permitiendo la formación de raíces en ausencia de auxina exógena. Las auxinas aplicadas de
DE
forma exógena inducen el desarrollo de raíces adventicias, más comúnmente utilizadas el

ácido 3-indolbutírico (IBA) y el ácido naftalén acético (ANA), induciendo más
CA
efectivamente el enraizamiento que la auxina natural, el ácido 3- indolacético (AIA).

(Hartmann, 1997).
TE
El ácido indolbutírico (IBA) es la auxina más común en la propagación vegetativa de plantas;

IO
este efecto se logra debido a su estabilidad y baja movilidad; la otra auxina más usada ha
BL
sido el Ácido Naftalenacético (ANA), presenta más movilidad y por tanto menos estabilidad
BI
y consistencia. En la propagación invitro, se utiliza para inducir la formación de raíces en

los callos indiferenciados y a la vez sirve de estimulante en la división celular. (Weaver,
1976)
15
El ácido Indol butírico IBA se usa con más frecuencia que el NAA o cualquier otra auxina
con la finalidad de generar el desarrollo de raíces. Él IBA permanece activo a pesar de su
rápido metabolismo a IBA-asparto y al menos otro compuesto conjugado péptidico. Se ha
sugerido que la formación de conjugados conserva él IBA, cuya liberación gradual mantiene
un nivel suficiente de concentración de IBA, especialmente durante las etapas finales de la
A S
formación de la raíces. (Raven, 1999)
RI
Existen estudios que determinaron rangos de dosis en protocolos de propagación in vitro
A
oscilando entre 0.1 mg. L-1 hasta 10 mg. L-1 (Delgado y Rojas, 1999). Según Vega et al
CU
(2016) investigaciones han determinado que, para estimular los procesos de crecimiento y
desarrollo, lo ideal es utilizar bajas concentraciones, debido a que un exceso de estos
PE
reguladores puede interferir con la multiplicación celular y causar la senescencia del tejido
RO
En lo mencionado por Mejía (2017), los productores de piña en los distritos de Poroto y
Salpo tienen serios problemas con la uniformidad de la plantación y las infestaciones de
AG
plagas y enfermedades, debido a que muy a menudo obtienen sus semillas de los campos
vecinos siendo importante purificar el material de propagación mediante la técnica de cultivo
AS
in vitro para evitar esta contaminación constante. Esta actividad no solo estandariza cada
CI
zona de cultivo seleccionando semillas por tamaño y especie, sino que también es posible
crear campos semilleros y unidades de cultivo para no introducir plantas que supongan serios
EN
problemas fitosanitarios en el campo final; asegurando así la uniformidad del cultivo, lo que
CI
se traduce en una mejor calidad de la fruta en la cosecha, además, se podrá aportar semilla
de piña de buena calidad sin el riesgo que estas puedan diseminar o transmitir enfermedades
DE
o plagas como si ocurre con el uso tradicional de cormos e hijuelos. Por lo expuesto en esta
investigación se busca determinar el mejor medio de cultivo para el enraizamiento de
CA
plántulas in vitro de Ananas comosus L. Merrill var. Roja Trujillana.

TE
IO
BL
BI
16
CAPITULO II
MATERIAL Y MÉTODOS
2.1. UBICACIÓN
A S
El experimento se llevó a cabo en el Laboratorio de Biotecnología Vegetal de la E.A.P de
RI
Agronomía, ubicado en el segundo nivel, en la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la
A
Universidad Nacional de Trujillo.
CU
Para la realización del experimento se utilizó un estante de madera de bordes laminados, el
mismo que poseía anaqueles con iluminación a base de tubos fluorescentes de luz blanca en
PE
donde se colocaron las unidades de forma ordenada y al azar.
RO
2.2. MATERIALES
• Dimensiones del estante:

AG
- Largo: 1.30 m
AS
- Ancho: 0.50 m
- Altura: 2.0 m
CI
- Numero de anaqueles: 5
EN
- Fluorescentes por anaquel: 4

• Equipos
CI
- Cámara de flujo laminar BIOBASE, dimensiones: 2.0 x 1.10 x 0.70 m.

DE
- Destilador de agua BOECO (Destank 4000), de 8 litros de capacidad.

- Estufa MERMENT modelo 30-750
CA
- Autoclave HNTEK modelo 4x-2800, de 20 litros de capacidad.

TE
Material de Vidrio
IO
- Vasos de precipitación (50, 100, 500 y 1000 ml de capacidad).

BL
- Pipetas (0.5, 1 y 2 ml).

- Placas Petri (10 cm de diámetro)
BI
- Probeta (50 ml de capacidad)

- Varilla de agitación (30 cm)
17
Material de plástico
- Balde (10 L)
- Galoneras (4 L )
- Pisetas (250 ml)
S
Material de metal
A
RI
- Mango de bisturí N° 7
A
- Hoja de bisturí N° 11
CU
- Pinzas (20 cm)
- Tijeras
PE
- Cuchillo de acero (40 cm)
RO
Material de limpieza
- Lejía (1 galon)
- Detergente (1 kg)
AG
- Escoba
AS
- Trapeador
- Esponja verde
CI
EN
Otros Materiales
- Algodón hidrófilo (1 paquete)
CI
- Guardapolvo
DE
- Papel de aluminio (1 rollo)

- Papel Bond A4 ( 1 millar)
CA
- Papel Bulki (1 millar)

