IBMB INSTITUTO DE BIOLOGÍA

MOLECULAR Y BIOTECNOLOGÍA
TRUJILLO - PERU

BIOLOGÍA DE
Mycobacterium
tuberculosis

Blgo. Dr. José Guillermo González Cabeza gonzalezbiotec@hotmail.com

 Antecedentes Históricos
➢ Una enfermedad tan antigua como el hombre mismo

➢ Parece ser que el M.

tuberculosis moderno, ya
infectó a humanos hace
9,000 años en Atlit-Yam
(Hershkovitz et al., 2008)
Blgo. José González Cabeza
 Antecedentes Históricos

➢ Víctima de la tuberculosis,
Vivian Leigh (1913-1967).
Famosa por su papel de
Scarlett O'Hara en la
película "Lo que el viento se
llevó", la actriz Vivian Leigh
es una de las numerosas
víctimas causadas por la
tuberculosis
Blgo. José González Cabeza
 Antecedentes Históricos
“Enfermedad infecciosa crónica pulmonar y extrapulmonar, adquirida mediante inhalación en la estructura alveolar del
pulmón de núcleos de gotitas que contienen el bacilo de la TBC (Mycobacterium tuberculosis); se caracteriza por períodos de
infección temprana (a menudo asintomática), latencia y potencial recurrencia” *.

Blgo. José González Cabeza

 Antecedentes Históricos

Robert Koch, 1882

➢ Koch → Descubrió el agente causal → Aisló,

➢ Villemin → 1865 → reprodujo la enfermedad en animales y
Naturaleza infecciosa. recupero los bacilos en cultivos puros →
“Postulados de Koch”. Premio Nobel de
Fisiología o Medicina en 1905.
Blgo. José González Cabeza
Antecedentes Históricos

Blgo. José González Cabeza

 Tuberculosis

Blgo. José González Cabeza

 Tuberculosis

Blgo. José González Cabeza

 Tuberculosis

➢ Desde 1882 al día de hoy → Micobacterium tuberculosis ha matado más

de 300 millones de personas.
➢ Más de 2´000.000 muertes anuales y cada año 9´000,000 contraen la TBC
➢ 1 infectado → Cada segundo en el mundo.
➢ Enfermedad infecciosa de mayor prevalencia mundial.
➢ Cada año → Infecta al 1% de la población mundial.
➢ Sin tratamiento, un individuo con TBC puede infectar 10 a 15 personas
por año.
➢ 80% de los casos en el mundo se concentran en 22 países
➢ Limitaciones → Terapia anti-tuberculosa.
➢ Limitada → Eficacia de la BCG.

Blgo. José González Cabeza

Tuberculosis

Blgo. José González Cabeza

Tuberculosis

Blgo. José González Cabeza

 Taxonomía
➢ Existen aproximadamente 100 sp descritas, pero científicamente son
reconocidas 50.
➢ Micobacterias de Importancia clínica:
✓ Complejo Tuberculosis: M. tuberculosis, M. bovis.
✓ Complejo Avium: M. avium, M. intracellulare
✓ Complejo Lepra: M. leprae

➢ Orden: Actinomycetales
✓ Suborden: Corynebacterineae
❑ Familias:
▪ Corynebacteriaceae
▪ Nocardiaceae
▪ Mycobacteriaceae
Blgo. José González Cabeza
 Complejo Mycobacterium tuberculosis
1822, Robert Koch
M. tuberculosis
Principal causante de TBC en el mundo

M. bovis Transmisión a partir de la leche

Oeste de África

Hospedador exclusivamente humano

M. africanum
Infección por vía aérea

Asociado con VIH

M. microti Hospedador roedores

M. canettii Hospedador exclusivamente humano

Blgo. José González Cabeza

 Complejo Micobacterias patógenas
Mycobacterium
tuberculosis
BCG

Pacientes
con SIDA

Blgo. José González Cabeza

CARACTERÍSTICAS
BIOLÓGICAS DE
Mycobacterium

Blgo. José González Cabeza

 Microbiología
➢ Bacilo delgado, recto o ligeramente curvo, extremos redondeados.
➢ Ancho = 0,3 – 0,6 µ → Largo = 1 – 4 µ.
➢ No formadores de esporas.
➢ No capsulados.
➢ Inmóviles.
➢ Débilmente Gram Positivos → No sirve para identificación y/o
diagnóstico.
➢ Tinción → Ziehl - Neelsen → “Fucsia”.
➢ Vacuolas y alto contenido de fosfatos (apariencia en rosario).
➢ Velocidad de crecimiento variable:
✓ M. tuberculosis 20-22 horas → Cultivo 3-6 semanas.
✓ MNT menor tiempo → Cultivos menos de 7 días.

