Manipulación de La Fermentación Ruminal (Libro)

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MANIPULACIN DE LA FERMENTACIN MICROBIANA RUMINAL

Juana Galindo, Yoandra Marrero, Niurca Gonzlez y Areadne Sosa
Instituto de Ciencia Animal, La Habana, Cuba
Jgalindo@ica.co.cu; ymarrero@ica.co.cu; ngonzlez@ica.co.cu
asosa@ica.co.cu
CONTENIDO
1. Nota de las autoras

2. Introduccin
3. El rumen. Caractersticas Generales del ambiente ruminal
4. El rumen como sistema de fermentacin continua
5. Microorganismos que habitan en el rumen
a) Caractersticas generales de las bacterias del rumen
b) Caractersticas generales de los protozoos del rumen
c) Caractersticas generales de los hongos del rumen
6. Relacin entre los microorganismos del rumen y el animal hospedero
7. Requerimientos nutricionales de los microorganismos del rumen
8. Factores que afectan la poblacin de microorganismos del rumen
9. Fermentacin microbiana de nutrientes
10. La celulolisis ruminal y los factores que la modifican
11. Adaptacin de microorganismos a la dieta
12. Manipulacin de la fermentacin ruminal
a)
Concepto de manipulacin de la fermentacin microbiana ruminal
b)
Sitios probables para manipular la fermentacin microbiana
ruminal
13. Optimizacin de la fermentacin ruminal mediante el manejo de la dieta
a) Empleo de aditivos
b) Antibiticos ionforos
c) Uso de cidos orgnicos
14. La defaunacin
15. Tratamiento del alimento antes del consumo
16. Manipulacin gentica de los microorganismos
16. Uso de microorganismos viables y productos microbiales
17. Conclusiones
Manipulacin de la fermentacin microbiana ruminal

Juana Galindo, Yoandra Marrero, Niurca Gonzlez y Areadne Sosa
Jgalindo@ica.co.cu; ymarrero@ica.co.cu; ngonzlez@ica.co.cu
asosa@ica.co.cu
Nota de las autoras

Este libro est dirigido a todas aqullas personas que se apasionan con
introducirse en el estudio del pequeo mundo que es el rumen. Esperamos
que el mismo contribuya a descubrir sus leyes ms generales, relaciones
ecolgicas y contradicciones biolgicas, as como a extraer del mismo los
beneficios que puede proporcionar al hombre su manipulacin consciente.
Igualmente, se destina a los tcnicos y profesionales directamente vinculados a
la investigacin y produccin, para los cuales se muestran las experiencias
acumuladas a partir de los resultados que se obtuvieron de dos proyectos de
investigacin, y que constituyen herramientas tiles para la toma de decisiones.
Si en alguna medida, Ud. logra stos propsitos, las autoras nos sentiremos
satisfechas.
Introduccin
Los rumiantes presentan particularidades distintivas en relacin con el resto de
los mamferos, porque el rumen y el retculo, dos de los compartimientos preestomacales, se encuentran habitados por una de las ms variadas, densas y
activas poblaciones microbianas conocidas en la naturaleza (protozoos,
bacterias y hongos), que juegan un papel significativo en la degradacin del
alimento que consumen los animales (Estrada et al., 1993).
Estos compartimientos no producen enzimas capaces de atacar las uniones
1,4 y 1,6 glucosdicas presentes en la celulosa y otros componentes que
constituyen los carbohidratos estructurales de las paredes celulares de los
vegetales, sin embargo contienen el mayor complejo enzimtico que se
conoce, es el sitio principal de degradacin de la celulosa, hemicelulosa y
lignina presentes en los materiales fibrosos (Dijkstra y Tamminga, 1995). La
conversin de la celulosa a glucosa requiere de la accin cooperativa
secuencial llevada a cabo por una familia de enzimas celulolticas constituida,
al menos por tres complejos enzimticos bsicos: endoglucanasas
(CMCasa:EC), exoglucanasas, nombradas celobiohidrolasas y glucosidasas

(Leatherwood, 1965; Li y Forsberg, 1987; Xue et al, 1992, Awafo et al 1996,
Valio 1999 y Galindo, 2004a).
El presente libro tiene como objetivos presentar y discutir los aspectos bsicos
de la microbiologa del rumen, las caractersticas de los microorganismos que
habitan en ese reservorio, as como sus principales interacciones en el proceso
fermentativo de nutrientes. Se prev dotar a los estudiantes del tema de las
herramientas necesarias para actuar y manipular, con conocimientos, los
procesos fermentativos que se producen en el rumen.
Caractersticas generales del ambiente ruminal
El rumen es una gran cmara de fermentacin, el que garantiza las condiciones
necesarias para la existencia y reproduccin de los microorganismos que lo
habitan. Es el reservorio mas voluminoso del aparato digestivo de los rumiantes
y representa del 70-75% del contenido total del tubo digestivo y del 50-60% de
su volumen.
En condiciones normales de manejo y alimentacin, el contenido ruminal se

mantiene relativamente constante y se caracteriza por
Concentracin elevada de agua (85-90%)
Temperatura constante (39-40 C)
Potencial de oxidacin- reduccin que vara entre 250 a 400mV. Este
bajo potencial REDOX garantiza las condiciones de anaerobiosis necesarias
para el desarrollo de los microorganismos.
PH generalmente comprendido entre 6-7, el que es regulado por varios
factores, entre los que se pueden mencionar el aporte de bicarbonatos y
fosfatos procedentes de la saliva, la cual posee un pH de 8.3.
Presin osmtica relativamente constante (290-320 mOsmol).
4
Aporte regular de nutrientes para los microorganismos y el animal

hospedero, procedente de la ingestin de alimentos.
Eliminacin continua de productos finales del metabolismo por absorcin
directa a travs de las paredes del rumen o por pasaje hacia las partes
bajas del tracto gastro intestinal y por la eructacin.
Atmsfera relativamente constante de gases situados al nivel del saco
dorsal. La fase gaseosa del rumen se compone principalmente de CO2,
CH4, N2, H2S, e H2. La tabla 1 muestra la composicin de los gases del
rumen
Tabla 1. Composicin de la mezcla de gases del rumen, %

Gas
CO2
CH4
N2
O2
H2
H2 S
% de la mezcla
65.53
26.76
7.00
0.56
0.18
0.01
El rumen como sistema de fermentacin continua

El rumen es un sistema de fermentacin continua en el cual estn ingresando
constantemente los alimentos frescos, solucin nutritiva y saliva los cuales se
mezclan con la masa que se encuentra en proceso de fermentacin. Al mismo
tiempo salen por el orificio retculo omasal lquidos, residuos de alimentos,
productos finales de la fermentacin y clulas microbianas en cantidades
similares a las que ingresan. El volumen en fermentacin se mantiene
constante.
Esquema del rumen
Microorganismos que habitan en el rumen

El rumen normal de un rumiante adulto contiene una de las ms variadas,
densas y activas poblaciones microbianas conocidas en la naturaleza, la cual
es responsable de la degradacin de los principios nutritivos, al mismo tiempo
que sintetizan protenas, vitaminas y otros metabolitos tiles en la nutricin del
animal hospedero.
La poblacin microbiana ruminal se encuentra integrada por bacterias,
protozoos, hongos, bacterifagos y ocasionalmente, levaduras. Estos
mantienen estrechas interrelaciones entre s, tanto sinrgicas como
mutualistas
Caractersticas Generales de las bacterias del rumen
1. Forma y Representacin de las bacterias del rumen
Las bacterias constituyen la mayor y ms diversa poblacin microbiana que
est presente en el rumen. El nmero total de bacterias del contenido del
rumen, bajo condiciones normales de alimentacin, es aproximadamente 1091010 ufc/ml. Se encuentran representadas por tipos morfolgicamente variados:
cocos, bacilos, vibrios, espirilos, espiroquetas, rosetas ovales y tetracocos.
La forma y tamao de las bacterias del rumen puede variar considerablemente
en cultivos simples o en grupo de cepas, incluso si se observa en condiciones
estrictamente uniformes, como en los trabajos con cultivos puros.
Las bacterias del rumen son pleomrficas. Su tamao oscila entre 0.1- 1 de
dimetro y 1-3 de largo
Las bacterias consiguen un ecosistema constante y permiten a los rumiantes el
consumo de nutrientes inasequibles para otros animales. Por otra parte,
tambin se establecen relaciones mutualistas entre los microorganismos del
ecosistema ruminal. La mayora de los microorganismos del rumen,
especficamente las bacterias tienen relaciones de sinergismo, mutualismo o
simbiosis. En la tabla 2 se presentan las relaciones que se establecen entre los
microorganismos en el rumen.
Tabla 2. Relaciones ecolgicas entre microorganismos del rumen
nombre
Individuo 1
Individuo 2
Neutralismo
Comensalismo
Sinergismo
Mutualismo o simbiosis
Parasitismo
Depredacin
Grupos fisiolgicos de bacterias del rumen

