TÉCNICA DE WESTERN BLOT

Western Blot es una técnica analítica, ampliamente utilizada, para el estudio

de proteínas. Este método permite la detección de una sola proteína dentro
de una muestra biológica. La especificidad del Western Blot se logra
mediante el uso de un anticuerpo que reconoce y se une a un epítopo único
de la proteína de interés.
En el laboratorio a menudo queremos medir si una proteína específica se
expresa en una muestra. Podemos hacer esto tomando el material de la
muestra y correrlo en un gel, y luego transferir las proteínas resueltas en una
pieza especial de una membrana - de papel, si se quiere - y luego se expone
el papel a una sonda que contine un anticuerpo contra la proteína específica
de interés. Debido a que el anticuerpo está marcado con una molécula que
podremos visualizar, podemos preguntarnos si la proteína de interés se
expresa en esta muestra y tener una idea de la concentracion, así como la
composicion y el tamaño es la proteína.
Básicamente, las transferencias de Western son herramientas útiles en
cualquier momento en que le gustaría obtener información sobre la
expresión de proteínas en sus muestras. Se puede usar para indicar si la
muestra expresa la proteína de interés o para realizar comparaciones
cuantitativas de los niveles de proteína entre diferentes muestras o grupos
de tratamiento. Es muy útil para validar la especificidad de un anticuerpo si
su objetivo final es usarlo en inmunohistoquímica, o inmunocitoquímica, ya
que la reacción cruzada se puede ver fácilmente en el western blot.
La detección de la proteína se puede hacer mediante métodos directos o
indirectos, cada uno con sus ventajas e inconvenientes. Los métodos directos
utilizan un anticuerpo primario conjugado con un marcaje detectable, como
una enzima, biotina o molécula fluorescente. Lo métodos indirectos utilizan
dos anticuerpos; un anticuerpo primario y un anticuerpo secundario contra la
especie del primer anticuerpo. En la detección indirecta, es el anticuerpo
secundario el que está conjugado con un marcaje detectable. Esta última es
la forma más utilizada debido a la amplificación de la señal que produce.
Hay tres tipos de detección que se usan comúnmente en el Western Blot,
quimioluminiscencia, fluorescencia y colorimetría
Procedimiento