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Revista de biorremediación y El-Bassi et al., J Bioremediat Biodegrad 2018, 9: 3

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DOI: 10.4172 / 2155-6199.1000439

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ISSN: 2155-6199
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Artículo de investigación Acceso abierto

Biotransfromation de dibenzothiphene por las células en reposo de un recién

aislado Serratia marscens Sp. Deformación originada en aguas residuales
industriales
Leila El-Bassi 1 *, Rim Nefissi Ouertani 2, Naoya Shinzato 3 y Ahmed Ghrabi 1
1 Laboratorio de Aguas Residuales y Medio Ambiente, Centro de Investigación y Tecnologías del Agua, Ecoparque Borj-Cedria, Soliman, Túnez

2 Laboratorio de Fisiología Molecular Vegetal, Centro de Biotecnología de Borj Cedria (CBBC), Ecoparque Borj-Cedria, Soliman, Túnez

3 Centro de Investigación de la Biosfera Tropical, Centro de Biociencias Moleculares (COMB), Universidad de Ryukyus, 1 Sembaru, Nishihara-cho, Okinawa, Japón

*Autor correspondiente: Leila El-Bassi, Laboratorio de Aguas Residuales y Medio Ambiente, Centro de Investigación y Tecnologías del Agua, Ecoparque Borj-Cedria, Soliman, Túnez, Tel:

21679325122; Correo electrónico: l.elbassi@gmail.com

Fecha de grabación: 23 de marzo de 2018; Fecha acc: 30 de abril de 2018; Fecha de publicación: 02 de mayo de 2018

Derechos de autor: © 2018 El-Bassi L, et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la Licencia de Atribución Creative Commons, que permite el uso, distribución y
reproducción sin restricciones en cualquier medio, siempre que se acredite el autor y la fuente originales.

Resumen

Se seleccionaron cinco aislamientos capaces de utilizar dibenzotiofeno (DBT) como única fuente de azufre con altas tasas para investigar sus potencialidades como
biocatalizadores de reacciones de biodesulfuración. Se investigaron las actividades desulfurantes de las cepas seleccionadas en el estado celular en crecimiento y en reposo.
Los rendimientos de biodegradación fueron considerablemente más altos en la reacción celular en reposo, especialmente para dos cepas denominadas provisionalmente S1
(98,8%) y S27 (97,5%). Estos resultados insinuaron que la actividad de biodegradación estaba relacionada principalmente con el metabolismo secundario de estas cepas.
También se evaluaron sus potencialidades de biotransformación bajo diversas condiciones con el fin de evaluar su estabilidad tanto en medios acuosos como orgánicos; y su
sensibilidad a la presencia de escualeno, utilizado en este estudio como representante de los hidrocarburos en el petróleo. Los resultados mostraron que las 5 cepas
seleccionadas todavía estaban activas en presencia de 95% de escualeno pero no se observó transformación en 99% de escualeno. La selectividad del sustrato de azufre se
estudió en presencia de otros compuestos orgánicos de azufre como dimetilsulfóxido DMSO y benzotiazol BTH. La presencia de estos sustratos inhibió la absorción de DBT por
las bacterias y, en consecuencia, disminuyó su tasa de degradación. Además, el análisis convencional de la secuenciación del ADN ribosómico 16S mostró que la cepa, con las
tasas de bioconversión más altas, pertenecía a La presencia de estos sustratos inhibió la absorción de DBT por las bacterias y, en consecuencia, disminuyó su tasa de
degradación. Además, el análisis convencional de la secuenciación del ADN ribosómico 16S mostró que la cepa, con las tasas de bioconversión más altas, pertenecía a La
presencia de estos sustratos inhibió la absorción de DBT por las bacterias y, en consecuencia, disminuyó su tasa de degradación. Además, el análisis convencional de la
secuenciación del ADN ribosómico 16S mostró que la cepa, con las tasas de bioconversión más altas, pertenecía a Serratia marcescens especies. Hasta donde sabemos, Serratia
sp. rara vez se informó como cepa degrder DBT. Por lo tanto, la velocidad y el alcance de la reacción de biodesulfuración, exhibida por la cepa Serratia marcescens S27, sugirió
que podría usarse en una escala práctica.