En dependencia de los sustratos que las bacterias pueden utilizar o fermentar,
estas se han agrupado en: celulolticas, hemicelulolticas, amilolticas,
proteolticas, fermentadoras de azcares, bacterias que utilizan los cidos,
metanognicas, lipolticas, pectinolticas, bacterias que sintetizan vitaminas,
bacterias que utilizan aminocidos como fuente de energa, y otras.
Bacterias celulolticas
Son las bacterias que producen el complejo de enzimas celulasas, que
hidroliza la celulosa nativa u original. Tambin pueden utilizar la celobiosa,
disacrido que contiene el enlace beta. Gran nmero de bacterias celulolticas
son, tambin, hemicelulolticas. Entre ellas se pueden citar Fibrobacter
succingenes, Butyrivibrio fibrisolvens, Clostridium lochheadii, Ruminococcus
albus y Ruminococcus Flavefaciens.
Bacterias hemicelulolticas
Son capaces de hidrolizar la hemicelulosa. Este compuesto se diferencia de la
celulosa por contener pentosas, adems de hexosas entre los azcares que
forman la molcula. Existen bacterias hemicelulolticas que no son capaces de
utilizar la celulosa. Butyrivibrio fibrisolvens, Ruminococcus flavefaciens,
Ruminococcus albus, Bacteroides rumincola, Lachnospira multiparus,
Eubacterium ruminantium y Prevotella rumincola.
Bacterias pectinolticas
Son bacterias capaces de fermentar la pectina. Algunos grupos de bacterias
celulolticas como Butyrivibrio fibrisolvens y Fibrobacter succingenes, son
tambin capaces de atacar la pectina. Otros grupos microbianos que interviene
en el proceso son: Treponema saccharophilum, Prevotella rumincola,
Lachnospira multiparus y Succinivibrio dextrinosolvens
Bacterias amilolticas
En ste grupo se incluyen aqullas bacterias que hidrolizan y digieren el
almidn. Algunas bacterias amilolticas son, tambin, celulolticas, como por
ejemplo Clostridium lockheadii, algunas cepas de Fibrobacter succingenes, y
Butyrivibrio fibrisolvens. Algunas especies no celulolticas que digieren el
almidn incluyen Streptococcus bovis, Bacteroides ruminicola, Succinomonas
amylolytica, Bacteroides amylophilus, Espiroquetas del gnero Treponema, y
7
Peptostreptococcus elsdenii. Muchas cepas de Selenomonas ruminantium

tambin digieren el almidn, as como Succinivibrio dextrinosolvens. La
poblacin de bacterias amilolticas se incrementa considerablemente cuando
la dieta es a base de almidones.
Bacterias proteolticas
Bacterias que hidrolizan las protenas y las utilizan como fuente primaria de
energa. Muchas cepas de bacterias que fermentan la celulosa, hemicelulosa y
el almidn, son tambin proteolticas. Entre las bacterias proteolticas ms
activas se encuentran: Ruminobacter amylophilus, Clostridium sporogenes,
Bacillus licheniformis, Prevotella rumincola, Selenomonas ruminantium,
Butyrivibrio fibrisolvens, Butyrivibrio alactacidigens y Streptococcus bovis
Bacterias sacarolticas
Bajo este concepto se agrupan las bacterias que utilizan los azcares, mono y
disacridos. Muchas especies de bacterias celulolticas, hemicelulolticas,
amilolticas, proteolticas, y otras, tambin son capaces de fermentar los
azcares.
Bacterias lipolticas
Son las bacterias capaces de utilizar e hidrolizar el glicerol en la molcula de
grasa. Tambin se encuentran en ste grupo los organismos que hidrogenan
los cidos grasos no saturados y los que metabolizan los cidos grasos de
cadena larga a cuerpos cetnicos.
Bacterias metanognicas
Las bacterias metanognicas forman parte del dominio de las Arqueobacterias,
que incluye tres tipos de bacterias: metanognicas, las que producen metano;
halfilas extremas, las que viven en medios salinos extremos, y
termoacidfilas, las que subsisten en ambientes calientes y cidos. De los tres
tipos las que predominan son las metanognicas y han sido estudiadas por un
gran nmero de autores (Anon 2004).
Los metangenos son quizs los organismos anaerbicos ms estrictos,
requiriendo no solo condiciones libres de oxgeno, necesitan tambin un
potencial redox menor que 330mM. La mayora tiene tiempos de duplicacin
que va desde varias horas a varios das. Estos factores imposibilitaron el
estudio de metangenos en cultivos puros hasta mediados de la dcada del 70,
cuando el desarrollo de tcnicas anaerbicas perfeccionadas y cmaras de
anaerobiosis seguras, simplificaron el crecimiento, aislamiento y manipulacin
de las bacterias metanognicas. Otro impedimento para su estudio fue su dbil
crecimiento. El estudio de su nutricin, especialmente sus altos requerimiento
de nquel, permiti el crecimiento suficiente para realizar estudios bioqumicos
que demostraron vas metablicas completamente nuevas (Sowers 1995).
Estas bacterias poseen las caractersticas bioqumicas y genticas propias de

las Archaebacterias (Fox et al. 1980, Anon 2004). Por ejemplo:
- No poseen paredes celulares con peptidoglicanos
- Poseen lpidos de membrana diferentes tanto de las eubacterias como de
los eucariontes (incluyendo enlaces ter en lugar de enlaces ster).
- Presentan secuencias nicas en ARNr 16S
Los metangenos poseen coenzimas que son comunes en otras bacterias,
incluyendo vitamina B12, sin embargo, un aspecto especial de estos
microorganismos es la presencia en ellos de un grupo de coenzimas que son
nicas o de limitada distribucin (Stewart y Bryant 1988 y Mackie et al. 1992).
El centro del proceso de metanognesis es la coenzima M, un transportador de
grupos metilo, nico en metangenos, que es el precursor inmediato de
metano. La coenzima F420, sirve en Methanobrevibacter ruminantium y otros
metangenos, como un transportador de electrones, que funciona en lugar de
la ferredoxina. Adems de actuar como cofactor de la hidrogenasa, es cofactor
de la formiato deshidrogenasa y NADP reductasa (Tzeng et al. 1975a), por esto
el hidrgeno y el formiato son fuentes equivalentes de electrones para estas
bacterias (Tzeng et al. 1975b). Inicialmente la CoF420 fue descubierta en
metangenos, posteriormente se encontr en algunos actinomicetos y
nocardioformas (Jones et al. 1987) En Methanosarcina barkeri, la coenzima
F420, est presente en cantidades comparativamente pequeas, y la ferredoxina
sirve como transportador de electrones (Jones et al. 1987). Otros cofactores
inusuales son una nueva pteridina, metanopterina, que funciona como un
transportador de grupos C1; y un nuevo cofactor Ni-tetrapirrol, F430 que es un
grupo prosttico de la metil CoM reductasa (Mackie et al. 1992).
A pesar de compartir stas y otras caractersticas comunes, las bacterias
metanognicas muestran diversidad en cuanto a sus caractersticas
morfolgicas, fisiolgicas y bioqumicas. En ellas estn representadas todas las
formas y morfolgicas bsicas como cocos, bacilos y espirilos, tanto en formas
individuales o agrupadas como el caso de las sarcinas. La composicin de
bases del ADN (% GC) es otra caracterstica que vara ampliamente. Los
lpidos de membrana tambin son diversos en estructura y composicin. La
pared celular es otra estructura que difiere en las diferentes especies y se
clasifica en tres clases (Pseudomureica, proteica o glicoproteica) de acuerdo al
principal componente de esta (Mackie et al. 1992).
Los requerimientos nutricionales de los metangenos son simples y la mayora
de las especies pueden vivir quimiolitotrficamente en medios con sales
minerales que contengan CO2 como fuente de carbono y H2 como fuente de
energa. El amonio es la principal fuente de nitrgeno para estas bacterias,
mientras que el azufre es suministrado por sulfito o cistena. El crecimiento de
especies auttrofas se estimula por la adicin de compuestos orgnicos como
acetato, cistena, vitaminas del complejo B, lquido de rumen o extracto de
levadura. Las bacterias metanognicas requieren adems, sodio, nquel, hierro,
cobalto, molibdemo y otros elementos traza. Las condiciones redox se obtienen
por la adicin de sulfitos, cistena o una combinacin de ambos. Estos
microorganismos se encuentran a pH moderados, con un ptimo entre 6 y 8. El
rango de temperatura para este grupo es amplio, con un ptimo de 35 a 40C