Blgo. José González Cabeza

 Microbiología

➢ Acido - Resistencia → Naturaleza de la pared = Alto contenido de lípidos

= “Barrera” → Hidrofobicidad → Colorante forma complejos con ácidos
micólicos = Impide salida de carbolfucsina “atrapada”.

➢ Alto contenido lipídico (60%) → ACIDOS MICOLICOS

✓ La alta concentración de lípidos en la pared celular de M. tuberculosis
ha estado asociado a:

▪ Impermeabilidad de la PC a los colorantes.

▪ Resistencia a morir por compuestos ácidos y alcalinos.
▪ Resistencia a oxidaciones letales y sobrevivir dentro de los
macrófagos.

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Pared Celular Micobacteriana

Blgo. José González Cabeza

 Peptidoglicano

➢ Similar al de otras bacterias (cadenas

de polisacáridos = NAM + NAG +
puentes peptídicos).

➢ Unido al arabinogalactano por un

único puente diglicosil-fosforil que
contiene ramnosa y n-
acetilglucosamina.

➢ Esqueleto de pared → Polímeros:

PEPTIDOGLUCANO +
ARABINOGALACTANO + OTROS
MATERIALES.

Blgo. José González Cabeza

 Ácidos Micólicos
➢ El componente principal de la envoltura (hasta 60% del
peso seco de la pared).
➢ Hidrofóbicos, forman la cubierta lipídica.
➢ Uniones covalentes tipo éster a una arabinosa al final del
arabinogalactano ramificado.

FACTOR DE VIRULENCIA

➢ Probablemente previenen el ataque por proteínas

catiónicas, lisozima y radicales de oxígeno en la vesícula
fagocítica.
➢ Causan agregación bacteriana.
➢ Contribuyen al crecimiento lento.
➢ Protección contra el complemento.

Blgo. José González Cabeza

 Lipoarabinomanano
➢ Un glicolípido al final de la envoltura aunque está
anclado profundamente en el peptidoglicano.

➢ Estructura compleja.

➢ Un núcleo de manosas unidas a múltiples cadenas

laterales ramificadas de arabinofuranosil-manosa y
una unidad de fosfatidilinositol que puede ser utilizada
como un puente de unión a otros elementos de la
envoltura.

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Pared de Micobacterias

Blgo. José González Cabeza

 Otros Lípidos de Superficie

• Micósidos:
➢ Cera D: Ácido micólico + arabinogalactano y éste a 4 NAG/NAM, a los que se
unen 2 cadenas de tetrapéptidos. Una falsa cera. Propiedades adyuvantes.

➢ Factor Cordon → Glicolípido (trealosa 6’,6’dimicolato) → Responsable del

crecimiento serpenteante (en forma de cordón o filamento) en el que los
bacilos crecen en forma cerrada y ordenada.

➢ Factor Cordón → Es tóxico para los leucocitos, antiquimiotáctico, interfiere

con la función mitocondrial (hinchamiento) en los ratones y juega un papel
importante en el desarrollo de las lesiones granulomatosas. Promueve la
separación de ribosomas del RER.

Blgo. José González Cabeza

Factor Cordón

Blgo. José González Cabeza

 Otros lípidos de Superficie

➢ Fosfolípidos: Cardiolipina, fosfatidiletanolamina y fosfatidilinositolmanósidos

→ Implicados en la formación de granulomas.

➢ Sulfolípidos: Glicolípidos sulfatados (ácidos grasos + trealosa); ej., SulfolípidoI

→ Virulencia → Previenen la fusión fagosoma-lisosoma y hacen que los bacilos
no estén expuestos a las enzimas lisosómicas (importante en la supervivencia
intracelular)

➢ SOD (Superóxidodismutasa): Neutraliza la capacidad oxidante de los iones

superóxido.