Palabras clave: Dibenzotiofeno; Biodesulfuración; Organosulfur vía [22,23]. Rhodococcus y Gordonia tienen la especificidad de oxidar
compuestos; Xenobióticos; Biodegradación; Serratia sp. azufre en DBT sin dividir el esqueleto carbónico en hidrocarburos con
bajo número de carbonos. Esta propiedad tiene una gran ventaja cuando
Introducción se aplica a procesos industriales.

La vía de biodesulfuración de DBT, llamada vía 4S, se basa en un

Los compuestos orgánicos de azufre, incluidos el dibenzotiofeno (DBT), el
sistema multienzimático que implica cuatro reacciones consecutivas [24].
benzotiofeno (BT) y sus derivados alquilados en los combustibles fósiles, han
La reacción comenzó por oxidación de DBT usando dos
sido la principal causa de problemas ambientales en todo el mundo, incluida
monooxigenasas: DBT monooxigenasa (DszC) y DBT sulfona
la contaminación del aire y la lluvia ácida [1] y problemas saludables como la
monooxigenasa (DszA) y terminó por la conversión a 2-hidroxibifenilo
carcinogenicidad para los seres humanos [2,3 ]. Además, con la creciente
como producto final usando la enzima desulfinasa (DszB) [25].
demanda de energía y las políticas medioambientales más estrictas, la
desulfuración profunda del petróleo es cada vez más necesaria [4]. La desulfuración microbiana de DBT tiene un interés creciente ya que es fácil de
mantener, no requiere gas hidrógeno, ofrece menos perturbaciones ambientales y
La biodegradación de compuestos orgánicos de azufre se ha estudiado
menores costos operativos en comparación con la hidrodesulfuración [20]. Sin
previamente utilizando diferentes cepas como Corynebacterium sp. [5,6],
embargo, el rendimiento de la biodesulfuración podría verse limitado debido a las
Paenibacillus sp. A11-2 [7], Pseudomonas sp. [8-10], Rhodococcus sp. [11], Mycobacterium
actividades enzimáticas bacterianas y la velocidad de transporte del sustrato a
sp. [12,13], Sphingomonas sp. [14], Bacillus subtilis WU-S2B [15], Gordoni una
través de la membrana celular [26-28].
sp. [16-18], y Brevibacterium sp. [19].
Considerando la relevancia del impacto global de la contaminación generada por DBT,
reportamos en este estudio la caracterización de la bioconversión de DBT utilizando cinco
DBT se ha utilizado como un modelo de compuesto poliaromático de azufre para
cepas aisladas de aguas residuales en medio mínimo con DBT como única fuente de
el aislamiento y caracterización de bacterias capaces de bioconversión de
azufre. El examen del consumo de DBT por cepas seleccionadas se investigó en el estado
compuestos orgánicos de azufre recalcitrantes que se encuentran en una variedad
de crecimiento y reposo de las células. También se examinó la biodegradación de DBT en
de combustibles fósiles [20, 21]. El dibenzotiofeno (DBT) muestra una alta toxicidad
medio bifásico para simular condiciones reales y en presencia de otros compuestos
y mutagenicidad que puede afectar la salud humana y los ecosistemas en general
orgánicos de azufre para examinar la amplia especificidad de la cepa finalmente
[2]. Un pequeño número de géneros como Rhodococcus y
seleccionada. La identificación de las manchas se logró utilizando 16S
Gordonia se sabe que eliminan el azufre de DBT a través de un azufre específico

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ISSN: 2155-6199
Citación: El-Bassi L, Nefissi RO, Shinzato N, Ghrabi A (2018) Biotransfromation of Dibenzothiophene by Células en reposo de un recién aislado
Serratia marscens Sp. Deformación originada en aguas residuales industriales. J Bioremediat Biodegrad 9: 439. doi: 10.4172 / 2155-6199.1000439

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Identificación de ARNr. También se destacó la detección de genes 121 ° C durante 5 min en caso de células inactivadas por calor para examinar la
desulfurantes con el fin de caracterizar la vía metabólica utilizada por la posibilidad de adsorción de sustratos a las células en reposo. La reacción se inició
cepa con alto potencial de degradación. añadiendo el DBT utilizado aquí como sustrato. Se añadió DBT a una concentración
final de 1 g / L. Los experimentos de bioconversión se llevaron a cabo en matraces