Insumos
TE
• Sales MS
IO
• Agua Destilada
•
BL
Agar granulado
• Alcohol de 96°
BI
• Azúcar blanca
• Hidróxido de sodio
• Reguladores de crecimiento:
• Ácido indolbutirico (IBA)
18
2.3. MÉTODOS
2.3.1. DISEÑO EXPERIMENTAL
• Diseño general:
A S
El diseño que se utilizó para contrastar la hipótesis del experimento, fue un Diseño
RI
Completamente aleatorizado (DCA) con 16 tratamientos incluido el testigo.
A
CU
Los resultados fueron analizados a través del ANOVA y la prueba Tukey con un nivel de
significancia de 0.01 con el fin de comparar las medias de los tratamientos.
PE
2.3.2. TRATAMIENTOS DE ESTUDIO
RO
Se han realizado 16 tratamientos y 12 repeticiones incluido el testigo y se ha evaluado cada
5 días, por lo que se ha obteniendo en total 6 evaluaciones en 30 dias que duró el
AG
experimento.
AS
Los datos obtenidos se procesaron utilizando el programa Microsoft Excel y el programa

SPSS 23.
CI
Tabla 1. Tratamientos de estudio

EN
CLAVE/
CI
DESCRIPCION REPETICIONES
TRATAMIENTO
DE
T 0 (Testigo) SALES MS 100% 12

T1 SALES MS 95% + 5% Agua Destilada 12
CA

TE

IO

BL

BI

T8 SALES MS 100% + IBA 0.08 ppm (8 ml) 12
SALES MS 95% + 5% Agua Destilada +
T9 12
IBA 0.08 ppm (8 ml)
19

T 10 12
IBA 0.08 ppm (8 ml)
T11 12
IBA 0.08 ppm (8 ml)
S
T12 12
A
IBA 0.08 ppm (8 ml)
RI
T13 12
A
IBA 0.08 ppm (8 ml)
CU
T14 12
IBA 0.08 ppm (8 ml)
PE
T15 12
RO
IBA 0.08 ppm (8 ml)
AG
2.3.3. PROCEDIMIENTO
AS
El cultivo se realizó en frascos de vidrio autoclavables de 250 ml de capacidad y de

dimensiones de 5 cm de diámetro y 10 cm de alto.
CI
El experimento se realizó en el Laboratorio de Biotecnología Vegetal de la Facultad de

EN
Ciencias Agropecuarias de la Universidad Nacional de Trujillo que está dividido en

CI
diferentes áreas destinadas para lavado, desinfección, preparación de medios, y cámara de

incubación.
DE
Además, cuenta con equipos especializados para realizar el trabajo de micropropagación

CA
como cámara de flujo laminar, autoclave, destilador, estufa y balanza analítica.
Metodología de estudio
TE
A. Preparación de solución stock:

IO
Se preparó solución stock a una concentración de 10x. Para esto, en un vaso de precipitación
BL
previamente lavado y enjuagado con agua destilada, se agregó inicialmente 0.25 litros de
agua destilada aproximadamente. Luego se empezó a pesar las sales con la ayuda de la
BI
balanza analítica, para lo cual se usó un pedazo de papel aluminio como tara y se fueron
pesando uno por uno las sales necesarias para la solución stock MS a 10x. Se siguió el orden
y las cantidades indicadas en la tabla 2.3.
20
Para las sales del orden 13 y 14, se tuvo que disolver en agua caliente y seguido se les agregó
a la solución previamente preparada. Se tuvo que tener sumo cuidado en el pesado y se agitó
hasta que no quedaran residuos sólidos en el fondo del vaso de precipitación. Para los
componentes 13 y 14, se disolvieron en agua caliente, y se les agregó junto con el
mioinositol.
A S
Luego se procedió a enrasar el vaso de precipitación a la medida exacta de 0.5 litros y con
RI
la ayuda de una varilla de vidrio se agitó hasta que no quedaron residuos sólidos.
A
Seguido se procedió a dispensar 50 ml en bolsitas de plástico y se colocaron en la
CU
refrigeradora.
En la presente investigación se ha utilizado solución stock a una concentración de 10x. Se
PE
pueden utilizar las otras concentraciones para otros casos.
RO
Tabla 2. Cuadro de concentraciones de soluciones stock MS (g) RMA
N° 1x 5x 10x AG 20x 40x 80x

1 1.65 8.250 16.50 33.0 66.0 132.00
AS
2 1.9 9.50 19.0 38.0 76.0 152.00

3 0.44 2.20 4.40 8.80 17.60 35.200
CI
4 0.17 0.850 1.70 3.40 6.80 13.600

EN
5 0.0062 0.0310 0.062 0.1240 0.248 0.496

6 0.0168 0.0840 0.1680 0.3360 0.672 1.344
CI
7 0.0086 0.0430 0.0860 0.1720 0.344 0.688

DE
8 0.00083 0.004150 0.00830 0.01660 0.033 0.066

9 0.00025 0.001250 0.00250 0.0050 0.010 0.020
CA
10 0.000025 0.0001250 0.000250 0.00050 0.0010 0.002

11 0.000025 0.0001250 0.000250 0.00050 0.0010 0.002
TE
12 0.37 1.850 3.70 7.40 14.80 29.600

IO
13 0.03725 0.186250 0.37250 0.7450 1.490 2.980

14 0.02785 0.139250 0.27850 0.5570 1.114 2.228
BL
15 0.1 0.5 1.0 2.0 4.0 8.0

BI
Agua 125 ml 250 ml 500 ml 1000 ml 2000 ml 4000

destilada
21
Tabla 3. Sales Minerales necesarias para la preparación de la solución stock MS - RMA a

una concentración de 10x
N° COMPUESTO PESO (gr) NOMBRE
S
1 NH4NO3 16.500 Nitrato de amonio
A
2 KNO3 19.000 Nitrato de potasio
RI
3 CaCl22H2O 4.400 Cloruro de calcio dihidratado
A
CU
4 KH2PO4 1.700 Fosfato monopotásico
5 H3BO4 0.062 Ácido Bórico
PE
6 MnSO47H2O 0.109 Sulfato de Manganeso hidratado
RO
7 ZnSO47H2O 0.086 Sulfato de Zinc heptahidratado
8 KI 0.0082 Ioduro de Potasio

