¿Qué hace un antibiótico sobre las bacterias?

Bacteriostáticos: Inhiben el crecimiento del microorganismo

Bactericidas: Matan o destruyen a los microorganismos

4. Según su espectro de acción

a. Espectro reducido: Actúan selectivamente frente a un grupo determinado de bacterias. No

tienen efecto sobre el total de las bacterias presentes.

Ej.: Vancomicina: Cocos gram +

Gentamicina: Bacilos gram –

b. Amplio espectro: Actividad frente a una gran mayoría de los grupos bacterianos de importancia
clínica

Ej.: Penicilina: Cocos gram +, cocos gram – y algunos bacilos gram –

Tetraciclinas

Mecanismos de acción de los antibióticos

5. Según su mecanismo de acción

a. Inhiben la síntesis de la pared bacteriana

-Peptidoglicano: Está formado por varias cadenas de polisacáridos entrelazados a través de

enlaces covalentes (peptídicos) entre los péptidos que salen del aminoazúcar NAM

-Un monómero de peptidoglicano consiste en dos aminoazúcares unidos, N-acetilglucosamina

(NAG) y ácido N-acetilmurámico (NAM), con un pentapéptido que sale del NAM

-Antibióticos capaces de inhibir la síntesis de precursores del peptidoglicano:

A través de la inhibición de enzimas encargadas de sintetizar el pentapéptido (PMP) -> D-

cicloserina -> Inhibe la formación del dipéptido D-alanil-D-alanina
Antibióticos capaces de inhibir la síntesis de los distintos aminoazúcares que forman la capa de
polisacáridos -> Fosfonomicinas

-Inhibición del proceso de transpeptidación: B-lactámicos y los glucopéptidos

Transpeptidación

-Proceso que consiste en la formación de los enlaces peptídicos que permiten la unión covalente
entre las capas de peptidoglicano

-Proceso determinado por la acción enzimática de las enzimas denominadas PBP

-Vancomicina: Antibiótico capaz de unirse al péptido D-alanil-D-alanina, de manera que la enzima

PBP no encuentra el sustrato y no puede formar el enlace covalente para unir las capas de
peptidoglicano. Funciona bien contra las bacterias gram +. Al ser un glucopéptido, cuyo tamaño es
muy grande para atravesar la membrana externa de las bacterias gram –

b. Alteran la integridad o destruyen la membrana celular

-Polimixina y Colistina -> Molécula cargadas positivamente y que tienen afinidad por las moléculas
cargadas negativamente; en ese caso los fosfolípidos que forman parte de la membrana
plasmática

c. Inhiben la síntesis de proteínas

-Proceso determinado por las funciones enzimáticas de los ribosomas

Resistencia a los antibióticos

1. Definición en relación con la población: Capacidad de crecer en una concentración del
antibiótico que inhibe el crecimiento de otras bacterias de su misma especie

2. Definición clina: Bacterias capaces de crecer en presencia del antibiótico en las

concentraciones que éste alcanza a nivel sistémico durante un tratamiento. Concentración
que está determinada por las dosis prescritas

1. Disminución de la permeabilidad bacteriana

-Modificación de porinas en bacterias gram –

-Muchos antibióticos son capaces de entrar y acceder al sitio blanco de acción a través de las
porinas

2. Bombas de expulsión

-Bombas de expulsión: Maquina de proteínas que reconocen el antibiótico y lo expulsan una vez
ingresa al espacio citoplasmático

-Gram -: Requiere la formación de poros que permiten la salida del antibiótico al espacio
extracelular
-Bombas de expulsión para antibióticos específicos: Bombas de expulsión para tetraciclina

-Reconocimiento de sales de amonio cuaternario, algunos colorantes e incluso bromuro de etidio

3. Modificación del sitio donde actúa el antibiótico por mutaciones:

-Modificación del sitio blanco donde actúa el antibiótico generado por mutaciones

-Ejemplo: Resistencia a estreptomicina: Antibiótico que inhibe la síntesis de proteínas uniéndose al

ribosoma en la subunidad menor, de tal manera que bloquea el proceso de síntesis. Una mutación
particular en el gen rpsL produce un cambio del sitio de unión del antibiótico, dado que cambia la
subunidad menor del ribosoma

