LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

PROGRAMA ZOOTECNIA
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

IDENTIFICACIÓN DE PROTOZOOS CILIADOS RUMINALES

El rumen es un ecosistema anaerobio que presenta unas condiciones de temperatura

constantes 39 - 40°C, potencial redox -0.4 V y pH de 5.5 a 7.2. Está constituido por una
microbiota extremadamente abundante con una diversidad conocida parcialmente. La
población bacteriana conforma la mayor parte, con una concentración de 1 x 10 10 – 1011 /
g de contenido ruminal, lo que representa aproximadamente el 50% del total de la
biomasa microbiana ruminal. Cerca de 200 especies se han aislado, de las cuales han sido
descritas unas 60. Se ha considerado que solo entre 30 y 40 especies son autóctonas del
rumen, el resto se ha relacionado con flora transitoria y flora que aparece por
contaminación de los alimentos consumidos por el animal. Un segundo grupo presente en
el rumen está constituido por los hongos, quienes fueron la última población en ser
descubierta y estudiada, y a los cuales se les ha atribuido la participación en la
degradación de celulosa, hemicelulosas, pectinas y parcialmente ligninas. Este grupo
representa el 8% de la biomasa microbiana. La microfauna del rumen corresponde a los
protozoos que en su gran mayoría son ciliados, se encuentran en una concentración de 1 x
106 – 108 /ml de contenido ruminal y dependiendo de la dieta representan
aproximadamente el 40% de la biomasa microbiana.

Los protozoos ruminales participan en procesos que hasta hace poco se creían exclusivos
de las bacterias ruminales, algunos de ellos actúan con bacterias y hongos a través de un
esfuerzo colectivo en los procesos de hidrólisis de alimentos lignocelulósicos y almidón, y
participan en menor grado en la fermentación de glucosa para la obtención final de ácidos
grasos volátiles (AGV). Los AGV producidos son los ácidos acético, propiónico y butírico,
que luego atraviesan las paredes ruminales y van a tejidos, donde son utilizados como la
principal fuente energética del rumiante. Las enzimas producidas por los protozoos que
están involucradas en el metabolismo nutricional constituyen una porción representativa
de las enzimas hidrolíticas que actúan sobre los polisacáridos de la dieta del rumiante.

Por otra parte, los protozoos complementan el proceso de lipólisis en los rumiantes, en
donde una primer fase es desarrollada por las bacterias y protozoarios productores de
lipasas, que van a actuar sobre los triglicéridos y galactolípidos produciendo ácidos grasos
libres, glicerol y galactosa, para que en un segundo paso actúen bacterias y protozoos
fermentadores que aprovechan los carbohidratos solubles, obteniendo finalmente para
beneficio del animal AGV.

Así también, comparten con las bacterias actividad en la hidrogenación de los ácidos
grasos insaturados (AGI) y contribuyen de manera indirecta con la absorción de vitaminas
y carotenos. El ácido linoleico conjugado (CLA) es uno de los AGI más llamativos en la
producción microbiana por ser considerado un acido graso esencial, debido a que el
organismo humano no puede producir estos compuestos. El CLA al ser consumido a través
de la carne y la leche (principales fuentes para el ser humano) ofrece al consumidor
características benéficas para su salud, se ha encontrado que tiene acción
anticancerígena, antiaterogénica, antidiabética, actividad en la estimulación del sistema
inmune y antioxidante.

Los rumiantes al igual que los monogástricos requieren para la síntesis de tejidos y
proteínas de la leche, aminoácidos digeribles y no proteína como tal. Este hecho ha sido
considerado en el mejoramiento de dietas y raciones que proporcionen proteína para el
vacuno de alta producción láctea. No obstante, la obtención final de proteína o
aminoácidos está compuesta por la suma de la proteína sintetizada en el rumen, la
proteína endógena y la proteína alimentaria no degradada en el rumen. Debido a la
complejidad de los diferentes factores involucrados en cada una de ellas, es difícil predecir
la cantidad y el tipo de aminoácidos (nutriente final aprovechado por el animal). Sin
embargo se conocen datos, que presentan la proteína de origen microbiano, como la más
representativa con un valor promedio (55.1 ± 16.7%), la cual proporciona entre el 55 y el
87% del N aminoacídico, convirtiéndose en un factor relevante para el ganado lechero y
de carne, por ser el componente aminoacídico de mayor eficiencia en la absorción.

Los protozoos ruminales adquieren gran importancia debido a que proveen las mayores
proporciones del precursor para la síntesis endógena. Cuando la biohidrogenación no es
completada, intermediarios de la incompleta biohidrogenación de ácidos grasos
poliinsaturados (PUFA) quedan disponibles para depositarse tanto en la biomasa
microbiana como en tejido animal. Los protozooos ruminales contienen 2 a 3 veces más
ácidos grasos insaturados (AGI) (incluidos CLA y VA) que bacterias. Así, cuando más de la
mitad de la biomasa microbiana ruminal son protozoos, cerca del 75% de los ácidos grasos
microbianos presentes en el rumen pueden ser de origen protozoario, estos datos indican,
que los protozoos ruminales podrían representar un importante curso de CLA y VA para el
rumiante. Sin embargo, uno de los procesos del metabolismo de lípidos en los rumiantes
más discutidos a través de los años ha sido el flujo de protozoos como biomasa
microbiana hacia el duodeno, ya que las primeras investigaciones sobre el tema indican
retención selectiva de protozoos regulados por mecanismos de migración secuestro que
dependen de quimiotaxis, impidiendo así, su llegada al intestino delgado, sin embargo, se
han desarrollado alternativas metodológicas que permiten reconocer el importante papel
de los protozoos en el aporte de CLA y VA al rumiante, ya que la mayoría de ácidos grasos
que alcanza el intestino delgado en rumiantes deriva de los lípidos microbianos, los cuales
son en gran medida diferentes de los incluidos en los forrajes. Se ha estimado que los
protozoos constituyen entre el 30% y 43% del CLA y 40% del VA que alcanza el duodeno.

