Biotecnología

DOCENTE:
SOTO GONZALES HEBERT HERNAN
INTEGRANTES:
- CERVANTES MAQUERA CAMILA
- HUIZA LORENZO PAOLA
- TARQUI CHÁVEZ MEL
 CONSTRUCCIÓN Y VALIDACIÓN EXPERIMENTAL DE UN
BIORREACTOR ARTESANAL TIPO TANQUE
AGITADO PARA FERMENTACIONES SUMERGIDAS A
Resumen
ESCALA DE LABORATORIO
En el presente trabajo se presenta la
construcción de un biorreactor
Los biorreactores de tanque agitado se han ido perfeccionando en busca del control más
artesanal tipo tanque agitado, el cual
preciso de los ambientes de desarrollo de cultivos vivos.. Los biorreactores de pequeña
está elaborado con instrumentos y
escala han resultado vitales en procesos de escalado y desescalado, optimización de
Introducción
recursos disponibles en cualquier
cepas, caracterización y desarrollo de procesos. El costo de los biorreactores
laboratorio. Este biorreactor mostró
comerciales suele ser muy elevado, el cual dificulta su adquisición, es por ello que se
una satisfactoria capacidad de
pretender elaborar un biorreactor artesanal a partir de materiales más accesibles y de
mezclado. Los resultados obtenidos
bajo costo, a la ves que se cumple con los requisitos para el cultivo de microorganismos.
avalan la aptitud del biorreactor
artesanal para su uso en el estudio de
fermentaciones microbianas a escala

Materiales y Métodos Diseño y Construcción del Biorreactor

de laboratorio.

Vaso del Biorreactor Agitación Sistema para la toma de muestra Sistema para la entrada de inóculo

La agitación del sistema se estableció El embudo de vidrio debe estar Como reservorio del inóculo se
Balón de 2L., de diámetros en el
por medio de un agitador mecánico provisto con llave de rosca de dispuso de un Kitasato, a cuya salida
interior de 16 cm, altura de cuello 14
portable, el cual se acopló un impelente teflón, la tapa debe de contar con lateral se conectó un filtro
cm. La boca se cerró con un tapón de
de acero inoxidable de cuatro paletas dos orificios en donde se le microbiológico (0.2), en la boca se
goma multihoradado, en el cual se
planas verticales, a una distancia del introducen tubos de vidrio. coloco un tapón de goma en el que
insertaron la flecha de agitador, el
fondo del fondo del vaso y del se insertó un tubo de vidrio.
termómetro, el condensador y los
tubos. dispersor de 3.5 cm y 2.5 cm.

