Tuberculosis Bovina - Revisión Bibliográfica 2013

TUBERCULOSIS BOVINA:
DESCRIPCIN Y MTODOS DIAGNSTICOS

Mauricio Andino Molina, Mario Alejandro Moncada | 2013
Escuela de Microbiologa, UNAH
Revisada por Dra. Reina Laura Rivera, MSc; Dra. Rebeca Rivera, MSc

TABLA DE CONTENIDO
No. pgina
Tuberculosis bovina 2
Agente etiolgico 2
Caractersticas epidemiolgicas 3
Internacionales 4
Nacionales 6
Diagnstico de la tuberculosis bovina 6
Cultivo bacteriolgico y diagnstico microbiolgico 7
Pruebas inmunolgicas (serolgicas) 8
o Interfern 8
o MAPIA 10
o PPD/TST 11
o Pruebas rpidas (PR-BTB) 12
o Prueba de plataforma dual (DPP) 13
o ELISA 13
o SeraLyte-Mbv 14
o Multiplex chemiluminescence immunoassay (MCI-BTB) 14
o Biologa molecular 15
o PCR 15
o Spoligotyping 16
o IMS-Spoligotyping 17
o Fingerprinting 17
Conclusiones 18
Recomendaciones 19
Anexos 21
Bibliografa 23

TUBERCULOSIS BOVINA: DESCRIPCIN Y MTODOS DIAGNSTICOS
2

TUBERCULOSIS BOVINA
La tuberculosis bovina es una enfermedad producida por bacterias del Complejo
Mycobacterium, principalmente por Mycobacterium bovis y Mycobacterium tuberculosis. (15)
En la presente revisin presentamos una coleccin variada de datos referentes a Mycobacterium
bovis como agente etiolgico de la tuberculosis en el ganado, su asociacin patolgica con los
reservorios naturales y salvajes y los mtodos de diagnostico utilizados en la actualidad y los que se
encuentran en desarrollo para su uso e implementacin.

AGENTE ETIOLGICO
Mycobacterium bovis fue aislado inicialmente por Theobald Smith en el ao de 1896, sus
observaciones iniciales dieron por sentado que se trataba de una bacteria del complejo
Mycobacterium debido a sus caractersticas morfolgicas e histopatolgicas. Mycobacterium bovis
presenta diferencias bioqumicas y caractersticas virulentas de importancia en conejos y otros
animales salvajes que distan de las presentadas por Mycobacterium tuberculosis. Aos mas tarde
en trabajos subsecuentes por otros autores esta bacteria fue emplazada como una subespecie de
Mycobacterium tuberculosis y es hasta 1970 que en el proyecto presentado por Karlson et al. Se
propone el nombre de Mycobacterium bovis. (3)
Mycobacterium bovis se presenta en forma de bacilos, inmviles y no formadores de
esporas, con un alto contenido de lpidos de alto peso molecular en su pared. Mycobacterium bovis
crece ms lentamente que Mycobacterium tuberculosis, es micro-aeroflico y tiene una
temperatura ptima de crecimiento de 37C. En un medio slido adecuado basado en piruvato, la
morfologa colonial es disgnica y no cromgena, las colonias son lisas y de color crema. (6) Esta

3

bacteria presenta tambin una mayor patogenicidad en conejos, comparndole con su homologa
Mycobacterium tuberculosis. (3)
Las caractersticas de morfologa colonial en el cultivo en el medio Middlebrook
1
son:
Colonias puntiformes, obtenidas tras incubacin a 37 C en 1 a 2 semanas, luego estas
crecen lentamente hasta alcanzar 2-3 mm de dimetro.
No pigmentadas.
Aparentemente hmedas pero ligeramente granuladas.
Friables.

Mycobacterium bovis es naturalmente resistente a pirazinamida y puede establecer
infecciones zoonticas con multi-resistencia a drogas teraputicas. (6, 7)

CARACTERSTICAS EPIDEMIOLGICAS
En los ltimos aos se han realizado diversos estudios que describen los avances en cuanto
a diagnstico y prevencin. En Amrica se cuenta con laboratorios de referencia y logstica
aceptables, que aunque realizan la identificacin bacteriolgica y molecular, sus esfuerzos no son lo
suficientemente contundentes, en parte por la ausencia de documentacin tcnica y cientfica que se
encuentre disponible, como es el caso en la mayora de los pases de Latinoamrica, y por otro lado
el manejo que disponen las agencias internacionales de control y sanidad animal que contemplan el
sacrificio del ganado una vez haya sido establecido un diagnstico primario por tuberculosis. (1)
Epidemiolgicamente se han descrito dos tipos de hospederos: los de manutencin y los
incidentales. Los primeros se encuentran constituidos por animales que son infectados, luego estos
enferman y durante este proceso son capaces de transmitir la enfermedad a poblaciones