AG
9 Na2MoO42H2O 0.0025 Molibdato de Sodio dihidratado
AS
10 CUSO45H2O 0.00025 Sulfato cúprico pentahidratado
11 CoCl26 H2O 0.00025 Cloruro de Cobalto exahidratado

CI
12 MgSo47H2O 3.700 Sulfato de Magnesio heptahidratado

EN
13 Na EDTA 0.3725 Ethylendiaminatetraacético de Sodio

CI
14 FeSO47H2O 0.2785 Sulfato de hierro Heptahidratado

DE
15 CeHi2O8 1.000 Meso inositol o mioinositol (Vitamina)

CA
Tabla 4. Vitaminas necesarias para la preparación de medio MS - RMA a una

TE
concentración de 10x
IO
N° Compuesto Peso (gr/l)

BL
1 Tiamina 0.001
2 Glicina 0.02
BI
3 Acido Nicotínico 0.005

4 Pyridoxina 0.005
22
B. Preparación del medio de cultivo
En el presente experimento, se preparó medio de cultivo de Murashige y Skoog (MS) en los

tratamientos establecidos con reguladores de crecimiento y sus concentraciones.
Para la preparación de los tratamientos de siguió la siguiente secuencia:
A S
-Se añadió a un vaso de precipitación de 1 L de capacidad, aproximadamente 500 ml de agua
RI
de destilada, 50 ml de solución stock MS (10x) y 1.2 ml de NaOH, seguido se procedió a
A
agitar con la ayuda de una varilla y se enrazó el vaso de precipitación a 1 litro con agua
CU
destilada. Este método sirvió para poder preparar los tratamientos con las concentraciones
de sales MS indicadas en los tratamientos.
PE
-Para la preparación de los tratamientos se separó en otro vaso de precipitación 400 ml de la
RO
solución anterior para agregarle los demás ingredientes, que se calcularon con una simple
proporción, para 400 ml de medio MS corresponden 12 gr de azúcar y 2.8 gr de agar. Para
AG
los demás tratamientos se utilizaron las concentraciones indicadas en el cuadro siguiente.
Tabla 5. Cantidades de medio de cultivo MS y agua destilada empleadas en la preparación

AS
de los tratamientos de estudio

CI
Medio de cultivo MS Agua

EN
Concentraciones destilada
CI
Sales MS 100 % 400 ml 0 ml

Sales MS 95% + 5% Agua Dest. 380 ml 20 ml
DE

CA

TE

IO
Sales MS 65% + 35% Agua Dest. 260 ml 140

BL
BI
-Se tuvo que tener en cuenta los tratamientos con las concentraciones de IBA, para lo cual,
se le agregó la cantidad necesaria y se agitó con la ayuda de una varilla de vidrio.
-Después de preparar el medio de cultivo, se procedió a dispensar 30 ml en cada frasco de
vidrio, obteniéndose 12 frascos equivalente a 12 repeticiones por cada tratamiento de
23
estudio. Los frascos fueron tapados con papel aluminio y numerados, con ayuda de un
plumón indeleble, indicando cada tratamiento y repetición. Seguido se llevaron a la
autoclave para su esterilización.
-La autoclave se programó a 121°C durante 20 minutos.
-Terminado el proceso de esterilización en la autoclave, se retiraron los frascos conteniendo
A S
el medio de cultivo y se colocaron en orden para su enfriado y posteriormente realizar el
RI
proceso de micropropagación.
A
CU
C. Preparación de reguladores de crecimiento
Preparación de IBA a una concentración de 100 ppm:
PE
-Se pesó 2 gr de IBA en polvo con la ayuda de la balanza analítica, y se disolvió en
aproximadamente 1 ml de alcohol, luego se enrazó a una cantidad de 100 ml de agua
RO
destilada y posteriormente se refrigeró para su conservación. Para los tratamientos se empleó
8 ml de IBA, que equivalen a 0.08 ppm. AG
AS
D. Micropropagación
Las plántulas in vitro de Piña, fueron proporcionadas por el Laboratorio de Biotecnología de
CI
la E.A.P. de Agronomía a cargo del Ing. Rubino Mejía Anaya.

EN
Para el proceso de micropropagación se realizó lo siguiente:

-Se limpió el interior de la cámara de flujo laminar con una solución de lejía al 10%, y usando
CI
un pedazo de algodón.
DE
-Se colocó un mechero en el centro y a la derecha las bolsitas conteniendo el material vegetal
en estadío 2, a la izquierda se colocó el medio de cultivo previamente preparado y separado
CA
por tratamientos.
-Se flameó los instrumentos de metal como pinzas, tijeras y bisturí y se colocaron sobre
TE
placas Petri. Luego se retiró un pedazo de papel esterilizado y sobre este se realizaron los
cortes del material vegetal.
IO
-Al terminar el proceso se rotuló identificando el número de tratamiento y fecha en que se

BL
realizó el proceso. Se colocaron en el anaquel designado en la cámara de incubación.