para las especies mesfilas y 60C para las termfilas. Actualmente estas
bacterias se mantienen, en condiciones adecuadas, en varios laboratorios del
mundo y se utilizan en las investigaciones sobre sus procesos metablicos
(Mackie et al. 1992).
La clasificacin de las bacterias metanognicas se basa en la estructura del
ARNr 16S. Aunque en los diferentes hbitats anaerbios, se han identificado
alrededor de 70 especies de microorganismos metanognicos pertenecientes a
21 gneros, solo 7 especies han sido aisladas del rumen (tabla 1.) (Jarvis et al.
2000, Tajima et al. 2001, Whitford et al. 2001).
Las bacterias metanognicas encontradas en el rumen son las siguientes:
Methanobacterium formicicum bryantii; Methanobrevibacter ruminantium smithii;
Methanomicrobium mobile; Methanosarcina barkeri y Methanoculleus
olentangyi
Bacterias acetognicas
Las bacterias acetognicas son capaces de producir cido actico a partir del
H2 que se encuentra disponible en el lquido ruminal como resultado de la
fermentacin de los materiales fibrosos. La reaccin mediante la cual ste
grupo ejerce su accin es: 4H2 + 2 CO2 CH3 COOH + 2 H2 O. Las bacterias
ms representativas son Acetitomaculum ruminis y Ruminococcus schinkii
Bacterias que utilizan los cidos
A este grupo pertenecen las bacterias que utilizan diferentes cidos orgnicos,
como: lctico, succnico, mlico, fumrico, oxlico. De forma general, estos
cidos no se producen en grandes cantidades en el rumen, aunque su
concentracin se encuentra relacionada, fundamentalmente con la dieta que
reciben los animales.
Bacterias que utilizan aminocidos como fuente de energa
Agrupa a las bacterias que son incapaces de utilizar otra fuente de energa
diferente a los aminocidos. Generalmente se incluyen dentro de las bacterias
proteolticas.
En las tablas 3 y 4 se muestran las caractersticas
morfolgicas y
fermentativas de algunas de las ms importantes especies de bacterias del
rumen. Como se observa, una misma bacteria es capaz de fermentar
diferentes sustratos, aspecto ste que hace muy complejo el rumen como
sistema ecolgico.
Tabla 3. Caractersticas morfolgicas y fermentativas de algunas

bacterias del rumen
10
Organismo
Morfologa Productos
fermentacin
de Sustrato
Fibrobacter succinogenes
Bacilo
Succinato,
formiato
Butyrivibrio fibrisolvens
Bacilo
curvado
Acetato, formiato, lactato, Celulosa

butirato, H2 y CO2
Ruminococcus albus
Coco
Acetato, formiato, H2 y Celulosa

CO2
Clostridium lochheadii
Bacilo
(espora)
Acetato, formiato, butirato Celulosa

H2 y CO2
Ruminococcus Flavefaciens
Coco
Acetato, succinato y H2
Clostridium
polysaccharolyticum
Bacilo
(espora)
Acetato, formiato, butirato Celulosa

y H2
almidn
Bacteroides ruminicola
Bacilo
Formiato,
succinato
acetato
y Almidn
Ruminobacter amylophilus
Bacilo
Formiato,
succinato
acetato
y Almidn
Selenomonas ruminantium
Bacilo
curvado
Acetato,
lactato
propionato
y Almidn
Succinomas amylolytica
Bacilo
ovalado
Acetato, propionato
succinato
y Almidn
Streptococcus bovis
Coco
Lactato
Almidn
Selenomonas lactilytica
Bacilo
curvado
Acetato y succinato
Lactato
Megasphaera elsdenii
Coco
Acetato,
propionato, Lactato
butirato,
valerato,
coproato, H2 y CO2
Viellonella prvula
Coco
Acetato, propionato y H2
Lachnospira multiparus
Bacilo
curvado
Acetato, formiato, lactato, Pectina

H2 y CO2
Anaerovibrio lipolytica
Bacilo
Acetato, propionato
succinato
Eubacterium ruminantium
Bacilo
Formiato, butirato, lactosa Xilano

y CO2
Lactobacillus ruminis
Bacilo
Lactosa
acetato, Celulosa
Celulosa
Lactato
y Lipolitico
Azucares
11
Lactobacillus vitulinus
Bacilo
Lactosa
Azucares
Methanobrevibacter
ruminantium
Bacilo
CH4 (de H2 + CO2

formiato)
Methanomicrobium mobile
Bacilo
CH4 (de H2 + CO2 o Metangenos

formiato)
Eubacterium oxidoreducens
Bacilo
Lactosa y H2
o Metangenos
Aromticos
Tabla 4. Algunas especies de bacterias que fermentan principios

nutritivos en el rumen
Celulolticos
Fibrobacter succinogenes
Ruminococcus flavefaciens
Ruminococcus albus
Utilizadores de azcar
Treponema bryantii
Lactobacillus vitulinus
Lactobacillus ruminus
Pectinolticos
Lachnospira multiparus
Succinivibrio dextrinosolvens
Treponema bryantii
Streptococcus bovis
Amilolticos
Bacteroides amylophilus
Streptococcus bovis
Succinimonas amylolytica
Productores de amoniaco
Ureolticos
Succinivibrio dextrinosolvens
Selenomonas sp.
Ruminococcus bromii
Butyrivibrio sp.
Treponema sp.
Hemicelulolticos
Ruminococcus sp.
Utilizadores de cidos
Utilizadores de lpidos
Anaerovibrio lipolytica
Treponema bryantii
Eubacterium sp.
Fusocillus sp.
Micrococcus sp.
Proteolticos
Bacteroides amyliphylus
Streptococcus bovis
Productores de metano
Methanobrevibacter ruminantium
Methanobacterium formicicum
Methanomicrobium mobile
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Fotos de algunas de las bacterias del rumen (extrado de Kaufmann)
Rosetas
Cocos
Rosetas y Selenomonas
Sarcinas
Caractersticas Generales de los protozoos del rumen

Los protozoos fueron los primeros organismos que se descubrieron en el
rumen, debido, fundamentalmente a su tamao relativamente grande. Su
tamao oscila entre 38-195 micras de largo por 15-109 micras de ancho. De
igual forma que las bacterias, requieren una temperatura de 39 a 40 0 C para
vivir, ausencia de oxigeno, pH comprendido entre 5.5-8.0, con un rango optimo
de 6.5-7.3 y un potencial de oxidacin - reduccin bajo.
La mayora de los protozoos del rumen son ciliados (aproximadamente 104 106 / g de contenido ruminal) y tambin se encuentran algunos flagelados (Ej.:
Trichomonas spp, Monocercomonas. Sp y Chilomastix. Sp) estn presentes en
bajo nmero (103 - 104 / g). Aunque la clasificacin de los ciliados no est
determinada, es difcil refutar la existencia de dos grupos ciliados del rumen
13
bien separados, los cuales fueron primeramente denominados: Holotricha y

Entodiniomorfos
El primer grupo incluye tres especies comunes: Dasytricha ruminantium,
Isotricha prostoma, Isotricha intestinalis y algunos otros menos frecuentes. El
segundo grupo contiene numerosos gneros juntos, todos incluidos en la
familia
Ophryoscolecidae
(Entodinium,
Diplodinium,
Ostracodinium,
Eudiplodinium, Epidinium, Epiplastron, Opisthotrichum, Ophryoscolex,
Elytroplastron, Polyplastron, entre otros).
Las evidencias experimentales han sugerido que los protozoos pueden afectar
la velocidad de crecimiento del animal, la digestibilidad de la racin, la calidad y
cantidad de la protena microbiana disponible en el intestino. Los mayores
cambios observados en la ausencia de protozoos del rumen parece ser un
incremento en el nmero de bacterias ruminales y una ligera disminucin en la
digestibilidad del rumen
Los estudios comparativos que se han efectuado entre animales faunados y
defaunados han demostrado que los ciliados no solamente contribuyen a los
procesos metablicos en el rumen sino adems sugiere que los protozoos son
capaces de modular las caractersticas fsicas qumicas del ecosistema.
Tambin se ha demostrado que la presencia de protozoos influye en el
volumen del rumen, la retencin de la digesta, la composicin y actividades de
la poblacin microbiana presente, las concentraciones y proporciones de
productos finales de la fermentacin microbiana y en el pH ruminal.
Los cambios en uno de estos indicadores pueden influir en la funcin ruminal y
como consecuencia, la digestin ruminal de protena diettica y la materia
orgnica y fibra son mayores en animales faunados. Por otro lado, la sntesis
de protena microbiana neta y el flujo de protena a las partes bajas del tracto
gastrointestinal se reducen cuando los protozoos estn presentes en el rumen.
La defaunacin ofrece el potencial para mejorar la eficiencia de la ganancia de
peso vivo y la produccin de leche.
El impacto de la presencia o ausencia de los protozoos ciliados del rumen para
el hospedero puede depender de la dieta y del nmero y especie de ciliados
presentes. En animales alimentados con dietas bajas en protena los protozoos
ciliados aparentemente tienen un efecto negativo en el crecimiento y en el
desarrollo. Sin embargo, en animales alimentados con dietas ricas en granos,
los protozoos ciliados pueden tener un papel beneficioso, debido a su habilidad
de influir en la degradacin ruminal del almidn y en el metabolismo del cido
lctico.
La presencia de protozoos ciliados en animales alimentados con dietas en
granos est asociada con una disminucin de la acumulacin y fermentacin
del cido lctico. Debido a su influencia en la acumulacin de lactato ruminal,
existe la hiptesis de que los protozoos ciliados juegan un papel importante en
la moderacin de la fermentacin ruminal en rumiantes alimentados con dietas
ricas en grano.
14
La defaunacin frecuentemente resulta en una disminucin en la produccin de