1
VER TABLA 1 EN ANEXOS.

4

susceptibles. Luego los segundos (conocidos tambin como spillover hosts) estn constituidos por
aquellos animales que se infectan y posteriormente enferman pero que durante este proceso casi
nunca transmiten la enfermedad al resto de la poblacin. Segn estudios la mayora de los animales
enfermos encajan perfectamente en la descripcin de hospederos incidentales. Hasta la fecha no se
ha demostrado o descrito una mayor susceptibilidad debido a condiciones predisponentes sean
estas genticas o fisiolgicas. (4)
En cuanto a los factores de riesgo para la infeccin por Mycobacterium bovis se ha
encontrado que la tasa de contacto, la alimentacin de las terneras y el ingreso de nuevos bovinos
no examinados son potencialmente los principales elementos a controlar para evitar la diseminacin
de la enfermedad. Tambin se encontr que la alimentacin con leche cruda a las terneras, la carga
animal, el agrupamiento de vacas en rodeos nicos, rodeos mixtos, ingreso de vacas y toros
(espordicamente) no se asociaron de forma directa con tuberculosis bovina, sin embargo el
desmadre de las terneras a una edad superior a los cuatro das puede potenciar el riesgo. (8)
Mycobacterium bovis puede transmitirse en forma de aerosol, por lo tanto es perjudicial y
altamente riesgoso el hacinamiento de los animales y la sobreexposicin de trabajadores en los
recintos de cuidado, extraccin lechera y lugares de matanza. Tambin se ha encontrado que la
dosis mnima infectante de Mycobacterium bovis es muy baja. (6, 8, 9)

A NIVEL INTERNACIONAL
En muchos pases de Europa, especialmente en el Reino Unido, la tuberculosis bovina ha
constituido un problema prioritario, no solo por las implicaciones patolgicas en los animales, sino
ms bien por las repercusiones a nivel sanitario y socioeconmico en los consumidores y

5

productores de productos lcteos. En Amrica los programas de control han estado orientados no
precisamente a la prevencin sino al control de brotes y casos. Hacia el 2004 se estimaba que un
24% de la poblacin bovina en Amrica Latina no se encontraba bajo ningn tipo de control. (4, 10)
La estimacin de la prevalencia de tuberculosis bovina en Latinoamrica es controversial,
debido a los factores y condiciones ya expuestos; algunos pases se encuentran en la etapa de
erradicacin. (11)
En cuanto a los reservorios que tambin son considerados como hospederos de
manutencin, Europa muestra una amplia variabilidad siendo el ciervo uno de los mas
representativos. (12)
As mismo son bien conocidas las caractersticas morfolgicas y bioqumicas de las
bacterias responsables, su ciclo intracelular y otros datos relacionados. Las exigencias inherentes
para su cultivo vuelven complejo su estudio y precarizan el hallazgo de soluciones definitivas en
busca de: un tratamiento eficaz, un manejo menos radical, y de un diagnstico rpido, simple y
confiable.
El uso de pruebas diagnosticas combinadas, aunadas a un manejo intensivo y detallista
proveen poderosas herramientas en la bsqueda del control y erradicacin de la enfermedad. (13)
Las tcnicas y criterios utilizados internacionalmente son tratados en las secciones
correspondientes.

6

A NIVEL NACIONAL
En una encuesta realizada hacia el 2008 existan alrededor de 96,622 explotaciones que se
dedican a la ganadera bovina. Con un hato colectivo de 2.5 millones de cabezas. Tambin se
inform que durante la poca de verano la produccin de leche es de 1.8 millones de litros/da con
base a un rendimiento de 3.8 litros/vaca/da. En el invierno la produccin de leche es de 2.4 millones
de litros/da con un rendimiento de 4.4 litros/vaca/da. (14)
Los datos anteriores son de suma importancia sobre todo si los extrapolamos con los
hallazgos obtenidos en estudios epidemiolgicos realizados en Estados Unidos, que muestran que
Mycobacterium bovis puede convertirse en un importante elemento zoontico por el consumo de
lcteos y derivados provenientes de hatos contaminados. (15)
Actualmente se realiza un estudio epidemiolgico a nivel nacional para poder conocer las
cifras de prevalencia de tuberculosis bovina. No se cuenta con datos actualizados, sin embargo
segn reportes internacionales los brotes son aparentemente espordicos. (16, 17) Los mecanismos
de diagnstico, manejo, prevencin y control sern tratados en los apartados correspondientes.