BI
24
E. Ubicación de los tratamientos en 4 pisos del anaquel
A S
A RI
CU
PE
RO
AG
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
Figura 1. Ubicación de los tratamientos completamente aleatorizados.

BL
F. Parámetros evaluados:
BI
Se cultivó 4 plántulas en cada frasco por repetición, al momento de instalar se tuvo sumo
cuidado de que todas las plántulas tuvieran el mismo tamaño, en cada frasco con su
respectivo medio de cultivo por tratamiento.
25
Cada frasco fue rotulado indicando la fecha, tratamiento y repetición para posteriormente
colocarlos en el anaquel debidamente ordenados. Se consideró la evaluación de los
siguientes parámetros:
a. Longitud de Raíz
S
Se realizó la medición con la ayuda de una regla graduada en centímetros, para ello se colocó
A
la regla encima del frasco y se fue midiendo el tamaño de cada raíz.
RI
Se realizaron 6 evaluaciones, cada 5 días por un mes. Los resultados de las mediciones
A
fueron expresados en centímetros.
CU
b. Número de Raíces
PE
Se procedió a contar el número de raíces de cada planta por frasco, para ello se fue marcando
RO
con la ayuda de un plumón por encima del frasco y evitar que la misma raíz vuelva a ser
contada en cada evaluación, se realizaron 6 evaluaciones, cada 5 días por un mes.
AG
c. Diámetro de Raíz
AS
Se retiró cada planta y con la ayuda de un vernier se procedió a medir el diámetro de las
raíces en conjunto, la medición se realizó al final del experimento. Los resultados de las
CI
mediciones fueron expresados en centímetros.

EN
d. Número de hojas
CI
Se procedió a contar el número de hojas de cada planta por frasco, se realizaron 6

DE
evaluaciones, cada 5 días por un mes.

CA
e. Peso fresco de vitroplantas (de la planta y raíces)

Se retiró cada planta de su frasco y se procedió a pesar el peso fresco de las vitroplantas, se
TE
realizó al término del proyecto, utilizando una balanza electrónica. El resultado de la

IO
medición fue expresado en gramos.

BL
f. Peso seco de vitroplantas (de la planta y raíces)

BI
Se hizo después de haber realizado el pesado fresco de las vitroplantas, se colocaron dentro
de sobres rotulados con sus respectivos tratamientos, en la estufa a 121° C por 24 horas y
después se procedió a pesarlas, para ello se utilizó una balanza electrónica. El resultado de
la medición fue expresado en gramos.
26
CAPÍTULO III
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
3.1. LONGITUD DE RAÍZ
A S
En la variable longitud de raíz, se determinaron diferencias estadísticas significativas entre
RI
tratamientos, siendo el tratamiento T4 (SALES MS 80% + 20% Agua Destilada) que
A
presentó mayor longitud de raíz con 3.10 cm; seguido de los tratamientos T12 (SALES MS
CU
80% + 20% Agua Destilada + IBA 0.08 ppm (8 ml) con 3.05 cm; T2 (SALES MS 90% +
10% Agua Destilada con 2.96 cm, y el tratamiento T9 (SALES MS 95% + 5% Agua
PE
Destilada + IBA 0.08 ppm(8ml)) con 2.95 cm respectivamente frente al testigo T0 (SALES
RO
MS 100%) que obtuvo 1.95 cm de longitud de raíz y demás tratamientos realizados.
Tabla 6. ANOVA de la Longitud de raíz.

AG
FV SC GL CM F P valor SIG
Tratamientos 13.100 15 0,873 3.377 0.0002 0.01
AS
EE 20.688 80 0,259
CI
Total 641.312 96
CV = 24%
EN
Tabla 7. Comparación múltiple de Tukey de la variable Longitud de raíz.

CI
Clave Tratamiento Longitud de Raíz (cm.)

DE
T4 SALES MS 80% + 20% Agua Destilada 3.10 a

T12 SALES MS 80% + 20% Agua Destilada + IBA 0.08 ppm (8 ml) 3.05 a
T2 SALES MS 90% + 10% Agua Destilada 2.96 a b
CA
T9 SALES MS 95% + 5% Agua Destilada + IBA 0.08 ppm (8 ml) 2.95 a b

TE

IO
T8 SALES MS 100% + IBA 0.08 ppm (8 ml) 2.42 a b

BL

BI
T0 SALES MS 100% 1.95 a b
T11 SALES MS 85% + 15% Agua Destilada + IBA 0.08 ppm (8 ml) 1.77 b
Los promedios unidos con una misma letra minúscula son estadísticamente iguales según
prueba de Tukey HSD al 0.99%
27
3.50
3.00
S
2.50
A
RI
Longitud (cm.)
A
2.00
CU
1.50 3.10 3.05
PE
2.96 2.95
2.68 2.65 2.63
2.58
2.42 2.37
RO
2.31 2.28 2.28 2.28
1.00 1.95
1.77
AG
0.50
AS
0.00
CI
T4 T12 T2 T9 T1 T6 T3 T13 T8 T14 T5 T10 T15 T7 T0 T11

TRATAMIENTO
EN
CI
Figura 2. Longitud de raíz promedio por tratamiento.