-Mutantes se producen al azar

-Son pocas aquellas que van a afectar específicamente el sitio de unión del antibiótico

-Resistencia a ciprofloxacino: Este antibiótico es una quinolona que se une específicamente a un

sitio particular de la girasa (proteína que participa durante la replicación del DNA). Las mutaciones
modifican el sitio blanco de acción del antibiótico, pero no modifican la funcionalidad de la enzima

3.1 Reemplazo del sitio donde actúa el antibiótico

-Staphyloccocus Aureus meticilino resistente: Esta bacteria es resistente a todos los antibióticos
que pertenecen a la familia de los B-lactámicos dado que posee una transpeptidasa, una proteína
PBP adicional a las propias. Esta proteína PBP2A es distinta a las propias y fue adquirida por
transferencia horizontal de genes, adquiriendo el gen mecA incluido en el casete genético SSC que
fue incorporado en el material genético del S.A que originalmente lo recibió

-Resistencia a vancomicina: Vancomicina se une al extremo del péptido que forma parte del
peptidoglicano (dipéptido de alanina-D-alanina), bloqueando el blanco de unión de PBP. No hay
reconocimiento de sustrato y, por lo tanto, se inhibe la síntesis de proteoglucano. Las bacterias
resistentes a vancomicina contienen genes que codifican proteínas capaces de modificar esta
estructura de ala-D-ala, de tal manera que el antibiótico ahora no la reconoce

4. Inactivación enzimática del antibiótico

-Mecanismo más frecuente encontrado en bacterias

-Modificación por hidrolisis: El gen bla se encarga de codificar a la enzima penicilinasa (B-
lactamasa), que es capaz de hidrolizar el anillo betalactámico de los antibióticos, transformando el
anillo betalactámico en una molécula distinta que ya no es capaz de unirse a la proteína PBP y de
esta manera inactiva la función antibiótica del B-lactámico

-Modificaciones químicas: Resistencia a kanamicina: El antibiótico puede ser acetilado, fosforilado,

adenilado, etc. En estas tres posibilidades la molécula resultante pierde su capacidad de inhibición
(síntesis de proteínas)
La resistencia a un antibiótico puede ser multifactorial

-Es importante recordar que la resistencia a un antibiótico puede ser multifactorial, pueden
converger en una misma bacteria distintos mecanismos de resistencia y en el caso, por ejemplo,
de los β-lactámicos:

Producción de β-lactamasas

Alteración en las PBPs regulares (por mutaciones, por ejemplo, que impiden la unión del
antibiótico)

Nuevas PBPs resistentes a β-lactámicos, ya que han sido adquiridas por transferencia horizontal de
genes que son resistentes

En el caso de una bacteria Gram-, puede tener cambios en la estructura de las porinas que
impiden su entrada

Bases genéticas de la resistencia a antibióticos

-Determinada básicamente por: la resistencia natural o intrínseca y la resistencia adquirida

-Resistencia natural:

Inmunidad frente a la acción de las bacteriocinas sintetizadas por las propias bacterias

Pared celular como barrera natural de permeabilidad para el antibiótico

Falta de sistemas de transporte para el antibiótico

Resistencia a vancomicina por bacterias Gram -: Dada su estructura de pared que impiden que el
antibiótico ingrese al espacio periplásmico, impidiendo el acceso al sitio blanco de acción

Resistencia a B-lactamicos por Mycoplasma: Bacteria que no posee pared celular constituida por
peptidoglicano, por lo tanto, esta enzima no posee PBP (sitio blanco de acción)

-Resistencia adquirida:

Puede estar determinada por mutaciones transferidas verticalmente

Adquisición de material genético externo a través de la transferencia horizontal de genes

¿Cuáles son los mecanismos que permiten transferir genes horizontalmente?: Mecanismos de
transformación, transducción y conjugación -> Todos ellos permiten que el DNA exógeno ingrese a
la bacteria y si este contiene un gen de resistencia, podrá ser incorporado al material genético
propio

¿Cómo se mide la susceptibilidad de los antibióticos?