DIAGNSTICO DE LA TUBERCULOSIS BOVINA
El diagnstico de tuberculosis bovina se puede realizar mediante las tcnicas tradicionales
(cultivo de secreciones, tejidos), pruebas inmunolgicas, pruebas de biologa molecular y por
supuesto la evidencia histopatolgica post-mortem. Sin embargo la utilizacin de pruebas
serolgicas requieren personal tcnico capacitado y tambin de logstica administrativa, basado en

7

el hecho de que la enfermedad causa respuesta inmunolgica similar mas no igual entre especies
animales. (18)

1. CULTIVO BACTERIOLGICO Y DIAGNSTICO MICROBIOLGICO
Las exigencias bioqumicas del gnero Mycobacterium vuelven complejo el proceso
de aislamiento y recuperacin. Actualmente se realiza un homogenizado y concentrado de
las muestras (piezas histolgicas, tejidos y secreciones). Posteriormente este material se
cultiva preferiblemente en medios enriquecidos con piruvato y carentes de glicerol. (15, 18)

Para tal fin puede utilizarse el medio Middlebrook o Stonebrink, los cuales ofrecen
mejores tasas de crecimiento, siendo Stonebrink el que mejores resultados ha mostrado
para el aislamiento y/o recuperacin de Mycobacterium bovis. El tiempo de generacin es
aproximadamente de 16 a 20 horas, tambin se necesita un periodo de incubacin mnimo
de 56 das (8 semanas), aunque se puede incubar para mejores resultados por alrededor de
84 das (hasta 12 semanas). La morfologa colonial caracterstica de Mycobacterium bovis
en este medio es de colonias puntiformes, que gradualmente crecen hasta alcanzar 1mm de
dimetro, no pigmentadas, finamente granulares y friables. Tambin pueden identificarse
cepas determinando las propiedades clsicas de cultivo y haciendo uso de bateras
bioqumicas que incluya pruebas tales como la catalasa, ureasa, etc. (3,18)

En ciertos casos, dependiendo de la muestra referida, se realiza una tincin Ziehl
Neelsen para determinar la presencia de BAAR como forma preliminar de diagnstico. (15)

8

2. PRUEBAS INMUNOLGICAS
Las pruebas inmunolgicas, basadas en la interaccin antgeno-anticuerpo,
constituyen las principales herramientas modernas para el diagnstico rpido y eficaz de
muchas enfermedades, actualmente se realizan esfuerzos para el desarrollo e
implementacin de pruebas inmunolgicas para el diagnstico de la tuberculosis bovina.
Desde los primeros ensayos dirigidos hacia la deteccin de antgenos especficos hasta la
actual combinacin de antgenos purificados para la deteccin de anticuerpos, estas
tcnicas han recorrido un largo camino y deben aun mejorar su sensibilidad y especificidad
lo cual nos permitira un mejor desempeo en los procesos de evaluacin e investigacin.

El antgeno (protena purificada) que ha mostrado ser muy antignico es MPB83. Su
uso en diferentes ensayos y como elemento principal en muchas de las tcnicas que a
continuacin se analizan es de suma importancia. (19) Otras molculas proveen valiosa
colaboracin para el diagnstico, tales como ESAT-6, CFP-10, LAM y MPB70. (20)

Prueba de Interfern (IFN)
El interfern es un mediador crtico en la activacin de macrfagos como
instrumentos ejecutores de resistencia ante patgenos intracelulares. Su
participacin en los procesos de apoptosis es incuestionable, promoviendo esta en
clulas T-CD4+ estimulando la produccin de molculas pro-apoptticas
intracelulares y seales bioqumicas apoptticas externas. (21) Es aproximadamente
despus de dos semanas post infeccin o sensibilizacin del animal con PPD, que

