Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Electroforesis en papel
Carbajal Ortiz Itzel
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 Electroforesis de papel

• Fue el primer soporte usado en las técnicas de electroforesis

desarrolladas para separar compuestos (Tiselius, 1937)

• es fácil de usar porque no se requiere preparación de la matriz.

• su uso queda reducido a la separación de aminoácidos

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La muestra es obligada a desplazarse sobre un
soporte solido

Los extremos de la tira se sumergen en dos

recipientes separados que contienen la
disolución buffer y en los que se hallan
colocados los electrodos.

La muestra se aplica sobre una tira de papel

humedecido con una disolución con un
determinado pH

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se emplea principalmente en la separación de sustancias
de bajo peso molecular como aminoácidos y péptidos

El revelado se realiza empleando los mismos métodos que los

utilizados en cromatografía sobre papel, mediante la acción de
los colorantes adecuados.

Ninhidrina 4
 Fundamento

• Método basado en el

Cátodo
movimiento de iones o

Ánodo
moléculas cargadas por
acción de un campo
eléctrico

Las moléculas cargadas negativamente, aniones, se desplazan hacia el

electrodo positivo, el ánodo. Por otra parte, las moléculas cargadas
positivamente, cationes, se desplazan hacia el electrodo negativo, el cátodo.

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 Velocidad y movilidad de las moléculas en
una electroforesis
• Cada molécula se desplaza por efecto del campo alcanzando rápidamente una velocidad constante al
equilibrarse la fuerza impulsora (fuerza del campo eléctrico) con la resistencia al avance (fuerza de fricción o
rozamiento) impuesta por el medio en el que se desplaza.

Fuerza del campo eléctrico = Fuerza de fricción

q*E = f *v
f = coeficiente de fricción (C·V·s / m2 =
q  = carga (C)
  kg/s)
E = intensidad del campo (V/m = N/C)
v = velocidad de la molécula (m/s)

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La velocidad de migración es proporcional al producto de su carga efectiva (Q) y el
gradiente de potencial eléctrico (E) e inversamente proporcional al coeficiente de
fricción (F) relativo a la talla y forma de la molécula.

Cuanto mayor carga por unidad de masa más rápida será la migración.

V =velocidad (m/s)
𝐸𝑄 E= intensidad campo eléctrico (V x m)
𝑉= Q =carga neta (C )
𝐹 F=coeficiente de fricción (C x V/s)

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Movilidad electroforética
Parámetro que determina el comportamiento de una molécula en un
campo eléctrico. Es la velocidad de migración por unidad de campo.

V= velocidad (m/s)
E= intensidad campo eléctrico (V x m)
Q= carga neta (C )
F= coeficiente de fricción (C x V/s)

La movilidad electroforética de una partícula dependerá de su

𝑄
carga, de su masa, del medio en el que tiene lugar la separación
𝜇=
y del campo eléctrico.
6 𝜋 𝑛𝑟
Q= carga neta (C )
n= viscosidad de la solución
a= tamaño de la partícula 8
 ¿Que afecta a la movilidad electroforética?
Externos
• Intensidad del campo eléctrico
• Temperatura descenso de fricción

Solventes
• Constante dieléctrico aumento de movilidad electroforéticaµ
• Viscosidad por disminuir la resistencia por fricción aumento de movilidad
• Fuerza iónica descenso de µmovilidad
• pH: da el grado de ionización de la partícula

Sustancia problema
• Carga de la partícula Influenciado por el pH del solvente
• Forma y tamaño de la partícula

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 ¿Qué requerimos para realizar una
electroforesis de papel?

• Papel (Whatman)
• Solución buffer
• Fuente de electroforesis
• cubeta para electroforesis
en papel

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 Precauciones a tener
• El papel de celulosa hay que procurar no tocarlo con los dedos. El papel hay que manejarlo con las
pinzas

• No contaminar las soluciones de los aminoácidos patrón y de la muestra problema.

• Desde el momento en que se conecte la fuente de corriente a la cubeta de electroforesis, hasta que
termine la misma, no se deben de tocar los cables, conexiones o disolución que esté en contacto
con la corriente.

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 Detección de los aminoácidos
• Se airea el papel para que se seque

• Con las pinzas de madera se sumerge en la cubeta que contiene la solución de ninhidrina. Nada
más que se impregne, se saca de la solución, dejando que escurra el exceso de la misma.

• Se espera hasta que se produce la reacción de color

• La detección de los aminoácidos patrón y de la muestra problema se realiza por la aparición de las
manchas de color púrpura

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Ejemplo de una electroforesis en papel

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Determinación experimental

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 Determinación experimental

Se realizan corridas electroforéticas de la sustancia en

estudio utilizando soluciones buffer de igual fuerza
iónica y viscosidad, pero diferentes valores de pH. En
todos los casos se calcula la movilidad electroforética
y se grafica µ en función del pH.

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Gracias por su
atención

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