Materiales y métodos de 250 mL a 30 ° C y 200 rpm. Las muestras se recogieron cada 2 horas de
intervalos para el ensayo de DBT por HPLC. La actividad de las células en reposo se
determinó mediante la tasa de consumo de DBT durante las 24 h del experimento.
Productos quimicos

El dibenzotiofeno (DBT) (Wako Pure Chemicals Co., Japón), el

benzotiazol (BTH, Wako Pure Chemicals Co., Japón) y el dimetilsulfóxido
(DMSO; Wako Pure Chemicals Co., Japón) eran de grado de
cromatografía líquida y otros productos químicos eran analíticos. grado,
disponible comercialmente. Todos los demás reactivos fueron de la más
alta pureza disponible comercialmente y se usaron sin purificación
adicional. Todos los medios y soluciones se prepararon con agua
desionizada.
Enriquecimiento y aislamiento
Las aguas residuales se obtuvieron de la descarga de diferentes instalaciones
industriales (curtiduría, agroalimentario, industria del plástico) en Túnez. Varias
cepas que crecen con DBT como única fuente de azufre se aislaron de las aguas
residuales muestreadas. Así, se suspendieron 10 mL de aguas residuales en 100
mL de medio BHMS (composición: 1 g / L KH 2 correos 4; 0,2 g / LK 2 HPO 4;
0,2 g / l de MgSO 4 H 2 O; 0,02 g / L CaCl 2; 1 g / L de NH 4 NO 3; y 2 gotas de
FeCl 3 60%), inoculado con 0,25 mM de DBT como fuente única de azufre y 5 g /
L de glucosa como fuente de carbono. La suspensión resultante fue
incubados en agitador rotatorio (200 rpm) a 30 ° C hasta turbidez por 24
h. Luego, la mezcla se centrifugó a 14000 rpm durante 3 min y el cultivo
se transfirió a medio fresco que se inoculó con inóculos al 5% v / v
seguido de un subcultivo con inóculos al 2% v / v cinco veces [29]. El
aislamiento bacteriano se realizó esparciendo una sola colonia en el
mismo medio que contenía agar al 1,5%.
Reacciones de bioconversión en medio bifásico
También se investigó la capacidad de cepas seleccionadas para convertir
DBT en un sistema de dos fases. Así, utilizamos un medio bifásico con
escualeno como representante de los hidrocarburos. Los sistemas de
desulfuración de dos fases contienen células en reposo suspendidas en 25 ml
de tampón fosfato (0,1 M; pH 7) inoculadas con DBT 3 mM y la concentración
apropiada de escualeno: 0, 50, 90, 95, 99% en volumen; con respecto al
volumen total. La reacción se detuvo mediante centrifugación y muestreo de
la fase orgánica. Las concentraciones de sustrato se determinaron en la fase
orgánica mediante análisis por HPLC. La actividad de degradación de DBT
residual se calculó como el porcentaje de actividad en presencia de escualeno
en relación con la actividad medida en ausencia de escualeno (100% de
actividad = actividad en fase acuosa).
Degradación de otros compuestos orgánicos de azufre
Para investigar la gama de compuestos orgánicos de azufre que
pueden ser asimilados por cepas seleccionadas, se utilizaron dos
compuestos: benzotiazol BTH y dimetilsulfóxido DMSO. Los compuestos
orgánicos de azufre; además de DBT se añadieron como única fuente de
azufre en experimentos de crecimiento a una concentración final de 30
mg / L. El cultivo se prolongó durante 7 días a 30 ° C. Al final del
experimento, se realizó un análisis de HPLC utilizando una fase acuosa.
El crecimiento celular se estimó midiendo la densidad óptica a 660 nm.