9

se alcanzan los niveles ptimos de interfern para su deteccin y los mismos son
sostenidos por alrededor de 16 semanas (utilizando como agente inmuno-
estimulante a Mycobacterium bovis). (22)
En un estudio se obtuvieron resultados que muestran la variabilidad de la
respuesta inmune de los animales inoculados con Mycobacterium bovis y donde la
respuesta humoral ante el antgeno ESAT-6 fue medida observando sus niveles
ptimos pico alrededor de las 8 semanas post-infeccin. (23)
Esta tcnica combina la sensibilizacin y activacin in-vitro de linfocitos
durante un periodo de incubacin de hasta 24 horas y la deteccin de interfern
mediante ELISA. (18) Se debe sealar que esta tcnica es utilizada ampliamente en
muchos pases, no solo de Latinoamrica sino tambin en Europa y en pases
industrializados. Sin embargo su costo no permite la utilizacin de la misma como
una prueba de rutina en la prevencin y/o control de la enfermedad. (12, 18, 22, 24,
25)
Actualmente se utilizan pools de antgenos altamente purificados para la
prueba ELISA; se han obtenido mejores resultados cuando se han utilizado los
productos antignicos ESAT-6 y CFP-10, incrementando as la especificidad de la
tcnica y mejorando el valor predictivo. (12, 18, 20, 22)
Schiller O. et al reporta que la sensibilidad y especificidad del ensayo de
interfern ha sido estimado en mltiples estudios, la sensibilidad se encuentra en el
rango que varia desde 73.0 a 100.0 % con una media de 87.6 %, en cambio la
especificidad varia en un rango de 85.0 a 99.6 % con una media de 96,6 %. Se debe

10

considerar que la variabilidad de dichos parmetros podra ser el resultado de
reportes dispares. El autor recomienda entonces la elaboracin de procedimientos
mas estandarizados para fortalecer dicha prueba como elemento de diagnstico
primario en los programas de tuberculosis.

MAPIA
MAPIA (multi-antigen print immunoassay) es una prueba basada en la reaccin
antgeno-anticuerpo, donde se evala la respuesta humoral del animal. Para tal fin se
imprimen por micro-aerosolizacin de forma covalente 12 antgenos purificados de
Mycobacterium bovis en una base o plataforma de nitrocelulosa. Los antgenos utilizados
son ESAT6, CFP10, MPB64, MPB59, MPB70, MPB83, 16kda, 38kda, E6/P10, 16/83, B-
PPD, MBCF. Los criterios de resultado son (P) positivo, (N) negativo y el anlisis de los
resultados puede llevar al establecimiento de un resultado sospechoso (S), segn el patrn
de lectura que es elaborado por el fabricante.(26)
MAPIA reconoce solamente Inmunoglobulinas G (IgG) y ha sido utilizado en
mltiples ensayos como prueba de contraste y referencia, dadas las mltiples aplicaciones
del mismo. (2628)
En un estudio se analizo la respuesta inmune humoral del ciervo y se determino la
sensibilidad y especificidad de la tcnica utilizando como referencia 4 antgenos purificados:
ESAT-6, CFP-10, MPB83 y MPB70. Se calculo una sensibilidad media de 64.0% y una
especificidad media de 99.0%.
2
Aunque el ensayo fue practicado en sueros de ciervo y no

2
Ver Tabla 2. Respuesta Humoral en Inmunoensayos, (MAPIA).

11

bovino la informacin obtenida en el mismo pone de manifiesto las aplicaciones posibles y
los cambios y mejoras que son necesarios y pertinentes. (20)
La seleccin cuidadosa de antgenos debe ser una premisa en el desarrollo de mejoras y
optimizaciones en esta tcnica. A partir de 2010, MPB70 y MPB83 son los antgenos
utilizados con mayor frecuencia en las tcnicas serolgicas IN VITRO que involucran el uso
de MAPIA. (12) El conjugado de MPB83-CFP10 ha mostrado una notoria mejora en cuanto
a sensibilidad en los ensayos epidemiolgicos. (29, 30)

PPD / TST
El mtodo comercial mas ampliamente utilizado para la deteccin de tuberculosis
bovina es la prueba de tuberculina, donde se utiliza un conjugado de derivados proteicos
purificados de Mycobacterium bovis (PPD / PPD-B) en una inyeccin aplicada al animal
investigado. Posteriormente se evala la reaccin de hipersensibilidad tarda en el punto de
inyeccin 72 horas post-inoculo. En algunos pases es utilizada la prueba combinada CCT
que utiliza PPD bovino y PPD aviar. (18) La cepa utilizada globalmente para fabricar PPD-B
es Mycobacterium bovis cepa AN5. (12)