DE
CA
Se determinó que existe diferencia significativa entre tratamientos (p<0.01) (tabla 6). Con el
tratamiento T4 (Sales MS 80% + 20% H2O D) se obtuvo un mejor promedio de 3.10 cm
TE
de longitud de raíz en plantas invitro de Ananas Comosus, en contraste con García et. al
(2012); quienes observaron un aumento en la longitud de las raíces en aquellos tratamientos
IO
donde estaba presente el IBA como regulador del crecimiento, mientras que en el tratamiento
BL
control, observaron un aumento en el largo de las raíces obteniendo 1.20 cm de longitud de

BI
raíz en el cultivo in vitro de Bambusa vulgaris. En el tratamiento control T0 (SALES MS

100%) de este experimento se logró obtener 1.95 cm de promedio de longitud de raíces.
28
3.2. NÚMERO DE RAÍCES
En la variable número de raíces, se determinaron diferencias estadísticas significativas entre

tratamientos, siendo el tratamiento T9 (SALES MS 95% + 5% Agua Destilada + IBA 0.08
ppm (8 ml)) que presentó mayor promedio de número de raíces con 30.3; seguido de los
S
tratamientos T5 (SALES MS 75% + 25% Agua Destilada) con 29.8 promedio de raíces, el
A
T6 (SALES MS 70% + 30% Agua Destilada) con un promedio de 29; el tratamiento T7
RI
(SALES MS 65% + 35% Agua Destilada) con un promedio de 28.3; frente al testigo T0
A
(SALES MS 100%) que obtuvo 16.8 raíces promedio y demás tratamientos realizados.
CU
Tabla 8. ANOVA del número de raíces
PE
RO
Tratamientos 1651.740 15 110.116 4.842 0.000 0.01
EE 1819.500 80 22.744
Total 57859.00 96 AG
CV = 25%
AS
Tabla 9. Comparación múltiple de Tukey de la variable número de raíces

CI
Clave Tratamiento Número de raíces

30.333
EN
T9 SALES MS 95% + 5% Agua Destilada + IBA 0.08 ppm (8 ml) a

CI

DE

CA
TE

IO

BL
T0 SALES MS 100% 16.833 b

BI
29
35
30
S
25
A
RI
Número de raíces
20
A
CU
15 30.3 29.8
29.0 28.8
25.8 24.8 24.8
PE
23.5 23.2 22.8 22.5 22.5
10 19.8 19.3
RO
16.8 16.8
5
AG
0
AS

TRATAMIENTOS
CI
EN
Figura 3. Número de raíces promedio por tratamiento.

CI
Se determinó que si existe diferencia significativa entre tratamientos (p<0.01) (tabla 8). El
tratamiento T9 (Sales MS 95% + 5% H2O D + IBA 0.08 ppm) fue el que generó mayor
DE
número de raíces (30.3 como media general); por otro lado, Abdelnour et al. (2002) quienes
evaluaron los porcentajes de enraizamiento utilizando un medio de cultivo MS completo
CA
(Sales MS 100%) y diferentes cultivares en ausencia de enraizadores. obtuvo una media 8.9
y 9.7 raíces por planta en el cultivo in vitro de Sechium edule.
TE
Por otra parte, según Rodriguez et. al (2015) encontraron que mayores concentraciones de
IO
IBA aumentaron el número de raíces, encontrándose en los tratamientos de 50% MS con

BL
0.1 y 0.2 ppm de IBA los valores significativamente más altos en clones de Ugni molinae.
BI
El valor promedio de longitud de las raíces osciló entre 0.189 y 0.124 cm para el Clon 1 y
0.169 y 0.123 mm para el Clon 2, observándose los valores menores en los tratamientos con
100% MS en presencia de IBA.
30
3.3. DIÁMETRO DE RAÍZ
En la variable diámetro de raíz, se determinaron estadísticas significativas entre tratamientos,

siendo el tratamiento T7 (SALES MS 65% + 35% Agua Destilada) el cual presentó mayor
diámetro de raíz con 1.58 cm promedio, seguido de los tratamientos T2 (SALES MS 90% +
S
10% Agua Destilada) con 1.26 cm; el tratamiento T6 (SALES MS 70% + 30% Agua
A
Destilada) con 1.15 cm y el tratamiento T5 (SALES MS 75% + 25% Agua Destilada) con
RI
1.09 cm frente al testigo T0 (SALES MS 100%) con 0.52 cm y demás tratamientos
A
realizados.
CU
Tabla 10.ANOVA del diámetro de raíz
PE
RO
Tratamientos 12.026 15 0.802 26.258 0.000 0.01
EE 2.443 80 0.031
Total 74.059 96 AG
CV = 50 %
AS
Tabla 11. Comparación múltiple de Tukey de la variable diámetro de raíz

CI
Clave Tratamiento Diámetro de raíz (cm.)

EN

CI
T5 SALES MS 75% + 25% Agua Destilada 1.09 b

T4 SALES MS 80% + 20% Agua Destilada 1.03 b c
DE
T15 SALES MS 65% + 35% Agua Destilada + IBA 0.08 ppm (8 ml) 0.88 c
T1 SALES MS 95% + 5% Agua Destilada 0.76 c
T8 SALES MS 100% + IBA 0.08 ppm (8 ml) 0.75 c
CA

TE
IO
T0 SALES MS 100% 0.52 c
BL
BI
31
1.80
1.60
1.40
A S
1.20
A RI
1.00
cm
CU
0.80 1.58
PE
1.26
0.60
1.15
1.09
RO
1.03
0.88
0.40 0.76 0.75 0.75
AG 0.66
0.60 0.58 0.55
0.52
0.20
0.25 0.20
AS
0.00
CI
TRATAMIENTOS
EN
Figura 4. Diámetro de raíz promedio por tratamiento.