Condiciones de cultivo
Análisis de HPLC
Las cinco cepas seleccionadas cultivadas en 50 mL de medio de cultivo en
matraces de 250 mL se inocularon con 25 mg / L de DBT y se incubaron
Todas las concentraciones de compuestos se midieron mediante
durante 120 horas a 30 ° C en condiciones de agitación. Durante el tiempo de
cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) (Tipo LC-10A, Shimadzu
cultivo, se tomaron muestras de alícuotas del cultivo para medir las
Co., Kyoto, Japón), equipada con un detector de red de diodos y un
concentraciones de DBT por HPLC y el crecimiento celular por ensayo
inyector automático.
turbimétrico a una densidad óptica de 660 nm (DO). Para analizar por HPLC se centrifugaron 1,5 mL de muestra a 13000 rpm
durante 5 min, en tubos Eppendhorf (muestras acuosas con acetonitrilo, en
El medio de cultivo se preparó según lo mencionado por Izumi et al.
diluciones ½). Cuando se separaron ambas fases, se midieron los compuestos
[30]. El medio estándar mínimo libre de sulfato (SMM) contenía: 5 g
en aceite una vez disueltos con una columna para análisis de fase inversa
fuente de carbono (glucosa o glicerol), 0,5 g de KH 2 correos 4, 4 mg de
(Tipo VP-ODS Shim-pack, 150 mm 4,6 mm, Shimadzu Co., Kyoto, Japón). En
K 2 HPO 4, 1 g de NH 4 Cl, 0,2 g de MgCl 2. 6H 2 O, 0,02 g de CaCl 2, 0.01 g de NaCl, 10
este caso, la elución isocrática se realizó con una fase móvil de acetonitrilo:
mL de solución de metal en 1000 mL de agua desionizada (pH 7,7).
La solución de metal contenía 0,5 g de FeCl 2. 4H 2 O, 0,5 g de ZnCl 2, 0,5 g de agua 55:45 (v / v) a 1 mL min. 1. Se detectó DBT a un valor de longitud de onda
de 280 nm.
MnCl 2. 4H 2 O, 0,1 g de Na 2 Mugir 4. 2H 2 O, 0.05 g de CuCl 2, 0,05 g de
N / A 2 WO 4. 2H 2 O y 120 mmol de HCl en 1000 ml de agua desionizada. La única fuente de azufre en este
experimento fue DBT (25 mg. L- 1 añadido en Identificación del ARNr 16S
solución en alcohol etílico).
El ADN genómico se preparó usando ISOPLANT (Nippon-gene Co., Tokio,
Japón) y se usó para PCR. El locus del gen 16S rRNA fue amplificado por PCR
Bioconversión de DBT por células en reposo como se describió anteriormente [31]. Se utilizó el programa blast
(http://ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/NCBI, MD, EE. UU.) Para la búsqueda de
Las células se cultivaron en 50 mL de SMM en matraces de 250 mL. Se
homología génica con el programa estándar por defecto. El árbol filogenético
recolectaron al final de la fase de crecimiento por centrifugación (20000 g durante
basado en la secuencia del gen de ARNr 16S se construyó mediante el método
15 min), se lavaron dos veces con agua desionizada esterilizada y una vez con
de unión de vecinos [32], con el modelo de dos parámetros de Kimura como
Tampón fosfato 0,1 M (pH 7,0) y suspendido en un volumen apropiado
corrector de distancia [33] después de la alineación de
del tampón fosfato para ajustar la concentración celular a una densidad
óptica a 660 nm de 10. La suspensión celular se calentó a

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Citación: El-Bassi L, Nefissi RO, Shinzato N, Ghrabi A (2018) Biotransfromation of Dibenzothiophene by Células en reposo de un recién aislado
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secuencias con el programa de alineación de secuencias múltiples CLUSTAL X [34].

Detección de genes dszA, dszB y dszC basada en PCR

La cepa aislada se examinó mediante PCR para detectar la presencia de
genes desulfurantes; Genes dszC, dszA y dszB. Ellos son:

• dszA hacia adelante: 5'-TCGATCAGTTGTCAGGGG-3 ', dszA hacia atrás:

5'-GGATGGACCGACTGTTGAG-3'

• dszB hacia adelante: 5'-ATCGAACTCGACGTCCTCAG-3 ', dszB hacia atrás:

5'-GGAACATCGACACCAGGACT-3'

• dszC hacia adelante: 5'-CTGTTCGGATACCACCTCAC-3 ', dszC hacia atrás:

5'-ACGTTGTGGAAGTCCGTG-3'. Todas las amplificaciones por PCR se
realizaron en condiciones según Duarte et al. [29] protocolo.

