Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Ingeniería Bioquímica
Departamento de Ingeniería Bioquímica.

Laboratorio de bioquímica y metabolismo microbiano

Practica 5. Regulación de la síntesis de la β

galactosidasa en Escherichia coli
Grupo 5IV2 Sección 2 Equipo #5
Integrantes:
Perfecto Alvarado Nahum
Pineda Bolaños Javier
Valle Zamorano Elaine Nicole
Hipótesis
• Si la actividad de la β-Galactosidasa depende de la fuente de
carbono que se le anade, entonces se tendra diferente actividad
enzimatica al anadir lactosa y glicerol.
• Al anadir ciertas fuentes de carbono, la β-Galactosidasa presentara
una induccion o una represion catabolica dependiendo de esta.

Objetivos
• Determinar la actividad de la β-Galactosidasa en Escherichia coli al
agregar lactosa y glicerol.
• Observar si existe una represion o induccion catabolica de la β-
Galactosidasa al agregar lactosa seguida de glucosa como fuente de
carbono.

Resultados
Actividad β-galactosidasa celulas crecida en:
No tratatas con tolueno
Tiempo (min) Glicerol Δ Abs 420nm Lactosa Δ Abs 420nm
0 0.245 0 0.235 0
1 0.219 0 0.211 0
2 0.313 0.068 0.248 0.013
3 0.255 0.01 0.264 0.029
4 0.286 0.041 0.272 0.037
5 0.246 0.003 0.279 0.044
6 0.299 0.054 0.233 0
7 0.27 0.025 0.304 0.069
8 0.275 0.03 0.299 0.064
9 0.259 0.014 0.3 0.065
10 0.249 0.004 0.318 0.083
Actividad β-galactosidasa células crecida en:
Tratadas con tolueno
Tiempo (min) Glicerol Δ Abs 420nm Lactosa Δ Abs 420nm
0 0.175 0 0.209 0
1 0.189 0.014 0.246 0.037
2 0.122 0 0.498 0.289
3 0.217 0.042 0.583 0.374
4 0.231 0.056 0.642 0.433
5 0.231 0.056 0.7 0.491
6 0.18 0.005 0.814 0.605
 7 0.175 0 0.925 0.716
8 0.151 0 0.967 0.758
9 0.196 0.021 1.028 0.819
10 0.193 0.018 1.132 0.923

Cinética
Tiempo (min) Abs inicial (420 nm) Abs final ΔAbs √Δabs
0 0.239 0.155 0 0
5 0.094 0.161 0.067 0.25884358
10 0.188 0.223 0.035 0.18708287
15 0.164 0.167 0.003 0.05477226
20 0.086 0.26 0.164 0.40496913
30 0.106 0.311 0.205 0.45276926
35 0.228 0.62 0.392 0.62609903
40 0.08 0.499 0.419 0.64730209
50 0.111 0.608 0.497 0.70498227
60 0.048 0.596 0.548 0.74027022
 Discusión
Entre las características generales de Escherichia coli se encuentran que
es un bacilo corto gran-negativo, catalasa-positivo, oxidasa-negativo y
anaerobio facultativo. La mayoría de las cepas fermentan la lactosa,
aunque algunas son fermentadoras lentas de este azucar.
Las bacterias, se adaptan al ambiente en que viven. Las celulas al estar en
ausencia de un nutriente, estas no producen las enzimas necesarias para
su metabolizacion. En el caso de E.coli en presencia de lactosa se necesita
de dos enzimas que son la β-galactosidasa, tambien conocida como
lactasa, que cataliza la hidrolisis de lactosa en sus dos
monosacaridos(glucosa y galactosa). La segunda enzima es la galactosido
permeasa (tambien llamada lactosa permeasa), que transporta lactosa al
interior de las celulas de E. coli. Cuando se le agrega lactosa al medio
pocos minutos despues E. coli incrementa la tasa de produccion de estas
proteínas y mantiene esta produccion mientras exista lactosa en el medio,
regresando a la ínfima concentracion original cuando ya no esta presente.
Esta propiedad de producir series de proteínas solo cuando los substratos
que metabolizan estan presentes, permiten a la bacteria adaptarse a su
ambiente sin el enorme gasto de energía requerido para mantener la
síntesis de todas las proteínas contenidas en el genoma.
 la regulacion de la β-galactosidasa en su cinetica implica tanto
mecanismos de regulacion transcripcional como post-traduccional. Estos
mecanismos aseguran que la enzima este activa cuando sea necesaria
para la descomposicion de la lactosa y otros sustratos relacionados.

Conclusiones
• La enzima β-galactosidasa es extracelular en la cepa de E. coli
utilizada
• El tratamiento con tolueno facilita el transporte enzimatico
● En esta cepa, la enzima β-galactosidasa es sujeta a induccion y a
represion catabolica