AGCC. Esto est de acuerdo con resultados obtenidos en la digestin de
materia orgnica en el rumen. La desaparicin de los protozoos est
generalmente asociada con una disminucin en la proporcin de cido butrico
y la disminucin de la concentracin de N - NH3 en el rumen.
Los Entodiniomorfos, por el contrario a Holotrichas, metabolizan el cido lctico
y limitan el riesgo de acidosis causado por el consumo excesivo de
carbohidratos de fcil fermentacin (almidn, azcar)
La baja actividad metanognica que se observa despus de la defaunacin del
rumen, disminuye las prdidas de energa y se puede considerar beneficiosa
para los animales productores de leche o carne que presentan un potencial de
produccin alto
Los protozoos pueden transformar las toxinas que estn presentes en los
alimentos. Los animales defaunados son adems sensibles a la toxicidad por
cobre. Estos grupos microbianos mejoran la formacin de sulfito de cobre que
no puede ser absorbido en el tracto digestivo.
Fotos de algunos integrantes de la poblacin de protozoos del rumen (a
Galindo, 2004)
Diplodinium spa
Dasytricha ruminantiuma
Caractersticas Generales de los hongos del rumen

Los hongos anaerobios son el grupo ms recientemente reconocido de los
microorganismos del rumen, ya que primeramente eran incluidos como
protozoos flagelados.
Con el desarrollo de las investigaciones en microbiologa del rumen, as como
la inclusin de las tcnicas de microscopia electrnica, se pudo demostrar que
ciertas clulas flageladas que parecan ser protozoos eran, en efecto,
zoosporas de hongos.
15
Son organismos anaerobios estrictos que ataca, colonizan y crecen sobre

fragmentos fibrosos de las plantas, por lo que son activos microorganismos
celulolticos. La magnitud de la degradacin de la celulosa de los hongos del
rumen sobre tiras de papel de filtro es de aproximadamente 60%. Las celulasas
extracelulares de los referidos hongos atacan rpidamente los fragmentos de
las plantas en el rumen y a las 2-3 horas ya tienen invadido el tejido vascular
del vegetal. A las 3 horas se detectan en el tejido mesfilo y posteriormente el
crecimiento es mayor con produccin de esporangio.
Debido a la forma de crecimiento de los hongos, penetran dentro de los tejidos
vegetales hasta zonas que normalmente resultan inaccesibles a las bacterias.
Inicialmente todos los hongos anaerobios aislados del rumen fueron de tipo
monocntrico. Existen tres gneros de hongos anaerobios monocntricos:
Caecomyces (Sphaeromonas), Neocallimastix y Piromyces (Piromonas), cada
uno de estos gneros contienen numerosas especies.
Los hongos existen en el rumen como zoosporas y esporangios. La creencia de
que los hongos anaerobios son de importancia considerable para la nutricin
de rumiantes est basada en la habilidad demostrada para colonizar paredes
celulares lignificadas y para debilitar los tejidos fibrosos de las plantas en el
rumen, as como en la degradacin de los componentes estructurales de la
pared celular de las mismas y la fermentacin de los monosacridos
resultantes (fructosa, glucosa, xilosa)
Estudios in vitro han demostrado que los hongos degradan extensivamente la
fibra de las plantas en cultivos puros. Ellos producen un amplio rango de
enzimas que degradan la fibra, muchas de las cuales son extracelulares. Los
hongos anaerobios poseen endoglucanasas, exoglucanasas (incluyendo
celobiohidrolasas) y - glucosidasas las cuales actan para degradar la
celulosa (el mayor componente de la fibra) eficientemente.
La hemicelulosa, el segundo mayor componente de la fibra, se degrada por
- xilanasas y - xilosidasas. La lignina, el tercer componente mayor de la fibra,
es atacada por enzimas tales como feruloil y curamoil esterasas que actan
para separar carbohidratos fermentables de la lignina ms que para degradar la
lignina extensivamente.
Los hongos tambin tienen el potencial de contribuir al suministro de protena al
animal hospedero. Las clulas de los hongos estn compuestas de protenas
con una combinacin bien balanceada de aminocidos las cuales son
altamente digestibles y disponibles al animal hospedero
Relacin entre los microorganismos del rumen y el animal hospedero

El animal rumiante y aquellos microorganismos que viven en su tracto
digestivo, particularmente el rumen, son un ejemplo excelente de mutualismo.
El animal provee un nicho ambientalmente favorable, con un suministro
continuo de alimentos y remocin de productos finales. Por su parte los
16
microorganismos (bacterias, protozoos y hongos) proveen un servicio digestivo

o funcin que proporciona grandes cantidades de energa disponible al animal
hospedero la cual no puede obtenerse a travs de sus propios procesos
digestivos.
Si los protozoos del rumen fueran meramente comensales entonces ni el
hospedero ni los protozoos podran ser beneficiados o daados por la
asociacin. Sin embargo el hospedero se beneficia de la habilidad degradativa
de los protozoos y estos satisfacen a travs del hospedero sus requerimientos
especficos para el crecimiento y multiplicacin. Esto incluye un amplio rango
de temperatura, pH, alimento, bajo potencial Redox, bacterias vivas. Los
protozoos del rumen pueden ser considerados como simbiontes dependiendo
del animal hospedero y otros microorganismos del rumen. El hecho de que las
bacterias del rumen y posiblemente los hongos puedan proveer actividades
metablicas similares para el animal hospedero no afecta su clasificacin.
La informacin sobre la interrelacin entre hongos y protozoos en el rumen es
limitada. Las zoosporas individuales de hongos pueden ser ocasionalmente
engolfadas por los protozoos ciliados del rumen. Es conocido que la
defaunacin conduce a una mayor poblacin de hongos, aunque este
incremento no es siempre significativo. El mecanismo por el cual la
defaunacin incrementa la poblacin de hongos podra ser una reduccin en el
recambio de las protenas de los hongos en el rumen, pero esta actividad
predatoria es mucho menos aparente con hongos que con bacterias ruminales.
La quitina, un componente comn en la pared celular de los hongos, es un

polisacrido formado por N acetil D glucosamina y es extremadamente
resistente a la degradacin por microorganismos. La hidrlisis completa de la
quitina se produce por un sistema quitinoltico, que consiste en dos hidrolasas,
cuyas acciones se efectan de manera consecutivas. La degradacin de
clulas de hongos. Diferentes investigaciones han demostrado que los
protozoos del rumen poseen un sistema quitinoltico con actividad quitinasa y N
acetil - - D- glucosaminidasa.
Por otra parte la protena fngica parece, en parte, ser usada por los protozoos
para construir sus propios componentes.
Los ciliados del rumen engolfan bacterias, algunas veces selectivamente, con
velocidades de consumo mximo de aproximadamente 105 bacterias /
protozoos / hora. La velocidad de consumo bacteriano es especie dependiente
y est influenciada por la densidad de la poblacin bacteriana, la forma fsica
de la bacteria, el estado nutricional de los protozoos y factores ambientales
tales como el pH y concentraciones de sal.
Los protozoos engolfan las bacterias mediante vesculas citoplasmticas y la

mayora son matadas y digeridas con alguna liberacin de productos de la
digestin en el medio. La actividad predatoria de los protozoos reduce el
tamao de la poblacin bacteriana ruminal y puede influir en las proporciones
17
relativas de los tipos de bacterias presentes. Por ejemplo, el nmero de

bacterias celulolticas incrementa en animales faunados mientras que el
nmero de bacterias amilolticas desciende.
Requerimientos nutricionales de los microorganismos del rumen
Los microorganismos del rumen, como todo organismo vivo, tienen
requerimientos energticos, proteicos y factores de crecimiento para la sntesis
de protoplasma celular. Como fuente de energa, puede ser capaz de utilizar
una gran variedad de carbohidratos, desde azcares simples como la glucosa y
la fructosa, hasta los ms complejos como el almidn, la celulosa, pectina y
hemicelulosa. Sin embargo, esto no significa que todas las bacterias sean
capaces de utilizar todos los carbohidratos, sino que por lo general, cada
bacteria tiene sus requerimientos especficos.
Como fuente de nitrgeno, las bacterias son capaces de utilizar desde el
nitrgeno no proteico, pequeos pptidos, aminocidos y hasta protenas. La
posibilidad de utilizar fuentes de NNP para la sntesis de protena microbiana
es uno de los aspectos ms importantes del metabolismo nitrogenado de los
microorganismos del rumen.
Muchas bacterias del rumen, fundamentalmente celulolticas, requieren
preferentemente amonaco en relacin a los aminocidos o pptidos.
Los principios nutritivos que requieren los microorganismos del rumen se
presentan en la tabla 5.
Tabla 5. Factores nutricionales de los microorganismos del rumen