La prueba TST (Tuberculin skin test) hace uso de variantes en el sitio de
inoculacin, composicin de PPD y evaluacin de la reaccin inmunolgica, dichas variantes
pueden intervenir en el resultado obtenido segn los esquemas disponibles de
interpretacin. Las variantes son: CFT (Caudal fold test), CIT (Mid cervical intradermal test),
CCT (Comparative cervical test). (12)

12

En un estudio practicado por Monaghan et al. en 1994, se obtuvo una sensibilidad
de 68-96.8% y 96-98.8% de especificidad para la variante TST-CFT, una sensibilidad de 80-
91.0% y 75.5-96.8% de especificidad para la variante TST-CIT y una sensibilidad de 55.1-
93.5% y 88.8-100.0 % de especificidad para la variante TST-CCT.

En los ltimos aos se ha trabajado en la fabricacin de PPD mejorada, utilizando
nuevos pptidos en conjugados y utilizando variantes de hasta 21 pptidos en un solo
producto. En algunos casos la sensibilidad fue incrementada sustancialmente, sin embargo
la especificidad fue ligeramente afectada. (12)

PRUEBAS RPIDAS (PR-BTB)

Las pruebas rpidas son utilizadas ampliamente en el mundo diagnstico como un
mtodo de diagnstico rpido y econmico.

Como se ha discutido en varios estudios, el uso de mltiples antgenos especficos
de Mycobacterium bovis aerosolizados o fijados en plataformas de nitrocelulosa
constituyen la base de las tcnicas de inmunocromatografa en el rea veterinaria. Este tipo
de prueba ha sido utilizado no solo para bovinos sino para un amplio espectro de animales
que son infectados con Mycobacterium bovis y que constituyen reservorios naturales de
infeccin tanto para otros animales como para el humano. (12, 20, 25, 28, 29, 3136)

13

Uno de los antgenos mas ampliamente utilizado para la manufactura de pruebas
rpidas de tuberculosis bovina es MPB83, segn estudios se encontr una sensibilidad de
60.0% y una especificidad de 96.0% en ganado. (20)

Prueba de Plataforma Dual (DPP)

Esta novedosa prueba se utilizada en mltiples ensayos y ha sido montada para la
deteccin de VIH 1/ VIH 2 por CHEMBio , esto muestra la versatilidad de la misma.

Se ha utilizado un montaje del antgeno recombinante o purificado MPB83 y MPB70
para la deteccin de anticuerpos especficos en camlidos americanos. En el estudio
realizado DPP mostr una sensibilidad 74.3% y una especificidad de 97.6%. (37) El uso de
esta tcnica es prometedora en el campo del diagnostico bovino a gran escala y en estudios
epidemiolgicos primarios.

ELISA

ELISA es por excelencia uno de los kits comerciales y tambin In House mas
utilizados alrededor del mundo. Sus aplicaciones son infinitas y se utilizan como mtodos de
referencia para el estudio de un sin numero de enfermedades y sus agentes etiolgicos. Es
esta tcnica la que se utiliza para poder medir la concentracin de interfern como se
describi anteriormente en el apartado correspondiente. As mismo el uso de antgenos
variados y en algunos casos combinados como lo son MPB70 y MPB83 hacen de esta
tcnica una forma simple y segura de diagnstico. (20, 38, 39) La sensibilidad media y

14

especificidad media con el uso de dichos antgenos es de hasta 63.5% y 88.8%
respectivamente. (20, 39)

SeraLyte-Mbv

Esta es una novedosa tcnica de reciente introduccin, donde se utilizan perlas de
ferrita con una capa de antgeno MPB83 unida covalentemente al soporte. El conjugado
cuenta de ferrita-antgeno (Conjugado primario) se une especficamente a los anticuerpos
presentes en el suero a examinar en animales potencialmente infectados (Conjugado
secundario). Para correr la prueba se requieren de aproximadamente 2 horas, donde el
conjugado primario y secundario son incubados, luego la mezcla de trabajo es lavada y es
detectado por anticuerpo monoclonales especficos que contienen marcadores cromgenos
(Conjugado terciario). El resultante ser ledo por quimioluminiscencia. La sensibilidad y
especificidad fueron de 96.0% y 98.0% respectivamente. (40)