CLAVES PARA LA IDENTIFICACIÓN DE PROTOZOOS CILIADOS RUMINALES

PROTOZOOS CILIADOS DEL RUMEN: son organismos eucarióticos unicelulares (18-500

μm). su clasificación incluye aproximadamente: 5 familias que contienen 24 géneros y
cerca de 257 especies, se conocen generalmente como holotricos y entodiniomorfos.
Los holotricos (por ejemplo los géneros Isotricha, Dasytricha entre otros), presentan el
cuerpo cubierto de cilios (Fig. 1). Estos protozoos metabolizan preferentemente hidratos
de carbono solubles como fuente de energía, y los productos principales de la
fermentación realizada por los holotricos son los ácidos acético, butírico y láctico junto a
gases como CO2 e H2.

Los entodiniomorfos se caracterizan por poseer cilios confinados a regiones específicas de

la superficie corporal, generalmente en la zona anterior (Fig. 1). Incluyen los géneros:
Entodinium, Epidinium, Endiplodinium, Diplodinium, Polyplastron y Ophryoscolex. Los
entodiniomorfos son predominantemente consumidores de alimento particulado, células
bacterianas y vegetales, y gránulos de almidón. Pero también pueden usar carbohidratos
solubles como fuente de energía, cuando no disponen de alimento particulado. La
principal fuente de carbono y energía para los Entodiniomorfos es el almidón y los
productos de fermentación de estos protozoos lo constituyen gases como CO 2 e H2 y
varios ácidos grasos.
Criterios generales para clasificar e identificar los protozoos del rumen

 La célula está cubierta con cilios, completamente, en una o varias zonas distintas.
 El número y ubicación de las zonas con cilios.
 La morfología de la célula y la relación de largo/ancho (L=length; W=width; L/W).
 Si están presentes: la ubicación, tamaño y número de placas esqueléticas.
 Número y ubicación de las vacuolas contráctiles.
 Debe tenerse en cuenta las espinas, pero generalmente no se considera como una
característica fiable.

Clave para la identificación de protozoos del rumen al nivel de subfamilia/nivel género 1

1. Con cilios en toda la superficie corporal.............................................................. 2

-Zona de cilios en el extremo anterior de cuerpo……………………...................... 3

-Zona de cilios en el extremo anterior de cuerpo más una segunda zona ciliar en una
ubicación diferente……………………………………………………………………………………………………… 4

2. Cilios en hileras longitudinales paralelas a lo largo del cuerpo;

-Tamaño del cuerpo > 100 micras……….………………………………............................. Isotricha

-Tamaño del cuerpo por lo general entre 50 y 75
micras................................................................................................................... Dasytricha
3. Zona de cilios en el extremo anterior de cuerpo, alrededor de la zona oral, una única
vacuola contráctil; el macronúcleo se encuentra junto a la pared dorsal del cuerpo;
micronúcleo hacia la cara ventral del macronúcleo
………………………………………….……..……..……………………………………………………………Entodinium

4. Zona de cilios en el extremo anterior de cuerpo con una segunda zona ciliar dorsal o en
la misma zona ciliar en un plano paralelo; opérculo presente, dos o más vacuolas
contráctiles; el micronúcleo está ubicado entre el macronúcleo y la pared dorsal del
cuerpo; puede presentar placas esqueléticas………………………………Subfamilia Diplodiniinae

-Segunda zona ciliar desplazada (dorsal) hacia la parte posterior de la célula

……........................................................................................................................................ 5

5. Zona ciliar dorsal situada ligeramente hacia el extremo posterior. Con forma delgada,
relación L/W generalmente ≥2.............................................................................. Epidinium

-La zona dorsal ciliar es una banda de cilios que rodea las tres cuartas partes de la célula
(ancho), inclinada hacia el extremo posterior .................................................. Ophryoscolex

Para la identificación de especies se requiere de la utilización de tinciones diferenciales

como el azul de metileno acidificado para colorear el núcleo y como el lugol para colorear
las placas esqueléticas (aumento 450× o 1000× con aceite de inmersión).

Figura 1. Representación esquemática de los protozoos del rumen1. Rangos aproximados

de tamaño (μm) para:
 Isotricha (L=length)=80-200 y (W=width)=45-150; L/W= 1,65-2,55
 Dasytricha L=37-75 y W=20-40; L/W= 1,70-2,70
 Entodinium L=18-120 y W=10-90; L/W= 1-2
 Diplodiniinae L=20-500 y W=0-240; L/W= 1,2-2
 Epidinium L=50-230 y W=20-120; L/W= 1,6-2,9
 Ophryoscolex L=120-215 y W=60-110; L/W= 1,6-2