Universidad Nacional Autónoma de 

México 
Facultad de Química 
Laboratorio de Biosíntesis 
Microbiana  
Semestre 2019-2 
 
Práctica  No.3  ​TRANSFORMACIÓN DE Escherichia coli POR
ELECTROPORACIÓN

Integrantes:
-​Flores González Cinthya Sarai
-Ortiz Manzano Ángel Tlacaelel

Objetivos:

-Electrotransformar células E.coli W3110 con el plásmido pSPG-GPF, purificado por

columna.
-Determinar la eficiencia de transformación de células electrocompetentes de E. coli
W3110.
Muestra: ​ Transformación de ​E.coli

Fecha de la muestra:​ 08/03/2019

Tiempo de crecimiento: 4
​ 8 horas

Temperatura de incubación​:
Temperatura ambiente (28°C)

Descripción:
Se muestra un ligero crecimiento de 11
colonias alrededor de la caja petri

Muestra: ​ Control de viabilidad de E

​ .coli

Fecha de la muestra:​ 08/03/2019

Tiempo de crecimiento: 4
​ 8 horas

Temperatura de incubación​:
Temperatura ambiente (28°C)

Descripción:
Notable crecimiento por las estrías de la
caja

Muestra: ​ Control negativo de ​E.coli

Fecha de la muestra:​ 08/03/2019

Tiempo de crecimiento: 4
​ 8 horas

Temperatura de incubación​:
Temperatura ambiente (28°C)

Descripción:
No hay presencia de crecimiento de
ningún microorganismo
Puesto que cada colonia se origina a partir de una única célula transformada, nosotros
podemos calcular la eficiencia de transformación, o el número de células transformadas por
microgramo (g) de ADN plasmídico. Por ejemplo, si 10 nanogramos (0.01 g) de plásmido se
utilizaron para transformar 1 ml de células, y sembramos 0.1 ml de la mezcla y obtenemos
100 colonias, obtenemos una eficiencia de transformación del 1 x 105 células transformadas
por g de ADN plasmídico. La eficiencias de transformación generalmente oscilan entre 1 x
105 hasta 1 x 108 .

Base de cálculo

# colonias = 11
DO600nm muestra = 30
valor teórico
30 * 109 cel/mL * ( 0.05mL 9 10
3.05mL ) * (0.1mL) = 0.049 * 10 células = 1.99 * 10 cel/microg

valor experimental
75 microg 1 microg
3mL+0.05mL * (0.1mL) = 2.46 ng * ( 1000ng ) = 0.00246 microg

Eficiencia transformación = UFC transformantes / µg DNA

11 colonias
E f iciencia T ransf ormación = 0.00246 microg = 4471.45 celulas/microg
4471.45cel/microg −5
%T = 1.99*1010 cel/microg * 100 = 2.247 * 10 % rendimiento

Análisis de resultados
Esta técnica se basa en la permeabilización relativa de las biomembranas inducida por
campos eléctricos de alta intensidad y corta duración.
En forma general el funcionamiento de un equipo de electroporación se basa en la
descarga de un capacitor que produce el campo eléctrico requerido. Este campo
eléctrico de duración de apenas unos 10 µs genera poros instantáneos en la célula y
permite el paso del ADN.
La acción del campo eléctrico sobre la superficie celular genera una conductividad y una
tensión eléctrica que terminan por romper de manera reversible la membrana (Imai e
Isaka.2002). Al mismo tiempo las cargas electrostáticas ocasionan que las hebras de
ADN se adhieran a la superficie, de tal modo que al ocurrir los rompimientos de dicha
superficie, el ADN puede pasar al interior de la célula.
Al realizar el procedimiento este se debe hacer con cuidado al momento de transferir las
células a la celda debido a que se debe realizar despacio sin generar burbujas, ni
incorporando aire en la mezcla, ya que nuestras células puede morir y no llevarse a cabo
la transformación.

Para la comprobación de las características obtenidas por la adición del plásmidos se

realizaron cultivos en cajas petri las cuales fueron: Control negativo de ​E.coli e​ n donde
no se observó cambio alguno, mientras que en el ​ ​ Control de viabilidad de E​ .coli ​ si se
pudo observar un notable crecimiento por las estrías marcadas de color blanco muy
tenue a verde. También a simple vista en otra caja petri se observó el crecimiento de
colonias con un tono blanco.Las anteriores ¨pruebas¨ ya mencionadas en las cajas petri
evalúan las características obtenidas con el plásmido , por lo que de esta manera se
demostró el fenotipo de la bacteria de su transformación.

Se observa que el porcentaje de eficiencia fue de 0.00022 % ​el cual es muy pequeño, ya
que la cantidad de células recombinantes no es amplio, esto puede deberse a un posible
mal manejo al realizar la técnica En la práctica la transformación es altamente
ineficiente, sólo una de cada 10.000 células incorpora con éxito el ADN plasmídico. Si las
bacterias son transformadas con un plásmido que contiene un marcador selectivo y
sembradas en placas de agar con un medio selectivo y no-selectivo, observaremos
diferentes resultados. Las placas de agar con un medio no selectivo permitirán crecer a
las bacterias transformadas y las bacterias no transformadas. Por el contrario, en las
placas de agar con el medio selectivo sólo crecerán las bacterias que expresan el
marcador selectivo.

Conclusión

Se pudo electro transformar células E.coli W3110 con el plásmido pSPG-GPF, purificado
por columna.
Y se determinó la eficiencia de transformación de células electrocompetentes de E. coli
W3110, con un resultado de 2.247 * 10−5
La electroporación es una herramienta útil en campo de microbiología ya que a partir
de ella podemos hacer que una bacteria produzca un producto de interés biológico