Blgo. José González Cabeza

 Otros lípidos de Superficie

➢ Contiene además un gran numero de aminoácidos → Como lipoproteínas o

glicoproteínas → Algunos son esenciales en la actividad tuberculinica.

➢ Uno de los polipeptidos mas abundantes → Ácido poli-α-L-glutámico

parcialmente amidado → Importante porque esta presente en bacilos
tuberculosos humanos y bovino, pero ausente en las especies saprofitas. → En
algunas especies puede representar hasta el 8% del peso total.

Blgo. José González Cabeza

 Fisiología de las Mycobacterias

➢ Proliferan en medios simples → Pero para el aislamiento primario → Medio mas

complejo que contenga una base de papa/huevo.

➢ Catalasa y Peroxidasa → Eliminar EROs.

➢ Crecimiento Lento → Optimo a 37°C.

➢ Colonias → Pequeñas / Secas / Aspecto escamoso.

➢ Medios Sintéticos líquidos → Película delgada en interfase gas/líquido → +

Tween 80 = Crece de forma difusa y efectuar determinaciones turbidimétricas.

➢ pH → Óptimo = 7 → 6 ~ 7,6.

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 Fisiología de las Mycobacterias
REQUERIMIENTO DE OXIGENO

➢ Oxigeno es crítico → Tanto in vivo como in vitro. Reducción de oxigeno → Reduce

notablemente el crecimiento.
➢ Aerobio obligado → Oxidación completa de glucosa o del glicerol.
➢ Glicerol → Fuente preferida de carbono → Vía de Embdem Meyerhof → TCA y del
glioxilato → Se han descrito 3 cadenas respiratorias que usan oxigeno molecular.
➢ In vitro → Anaerobiosis → Superviven → Cambio notable al desvió glioxilato
anaplerotico a medida que se produce la limitación de oxigeno. También entra en
juego una glicina deshidrogenasa → Desaminación reductora en M tuberculosis.
➢ Desviación de glicina y de intermediarios de TCA a la síntesis de glioxilato → Sirve
principalmente para proporcionar un sustrato para la generación de NAD que puede
ser necesario para la detención ordenada antes de que la limitación de oxigeno
interrumpa la proliferación.
Blgo. José González Cabeza
 Fisiología de las Mycobacterias
REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES.
➢ Protótrofos → Para todos los aa. / Pu,Py / Vit. complejo B.
➢ Fte. mas importante de carbono = Glicerol.
➢ Asparagina → Fuente preferida de asparagina.

ASIMILACIÓN DE HIERRO
➢ Deficiencia → Disminución de Crecimiento / Estructuras / Metabolismo.
➢ Naturaleza insoluble del hierro → Desarrollado sistema de transporte (por pared) → 2
componentes quelantes:
➢ A) Exoquelina → Sustrae hierro de la Ferritina.
✓ Modelo: Hierro férrico en medio extracelular es solubilizado por la exoquelina.
➢ B) Micobactina → Molécula lipofílica ubicada en envoltura celular.
✓ A) y B) → Actúan en concierto para transportar
Blgo. José González Cabeza
 Genética
➢ Mutaciones → Con
frecuencia muy bajas.
➢ Mutaciones → Alteración en
morfología de las colonias:
Lisas (S) / Rugosas (R).
➢ Virulentos → Mayormente
“R” → Ej.: M. tuberculosis
cepa H37 → Variante
Rugosa Virulenta (Rv) y
Variante Rugosa Avirulenta
(Ra).
➢ Complejo Micobacterium
tuberculosis → Similares en
un 99.9% a nivel de
nucleótidos y secuencias
idénticas de 16S RNAr.
Blgo. José González Cabeza
 Genética
➢ Complejo Micobacterium tuberculosis • Estudios actuales:
Brosh et al. evaluaron eventos de inserción-
• Estudios iniciales → Zoonosis delección en el conjunto de las micobacterias
que forman el complejo M. tuberculosis en
M. bovis 100 cadenas de MTB en función de la
C distribución de 20 regiones variables.
o
e
v
o
l
u
ci
ó
n