ENERGIA
NITRGENO
Todas las fuentes energticas protenas,

pueden ser utilizadas por las aminocidos,
bacterias:
pptidos,
amonaco
glucosa, fructosa, sacarosa,
xilosa, celobiosa, celulosa,
almidn, glicerol, dextrana,
lactato, pectina, etc.
FACTORES DE CRECIMIENTO
AGCC:
acetato,
butirato,
isovalrico,
metilbutrico,
caproico.
Minerales: Mg2+, Ca2+, K+, Na+,
PO4, Mn2+, Co, S, Hemina, etc.
Vitaminas:
biotina,
paminobenzoico,
tiamina,
piridoxina, cido pantotnico,
etc.
Otros:
Factores
no
identificados
18
Entre los aminocidos que requieren las bacterias del rumen se encuentran los
aminocidos ramificados y los sulfurados, como la tirosina, metionina, y la
cistena. Esto se debe a la imposibilidad de sintetizar la cadena ramificada o
sulfurada para la sntesis de novo de los aminocidos.
Otros compuestos requeridos por las bacterias del rumen, se agrupan bajo el
nombre genrico de factores de crecimiento. Entre estos se encuentran los
cidos grasos de cadena corta, AGCC, algunos minerales, vitaminas del
complejo B y otros factores no identificados y que se encuentran en el lquido
ruminal clarificado.
Los AGCC mas utilizados por las bacterias son el actico y los de cadena
ramificada. Estos ltimos son el resultado de la fermentacin de las propinas y
su importancia en la nutricin microbiana se debe a que las bacterias sintetizan
sus aminocidos a partir de estos y el amoniaco.
Los minerales y las vitaminas, principalmente del complejo B, participan como
cofactores enzimticos en numerosas reacciones catabolizadas por las
enzimas. Se ha demostrado que la inclusin en la racin para rumiantes de
productos microbianos que contengan estas vitaminas, activa el crecimiento
microbiano.
Factores que afectan la poblacin de microorganismos del rumen.

Existen muchos estudios acerca del
desarrollo de la mejor poblacin
microbiana ruminal y los factores que controlan su balance. Algunos de estos
factores estn ligados a la fisiologa de diferentes especies (mxima velocidad
de crecimiento, afinidad por el sustrato, energa metablica, resistencia a pH
cidos y compuestos txicos, habilidad para adherirse a las partculas de la
planta, etc). Esto depende del hospedero y su alimento (composicin de la
dieta, frecuencia de comidas, cantidades ingeridas, aditivos del alimento, forma
en la cual el alimento es presentado, etc.) y de la naturaleza de las relaciones
establecidas entre las diferentes poblaciones durante la evolucin, como la
competencia, el sinergismo, la predacin, el mutualismo, etc.).
Generalmente se acepta que los principales factores que modifican la
poblacin de microorganismos del rumen son:
La dieta y su manipulacin
Cantidad y frecuencia en el suministro de alimentos
Cambios diurnos y estacionales
Procesamiento de la dieta
Competencia entre protozoos y bacterias
Especie animal
Edad
Existen otras variables, que pudieran ser factores, las que tambin influyen en
el nmero y representacin de especies microbianas, entre estas tenemos: El
19
consumo y su velocidad, la selectividad al pastar, la fertilidad del suelo, la

situacin geogrfica, el clima. Estos influyen en la cantidad y calidad de
nutrimento que se ofrecern a los microorganismos del rumen.
La dieta y su manipulacin.
Uno de los principales factores que influyen en la poblacin de
microorganismos del rumen es la variabilidad de los componentes de los
alimentos. Por otro lado, el tipo de carbohidratos preponderante en la dieta
produce una fermentacin caracterstica, que a su vez influir en la clase de
microorganismos que se desarrollaran. Por ejemplo, las dietas ricas en
carbohidratos solubles como las mieles presentaran una poblacin mayor de
protozoarios de los diferentes gneros y en total que las dietas de
concentrados ricas en almidn. Las bacterias se presentan en menor cantidad
en aquellas dietas que en las de concentrados.
La presencia
de grandes cantidades de almidn produce una rpida
fermentacin, lo que provoca un descenso rpido del pH. Este descenso
ocasiona la muerte de los protozoarios. Esto afecta a las bacterias celulolticas,
y aumentan las amilolticas. Sin embargo, se ha encontrado que la inclusin de
almidn en dietas fibrosas mejora el desarrollo de la poblacin microbiana
hasta cierto lmite. Mas adelante, analizaremos esta respuesta cuando se
estudie la celulolisis ruminal.
Otro aspecto importante a sealar es que no solamente cambia la relacin
protozoo / bacterias, sino que tambin cambian las proporciones en que se
encuentran los diferentes gneros protozoarios y especies de bacterias que se
involucran en el proceso. La suplementacin con protenas, en dietas bajas en
este nutrimento, tambin modifica la poblacin microbiana ruminal.
Las dietas ricas en azcares como la caa deprimen la poblacin de bacterias
celulolticas ruminales. A esto se une el hecho de que este alimento presenta
un bajo contenido en protena.
Cantidad y frecuencia en el suministro de alimentos

La cantidad y frecuencia en el suministro de alimentos se ha encontrado que
afecta a la poblacin microbiana.
La alimentacin una vez al da produce grandes disminuciones en el pH y en
los conteos de protozoos y bacterias. Por el contrario, un suministro de
pequeas cantidades varias veces al da, produce variaciones mas pequeas,
puesto que el rumen se asemejara mas a al modelo de fermentacin continua
que se presento a inicios de esta conferencia.
Cambios diurnos y estacionales
Los cambios diurnos y estacionales que se presentan en la poblacin de
microorganismos del rumen estn basados, principalmente, en la entrada y
salida de alimento. Cuando los animales se someten a un ayuno prolongado y
20
se les suministra de nuevo alimentos, se observa, inicialmente, un incremento

en el nmero de protozoos y bacterias, las cuales se multiplican rpidamente. A
las 2 horas del suministro de alimento se observan los mayores conteos de
protozoos y de las 4 a 6 horas el de las bacterias, cuando la alimentacin es
una vez al da.
Los cambios estacionales que se presentan en nuestro clima afectan la
poblacin de microorganismos debido a los cambios en la calidad del alimento,
principalmente, por deficiencia en le aporte proteico de las dietas. Si se
suplementa en estos momentos con un nivel adecuado de nitrgeno, las
variaciones debidas a la estacin disminuirn y pueden desaparecer.
Procesamiento de la dieta
El procesamiento de la dieta, tambin influye en la poblacin ruminal. El molido,
peletizacin y desecacin de los forrajes produce una disminucin de los
protozoos y, en ciertos casos, pueden llegar a su eliminacin total.
Estas disminuciones se han planteado se deben a un aumento en el pasaje del
contenido ruminal, un incremento en la fermentacin con aumento de la acidez
que atenta contra el desarrollo de los protozoos. Por lo regular, las bacterias se
ven menos afectadas por estos procesamientos y en ocasiones se ven
incrementadas en numero. Sin embargo, se plantea que existen variaciones en
los grupos fisiolgicos que se establecen en un momento dado.
En el caso de los almidones sucede algo parecido a lo que ocurre con los
materiales fibrosos. El hacer del grano hojuelas, molerlo, peletizarlo o cocerlo,
provoca un aumento de la fermentacin. Esto trae consigo la desaparicin de
los protozoos y el aumento de bacterias.
Competencia entre protozoos y bacterias
El nmero de bacterias en los animales defaunados es mayor que en los que
presentan fauna. Esta diferencia puede ser debida a la competencia por los
nutrientes o al consumo de bacterias por los protozoos.
Tambin se seala que los protozoos realizan una seleccin de las bacterias
que ellos ingieren. Esto hace disminuir y en algunos casos desaparecer las
especies de las cuales se alimentan.
El empleo de rboles y arbustos de leguminosas para manipular la
fermentacin microbiana ruminal y producir efecto defaunantes, es una prctica
que ha tomado auge en los ltimos aos. Gliricidia sepium es uno de los
arbustos de mayor empleo con estos propsitos. Reduce la poblacin de
protozoos ruminales
e incrementa el nmero de bacterias y hongos
celulolticos ruminales. Las razones se encuentran en la presencia de
metabolitos secundarios, fundamentalmente taninos condensados.
Especie animal
21
El efecto de la especie y la raza de los rumiantes se ha encontrado que