Figura 2: Crecimiento de 5 cepas aisladas en medio mínimo con DBT

Resultados
como única fuente de azufre. (cepa S1, cepa S7, ∆ cepa S19, cepa S26, ○
Cepa S27).

Aislamiento y selección de cepas eficientes para la

biotransformación de DBT La Tabla 1 mostró la degradación de DBT utilizando células de crecimiento
bacteriano suplementadas con 0,25 mMDBT como única fuente de azufre y 5 g / L
Se aislaron cinco cepas puras capaces de crecer con DBT (Figura 1) como única
de glucosa como fuente de carbono. La degradación prosiguió con el crecimiento
fuente de azufre de las instalaciones de aguas residuales industriales. Las cepas se
celular y la mayor parte de DBT se agotó a las 120 h de tiempo de reacción. En
sometieron al análisis del consumo de DBT evaluado como biodegradación de DBT.
condiciones de crecimiento, se observó la tasa de bioconversión de DBT más alta
El crecimiento bacteriano se continuó durante 120 h, de forma paralela al
para S27 y S1, que fueron respectivamente 93% y 90,7% dentro de las 120 horas de
agotamiento de DBT. Como se muestra en la Figura 2, las cepas tentativamente
tiempo de reacción.
denominadas S1, S27 y S7 crecieron bien en DBT como única fuente de azufre con
una tasa de crecimiento específica respectivamente igual a 0.055 h- 1,
DBT residual
0,056 h 1 y 0.052 h- 1. Sin embargo, S19 y S26 tuvieron un crecimiento más lento Concentración celular (mM) Degradación (%)
en las mismas condiciones con µ max de 0.036 h- 1 y 0.049 h- 1
respectivamente. El perfil de crecimiento por S27 mostró una fase de retraso corto de (OD 660)
crecimiento temprano en las primeras 10 horas, seguido de la fase de crecimiento
S1 3.8 0.023 90,7
exponencial a partir de las 30 horas. El crecimiento máximo se observó después de
80 horas de incubación seguido de una pequeña fase estacionaria mantenida S7 4 0.076 69,48
durante 120 horas. Por el contrario, para las cepas S26 y S1, hubo una ligera
T19 2,7 0.088 64,64
inhibición en el período 0-8 horas de crecimiento y se observó la tasa máxima de
crecimiento respectivamente a las 96 hy 108 h. Las cepas seleccionadas pertenecen S26 3.1 0.073 70,62
probablemente a diferentes especies debido a su diferente curva de crecimiento.
S27 4.2 0,016 93,5

sin celdas -- 0,25 0

Tabla 1: Degradación de DBT por células en crecimiento de bacterias seleccionadas.

Para comprender mejor la biodegradación del dibenzotiofeno utilizando cepas

seleccionadas, el experimento se llevó a cabo con células bacterianas en reposo. La Figura
3 mostró la transformación de DBT por las células en reposo de las 5 cepas seleccionadas.
Casi todas las cepas degradan la DBT después de 25 horas de tiempo de experimento.
Obviamente, la tasa de conversión de DBT con células en reposo fue considerablemente
más alta para todas las cepas en comparación con las condiciones de crecimiento de las
células en un tiempo más corto. Las células en reposo de S1 y S27 mostraron la mayor

Figura 1: Estructura química del dibenzotiofeno DBT. degradación en una tasa de tiempo más corta evaluada respectivamente como 98,8% y
97,5% como se ilustra en la Figura 4.

No se observó transformación con las células inactivadas por

calor, lo que indica que la transformación se procedió a una
reacción bioquímica; ni por absorción de sustrato por las células ni
por transformación espontánea.

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Citación: El-Bassi L, Nefissi RO, Shinzato N, Ghrabi A (2018) Biotransfromation of Dibenzothiophene by Células en reposo de un recién aislado
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Tabla 2: Efecto de la concentración de escualeno sobre las actividades que

consumen DBT en medio bifásico. La concentración de escualeno (% en volumen) se
calcula con respecto al volumen total de reacción. La actividad residual se expresa
como el porcentaje de la actividad en presencia de escualeno en relación con la
actividad medida en ausencia de escualeno (100% de actividad = actividad en fase
acuosa).