M. tuberculosis
Blgo. José González Cabeza
 Genética
Brosh et al. hablan de un antecesor común del complejo M. tuberculosis

3 linajes

• M. canetti Sin deleción RD

“ancestral” TbD1
• M. tuberculosis
Moderno → epidemias Beijing, Haarlem y grupos de M.tuberculosis africana
M. africanum
• M. microti Deleción RD9
M. bovis

Blgo. José González Cabeza

 Genética

➢ Esquema de la ruta evolutiva propuesta del

bacilo de la tuberculosis que ilustra la pérdida
sucesiva de ADN en ciertos linajes. El esquema
está basado en la presencia o ausencia de
regiones conservadas y la eliminación de los
polimorfismos de secuencia en cinco genes
seleccionados.

Blgo. José González Cabeza

 Genética
Dos clados y un origen

humano

animal

Blgo. José González Cabeza

 Mycobacteriofagos
➢ Numerosos micobacteriofagos → Aislado de diversos hábitats → Casi todos
ellos con una cabeza hexagonal u oval y una cola larga NO contráctil.
➢ M. smegmatis → el peptidoglicopéptido, micosido C, actúa como receptor →
Pero en M.t. no ha sido caracterizado.
➢ Infectan → Lisis / Lisogenia (seudolisogenia).
➢ No obstante la virulencia no parece estar condicionada por estado lisogénico.
➢ Tipificación con Bacteriofagos → Herramienta poco limitada para la
clasificación → Consecuencia de que tienen un amplio rango de huéspedes los
fagos
➢ No obstante → Para M.t. → Herramienta potencialmente poderosa para
realizar estudios genéticos y epidemiológicos.
➢ Pdto de ello → 3 Grupos: A, B, C y I

Blgo. José González Cabeza

 Resistencia
➢ Resistentes a la desecación.

➢ Mantenidos a 37°C → 12 años viables y virulentos.

➢ Luz Solar directa sobre cultivos → Cultivos destruidos en 2 hrs., pero los
bacilos contenidos en esputo requieren una exposición de 20-30 horas.
➢ Bacilos presentes en esputo desecado protegidos de la luz solar → Viables
entre 6-8 meses.

➢ Resistente a desinfectantes mas que otros tipos de bacterias no formadoras de

esporas, en especial cuando se encuentran en esputo.

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FISIOPATOLOGÍA DE Mycobacterium

Blgo. José González Cabeza

 TBC: Factores Predisponentes
• Del bacilo → Virulencia / Cantidad
inoculada.
• Del ambiente → Hacinamiento.
• Del huésped:
– Fármacos como ciclofosfamida,
prednisona.
– Infecciones virales como el VIH.
– Otras: Diabetes mellitus, linfomas.
– Desnutrición → Proteica /
Alcoholismo.
– Edad → En los extremos de la vida.
– Raza → Menor en europeos,
mayor en negros y mapuches.

Blgo. José González Cabeza

 Primoinfección: Trasmisión
➢ M.t. → Organismo virgen → Mas del 90% de la infección → Vía Aerógena → Microgotitas de Pflügge →
Diámetro de 5 µm (cada nucleo desecado = 1-2 bacilos): Toser, estornudar, reír, llorar, gritar o hablar →
Depositan en los alvéolos.
➢ Bacilifero → > 105 bacilos/mL → 5–10 millones de bacilos diarios

Blgo. José González Cabeza

Blgo. José González Cabeza
 TBC: Patogenia

➢ Cuando alcanzan los alvéolos son ingeridos por macrófagos alveolares.

Resistente a Respuesta Humoral.

Bacilo Koch

Sensible a Respuesta Celular.

➢ Equilibrio entre actividad bactericida del macrófago y la virulencia del

bacilo.

Blgo. José González Cabeza

 TBC: Patogenia
➢ Virulencia:

✓ Nº de bacilos → Dosis mínima infecciosa → +/- de 1000 bacilos viables.