produce variaciones en la cantidad y especies de microorganismos presentes
en el rumen. Estas variaciones parecen deberse a la cantidad y calidad del
alimento que los diferentes rumiantes encuentran normalmente en su hbitat, lo
cual produce especies mas adecuadas a las condiciones que se encuentran en
el rumen. Tambin se han sealado variaciones entre la poblacin protozoaria
del Ceb y su cruce con la Parda Suiza Brown Swiss). Diferencias,
principalmente en la poblacin protozoaria, se han encontrado entre el camello,
el Suni el Antlope y otros rumiantes salvajes.
Edad
La edad es otro de los factores que afecta la poblacin de microorganismos del
rumen.
Los terneros de pocos das de nacidos tienen escaso desarrollo en el rumen y
la poblacin que aparece son organismos capaces de utilizar la leche, nico
alimento que consumen. Entre los microorganismos ms numerosos en esta
etapa se encuentran los Lactobacillus y Streptococcus, grandes productores
de cido lctico, el que mantiene un pH muy bajo. En esta edad no estn
presentes los protozoos, los que se establecen mas tarde, cuando el consumo
de alimento fibroso se incrementa y por el contacto con otros animales adultos
o que tienen una fauna establecida.
Al transcurrir el tiempo y entrar en contacto con alimentos fibrosos se desarrolla
el rumen, aumenta el pH, comienza la aparicin de los diferentes grupos
fisiolgicos de bacterias y se establecen los protozoos.
La figura 1 muestra el efecto de la edad en la poblacin de bacterias viables en

terneros.
20
15
bacterias
viables
totales(10
ufc/ml
10
5
0
28
56
84
22
Figura 1. Efecto de la edad en la poblacin de bacterias viables terneros,

das (Fuente Galindo, 2005)
Fermentacin microbiana de Nutrientes

Los microorganismo al actuar sobre los nutrientes producen como resultado,
producen como resultado de su metabolismo diferentes productos finales, los
cuales son muy variados, segn la naturaleza de los sustratos y de las
especies de bacterias y protozoarios presentes. En la tabla 6 se muestran de
una forma esquemtica las principales transformaciones que ocurren.
Tabla 6. Fermentacin microbiana de nutrientes en diferentes fuentes
Fuentes
Energticas
Proteicas
Sustratos
Productos Finales
Carbohidratos de fcil fermentacin

Carbohidratos estructurales
Lpidos
Protenas, Pptidos y Aminocidos
AGCC, cido lctico y gases

AGCC y gases
Saturacin de los no saturados,
lpidos para la sntesis de
membrana celular
AGCC, NH3 y gases
Fermentacin de fuentes energticas

De acuerdo con el sustrato prevaleciente en el alimento, los microorganismos
producirn diferentes cantidades de AGCC y adems, variaran sus
proporciones relativas.
En las dietas que presentan grandes cantidades de almidn, como son los
concentrados energticos, se observa un pH mas bajo, el cual es consecuencia
de un rpido ataque microbiano al almidn, que produce cido lctico, y AGCC.
El cido lctico, cuando los animales se adaptan previamente, se presenta en
pequeas cantidades debido a que se desarrolla una microflora que es capaz
de utilizar este cido en la misma magnitud que se produce.
Si los animales consumen dietas ricas en materiales fibrosos, que contienen
grandes cantidades de material estructural, el pH del rumen es mas elevado.
23
Estos componentes son atacados por las bacterias celulolticas ms

lentamente y la cantidad de cidos formados, es tambin inferior. Las dietas
ricas en azucares como las mieles y el jugo de cana presentan valores
intermedios de pH, as como a la cantidad de cidos formados. En esta dieta,
los carbohidratos que abundan son los monos y disacridos, los cuales son
tambin rpidamente fermentados, pero el pH no desciende rpidamente. Esto
tal vez sea motivado por el hecho de que la formacin de cido lctico no es
muy grande y o que la liberacin de amoniaco procedente de la urea neutralice
adems los cidos formados, conjuntamente en un patrn de consumo
intermitente.
Consecuentemente, la cantidad de carbohidratos que entran al rumen no es
grande por unidad de tiempo.
Resultan tambin importantes las diferentes proporciones de cidos grasos
individuales que se forman en las dietas. La dieta de concentrado presenta una
proporcin de cido propicio alta, si se compara con las otras, y bajos valores
de cido actico y butrico. Por esta razn, el patrn de fermentacin de una
dieta rica en concentrado se acostumbra a decir que es alto en propinico y
bajo en actico.
El heno y los alimentos fibrosos presentan un pH alrededor de 7, una
produccin de AGCC baja con altas proporciones de cido actico,
compensada con bajas proporciones de cido propinico y butrico.
Por otro lado, las mieles presentan un patrn de fermentacin intermedio, con
pH cercanos al neutro, produccin de AGCC intermedia entre los dos
anteriores y se caracteriza porque es alta la proporcin de cido butrico. En la
tabla 7 se presenta el efecto del suministro de dietas de concentrado, heno y
miel /urea en el pH y patrn de fermentacin ruminal en toros
Tabla 7. Efecto de la dieta en el pH y patrn de fermentacin ruminal

(Fuente Elas, 1971)
Dieta
pH
AGCC,
meq/l
Concentrado 6.16 157
Heno
7.10 82.0
Miel/urea
6.66 132
% molar
actico propinico butrico Isob. Val. Isov. Cap
44.9
76.0
49.7
42.8
15.0
21.3
5.83
7.46
25.7
1.83 2.24 2.03 0.73

0.41 0.29 0.39 0.00
0.30 2.81 0.26 0.79
24
Fermentacin de compuestos nitrogenados

La fermentacin de los compuestos nitrogenados en el rumen es muy complejo
y en el intervienen gran numero de especies microbiana.
La protena y la urea u otra fuente de NNP que entra al rumen se degradan a
NH3. La concentracin de aminocidos libres en el rumen es relativamente baja
debido a que los mismos son desanimados.
Las protenas se degradan con una rapidez variable, en dependencia de su
estructura y solubilidad y en el proceso de proteolisis intervienen bacterias,
protozoos y hongos. Alrededor del 38% de las bacterias viables totales,
aisladas del rumen de bovinos, son proteolticas, lo cual puede variar en
dependencia de la fuente de energa y protena diettica.
Bacteroides amylophilus, Selenomonas ruminantium y Bacteroides ruminicola
son la bacterias de mas alta actividad proteoltica en el rumen. Otras bacterias
proteolticas de inters son, Streptococcus bovis, Sphaerophorus hypermegas
y Peptostreptococcus sp.
La actividad proteoltica no es la accin aislada de una sola especie
microbiana, sino que existe sinergismo y relaciones estrechas entre las
diferentes especies, lo cual se ha demostrado en los estudios que se han
efectuado en cultivos puros, donde la actividad proteoltica es menor.
La urea que se utiliza para suplir total o parcialmente la protena verdadera, se
hidroliza rpidamente a amoniaco y agua., sin embargo, en el rumen se han
encontrado relativamente pocas especies de bacterias eminentemente
ureolticas, lo cual indica que la ureasa puede ser inducida en algunos grupos
microbianos cuando la urea esta presente en el medio de fermentacin.
La tabla 8 muestra el efecto de diferentes henos en el pH y la concentracin
de amonaco en el rumen
Tabla 8. Efecto de la urea

ruminal
Dieta
Heno
en el pH y concentracin de amonaco
Heno
c/urea
Henomaz
Henomaz
c/urea
Heno
alfalfa
Heno
alfalfa
c/urea
pH ruminal
7,3
7,2
7,0
6,2
6,7
6,8
N-NH3 ruminal (ppm)
35,4
110,6
1,7
2,1
26,8
27,3
25
Fermentacin de lpidos
Los lpidos, al entrar en el rumen sufren un proceso de hidrlisis debido al
ataque microbiano a la molcula de grasa. Una vez liberados los cidos grasos,
estos sufren un proceso de hidrogenacin, si no se encuentran saturados, que
comienza siempre por los cidos grasos que tienen un grado mayor de
instauracin, del modo siguiente
Cx3 Cx2 Cx1 Cx0
En los forrajes se encuentran numerosos lpidos, los que se encuentran
formando parte de las membranas de los cloroplastos, con un alto contenido de
lpidos no saturados.
En el proceso de hidrogenacin de los cidos grasos polinsaturados y
monoinsaturados intervienen algunas cepas de Butyrivibrios, una cepa de
Ruminococcus albus, dos cepas de Eubacterium sp, dos Fusocillus, un
micrococo y Treponema sp
Ventajas de la hidrogenacin de cidos grasos
Aumenta el crecimiento bacteriano, ya que los cidos grasos insaturados

provocan cambios en la permeabilidad de las membranas microbianas
Se reduce la produccin de metano al haber menor cantidad de
hidrgeno
Aumenta la energa disponible, ya que los cidos grasos saturados
liberan ms energa al oxidarse que los cidos grasos insaturados.
Anaerovibrio lipolytica es responsable de la hidrlisis de los triglicridos,