Según la Tabla 2, las actividades de consumo de DBT de todas las cepas

Figura 3: Evolución temporal de la degradación de DBT por células en reposo de
las cepas seleccionadas. ( ○ Célula inactivada por calor; cepa S1; cepa S7; cepa
S19; cepa S26; ∆ cepa S27).
disminuyeron con la adición de escualeno. Como era de esperar, no se detectó
actividad de biotransformación en medios micro-acuosos con 99% de escualeno. Sin
embargo, todas las cepas seguían siendo biológicamente activas en el 95% de
escualeno con tasas distintivas. El rendimiento de consumo de DBT fue todavía alto
en presencia de 90% de escualeno para las cepas S1 y S27; 40 y 58%
respectivamente. Sin embargo, la mayor sensibilidad de las cepas seleccionadas
debido a la presencia de escualeno se observó en el 90% del escualeno. La cepa S27
fue la cepa que mostró las actividades más altas en el 95% de escualeno.

De hecho, el efecto de la presencia de escualeno sobre las actividades que

consumen DBT depende de la cepa [35]. La actividad de degradación de DBT
fue menos estable en presencia del escualeno. Sin embargo, las 5 cepas
seleccionadas seguían activas en presencia del 95% de escualeno (más del 5%
de la actividad en medio acuoso). Sin embargo, no se detectó actividad en
medios microacuosos (99% de escualeno). Nuestros resultados confirmaron
que se puede utilizar una amplia gama de disolventes para un proceso de
biodesulfuración. Además, la sensibilidad de las cepas a la presencia de
disolvente es variable. Por ejemplo, S1 fue la cepa que mostró la mayor
actividad de degradación de DBT cuando el medio de reacción contenía 95%
de escualeno, mientras que S27 fue la mejor en presencia de 50% de
disolvente.

Caracterización de la cepa S27

Figura 4: Tasas de biodegradación (%) de DBT por células en reposo de cepas
seleccionadas denominadas S1, S7, S19, S26 y S27. Se encontró que el aislado S27 era una bacteria aeróbica, móvil y Gram
negativa. La secuenciación del ARNr 16S del aislado S27 mostró una similitud
del 99% con la de Serratia marcescens ( Número de acceso al banco de genes
NBRC_102204) y, por lo tanto, se clasifica como Serratia marscens Cepa S27
Bioconversión DBT en medio bifásico (árbol filogenético mostrado en la Figura 5). La secuencia de ADNr 16S del
El efecto de la presencia de una fracción de aceite es fundamental en este tipo aislado S27 se ha enviado al banco de genes (número de acceso KY780304).
de procesos ya que puede afectar tanto al crecimiento del biocatalizador como al
desarrollo de la vía 4S. Se esperan transferencia de masa y efectos tóxicos [3]. La
Tabla 2 informó el ensayo de desulfuración en sistemas acuosos y de dos fases
mediante células en reposo de las 5 cepas aisladas. Se estudió el efecto de la
presencia de un medio orgánico sobre las actividades de desulfuración de las cepas
utilizando escualeno, que se supone que es un buen modelo de gasóleo en
términos de hidrofobicidad. Se utilizaron varias concentraciones de escualeno, que
oscilan entre el 50% y el 99% del volumen total de reacción. Las actividades en el
escualeno en comparación con las actividades en la fase acuosa se muestran en la
Tabla 2 con la consideración de que: 100% de actividad = actividad en la fase acuosa.

