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CÓDIGO: FO-DOC-112

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS


VERSIÓN: 01 PÁGINA: 1 de 2
PROCESO GESTIÓN DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016
LABORATORIO DE QUIMICA

UNIDAD ACADÉMICA: Departamento de Biología y Química


CURSO: Bioquímica

PRÁCTICA Nº 026: EVIDENCIA DE PRODUCCIÓN DE PIRUVATO Y


FOTOSÍNTESIS

1. OBJETIVOS
● Determinar la producción de piruvato durante la fermentación de glucosa por levadura.
● Evidenciar por medio de cambios en el pH en el agua el consumo de CO2 durante la fotosíntesis celular.

2. FUNDAMENTO TEÓRICO

El metabolismo son todos aquellos procesos químicos que suceden al interior de los seres vivos que dan como
resultado la transformación de una o varias sustancias. De los cuales unos de los procesos centrales de la
producción energética universal en todos los seres vivos son la glucolisis que ocurre en el citosol, transformando
una molécula de glucosa en dos moléculas de ácido pirúvico, generando adicionalmente 2 moléculas de ATP y 2
de NADH+ + H+. De forma similar la fotosíntesis es el principal proceso metabólico anabólico que transforma el
CO2 gaseoso en moléculas de hidratos de carbono en los organismos autótrofos.

3. MATERIALES Y REACTIVOS

Equipo Materiales Reactivos


Balanza de precisión Tubos de ensayo (4) Glucosa al 10 %
Centrífuga Tubos de ensayo grandes (3) Fosfato de sodio dibásico al 0.5 M
Baño maría Tubos para centrífuga (2) Fosfato de sodio monobásico al 0.5 M
Bortex Beaker de 400 ml (4) Ácido tricloroacético al 10%
pHmetro Pipeta de 5 ml (3) 2,4 dinitrofenilhidracina saturado en HCl 2M
Pipeta de 10mL (1) NaOH al 10%
Pinzas para tubo de ensayo (1) Levadura (traer)
Gradilla para tubos de ensayo Solución de bromotimol
Espátula Ramas de Elodea de igual tamaño (2) (traer)
Balón aforado
Papel aluminio
Pipeta Pasteur (3)
CÓDIGO: FO-DOC-112
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
VERSIÓN: 01 PÁGINA: 2 de 2
PROCESO GESTIÓN DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016
LABORATORIO DE QUIMICA

PROCEDIMIENTO

1ra Parte: Evidencia de producción de piruvato

Preparar 2 soluciones de levadura al 10% p/v, la primera usando como solvente fosfato de sodio dibásico 0,5 M
(solución 1) y la segunda usando como solvente solución de fosfato de potasio monobásico 0,5 M (solución 2).
Agitar en vórtex para homogenizar soluciones. En dos tubos de ensayo marcados como A y B agregar a cada uno
2,5 ml de solución de glucosa al 10%, al tubo A agregar 2,5 mL de la solución 1 y al tubo B agregar 2,5 ml de la
solución 2.

Colocar en baño maría a 37 °C por 1 hora, luego agregue a cada tubo 2 mL de ATA al 10% p/v. Mezclar
vigorosamente y centrifugar 10 minutos a 2500 rpm. Transferir un 1 ml de cada sobrenadante a tubos de ensayo
diferentes y agrégueles 0,5 ml de solución saturada de 2,4 dinitrofenilhidracina en HCl 2M. Mezcle fuertemente,
transfiera nuevamente 0,5 ml de esta mezcla y agregue 1 ml de NaOH al 10% y 0.5 ml de agua. La formación de
un color rojo indica la presencia de piruvato. Repita esta prueba usando una solución de glucosa en vez del
sobrenadante.

2da Parte: Evidencia de la fotosíntesis

En un beaker colocar unos 50 mL de agua destilada y agregar unas gotas de azul de bromotimol**. Si se obtiene
una solución amarilla, agregar lentamente unas gotas de NAOH agitando suavemente con una barra de vidrio
hasta obtener una coloración azul y medir el pH a esta solución con el pHmetro.

Marcar los tubos de ensayo grandes del uno al tres, agregar a cada tubo aproximadamente hasta la mitad agua
destilada con el indicador preparado inicialmente. Con la pipeta de 10 mL bien lavada soplar en el interior de las
soluciones de los tubos 2 y 3 hasta que la solución cambie a un color amarillo, medir y registrar su pH. En los
tubos 2 y 3 colocar ramitas de igual tamaño de Elodea. El tubo 2 de ser posible colocar a exposición directa de
rayos solares. Forrar completamente con papel aluminio el tubo 3 de tal forma que no quede ningún poro o
hueco por el cual pueda pasar luz. Incubar por una hora. Finalmente, a notar cambios aparentes en el color de
las soluciones, medir y registrar nuevamente el pH de los tubos 2 y 3. El tubo 1, es el patrón que se utiliza como
referencia para poder registrar los cambios de coloración durante el experimento.

** Nota: Se puede preparar una solución para todos los grupos de laboratorio, tomando en un beaker grande unos
250 mL de agua, agregando a esta las gotas de azul de bromotimol.

BIBLIOGRAFIA

− PLUMER, D.T. Introducción a la bioquímica práctica. México. McGraw-Hill Latinoamericana, S.A.


− CONN, E y Stumpf, P.K Bioquímica F.
− LOPEZ, E Y ANZOLA, C. Guías de laboratorio de Bioquímica, Facultad de ciencias. Universidad
Nacional de Colombia sede Bogotá.

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