aunque ataca los galactolpidos directamente. Butyrivibrio fibrisolvens, bacteria
eminentemente celuloltica, tambin interviene en la hidrlisis de los
fosfolpidos, en la hidrogenacin de los cidos grasos polinsaturados y en la
produccin de butirato a partir de la interconvercin del acetato en butirato.
La celulolisis ruminal y los factores que la modifican
La celulolisis ruminal es el proceso de transformacin bioqumica de la
celulosa en carbohidratos solubles Este proceso se lleva a cabo por algunos
miembros de la microflora y microfauna ruminal que tienen la capacidad de
segregar enzimas celulasas.
Accesibilidad de las enzimas a la celulosa
La capacidad de los organismos celulolticos para digerir la celulosa varia
grandemente con las diferentes especies de forraje o el grado de madurez en
que se encuentren, aun cuando sus contenidos en celulosa no sean tan
diferentes. Para apreciar completamente la influencia de la estructura de la
fibra en la susceptibilidad o resistencia a la degradacin enzimtica, es
necesario comprender la relacin entre microorganismo celuloltico, sus
enzimas extracelulares y la fibra propiamente dicha.
26
Los organismos que degradan la fibra viven en la superficie o en el interior de

la fibra. En estos lugares segregan enzimas extracelulares o superficiales que
catalizan la dilucin de los constituyentes de la fibra a productos que pueden
ser asimilados y metabolizados por estos microorganismos.
La susceptibilidad de la celulosa a la hidrlisis enzimtica esta determinada en
grado considerable por la accesibilidad de las enzimas producidas y el sustrato,
celulosa, es pues un prerrequisito para la hidrlisis, pues la celulosa es
estructuralmente compleja y a la vez insoluble. Este contacto puede ocurrir por
difusin de las enzimas dentro de la compleja matriz de la celulosa. Debe
esperarse, que la velocidad de la reaccin deba ser funcin del rea superficial
de la celulosa que esta accesible a la enzima. Cualquier aspecto estructural
que limite la accesibilidad de las enzimas del complejo celulasas a la celulosa
disminuir su susceptibilidad de la degradacin.
Aspectos estructurales que afectan el ataque enzimtico

Los aspectos estructurales que determinan la susceptibilidad de los materiales
celulsicos a la degradacin enzimtica incluyen:
Contenido de humedad de la fibra
Tamao de los poros microfibrilares
Los enlaces establecidos entre los diferentes constituyentes de la pared
celular
Otros aspectos
La humedad desempea un importante papel en la degradacin de la celulosa
ya que el agua es necesaria para hinchar la fibra; prev un medio adecuado
para la difusin de las enzimas extracelulares y de los productos de la
degradacin parcial de la fibra de los cuales obtienen los microorganismos sus
nutrimentos. Los elementos del agua se utilizan para producir el rompimiento
de los enlaces entre las unidades de glucosa que forman la molcula de
celulosa.
La degradacin enzimtica de la celulosa requiere que las enzimas celulasas y
otras enzimas extracelulares de los microorganismos se difundan desde los
organismos productores hasta la superficie accesible, sobre o dentro de la
fibra. Estas superficies accesibles se encuentran definidas por su tamao,
forma y propiedades superficiales en capilares microscpicos y sub
microscpicos dentro de la fibra. Estos capilares se encuentran dentro de dos
categoras: capilares gruesos, visibles al microscopio de luz y que tienen un
dimetro que vara desde 2000 a 10 micrones y los capilares o poros de la
pared celular, tales como los espacios entre las microfibrillas y las molculas de
celulosa en las regiones amorfas.
La mayora de los poros de la pared celular se encuentran cerrados cuando las
paredes no contienen humedad, pero se abren otra vez cuando se absorbe
agua. Cuando la fibra se encuentra completamente saturada de agua, los
capilares de las paredes celulares alcanzan sus dimensiones mximas. Estos
27
pueden alcanzar alrededor de 200 de dimetro, aunque comnmente poseen

un dimetro menor.
En un cuerpo poroso el rea superficial disponible para que el ataque de una
enzima se realice depender de los tamaos relativos de los poros y la enzima.
Los estudios realizados en este campo indican que la molcula del complejo
celulasas posee un dimetro entre 30-40 . Cuando el volumen accesible al
poro es cero, la reaccin de disolucin de la celulosa no ocurre; pero al
incrementarse el volumen
accesible del poro ocurre un incremento
correspondiente en la velocidad de reaccin. Tambin existe una correlacin
entre la reactividad y el rea superficial a una molcula con un tamao dado.
Esto se basa en que la velocidad de una reaccin qumica heterognea entre
molculas en solucin y un slido es, usualmente, proporcional a la superficie
disponible.
Existen algunas evidencias de uniones covalentes entre la lignina y algunos de
lo polisacridos de la pared celular. Estos enlaces posiblemente contribuyan a
impedir el ataque enzimtico de la fibra por inhibicin estereoqumica. Sin
embargo, tambin se plantea que ocurre un enrejamiento fsico de la celulosa
y la hemicelulosa.
Otros aspectos que se cree influyen en la susceptibilidad de la fibra al ataque
enzimtico son, el grado de cristalinidad de la celulosa, su grado de
polimerizacin, la asociacin con minerales y otras sustancias.
Microfibrillas de celulosa en la pared vegetal
Enzimas que intervienen en la celulolisis ruminal y modo de accin

El termino celulasas se utiliza para denominar las endoenzimas producidas por
los microorganismos celulolticos, que hidrolizan los enlaces -1-4 glucosdicos
presentes entre las unidades de anhidro glucosa y su nombre sistemtico es 1-4 glucan glucano hidrolasas.
Las enzimas celulasas no son una sola enzima, sino que constituyen un
complejo enzimtico, el cual est formado por varias enzimas, entre ellas: endo
-1-4 glucanasas (-1-4 glucan glucano hidrolasa, carboximetil celulasa Cx
celulasa); exo 1-4- glucanasas (exo celobiohidrolasa, 1-4- glucanglucanohidrolasa C1 celulasa); exo 1-4- glucosidasas (1,4 glucan
glucohidrolasa);
celobiasas
(
glucosidasas
glucohidrolasa);
celulodextrinasas; etc.
La mayora de los microorganismos celulolticos del rumen se encuentran
dotados de todas las enzimas y por esa razn, la celulolisis puede ser total
cuando se estudia en suspensiones con cultivos puros. Sin embargo, se ha
indicado que algunos microorganismos atacan solamente la forma nativa de la
celulosa, mientras que otros, considerados de baja actividad o pseudo
28
celulolticos, intervienen en el proceso de degradacin cuando la molcula de

celulosa ha sido atacada previamente.
Interacciones de microorganismos en la degradacin de la fibra
Para degradar la celulosa, los microorganismos se adhieren a las partculas de
alimentos y reducen la celulosa en fragmentos con formacin de productos
intermediarios que son metabolizados por otros grupos microbianos. Los
productos intermediarios de la degradacin de la celulosa son, succinato,
hidrgeno y formiato. Los productos finales son acetato y butirato.
La fermentacin completa de la celulosa se efecta mediante la accin de una
poblacin mixta, que comprende los siguientes grupos fisiolgicos
Microorganismos Celulolticos
Especies microbianas que fermentan los glcidos producidos por la
hidrlisis de la celulosa
Especies que degradan los compuestos como cido succnico y cido
frmico
Bacterias metanognicas, que utilizan el hidrgeno metablico o el formato
para la formacin de CH4.
Bacterias acetognicas, las que son capaces de producir cido actico a
partir del hidrgeno metablico. ste grupo microbiano compite con las
bacterias metanognicas por la obtencin del sustrato
Las bacterias celulolticas mas comnmente aisladas y estudiadas, tal y como
se seal anteriormente, son: Fibrobacter succingenes, Butyrivibrio
fibrisolvens, Ruminococcus albus, Ruminococcus flavefaciens, Clostridium
cellobiosparum, Clostridium lockheadii, Micromonospora ruminantium.
Algunos protozoos Entodiniomorfos tienen actividad celuloltica y juegan un
papel importante en la fermentacin de la lignocelulosa. Polyplastrom
multivesiculatum es el protozoo mas activo en la celulolisis y su presencia
puede incrementar hasta en un 10% la digestibilidad de la lignocelulosa. Otros
protozoos, Entodinium, estn dotados de una poliglucosidasa de tipo C
Otros protozoos con actividad celuloltica son, Eudiplodinium maggii, Epidinium
ecaudatum. Los protozoos Holotrichos Isotrichas y Dasytrichas, reducen la
degradabilidad de la fibra.
Todos los hongos del rumen, aislados e identificados hasta el presente, son
celulolticos. Entre ellos tenemos, Neocallimastix frontalis, Sphaeromonas
comunis y Piromonas comunis
Entre las diferentes especies y cepas de microorganismos celulolticas existen
numerosas Inter.- relaciones metablicas y asociaciones. Cada especie se
caracteriza por una forma particular de penetrar, atacar y colonizar el vegetal.
As, por ejemplo, R. Flavefaciens penetra al vegetal por las zonas daadas,
pero se adhiere a las clulas de la pared celular del vegetal para producir la
degradacin del mismo.
29
Otros microorganismos se adhieren ms rpidamente a la epidermis del

vegetal, esclernquima, floema y mesfilo, pero no degrada la pared celular a
travs del esclernquima. La presencia de grandes concentraciones de lignina
en la pared celular inhibe tanto la adhesin como la digestin.
En sentido general, se puede sealar que los primeros organismos que se
adhieren a la fibra proporcionan las condiciones para el ataque por los otros. La
colonizacin de la fibra en el rumen es rpida y ocurre en minutos.
Un ejemplo prctico de interacciones microbianas en el proceso de
fermentacin de la celulosa se muestra en la figura 2.
Celulosa
Fibrobacter succingenes
Fragmentos de celulosa
CO2
Propionato
+
Acetato
+
CO2
+
Acetato
+
Formato
Acetato
+
CO2
+
H2
+
succinato
CH4
CO2
CO2
Figura 2. Interacciones entre Fibrobacter succingenes y Selenomonas

ruminantium en el proceso de fermentacin de la fibra
Factores que modifican la celulolisis ruminal