CI
Se determinó que existe diferencia significativa entre tratamientos (p<0.01) (tabla 10). Con
DE
el tratamiento T7 (SALES MS 65% + 35% Agua Destilada) se obtuvo un mejor promedio

de diámetro de raíz con 1.58 cm; seguido de los tratamientos T2 (SALES MS 90% + 10%
CA
Agua Destilada), T6 (SALES MS 70% + 30% Agua Destilada), T5 (SALES MS 75% +

25% Agua Destilada) y T4(SALES MS 80% + 20% Agua Destilada) con 1.26, 1.15, 1.09
TE
y 1.03 cm respectivamente siendo determinante que, para obtener mayor promedio de

IO
diámetro de raíz, la concentración del medio de cultivo no debe ser del 100%, según refiere
Paz-Silva et al. (2009), donde recomienda que para lograr el enraizamiento invitro se debe
BL
de reducir la concentración del medio de cultivo hasta el 50% y a su vez disminuir las
BI
concentraciones de citoquininas y auxinas, como se ha evidenciado con esta variable en la

cual los mejores resultados se obtuvieron en ausencia de IBA.
32
3.4. NÚMERO DE HOJAS
En la variable número de hojas, se determinaron que no hay diferencias entre tratamientos,

siendo el tratamiento T2 (SALES MS 90% + 10% Agua Destilada) el que presentó el mayor
número de hojas promedio con 12.50; seguido de los tratamientos T4 (SALES MS 80% +
S
20% Agua Destilada) con 12.13 hojas promedio, el tratamiento T5 (SALES MS 75% + 25%
A
Agua Destilada) con 12.08 hojas promedio y T1 (SALES MS 95% + 5% Agua Destilada)
RI
con 11.88 hojas promedio respectivamente frente al testigo T0 (SALES MS 100%) con 10.63
A
hojas promedio y demás tratamientos realizados.
CU
Tabla 12. ANOVA del número de hojas
PE
RO
Tratamientos 31.167 15 2.078 4.125 0.000 0.01
EE 40.292 80 0.504
Total 12402.125 96 AG
CV= 8%
AS
Tabla 13. Comparación múltiple de Tukey de la variable número de hojas

CI
Clave Tratamiento Número de hojas

12.50
EN
T2 SALES MS 90% + 10% Agua Destilada a

CI
T1 SALES MS 95% + 5% Agua Destilada 11.88 a b c

T15 SALES MS 65% + 35% Agua Destilada + IBA 0.08 ppm (8 ml) 11.54 a b c
DE

CA
TE

T12 SALES MS 80% + 20% Agua Destilada + IBA 0.08 ppm (8 ml) 10.71 b c
IO
T8 SALES MS 100% + IBA 0.08 ppm (8 ml) 10.67 b c

10.63
BL
T0 SALES MS 100% b c
BI
33
14.00
12.00
S
10.00
A
RI
Número de hojas
A
8.00
CU
12.5 12.1
6.00 12.1 11.9
PE
11.5 11.4 11.4 11.3 11.3 11.2
11.1 11.1
10.7 10.7 10.6 10.4
RO
4.00
AG
2.00
AS
0.00
CI

TRATAMIENTOS
EN
CI
Figura 5. Número de hojas promedio por tratamiento.

DE
Se determinó que si existe diferencia significativa entre tratamientos (p<0.01) (Tabla 12).
CA
Con el tratamiento T2 (SALES MS 90% + 10% Agua Destilada) se obtuvo el mayor

número de hojas promedio con 12.5; seguido del tratamiento T4 (SALES MS 80% + 20%
TE
Agua Destilada) con 12.13 hojas promedio, donde se aprecia que es indiferente la varible
IO
número de hojas al efecto del regulador IBA, similares conclusiones obtuvo Castro et al
(2018) que estudió la combinación de auxina con medio de cultivo MS en plantas del genero
BL
Bromelia en las cuales halló que los tratamientos con MS sin reguladores de crecimiento y
BI
en aquellos suplementados con AIB, adicionados a los medios de cultivo solos o

combinados, no mostraron efecto aparente sobre el número de yemas formadas, brotes
desarrollados por explante, longitud y número de hojas por brote.
34
3.5. PESO FRESCO
En la variable peso fresco, se determinaron estadísticas significativas entre tratamientos,

siendo el tratamiento T4 (SALES MS 80% + 20% Agua Destilada) el que presentó el mayor
peso fresco con 18.3 gr.; seguido de los tratamientos T5 (SALES MS 75% + 25% Agua
S
Destilada) con 17.5 gr. y del tratamiento T6 (SALES MS 70% + 30% Agua Destilada) con
A
16.6 gr. de peso fresco promedio, frente al testigo T0 (SALES MS 100%) con 12.3 gr. y
RI
demás tratamientos realizados.
A
Tabla 14.ANOVA del peso fresco
CU
PE
Tratamientos 433.557 15 28.904 19.452 0.000 0.01
RO
EE 118.871 80 1.486
Total 18739.517 96
CV=18% AG
Tabla 15. Comparación múltiple de Tukey de la variable peso fresco
AS
Clave Tratamiento Peso fresco (gr.)