Sistema de salida de gases Control de temperatura

Sistema de suministro de aire

Se conformó por un condensador de reflujo La constancia de la temperatura se

Se constituyó por una bomba de vacío, con
capacidad de bombeo de 0.67L.min-1, el
cual se conectó mediante una manguera
de silicona a un filtro microbiológico de
membrana hidrofóbica para garantizar
esterilidad de aire.
de 30x3 cm acoplado al vaso del biorreactor.
Este se conectó a una trampa química, para
evitar la entrada de contaminantes. La boca
superior del balón se conectó al condensador
y la lateral a un dispositivo soxhlet para
garantizar el reflujo de la solución
microbiana.
estableció por medio del dispositivo de
calentamiento y recirculación de agua
de un baño termostático y se midió
mediante termómetros de mercurio
convencionales sumergidos en el cultivo
y en el agua.
 CONSTRUCCIÓN Y VALIDACIÓN EXPERIMENTAL DE UN
BIORREACTOR ARTESANAL TIPO TANQUE
AGITADO PARA FERMENTACIONES SUMERGIDAS A
ESCALA DE LABORATORIO
Materiales y Métodos
Materiales utilizaos en la
construcción del Biorreactor
Instrumentos y accesorios construidos a base
de vidrio borosilicato, tapones de caucho
vulcanizado y mangueras de silicona. El sistema
de agitación con acero ioxidable
Resultados y discusión
Diseño y Construcción del
Biorreactor
Se enfatizó en tres cuestiones esenciales de su
funcionamiento:
Capacidad de garantizar la esterilidad en
su interior durante un intervalo de tiempo
relativamente largo y la realización de
muestreos periódicos
Buena transferencia de oxígeno
Mezclado uniforme de la suspensión celular
Determinación del coeficiente Volumétrico
Global de Transferencia de Oxigeno (kla)
Por el método del Sulfito, se lleno con 1 L de una
solución de sulfito de sodio a 0.25 mol/L, como
catalizador CuSO4*5H20 a 1 g/L. A una
temperatura de 36°C, empleando diferentes
condiciones de agitación, y aireación sostenida de
0.67 vvm. La concentración residual de sulfito se
determino por el método yodimetrico.
Determinación de la Capacidad
de Mezclado de Sistema
Mediante el análisis de comportamiento
temporal de la concentración de un solido
insoluble finamente particulado y con un
alto coeficiente de sedimentación en el
punto de toma de muestra, bajo diferentes
comb8inaciones de aireación/agitación
Aireación
Se optó por un diseño en espiral del
dispersor, portando tres líneas
equidistantes de orificios de »3 mm de
diámetro, en posicionamiento alterno. Las
burbujas pequeñas presentan menor
velocidad de ascenso y, en consecuencia,
permanecen más tiempo en contacto con el
líquido, todo lo cual deriva en una mejor
transferencia de oxígeno al medio. Este
parámetro crítico en el desempeño de un
biorreactor.
Prueba de esterilidad del
Sistema
El biorreactor se cargo con 1 L de
caldo de nutrientes, se acoplaron
demás accesorios y se esterilizo con
autoclave. Al alcanzar la temperatura
ambiente, se puso en funcionamiento
a una temperatura de 37°C, flujo de
aire de 0.67 L/min y agitación de 650
min-1. Se establecieron tres puntos
temporales de control de esterilidad a
las 0, 12 y 24 horas.
Agitación
Los agitadores de palas y las turbinas
de placas planas, producen buenos
flujos radiales en el plano del rodete.
En general, los impelentes tipo turbina
de palas resultan los más usados, dada
su capacidad de operar a velocidades
de agitación altas y un amplio rango de
viscosidades. La agitación excéntrica
fue utilizada, al ser especialmente
recomendable en biorreactores de
pequeña escala, puesto que se evita el
uso de deflectores.
 CONSTRUCCIÓN Y VALIDACIÓN EXPERIMENTAL DE UN
BIORREACTOR ARTESANAL TIPO TANQUE
AGITADO PARA FERMENTACIONES SUMERGIDAS A
ESCALA DE LABORATORIO

Resultados y discusión
b. TRANSFERENCIA DE OXIGENO EN EL BIORREACTOR
Es el parámetro más importante implicado en el diseño, operación y escalado de biorreactores. Una
concentración de oxígeno superior a la crítica es necesaria para conseguir un crecimiento microbiano y
formación de productos óptimos. Por lo que el valor de coeficiente volumétrico de transferencia de masa es
indispensable. Los valores aumentan cuando se incrementan los niveles de agitación. El optimo de del kla en el
biorreactor es de 30-60%. El valor obtenido en el biorreactor artesanal a una velocidad de agitación de 850
por minuto, es eficiente para garantizar 20% de saturación de oxígeno.

c. CAPACIDAD DE MEZCLADO DEL BIORREACTOR

Los biorreactores deben garantizar un mezclado eficiente. El BaSO4 (Sulfato de Bario) posee una rápida
cinética de formación, estabilidad morfológica y de tamaño de sus partículas, baja solubilidad en agua y alta
densidad.
El experimento busca determinar la eficiencia del biorreactor en el proceso de mezclado mediante la
capacidad de mantener en suspensión uniforme bajo diferentes niveles de agitación y aireación.
En las variantes evaluadas se registran comportamientos sinusoidales, el análisis de regresión lineal simple de
la concentración de BaSO4 vs. Tiempo corrobora la apreciación.

d. PRUEBA DE ESTERILIDAD
El control se da a partir de la exposición continua del sistema en condiciones reales de fermentación microbiana.
No hubo presencia de contaminantes en las placas Petri.
Las muestras se propagaron en el caldo nutriente por 24h. y se sembraron en placas con agar nutriente. En 2h. la
contaminación del orden probable es de 0.1-3 cél/mL, pero la negatividad observada en los resultados demuestra
la esterilidad del biorreactor, lo que garantiza la fiabilidad del biorreactor.

El biorreactor de tanque agitado se diseñó Se construyó usando materiales e instrumentación de laboratorio en

para que reuniera una adecuada capacidad de entradas y salidas del sistema. Los estudios mostraron la aptitud del

Conclusiónes oxigeno, mezclado eficiente, control efectivo

de la temperatura y mantenimiento de la
esterilidad; y asi obtener éxito en la
fermentación microbiana.
biorreactor para investigaciones sobre fermentación dada la eficiencia
observada en procesos de mezclado, transferencia de oxígeno y
mantenimiento de esterilidad y temperatura en la duración de la
fermentación.