Multiplex Chemiluminescence Immunoassay

Esta es una tcnica que utiliza la inmuno-impresin por micro-aerosolizacin de 20
antgenos purificados en pozos de micro placa convencional para Inmunoensayo.
Posteriormente cada uno de los puntos que corresponden a un antgeno en especfico es
ledo por quimioluminiscencia. Se obtuvo una especificidad de 98.4% y una sensibilidad de
93.1%. (41)

15

BIOLOGA MOLECULAR
En los ltimos aos se han producidos notables avances en el diagnostico de bTB
con la herramientas de biologa molecular que contribuyen a ampliar las limitaciones de las
tcnicas tradicionales ya que los estudios de campo son propensos a subestimar
heredabilidad , debido a la exposicin desigual a los patgenos , as como la sensibilidad
incompleta de las pruebas de diagnstico que se utilizan se discute tambin la gran cantidad
de datos que ahora indica la existencia de una base gentica para la resistencia a la
tuberculosis bovina en el ganado bovino. (2)
Entre las tcnicas usadas para el diagnstico tenemos la Reaccin en Cadena de la
Polimerasa (PCR) y la tcnica Direct Variable Repeat Spacer Oligonucleotide Typing
(Spoligotyping).

PCR

El PCR es una reaccin de amplificacin gentica. En el caso de las mycobacterias,
la extraccin es simple si se realiza a partir de cultivos tanto slidos como lquidos donde
existe una cantidad elevada de ADN. Si se parte de una muestra clnica el rendimiento de la
extraccin es menor y deficiente porque la cantidad de ADN es inferior lo que puede
comprometer la sensibilidad.

La tcnica de PCR se ha utilizado para complementar estudios filogenticos y
tambin para analizar muestras extraas, como es el caso de un estudio publicado en el
que se extrajo ADN de moscas invasivas. El diagnstico de Mycobacterium bovis y

16

Mycobacterium avium subs. paratuberculosis fue lograda por la deteccin de las
secuencias IS6110 y IS900, de Mycobacterium bovis y Mycobacterium avium
respectivamente. (42)

Se ha determinado por medio de esta tcnica que una de las protenas con mayor
incidencia en los ensayos realizados es la MPB83. (19) Ciertas variaciones en la tcnica son
tiles para la obtencin de perfiles epidemiolgicos completos. La restriccin de genes para
su posterior deteccin muestra buenos resultados y sirve tambin para poder identificar
infecciones mixtas en ganado. Los tejidos son una buena muestra para esta tcnica. (43)

SPOLIGOTYPING

Se evalu por su capacidad para diferenciar cepas de Mycobacterium
bovis. Este mtodo detecta la presencia o ausencia de los espaciadores del locus de
repeticin directa del genoma de M. bovis. Los espaciadores en el locus de repeticin
directa se amplifican por PCR y se detectan por la hibridacin del producto de PCR marcado
con biotina con una membrana que contiene oligonucletidos derivados de secuencias
espaciadoras que han sido previamente unidos covalentemente a una membrana. Al final
del protocolo se obtiene un patrn (perfil de Espoligotipo) (44, 45)

17

IMS SPOLIGOTYPING

La tcnica de IMS (Immunomagnetic separation) nos permite concentrar de manera
especifica y selectiva bacilos de Mycobacterium bovis en muestras de tejido linftico
(nodos) mediante el uso de perlas micro-aerosolizadas con pptidos especficos.

Los resultados muestran una tasa de recuperacin superior cuando se utiliza la tcnica de
concentracin aunada al spoligotyping mencionado anteriormente. La IMS-Spoligotyping
podra evitar la necesidad de descontaminacin qumica, mediante la captura de forma
selectiva las clulas de Mycobacterium bovis y separndolas de otras bacterias en las
muestras, mejorando as su especificidad. (45)

FINGERPRINTING

En aos recientes se han fabricado sondas de ADN para el estudio filogentico de
diversas formas de vida, incluyendo mycobacterias. El mtodo ms popular del DNA
fingerprinting para mycobacterias del complejo M. tuberculosis es el anlisis de hibridacin
del Southern Blot usando elementos de ADN repetitivos como sondas. El elemento de
insercin que mejores resultados ha dado, ha sido el IS6110, con este elemento se visualiza
mejor la variacin de cepas que existen en el bacilo tuberculoso; ya que el polimorfismo del
ADN detectado por la sonda IS6110 es muy alto entre aislados clnicos no relacionados, y la
estabilidad de este elemento en el cromosoma de la mycobacteria, es muy alta. (38)