A. Difusión: Técnica de Kirby-Bavuer -> Antibiograma

-Prueba más utilizada en los distintos centros médicos y laboratorios

-Permite analizar varios antibióticos al mismo tiempo para una misma bacteria

-Consiste en sembrar en un medio solido de cultivo (placa de agar) una cepa bacteriana aislada,
junto a diferentes discos de papel impregnados con los distintos antibióticos. Esto se incuba 24 a
48 horas y finalmente se lee el resultado

-Resultado: Sensible o resistente

-Cuando no hay halo de inhibición en torno al disco del antibiótico, podemos aseverar que la
bacteria es resistente a ese antibiótico en particular

-Cuando tenemos halos mas pequeños o de distinto diámetro, no podemos determinar si la

bacteria es sensible o es resistente. Solo podemos aseverar que la bacteria es sensible al
antibiótico si comparamos el tamaño de este halo con respecto a las tablas de referencia
determinadas por laboratorios internacionales
 B. Dilución

-Método cuantitativo (en caldo o agar) que nos permite determinar la concentración inhibitoria
mínima (CIM) del antibiótico frente a la bacteria; para ellos es necesario enfrentar la bacteria a
distintas diluciones del antibiótico

-Generalmente se hacen diluciones seriadas en base 2 en un set de tubos, donde se agrega a cada
uno de ellos la misma cantidad de bacterias, se incuba durante 24 horas a 37°c y posteriormente
se visualiza si hay crecimiento bacteriano

-El crecimiento se refleja como turbidez

-Para determinar cuál es la concentración inhibitoria mínima, se analiza justamente el tubo mas
cercano al ultimo tubo donde hubo crecimiento bacteriano

C. Test de microdilución:

-Variante del método visto anteriormente

-Método cuantitativo

-Utiliza una microplaca de 96 pocillos que permiten disminuir considerablemente los volúmenes y
trabajar con más antibióticos simultáneamente
¿Cómo determinamos en el laboratorio si una bacteria es resistente o sensible a un antibiótico?

-En primer lugar, hay que hacer un estudio poblacional de muchas bacterias aisladas de la misma
especie

-Se somete a cada una de esas bacterias a pruebas de difusión: Se determina el diámetro del halo
de inhibición

-Se somete a las mismas bacterias a la prueba de dilución: Se determina la concentración mínima
inhibitoria para el mismo antibiótico

-Con estos resultados se obtiene una curva como la del gráfico; donde se visualiza que hay una
relación inversamente proporcional, a mayor diámetro del halo de inhibición, esa bacteria tiene
una menor concentración mínima inhibitoria, pero con este gráfico no podemos decir si es
resistente o es susceptible

-Se requiere el dato de: La concentración que alcanza el antibiótico que estamos analizando en
este gráfico en el plasma sanguíneo (absorción)

d. Antibiograma por difusión + dilución

-Técnica cuantitativa

-Nos permite determinar la CIM

-Consiste en utilizar tiras impregnadas con antibiótico, pero en una gradiente

-Esta tira genera un halo de inhibición, pero de forma elíptica de manera que, cuando el halo de
inhibición intercepta la tira, se indica inmediatamente cual es la CIM para este antibiótico
Definiciones:

CIM: Corresponde a la menor concentracion del antibiotico que inhibe el crecimiento bacteriano
luego de 18 a 24 horas de incubacion

Concentracion bactericida minima (CBM): Corresponde a la menor concentracion del antibiotico

capaz de reducir la densidad al 99,9% o destruir al 99,9% de la poblacion bacteriana

¿Por qué existen las bacterias resistentes a los antibioticos?

-Determinado basicamente por la modificacion del material genetico que se produce por
mutaciones durante el proceso de replicacion o por transferencia horizontal de genes que captan
genes de resistencia a los antibioticos y los incorporan a su material genetico

-Finalidad del antibiotico: Seleccionar bacterias resistentes

¿Qué factores favorecen el aumento de la poblacion de bacterias resistentes a los antibioticos?

-Uso indiscriminado e innecesario de los antibioticos en el uso clinico y en la agroindustria