Actividad residual de consumo de DBT (%) S1

Figura 5: Análisis filogenético de Serratia marcescens S27 basado en la
Concentración de escualeno
(%) S7 T19 S26 S27 secuencia de ARNr 16S. Las probabilidades de arranque se indican en los puntos
de ramificación. Los números de acceso se muestran entre paréntesis.
50 64 58 50 62 74

90 40 33 26 39 58

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Serratia marscens Sp. Deformación originada en aguas residuales industriales. J Bioremediat Biodegrad 9: 439. doi: 10.4172 / 2155-6199.1000439
Propiedad de desulfuración de DBT de R. erythropolis Se ha demostrado
que IGTS8, la primera bacteria que se informó por poseer la capacidad de
eliminar el azufre de la DBT [22], se debe a la presencia de genes de
desulfuración, es decir, el operón ABC de dsz [36]. Por lo tanto, se llevó a cabo
una PCR para la evidencia molecular de la presencia de genes dsz en el
aislado S27. El análisis de las secuencias de los productos de PCR reveló una
identidad del 100% con los genes dsz correspondientes (dsz A, dszB, dszC) de R. fuente de azufre. Sin embargo, la tasa de consumo de DBT alcanzó el 33,9%
erythropolis IGTS8. Esto está de acuerdo con la naturaleza conservada del
genotipo dsz de bacterias desulfurantes. Se ha descubierto que los genes
implicados en el metabolismo de DBT están presentes en casi todas las
bacterias degradantes de DBT y se ha demostrado que tienen casi el 70% de
la homología de secuencia [1].
Bioconversión de DBT en presencia de diversas fuentes de azufre
Se ha demostrado que muchos tipos de compuestos orgánicos de azufre,
además del DBT, como el BT y los derivados alquilados de DBT, están presentes en
el diésel, el petróleo crudo y las aguas residuales industriales [6]. Evaluar la amplia
especificidad de la tinción aislada; Serratia marscens S27 sp., La cepa se sometió a
una prueba de crecimiento en presencia de DBT, benzotiazol (BTH) como un
compuesto orgánico de azufre aromático y dimetilsulfóxido (DMSO) como un
compuesto orgánico de azufre alifático.
Figura 6: Curso de tiempo de Serratia marscens colar con DBT en
presencia de diversas fuentes de azufre en condiciones de
crecimiento. Círculos ( ○ ,): solo con DBT; triángulos ( ∆,): con DBT y
DMSO 5 mM; cuadrados (,), con DBT y BTH 5 mM.
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La Figura 6 mostró la degradación de DBT por la cepa S27 en presencia de
varias fuentes de azufre en condiciones de crecimiento. DMSO es un
compuesto orgánico de azufre alifático. El DMSO es una fuente de azufre más
realista que el DBT para la producción de cantidades industriales de
biocatalizador debido a su costo y disponibilidad. La cepa creció
considerablemente mejor con dimetilsulfóxido y DBT que con DBT como única
en presencia de DMSO en comparación con el 98% solo con DBT. La
degradación de DBT parecía estar inhibida por la presencia de DMSO. Se
obtuvo un resultado similar en presencia de BTH. El crecimiento bacteriano
fue mejorado por la presencia del compuesto organosulfurado aromático BTH
(Figura 6). Sin embargo, el consumo de DBT fue de alrededor del 68% en
presencia de BTH.
Discusión
Cinco cepas denominadas S1, S7, S19, S26 y S27; seleccionados de los 35
aislamientos iniciales capaces de crecer en DBT como única fuente de azufre
se aislaron de muestras de aguas residuales industriales. Los primeros pasos
de la selección incluyeron una alta actividad de biotransformación de DBT de
las células en crecimiento y en reposo. Las cinco cepas seleccionadas tenían
diferentes tasas de degradación de DBT. Una investigación adicional de sus
propiedades confirmó que tenían un comportamiento diferente hacia DBT. La
actividad desulfurante de las células en crecimiento fue considerablemente
alta para las dos cepas S1 y S27 (90,7 y 93,5% respectivamente). La tasa de
consumo de DBT fue considerablemente relevante en el estado de las células
en reposo para todas las cepas en comparación con el estado de crecimiento.
Este comportamiento podría explicarse por el hecho de que la capacidad de
degradación probablemente se deba a un segundo metabolismo de estas
cepas.
Además, mantener altas actividades de bioconversión en un medio
orgánico es un requisito previo para un proceso de biodesulfuración
