CÓDIGO: FO-DOC-112

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS PÁGINA: 1 de

VERSIÓN: 01
13
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016

LABORATORIO DE BIOQUIMICA BÁSICA

UNIDAD ACADEMICA: Regencia de Farmacia

CURSO: Bioquímica Básica
PRACTICA Nº 12 : Análisis de Orina

1. OBJETIVOS
 Determinar la presencia de algunos componentes en orina
 Poner en practica técnicas de análisis bioquímicos en fluidos corporales
 Identificar la presencia de algunas sustancias presentes en la orina como resultado del metabolismo de
biomoléculas

2. CONSULTA PREVIA
 ¿Cuál es la composición de la orina humana?
 ¿Qué es amoniotelismo y cuando se presenta?
 ¿Que utilidad tiene el análisis de orina?
 Indague si existen diferencias entre la excreción urinaria del hombre y animales; redacte sus palabras una breve
explicación.
 Que indica la presencia de urea y creatinina alta en perros?

3. FUNDAMENTO TEORICO

La orina es un líquido producido por los riñones para eliminar los productos de desecho del torrente sanguíneo. La orina
humana es de color amarillento y de composición química variable, pero aquí hay una lista de sus componentes
principales componentes primarios: principalmente de agua (91% a 96%), con solutos orgánicos que incluyen urea,
creatinina, ácido úrico y pequeñas cantidades de enzimas, carbohidratos, hormonas, ácidos grasos, pigmentos y
mucinas, e iones inorgánicos como el sodio, potasio, cloruro, magnesio, calcio, amonio, sulfatos y fosfatos. La presencia
de niveles significativos de proteína o azúcar en la orina indica posibles problemas de salud.

El pH de la orina humana varía de 5.5 a 7, con un promedio de alrededor de 6.2. La gravedad específica varía de 1.003
a 1.035. Las desviaciones significativas en el pH o la gravedad específica pueden deberse a la dieta, las drogas o los
trastornos urinarios.

Excreción del Nitrógeno: dentro de los productos de desecho de los compuestos nitrogenados se encuentran la urea,
ácido úrico, creatinina y nitratos y sus porcentajes varían dependiendo de la ingesta de proteína, el género y estado de
salud

El ácido úrico, producto del metabolismo de nucleoproteínas, ácidos nucleicos y purinas, tiene una concentración
plasmática que depende de la edad, hábitos alimentarios, género, entre otros factores. No obstante, se ha
demostrado que niveles altos de uricemia orientan a pensar en desórdenes en el metabolismo de estas sustancias o
de su eliminación. Otras causas de hiperuricemia son la leucemia, mielorna, policitemia y efectos tóxicos del plomo
y algunos medicamentos que contienen tiazinas. Otros medicamentos, por el contrario, inducen hipuricemia, tales
como la fenilbutazona y los salicilatos, por su carácter uricosúrico. Se ha reportado que individuos con hiperuricemia
tienen marcada tendencia a desarrollar artritis gotosa y cálculos renales de ácido úrico.

También se encuentran niveles altos de ácido úrico en hiperuricemia idiopática familiar y condiciones asociados con
el decremento de la función renal. El ácido úrico es una sustancia que forma el hígado cuando ha procesado las
purinas, es decir, compuestos que contienen ciertos alimentos, como carne, pescado, vísceras, mariscos, frutos
secos, embutidos, principalmente. El referido ácido no tiene utilidad en el organismo, por lo cual se desecha a través
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de la orina, pero cuando la eliminación no es óptima, o si su producción es muy abundante, se acumula en las
articulaciones con consecuencias que detallaremos más adelante. Hiperuricemia es la concentración elevada de
ácido úrico en la sangre, que puede depositarse poco a poco en las articulaciones hasta formar cristales, provocando
inflamación y dolor muy intenso, en otras palabras, la temible gota. La gota se produce cuando los cristales de urato
mono-sódicos se forman en las articulaciones, en los tendones y en los tejidos circundantes. La metabolización de
las purinas da lugar al ácido úrico, que normalmente se elimina por la orina. Es más probable que se formen cristales
ante la presencia de ácido úrico, pero la presencia en exceso de éste no implica necesariamente que se padezca de
gota. Las purinas pueden ser generadas por el cuerpo a través de las células de desecho o bien por la ingesta de
alimentos ricos en purinas, como, por ejemplo, el marisco. Los riñones son los responsables de aproximadamente
un tercio de la excreción de ácido úrico, mientras que el intestino es responsable del resto.

Es posible que defectos hereditarios en el riñón sean responsables de la predisposición de las personas para el
desarrollo de la gota. La gota es una forma de artritis que afecta principalmente a hombres entre los 40 y 50 años de
edad. Los altos niveles de ácido úrico en la sangre son causados por alimentos ricos en proteínas. El consumo de
alcohol a menudo causa ataques agudos de gota y factores hereditarios pueden contribuir a la elevación del ácido
úrico. Normalmente, las personas con gota son obesos, con predisposición a la diabetes y a la hipertensión, y con
riesgo alto de enfermedades del corazón. La gota es más común en las sociedades opulentas, debido a una dieta
rica en proteínas, grasas, y alcohol. Cuando se produce como consecuencia de otras enfermedades, como la
insuficiencia renal, es a menudo independientemente del estilo de vida de la persona.

4. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Estos son algunos de los equipos que utilizaran en posteriores prácticas.

Equipos Materiales Sustancias y/o Reactivos

4 Vaso de precipitado (1-150) (2-250), (1-500)
Balanza Papel Indicador universal
Pipeta 60ml Orina (traer)
Pera 5g Ureasa
10 Tubo de ensayo 10ml NaOH 30%
Placa de calentamiento 1ml NaOH 10%
Mechero Acido Pícrico solución saturada
Espátula 1ml Reactivo de molish
Vidrio reloj 1ml H2SO4 concentrado
Embudo de filtración 2ml Ba(OH)2 0,3N
Erlenmeyer 250ml 2ml ZnSO4.7H2O
2ml Fehling A y B
1ml Nitroprusiato de Sodio al 5%
Ácido Acético Glacial
1ml Ninhidrina
2ml Reactivo de Biuret
Papel filtro

5. PROCEDIMIENTO O METODOLOGÍA

5.1 Propiedades Físicas de la orina:

 Aprecie el color y turbidez de la orina; con ayuda del papel indicador mida el pH de la orina y regístrelo.
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5.2 Composición de la orina:

5.2.1 Urea: Coloque 10ml de orina en un tubo de ensayo, agregue 0.05g de ureasa pulverizada y 10 gotas de
Hidróxido de Sodio al 30%. Caliente a ebullición colocando un papel indicador universal en los humos que
salen del tubo
5.2.2 Creatinina: Coloque 5ml de orina en un tubo de ensayo, agregue 1ml de solución saturada de ácido
pícrico y alcalinice con NaOH al 10% (12-15 gotas). Observe la coloración

5.3 Proteínas y aminoácidos: Tome en 2 tubos de ensayo 3ml de orina en cada uno.
Prueba de biuret: Agregue a uno de ellos 2ml de solución de biuret. Agite y observe la formación de un
color violeta o purpura. Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos
ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (color violeta)

Prueba de Ninhidrina: Al segundo tubo agregue 1ml de solución de Ninhidrina, agite y caliente en agua
hirviendo durante 10 minutos. Enfrié y observé la formación de color rosado o violeta. Todas aquellas
sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo libre, reaccionaran con la ninhidrina.
(violeta o amarillo)

5.4 Presencia de glúcidos: Tome 5ml de orina en un tubo de ensayo y agregue 5 gotas del reactivo de molish,
agite y agregue 1ml de H2SO4 por la pared del tubo, sin agitar observe la coloración de la zona de contacto de
los dos líquidos.

Presencia de agentes reductores en orina:

Prueba de fehling: Tome en un vaso de precipitado 5ml de orina, agregue 2ml de ZnSO4.7H2O al 5%,
agite y agregue 2ml de Ba(OH)2 al 0,3N, agite y filtre. Agregue al filtrado 1ml del reactivo de fehling A y
B, mezcle y caliente a ebullición 10 min con el fin de observar la formación de un precipitado rojizo (mida
el tiempo). Prueba de Benedict: En un tubo de ensayo coloque 1 ml de solución de orina. Agregue 2 ml
de reactivo de benedict, agite bien y caliente durante 5 minutos en agua hirviendo. Anote en la tabla sus
resultados. La prueba positiva se observa por la formación de un precipitado color ladrillo.o verde para
bajas concentraciones.

5.3 Acetona: Coloque 2ml de orina en un tubo de ensayo y agregue 5 gotas de Nitroprusiato de Sodio al 5%.
Alcalinice la solución con NaOH al 10%. Si hay acetona aparece un color rojo. Luego acidifique con
ácido acético glaciar (20 a 30 gotas), si el color no corresponde a acetona, vira a amarillo, pero si hay
acetona el color se intensifica

6. RESULTADOS
 Propiedades físicas: A qué se debe el color de la orina.
 Urea: ¿A qué se debe el cambio de color del papel? ¿Cuál es la concentración normal de urea en orina?
Creatinina: ¿Escriba la fórmula de la creatinina, qué función biológica desempeña la creatinina?
 Glúcidos: ¿qué glúcidos pueden ser excretados en orina?
 Presencia de agentes reductores: ¿qué cuerpos reductores pueden hacer parte de la orina?
Acetona: ¿De dónde proviene la acetona en la orina?
 Proteínas: ¿A qué se debe la coloración violeta en la prueba de biuret? ¿Y la coloración rosada con la prueba
de Ninhidrina? ¿A qué se deben las coloraciones, si se presentaron?

7. BIBLIOGRAFIA
 Miguez Otalora, Jose Bernardo. (1997). Prácticas de Bioquímica.
 Nelson, D. L., & Cox, M. M. (2009). Lehninger principios de bioquímica (No. 577.1 LEH). Omega.
 Plummer, D. T. D. T. (1981). Bioquímica práctica (No. 574.192 P5).