18

CONCLUSIONES
El avance de la tecnologa ha permitido la implementacin de nuevas tcnicas de
diagnostico para la tuberculosis bovina. El uso y la aplicacin de pruebas inmunolgicas son
los principales objetivos de la investigacin global en este tema, mas de siete (7) diferentes
plataformas de diagnstico rpido y al menos cuatro (4) tcnicas novedosas han sido
valoradas, mostrando tasas satisfactorias de sensibilidad y especificidad.
El uso de conjugados poli-antignicos parecen ser los mejores candidatos para un
diagnostico serolgico efectivo. El uso de MPB83 y protenas recombinantes en plataformas
complejas son an promisorias pero requieren de una gran inversin para su
implementacin.
El uso de inmunoensayos convencionales utilizando pools de antgenos
recombinantes parece ser el mecanismo mas viable para combinar con pruebas tales como
Interfern, en la bsqueda de un diagnostico eficaz e individualizado en hatos lecheros y
ganaderos. En Espaa se combina el uso de TST-PPD y la prueba de Interfern para
aumentar la sensibilidad y especificidad de los resultados.
Segn expertos en Honduras, se utiliza la PPD como mecanismo de diagnostico
primario y el cultivo bacteriolgico como mecanismo de diagnostico confirmatorio. Aunque
ambas tcnicas proveen respuestas satisfactorias y son recomendadas por la OIE, la
implementacin de pruebas serolgicas o inmunolgicas son necesarias para poder
competir a nivel internacional en cuanto a la exportacin de productos lcteos o crnicos.

19

RECOMENDACIONES
Se necesita realizar una recoleccin de datos estadsticos y tcnicos sobre
tuberculosis bovina, su diagnostico, manejo, prevencin y control a nivel nacional.
El ensayo de pruebas inmunolgicas es una necesidad. El manejo que prescriben
los organismos internacionales en nuestro pas son el aislamiento y matanza del animal
infectado. Sin embargo la transmisin de tuberculosis por medio de productos lcteos es
posible y constituye un problema no valorado en los esquemas de control epidemiolgico, en
parte por los costos que esta actividad reguladora supondra.
Asimismo se requiere el ensayo de cultivos bacteriolgicos, el aislamiento y la
identificacin del patgeno, aunando a lo anterior una prueba de susceptibilidad a los
antimicrobianos, que sin lugar a dudas contribuira enormemente al fortalecimiento de la
investigacin y a la salud de nuestros pueblos no solo a nivel nacional sino internacional.

20

ANEXOS

21

Tabla 1. Caractersticas de Cultivo (Mycobacterium bovis)

Medium ATCC 19210
Pinpoint colonies in 2 weeks; gradually enlarged and
rounded to about 1 mm in diameter; no pigmentation;
colonies matted; with hand lens (3 to 5x), the surface is
finely granular; colonies friable; in nonglycerinated
medium, the colonies appear earlier and are larger.

Lowenstein - Jensen
Similar to above except growth is slower and colonies
smaller; in nonglycerinated medium, the colonies are
larger.

Petragnani
Pinpoint colonies in 2 to 3 weeks; gradually enlarge to
about 1 mm; no pigment; finely granular surface; friable.

Middlebrook 7H10
Pinpoint colonies in 1 to 2 weeks; slowly enlarge to 2 to 3
mm; no pigment; appear moist but granular; friable.

Egg-yolk agar
mm; no pigment; flat and slightly elevated surface;
granular; friable.

Stone brink
mm; no pigment; flat and slightly elevated surface;
granular; friable.

Lebek medium
Subsurface growth in 2 to 3 weeks.

Proskauer- Beck
liquid medium
Granular deposit in 3 to 5 weeks; not turbid; no pigment;
growth enhanced by 2 to 5% serum.

Dubs Tween-80
liquid medium
Diffuse growth in 3 to 5 weeks; slight sediment which
disperses on shaking; no pellicle; no pigment; maximal
growth at about 5 weeks.

22

Tabla 2. Respuesta Humoral en Inmunoensayo utilizando MAPIA.

Antgeno * Sensibilidad (%) Especificidad (%)
ESAT-6 67.0 98.0
CFP-10 56.0 99.0
MPB70 44.0 100.0
MPB83 89.0 99.0
* LA ESPECIE ANALIZADA FUE EL CIERVO.

23

BIBLIOGRAFA
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