Instituto Politécnico Nacional

Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnoligía

Práctica 6
“Mantenimiento de la asepsia en biorreactores”

Equipo 2:​ M. en C Martínez Limón Jonas

Hernández Silva Frida Tamara​​

Estrada Morales Juan Rodrigo​​
Vargas Arriaga David Irán
Salas Hernández Itzel Ameyalli
 Objetivo

El alumno conocerá y distinguirá las capas límites que se

forman entre los ambientes aséptico y no aséptico del
biorreactor y discutirá, con base en los conocimientos
adquiridos la efectividad de la asepsia del biorreactor.
 Asepsia
Conjunto de procedimientos que tienen por objeto
impedir la penetración de gérmenes en el sitio que no
los contenga para así preservar la esterilidad. Su
objetivo es asegurar que las materias primas solo se
biotransforman en el producto de interés.
 Axenia
Dicho de un cultivo o de un microorganismo que se
desarrolla en un ambiente donde no hay algún otro
organismo vivo.
 Limpieza
Conjunto de procedimientos que tienen por objeto
impedir la penetración de gérmenes en el sitio que no
los contenga para así preservar la esterilidad. Su
objetivo es asegurar que las materias primas solo se
biotransforman en el producto de interés.
 Propósitos del mantenimiento de la asepsia

El propósito de la asepsia en
biorreactores es evitar la infección o
contaminación microbiológica de
un medio de cultivo estéril o en el
que se esté efectuando una
biorreacción.
 Consideraciones para garantizar un
trabajo aseptico
Para el diseño de un biorreactor clasificado como un recipiente a presión, se requiere una gran
cantidad de cálculos ingenieriles basados en las normas y estándares de construcción
internacionales.

o Cálculos de las presiones y temperaturas a las que estará sujeto el biorreactor.

o Cálculos de velocidades de transferencia de masa, calor y momento (incluyendo el sistema
de agitación mecánica).
o Cálculos de construcción en acero inoxidable.
o Análisis de expansión térmica de tuberías y cuerpo principal del biorreactor.
o Acabados de superficies tanto de las tuberías como del cuerpo principal del biorreactor.
o Requerimientos de asepsia y hermeticidad.
o Sistema de aislamiento (térmico y/o acústico).
 Fuentes de contaminación

• Limpieza inadecuada del biorreactor.

• Uso de válvulas inadecuadas.
• Sellos mecánicos ineficientes.
• Diseño inadecuado del biorreactor (alimentación y
transferencia de gases y
• líquidos).
• Errores de operación
Repercuciones de la contaminación biológica

Inactivar o degradar al biocatalizador (si este es una

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1 enzima), lo que ocasionaría que no existiera más la
biorreacción y por consiguiente una gran pérdida
económica.

Competir por el sustrato con el microorganismo responsable

de efectuar la biorreacción, disminuyendo así los
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2 rendimientos celulares y de producto con base en el
sustrato

Producir subproductos ajenos al producto de interés

3 (tóxicos o no) contaminándolo químicamente.
 Sello hermético o mecánico

¿Qué es?

Adjetivo: Que se cierra de modo que no permite

pasar el aire ni los fluidos.

¿Para qué sirve?

Su función es triple: evitar la contaminación,

mantener hermético el sistema, servir de
amortiguador de fricción. El sello mecánico también
debe permitir la esterilización in situ del biorreactor,
mediante una línea de vapor sobrecalentado.

En un biorreactor, la hermeticidad se puede

comprobar de dos formas.
 Comprobación hidráulica

1. Llenar el biorreactor con agua

2. Se cierran todas las válvulas

que se conectan al biorreactor

3. Se comprueba si no hay
fugas de agua
 Comprobación neumática

1. Se presuriza el biorreactor hasta

un valor manométrico constante

2. Se cierran todas las válvulas que

se conectan al biorreactor

3. Se registra el valor de la presión

manométrica en distintos tiempos
para notar si hay un cambio.
Líneas de transferencia y válvulas
Las tuberías que conectan el exterior con el interior del biorreactor y por
las que fluyen los fluidos requeridos en la biorreacción, deben cumplir con
ciertos requisitos, entre los que sobresalen los siguientes:

• Inertes.
• De fácil limpieza.
• Que aseguren la hermeticidad.(considerando el tipo de unión)
• Esterilizables.
• A prueba de presión.

En biorreactores de grandes volúmenes se usan comúnmente tuberías de

acero inoxidable. Previo al uso de dichas tuberías para transportar un
fluido al interior del biorreactor o fuera de él, es necesario la
limpieza y pre esterilización de las mismas.
 Aire y filtros de aire
El aire es indispensable no sólo para proporcionar oxígeno a la biorreacción, sino
también para mantener una presión positiva que evite la entrada de
microorganismos al biorreactor y cumplir así con el tercer criterio básico de asepsia.

El aire que se introducirá al biorreactor deberá estar estéril. La forma más fácil y
económica de esterilizarlo es mediante la filtración del mismo con filtros absolutos
que, a su vez, deben estar previamente esterilizados. Se requiere el más alto
aseguramiento posible de la integridad y eficiencia de remoción de estos filtros para
la esterilización del aire.
Esquema del biorreactor
 Sistema CIP
El sistema de limpieza CIP es un sistema de
lavado automático in situ, es decir, sin
desmontaje del equipo de producción, que
consiste en recircular la solución de limpieza
a través de los componentes de la línea de
proceso, como tuberías, intercambiadores de
calor, bombas, válvulas, etc.
La acción de limpieza de los productos
químicos, combinados con la eficacia
mecánica de eliminación de la suciedad es el
principio de los sistemas CIP.
En general, el mecanismo de eliminación de la suciedad es un
proceso de 4 pasos
 Diagrama de bloques
Investigar previamente
definiciones relacionadas
con la asepsia en
biorreactores
Identificar las líneas que
conectan el interior de los
biorreactores con el
exterior
Comentar las
características esenciales
de las líneas para
garantizar un trabajo
aséptico y la forma en que
se lavan
Observar el sello Comentar la adecuación
mecánico, puertos de de estos para un trabajo
inoculación, adición y toma aséptico en los
de muestra biorreactores
Comentar la forma de
realizar pruebas
Comentar si estas son
hidráulicas y neumáticas
adecuadas para los
para comprobar la
biorreactores
hermeticidad del
biorreactor
Comentar sobre los
métodos para probar la
Observar los tipos de
integridad y eficiencia de
válvulas
remoción de filtros para la
esterilización por aire
 Referencias

● Carrasco Asensi, M. J. (2018) CIP, Universidad Tecnológica de Nezahualcóyotl,

México.https://ria.utn.edu.ar/bitstream/handle/20.500.12272/3298/Cleaning%20In%20
Place.pdf?sequence=1&isAllowed=y
● Montero Zamora J. P. (2014). Establecimiento y verificación del proceso de
esterilización para el control y aseguramiento de la calidad biotecnológica de
sistemas de biorreactores enchaquetados. Universidad de Costa Rica, Facultad
de Ingeniería, Escuela de Ingeniería
Química.http://repositorio.sibdi.ucr.ac.cr:8080/jspui/bitstream/123456789/24
25/1/37233.pdf