✓ Factores genéticos → Actividad catalasa-peroxidasa, el factor colonizador
de macrófago (mce). Factor sigma (sigA).
✓ Composición de la pared bacteriana rica en lípidos, glucolípidos y
polisacáridos.
✓ Antígenos proteicos:
• Moléculas de 30 y 32 kDa del complejo común BCG85 (median la
adhesión e invasión de los bacilos).
• Antígeno 10 kDa (estimula proliferación de linfocitos).

Blgo. José González Cabeza

 TBC: Patogenia

Bacilos en Multiplicación
Macrófagos

Macrófago se lisa

➢ Bacilos liberados son ingeridos por otros macrófagos y monocitos que son
atraídos desde el torrente sanguíneo.

➢ Los bacilos son transportados hasta los ganglios linfáticos regionales,

desde donde se diseminan hacia otras zonas del cuerpo.

Blgo. José González Cabeza

 TBC: Patogenia
2- 4 semanas postinfección

Respuesta inmune celular e hipersensibilidad

retardada.

➢ Respuesta eficaz requiere:

✓ Linfocitos CD8 citotóxicos y linfocitos CD4 con respuesta de
tipo Th1.

Blgo. José González Cabeza

 TBC: Patogenia
➢ La respuesta Th1 conlleva:

✓ Producción de IF-δ y GM-CSF → Potentes activadores de los macrófagos.

✓ TNF-α e IL-2 → Aumentan la actividad microbactericida del macrófago.
✓ IL-3 → Induce la formación de células gigantes.

➢ Linfocitos CD8 citotóxicos y linfocitos con respuesta Th2 producirían la

destrucción de los macrófagos no activados y el daño tisular.

➢ Estos dos tipos de respuesta, determinarán la forma de tuberculosis que

aparecerá con posterioridad.

Blgo. José González Cabeza

 TBC: Primaria
➢ Aparece consecutiva a infección inicial.
➢ Localizada principalmente en campos medios e inferiores de los pulmones.

➢ Localización más frecuente:

➢ Lóbulo Medio Derecho:

✓ Rodeado más densamente
✓ Por nódulos linfáticos.
✓ Mayor longitud y menor diámetro
relativo.

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 TBC: Primaria
Formas de evolución:
PROGRESIÓN PRIMARIA

COMPLEJO
PRIMOINFECCIÓN PRIMARIO

CURACIÓN
Bacilos en inactividad
metabólica
➢ En el período de multiplicación previo a Respuesta Inmune, hay invasión torrente
sanguíneo, produciéndose diseminación. → TBC Extrapulmonar.
➢ Frecuente: Adenopatías hiliares o paratraqueal.
➢ Inmunidad específica → LESIONES GRANULOMATOSAS: constituidas por la acumulación
de macrófagos activados, células epitelioides, células gigantes y linfocitos.
Blgo. José González Cabeza
La respuesta Inducida Controla pero no Elimina la Infección
Se establece la infección crónica
Macrófago incapaz de eliminar
micobacterias
Diferenciación dirigida
por citoquinas

Célula epitelioide no fagocítica

El LAM participa en la
diferenciación

Célula gigante multinucleada

M. tuberculosis

Granuloma Célula gigante

colágeno Célula epiteloide

Linfocitos T
CD4+ y CD8+
Bacilos dentro de célula gigante

Blgo. José González Cabeza

 TBC: Primaria
➢ Aparición → Necrosis Caseosa.
➢ Aunque el M. tuberculosis puede sobrevivir, su crecimiento queda inhibido (PO2, pH
ácido). Algunas lesiones curan
mediante fibrosis y calcificación

Complejo de Ghon
NOTA: Finalmente una capa de fibrina rodea
al granuloma (fibrosis), “lapidando” la lesión.
Progresión típica en la TB pulmonar involucra
caseificación, calcificación y formación de
cavitaciones

Blgo. José González Cabeza

 TBC: Post-Primaria
➢ Sinónimos: TBC secundaria, de REACTIVACIÓN DE LESIONES, del adulto, REINFECCIÓN A
PARTIR DE BACILIFEROS.
➢ Representa 90% de los casos adultos no –VIH.
➢ Se debe a la reactivación endógena de una infección tuberculosa latente.
Excepcionalmente exógena.
➢ Causas:

VIH Desnutrición

OH Insuficiencia Renal

Diabetes Fcos. Inmunodepresores

Blgo. José González Cabeza

 TBC: Post-Primaria

➢ Multiplicación activa → 10-14 días →

Nº crítico para producir enfermedad
cavitaria.