industrial. Por tanto, se midió el efecto de la presencia de escualeno sobre la
actividad consumidora de DBT. La actividad de degradación de DBT para
todas las cepas se redujo en comparación con su actividad en medio acuoso.
Sin embargo, las cinco cepas seguían activas en presencia de escualeno al
95%. Este resultado se debe principalmente a la acumulación de
subproductos en la fase oleosa. Sin embargo, casi no se detectó actividad en
medios microacuosos (99% de escualeno) para todas las cepas; la fase
orgánica evita que el sustrato llegue a la célula bacteriana. De hecho, la
bioconversión de DBT parece ser un proceso demasiado complejo que implica
muchos pasos para estar activo en dicho medio.
La cepa S27 que tiene la tasa de bioconversión DBT más alta se identificó como Serratia
marcescens presion. La detección de los genes de desulfuración, es decir, el operón ABC de
dsz, nos lleva a concluir que la vía 4S está implicada principalmente en la degradación de
DBT. Según investigaciones anteriores, la vía 4S es una vía específica para la
biodesulfuración de DBT y su conversión en 2-hidroxibifenilo. En este caso, la estructura
carbonada de DBT se libera intacta [2]. Además, las vías de bioconversión de DBT por
bacterias, han sido ampliamente estudiadas, como: Arthrobacter [ 37], Brevibacterium [ 38], Mycobacter
y
Rhodococcus rhodochrous IGTS8 [39]. Estas cepas solo pudieron eliminar el
azufre de DBT convirtiéndolo en el compuesto hidroxibifenilo 2 (2- HBP) [40].
Estos microorganismos tienen la especificidad de eliminar selectivamente el
azufre orgánico sin degradar los átomos de carbono. Hasta donde sabemos,
muy pocos informes han demostrado los potenciales de desulfuración del
género Serratia sp. informado en este estudio.
Incluso si la DBT se toma generalmente como el compuesto modelo de OSC de
organosulfuro heterocíclico, otras OSC representan una alta proporción
Volumen 9 • Número 3 • 1000439
Citación: El-Bassi L, Nefissi RO, Shinzato N, Ghrabi A (2018) Biotransfromation of Dibenzothiophene by Células en reposo de un recién aislado
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de estas moléculas, conocidas por ser recalcitrantes a la hidrodesulfuración. 11.
En este estudio se tuvieron en cuenta dos OSC: DMSO (OSC alifático) y BTH
(OSC aromático). La presencia de BTH y DMSO obviamente ha mejorado el 12. Kayser KJ, Cleveland L, Park H, Kwak J, Kolhatkar A, et al. (2002)
crecimiento bacteriano relacionado con la abundancia del elemento azufre. La
absorción de DMSO y BTH por la cepa Serratia marscens S27 fue
considerablemente más alta que la captación de DBT. En consecuencia, la
bioconversión de DBT disminuyó considerablemente. Esto sugirió que la
13.
actividad de degradación de DBT en esta cepa parecía estar inhibida por estos
compuestos y la cepa utilizó predominantemente estos compuestos como
14.
fuente de azufre en lugar de DBT. Este comportamiento podría ser una
limitación cuando se aplica en una escala práctica que contiene una mezcla de
compuestos orgánicos de azufre. 15.
Conclusión
Se aislaron cinco aislamientos capaces de desulfurar DBT en estado de
dieciséis.
crecimiento y reposo de las aguas residuales industriales. La tasa de
biotransformación fue considerablemente más alta en el estado de las células en
reposo que en el estado de las células en crecimiento, lo que significaba que la tasa
de biodegradación de DBT pertenecía al metabolismo secundario de estas cepas. La 17.
cepa con alta tasa de degradación se identificó como Serratia marcescens presion.
Sin embargo, la bioconversión de DBT usando esta cepa está muy influenciada por
los compuestos orgánicos de azufre que existen en el medio. Junto con el hecho de
18.
que la cepa expresó actividad desulfurante en un estado celular en crecimiento y en
reposo, como se mostró anteriormente, esta bacteria podría contribuir al
19.
tratamiento de aguas residuales que contiene DBT. Aunque parece que el S.
marcescens es capaz de desulfurar DBT, la bioconversión de este compuesto
todavía requirió mucha investigación para descubrir el mecanismo real de la vía
metabólica de desulfuración de DBT. 20. Labana S, Pandey G, Jain RK (2005) Desulfuración de
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