CI

EN

CI
DE

CA
T8 SALES MS 100% + IBA 0.08 ppm (8 ml) 12.7 b c
T0 SALES MS 100% 12.3 b c
TE
IO

BL
BI
35
20.0
18.0
16.0
S
14.0
A
12.0
A RI
Gr.
10.0
18.3
CU
17.5
8.0 16.6
15.3
14.5 14.5
13.3 13.1 13.0 12.9 12.8 12.7
PE
6.0 12.3
11.7 11.7
10.3
RO
4.0
2.0
AG
0.0
AS
TRATAMIENTO
CI
Figura 6. Peso fresco promedio por tratamiento.

EN
CI
Se determinó que si existe diferencia significativa entre tratamientos (p<0.01) (tabla 14).
DE
Con el tratamiento T4 (SALES MS 80% + 20% Agua Destilada) se obtuvo el mayor peso
fresco de vitroplantas con 18.3 gr. promedio, en contraste con Angel et al (2013), donde
CA
comparó métodos de propagación masal en piña variedad Golden, y donde si observó

diferencias significativas entre los tratamientos de estudio; es decir que el método del
TE
Sistema de Inmersión Temporal y el método convencional produjeron efectos diferentes en

IO
el peso fresco promedio de brotes (gr).

BL
BI
36
3.6. PESO SECO
En la variable peso seco, se determinaron estadísticas significativas entre tratamientos,

siendo el tratamiento T4 (SALES MS 80% + 20% Agua Destilada) que obtuvo 14.75 gr. de
peso seco promedio, seguido de los tratamientos T5 (SALES MS 75% + 25% Agua
S
Destilada) con 13.96 gr; el tratamiento T6 (SALES MS 70% + 30% Agua Destilada) con
A
13.07 gr y el tratamiento T9 (SALES MS 95% + 5% Agua Destilada + IBA 0.08 ppm (8
RI
ml)) con 11.77 gr; frente al testigo T0 (SALES MS 100%) con 8.84 gr de peso seco promedio
A
y demás tratamientos realizados.
CU
Tabla 16.ANOVA del peso seco
PE
RO
Tratamientos 433.557 15 28.904 19.452 0.000 0.01
EE 118.871 80 1.486
Total 10666.081 96 AG
CV=23%
AS
Tabla 17. Comparación múltiple de Tukey de la variable peso seco

CI
Clave Tratamiento Peso Seco (gr.)

EN

CI

DE
CA
TE

T0 SALES MS 100% 8.84 a b c
IO
BL

BI
37
16.00
14.00
12.00
A S
RI
10.00
A
CU
Gr.
8.00
14.75
13.96
13.07
PE
6.00 11.77
11.03 11.03
RO
9.77 9.61 9.47 9.36
9.28 9.16 8.84
4.00 8.20 8.16
6.79
AG
2.00
AS
0.00
CI
TRATAMIENTOS
EN
Figura 7. Peso seco promedio por tratamiento.

CI
DE
Se determinó que existe diferencia significativa entre tratamientos (tabla 16). Con el
tratamiento T4 (SALES MS 80% + 20% Agua Destilada) que obtuvo 14.75 gr. de peso
CA
seco promedio, seguido de los tratamientos T5 (SALES MS 75% + 25% Agua Destilada)
TE
con 13.96 gr; el tratamiento T6 (SALES MS 70% + 30% Agua Destilada) con 13.07 gr y
el tratamiento T9 (SALES MS 95% + 5% Agua Destilada + IBA 0.08 ppm (8 ml)) con
IO
11.77 gr; en el cual se utilizó el regulador de crecimiento. Sin embargo, según Martínez-
BL
Villegas et al. (2015) la acumulación de peso seco depende de la composición nutricional

BI
del medio de cultivo MS. En su estudio menciona que la acumulación de biomasa seca de
los brotes tuvo mayor valor en los primeros tratamientos con un medio de cultivo MS al 25
%; este resultado indicó el efecto negativo de las bajas concentraciones de nutrientes sobre
el crecimiento de los brotes.
38
CAPÍTULO IV
CONCLUSIONES
• Se logró el objetivo de determinar el mejor medio de cultivo para el enraizamiento de
S
plántulas in vitro de Ananas comosus L. Merrill var. Roja Trujillana, sobresaliendo el
A
tratamiento T9 (Sales MS 95% + 5% H2O D + IBA 0.08 ppm) con 30.3 raíces promedio,
RI
siendo este tratamiento el que se consideró por su mayor efectividad al generar mayor
A
número de raíces.
CU
PE
• La mayor longitud de raíz se obtuvo con el tratamiento T4 (SALES MS 80% + 20% Agua
Destilada) que presentó mayor longitud de raíz con 3.10 cm, por lo que se puede concluir
RO
que este tratamiento es beneficioso para la obtención de raíces más largas.
AG
• La tasa de enraizamiento fue de 1.01, es decir 30.3 raíces obtenidas promedio entre 30 días
que duró el experimento.
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
39
CAPÍTULO V: RECOMENDACIONES
• Se recomienda repetir el experimento ampliando con más variaciones de los tratamientos de

estudio y así poder contrastar y verificar los resultados obtenidos en el presente experimento,
variando el número de evaluaciones y reduciendo el número de días para así encontrar un
S
medio que permita obtener raíces en menos días de cultivo de Ananas comosus L. Merrill
A
var. Roja Trujillana.
A RI
• Utilizar MS al 100% + ANA 0.5 ppm. Como medio de cultivo en estadió III para obtener
CU
una mejor tasa de enraizamiento de Ananas comosus L. Merrill var. Roja Trujillana.
PE
RO
AG
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
40
CAPITULO VI
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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PE
RO
AG
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
44
A S
A RI
CU
PE
RO
AG
AS
ANEXOS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
45
A S
A RI
CU
PE
RO
AG
Frascos esterilizados para la labor de micropropagación.
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
Tesista en la labor de micropropagación.
46
A S
A RI
CU
PE
RO
AG
AS
Micropropagación de explantes.
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
Medición de explantes.
47
A S
A RI
CU
PE
RO
AG
Colocación de los tratamientos en los anaqueles.
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
Vista de enraizamiento de explantes.
48
A S
A RI
CU
PE
RO
AG
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
Toma de muestra de peso fresco.
49
A S
A RI
CU
PE
RO
AG
AS
Toma de muestra de peso seco.

CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
Medición de ancho de raíces.
50
A S
A RI
CU
PE
RO
AG
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
51
A S
A RI
CU
PE
RO
AG
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
52
A S
A RI
CU
PE
RO
AG
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
53

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ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGRONÓMICA

“Medios de cultivo para enraizamiento in vitro de Ananas comosus L.

Merrill var. Roja Trujillana en Trujillo, La Libertad.”

TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE

AUTOR: Ferrer De La Cruz, Martin Ronald

ASESOR: Dr. Luján Salvatierra, Ángel Pedro

A los profesores de la facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad Nacional de

AGRADECIMIENTOS ..................................................................................................... iii

PRESENTACIÓN ............................................................................................................. vii

MATERIAL Y MÉTODOS .............................................................................................. 17

CAPÍTULO V: RECOMENDACIONES ........................................................................ 40

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................................ 41

Tabla 1. Tratamientos de estudio......................................................................................... 19

Tabla 12.ANOVA del número de hojas .............................................................................. 33

Tabla 14.ANOVA del peso fresco ....................................................................................... 35

Tabla 15. Comparación múltiple de Tukey de la variable peso fresco................................ 35

Tabla 17. Comparación múltiple de Tukey de la variable peso seco .................................. 37

Figura 1 Ubicación de los tratamientos completos al azar.. ............................................... 25

Br. Ferrer De La Cruz, Martin Ronald

Autor: Br. Martin Ronald Ferrer De La Cruz (martinferrerdlc@gmail.com)

Asesor: Dr. Ángel Pedro Luján Salvatierra (pedrolujansalvatierra@hotmail.com)

media general) en comparación a los demás tratamientos, considerando el número de raíces

entre 30 dias que duró el experimento.

Palabras clave: Acido indolbutirico, micropropagación, cultivo invitro.

Author: Br. Martin Ronald Ferrer De La Cruz (mferrerdlc@gmail.com)

Advisor: Dr. Ángel Pedro Luján Salvatierra (pedrolujansalvatierra@hotmail.com)

30 days of the experiment.

Keywords: Indolbutyric acid, micropropagation, invitro culture

del total), las cuales se incrementaron en 561,3% en 2020 (ADEX, 2020).

mientras que en La Libertad se reportó para la campaña 2018, un rendimiento promedio de

productoras Trujillo, Bolívar, Otuzco, Pataz y Virú (Minagri, 2019).

Según el Minagri (2019), el distrito de Poroto es tiene como principal actividad

Mejía (2017), indica que el cultivo de la piña en Poroto, constituye en la actualidad la

mediante el uso de plantas obtenidas por micropropagación (Mejía, 2017).

De acuerdo con Clava y Perez (2005), el cultivo in vitro o micropropagación se refiere a un

conjunto de métodos para cultivar células, tejidos u órganos vegetales en condiciones

Según George y Debergh (2008), el propósito de la propagación de plantas vía

pequeñas de tejido u órganos de plantas llamados explantes obteniendo así microplantas.

postivo, ha impulsado la investigación en cultivo de tejidos, donde se han obtenido

resultados positivos en el mejoramiento de la producción, aumento de la tasa de crecimiento

y plantas libres de enfermedades (Mejía, 2018).

El cultivo de piña en la región La Libertad esta mayormente concentrado en los lugares de

56 géneros de la familia Bromeliaceae, siendo principalmente cultivada como alimento, es

1 a 2 m. Siendo su carga genética de 2n = 50. Desarrolla raíces numerosas, gruesas y

(Figueroa, 1970) teniendo la característica de distribuirse de manera superficial entre los

primeros 20 a 30 cm de profundidad, puede alcanzar algunas veces profundidades más

profundas dependiendo de la variedad. El sistema radicular llega a alcanzar un ancho entre

del peso del hijuelo vástago (Bartholomew, 2003).

La Variedad “Roja Trujillana” es una variedad cultivada en la región de La Libertad. Las

de tamaño medio y plano (Manual de piña, 2012).

Según Indacochea et.al (2018) la micropropagación o técnica de cultivo in vitro, es una

alternativa atractiva para la multiplicación masiva de cultivares, permiten incrementar los

coeficientes de multiplicación y a su vez la obtención de material vegetal, permitiendo

obtener plantas libres de enfermedades fitosanitarias.

El cultivo de tejidos in vitro comprende, en su definición general, como un grupo de

Los medios de cultivo se preparan a partir de soluciones de concentración 10x o 100x

líquida o sólida utilizando el agar como un gelificante.

experimentos para lograr su micro propagación o para la obtención de callos o suspensiones

formación de raíces (Weaver, 1976).

forma exógena inducen el desarrollo de raíces adventicias, más comúnmente utilizadas el

efectivamente el enraizamiento que la auxina natural, el ácido 3- indolacético (AIA).

El ácido indolbutírico (IBA) es la auxina más común en la propagación vegetativa de plantas;