➢ Localización más frecuente:

✓ Segmentos apicales y
posteriores de los
lóbulos superiores.
✓ También los segmentos
superiores de lóbulos
inferiores.

Blgo. José González Cabeza

 TBC: Post-Primaria

➢ Evolución:

✓ En el centro de la lesión, el material caseoso

presenta licuefacción, va destruyendo las
paredes de los bronquios y de los vasos
sanguíneos, y se drena en ellos el contenido
→ CAVERNAS.

➢ Diseminación broncógena.
➢ Diseminación hematógena.

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 TBC Post-Primaria: Clínica
➢ Inicio insidioso.
➢ Tos (50-70%).
➢ Pérdida de peso.
➢ Fatiga.
➢ Fiebre y sudoración nocturna (50%).
➢ Dolor torácico y disnea (70%).

➢ Afectación de vías respiratorias altas: Disfonía, ronquera y/o disfagia

dolorosa.
➢ Examen físico: Puede ser completamente normal o evidenciar
estertores, roncus, sibilancias, sonidos anfóricos en las áreas con
cavitaciones grandes y acropaquias.

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Diagnóstico

Blgo. José González Cabeza

 Bacteriología en Diagnóstico de la TBC
BACILOSCOPÍAS CULTIVOS

➢ Tinciones con Carbofucsina: ➢ Medio Sólido:

✓ Tinción Zielh Neelsen ✓ Ogawa
✓ Tinción Kinyoun ✓ Lowenstein Jensen
➢ Tinciones con Flurocromos: ✓ Agar Middlebrook (7H10)
✓ Tinción Auramina O ➢ Medio Líquido:
✓ Tinción Auramina-Rodamina ✓ Middlebrook 7H9
✓ Dubos

Blgo. José González Cabeza

 Baciloscopía – Resultados (según SAP)
No se observan BAAR, en 100 campos
Negativo
microscópicos.
Nº exacto de Si se observan menos de 10 BAAR, en 100
BAAR campos microscópicos.
PAUCIBACILAR
De 10 a 99 BAAR, en 100 campos
+
microscópicos observados.
1 a 10 BAAR por campo, en 50 campos
++
microscópicos observados
Más de 10 BAAR por campo, en 20 campos
+++
microscópicos observados.
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 Cultivos
➢ Procedimiento que permite recuperar a M. tuberculosis de muestras clínicas.
➢ Alta sensibilidad: 101 – 102 bacterias viables/ml muestra.
➢ Incrementa de 20 – 25% más al diagnóstico directo.
➢ Especificidad: Permite la identificación de especies.
➢ Se aplica a cualquier muestra → Esputo, aspirado gástrico, aspirado bronquial,
líquido pleural, LCR, biopsia de tejidos pleural, ganglionar, médula ósea, intestino,
orina, heces, entre otras.

Blgo. José González Cabeza

Mycobacterium tuberculosis

Blgo. José González Cabeza

 Cultivo: Informe de Resultados

Negativo No se observan colonias.

Nº exacto de Si se observan menos de 20

colonias colonias.

+ De 20 a 100 colonias.

++ Más de 100 colonias separadas.

Colonias incontables
+++ (confluentes)

Blgo. José González Cabeza

 Vacunación
➢ Vacuna → Bacilo de Calmette
y Guerin (BCG) → M. bovis
vivo atenuado por repiques
sucesivos en papa biliada.
➢ Aplicación → Vía
intradérmica.
➢ Sólo se vacunan los
tuberculinos negativos (PPD
negativa).
➢ Durante el primer mes de vida
y al ingreso escolar previa
reacción de Mantoux.
➢ Previene sobre todo la
meningitis tuberculosa que
generalmente es mortal.

Blgo. José González Cabeza

…muchas gracias.
Blgo. Dr. José González Cabeza

gonzalezbiotec@hotmail.com
www.gonzalezcabeza.com

Blgo. José González Cabeza