La degradacin de los componentes estructurales de la pared celular es
extremadamente variable y depende de varios factores, entre ellos.
1. Inherentes al vegetal.
Naturaleza de los carbohidratos estructurales, edad del vegetal, origen
botnico de la planta, contenido de lignina, tipo de tejido predominante,
30
parnquima, esclernquima, estado vegetativo, aspectos estructurales

del vegetal.
2. Referente a la racin
Naturaleza y cantidad de protena en el alimento
Disponibilidad en minerales, los cuales condicionan directamente la
actividad y el potencial enzimtico
Contenido de carbohidratos de fcil fermentacin
Estado fsico del alimento, tratamientos tecnolgicos, accin de agentes
qumicos o biolgicos, etc
3. Cualquier factor que modifique la temperatura y el pH de accin de las
enzimas celulasas o interfiera en la formacin del complejo enzimasustrato (ES)
La celulosa que llega al rumen, procedente de los alimentos que ingieren los
animales rumiantes, se digiere con rapidez variable, de acuerdo a los factores
que se mencion con anterioridad. En la tabla 9 se presenta la digestibilidad
de la celulosa de diferentes fuentes, as como la proporcin entre la lignina y la
celulosa, aspecto que interviene de manera directa en la razn de digestin de
la celulosa en el rumen
Tabla 9. Digestibilidad de la celulosa en diferentes materiales

Material
Alfalfa
Gramneas templadas
Gramneas tropicales
Papa
Papel
Madera
Vegetales
Digestibilidad, %
40-60
48-90
30-60
40-60
20-99
0-40
90-100
Proporcin lignina/celulosa
0.18-0.30
0.08-0.20
0.11-0.24
0.10-0.26
0.20-0.50
0.30-0.60
0-0.05
Las diferentes especies microbianas del rumen actan, preferentemente, sobre

un sustrato con especificidad relativa. Esta caracterstica se encuentra
estrechamente relacionada con los requerimientos nutricionales de cada
especie, y con el grado de lignificacin y contenido celular de los vegetales. Por
ejemplo, Ruminococcus albus y Fibrobacter succingenes
solubilizan en
mayor proporcin el heno de Teff en relacin a Butyrivibrio fibrisolvens,
mientras que Fibrobacter succingenes hace una mayor degradacin de la
mezcla de gramneas. Debe observarse en la tabla 10, la extensin de la
solubilizacin de las paredes celulares de los vegetales por diferentes
microorganismos, lo que demuestra el efecto de la especie microbiana en la
celulolisis ruminal
31
Tabla 10. Solubilizacin de paredes celulares de plantas por bacterias del

rumen
Microorganismo
Ruminococcus albus
Ruminococcus flavefaciens
Sustrato
Solubilizacin de
paredes, %
Heno de Teff
Mezcla de
gramneas
Paja de Barley
Heno de Teff
Mezcla de
gramneas
Paja de Barley
Heno de Teff
Mezcla de
gramneas
Paja de Barley
Heno de Teff
Mezcla de
gramneas
Paja de Barley
25
31
20
74
42
26
63
30
35
80
61
42
Nivel de carbohidratos solubles de la dieta

Para asegurar una actividad normal de la microflora y para que exista una
buena actividad celuloltica en la dieta, deber estar presente cierta cantidad
de carbohidratos solubles o fcilmente fermentables. Pequeas cantidades de
stos carbohidratos producen un aumento en la digestibilidad de la celulosa,
pero cantidades muy grandes la deprimen. Se aduce que estas diferencias en
digestibilidad se debe a un aumento en la proliferacin de los organismos que
utilizan estos carbohidratos y producen un incremento en la fermentacin de los
mismos, con un consecuente cambio en el pH (disminucin) y en el patrn de
fermentacin. Esto afecta el normal desarrollo de los microorganismos
celulolticos, y por ende, la actividad de las enzimas tambin disminuye. Se
debe sealar que generalmente, los pastos a la edad en que aproximadamente
se debe utilizar, alrededor de 6-7 semanas de edad, presentan cantidades
adecuadas de carbohidratos fcilmente fermentables.
Nivel de nitrgeno de la dieta
32
Uno de los Nutrientes ms limitantes en la utilizacin de la fibra es el nitrgeno.

La deficiencia de nitrgeno disminuye la digestibilidad de la fibra, ya que las
bacterias necesitan de este nutriente para sintetizar las enzimas necesarias
para su crecimiento y metabolismo. Adems la formacin del conjunto de
enzimas que constituyen el complejo celulasas requieren un gasto de energa y
nitrgeno alto.
Utilizacin del nitrgeno no proteico (NNP)
Se conoce que para cubrir los requerimientos de nitrgeno los organismos
celulolticos necesitan que parte del nitrgeno est en forma de NNP, porque
aunque ellos requieren de aminocidos que le son esenciales, pueden utilizar el
amonaco (NH3) para sintetizar sus aminocidos. Asimismo se ha encontrado
que parte del nitrgeno total de la dieta debe encontrarse en forma de protena
verdadera, ya que sta produce un efecto beneficioso en la digestin de la
celulosa.
Se han utilizado numerosos compuestos para suministrar el nitrgeno que se
requiere en las dietas. En los ltimos aos se ha incrementado la utilizacin de
compuestos que liberan NH3 en el rumen, como una forma de suministrar el
nitrgeno en la dieta. Los ms utilizados se presentan en la tabla.
Todos estos productos tienen en comn la presencia del grupo amonio (NH+ 4)
o el amino (NH2), los que se hidrolizan a NH3.
Uno de los componentes mas utilizados es la urea, la que se ha encontrado
que produce un aumento en la digestibilidad de la celulosa cuando se
suministra a los animales que consumen alimento fibrosos de baja calidad.
Es importante sealar que con los materiales fibrosos de baja digestibilidad la
adicin simultnea de pequeas cantidades de carbohidratos de fcil
fermentacin, ayuda a un mejor desarrollo de los microorganismos ruminales.
Los AGCC que se forman de la fermentacin de los carbohidratos, junto al NH3
contribuyen a la sntesis de protena microbiana
La inclusin de urea incrementa la digestibilidad de la celulosa en la paja de
trigo y mazorca de maz. Como se aprecia, los valores de inclusin de 50mg
Urea/100ml de lquido ruminal, bajo condiciones in vitro, no se traducen en una
mayor degradacin de la celulosa en la paja de trigo, aunque s en la mazorca
de maz. Esto nos conduce a informar que la suplementacin con urea con el
propsito de incrementar la digestibilidad de la celulosa, depende de la fuente
de celulosa especfica, adems de otros factores como son el nivel de
carbohidratos solubles de la racin.
La suplementacin nitrogenada, ya sea en forma de nitrgeno no proteico
(NNP) o de protena verdadera incrementa la digestibilidad y la eficiencia de
utilizacin de los forrajes de baja calidad, como resultado de un efecto directo
en la poblacin de microorganismos del rumen. Esta afirmacin se fundamenta
en que los microorganismos del rumen degradan la urea a amonaco y como
resultado, prolifera una amplia gama de microorganismos cuyos requerimientos
33
simples de nitrgeno se cubren por la presencia de NH3. El amonaco as

formado y las cadenas carbonadas presentes en el lquido de rumen,
provenientes del resto de la dieta, se utilizan para la sntesis de protena
microbiana.
La mxima sntesis de protena microbiana en el rumen se alcanza cuando la
concentracin de amonaco se encuentra entre 5-8 mg/100ml. A su vez, estos
niveles de amonaco se alcanzan cuando la concentracin de protena bruta
(PB) en la dieta es de aproximadamente 12 %. Sin embargo, resulta evidente
que los microorganismos del rumen requieren de fuentes de protena
verdadera, aminocidos, pptidos y otras formas nitrogenadas. Los
aminocidos aportan las cadenas carbonadas para la sntesis de cidos grasos
voltiles en el rumen, fundamentalmente, de cadena ramificada o isocidos
conocidos como cido isobutrico, cido isovalrico y cido 2-metilbutirato Es
bueno sealar que solo los tres aminocidos de cadena corta ramificada
(valina, leucina e isoleucina), permiten la produccin de estos isocidos.
En la tabla 11 de representa el efecto de diferentes cantidades de urea/ 100 ml

de lquido ruminal en la digestibilidad de la celulosa en dos fuentes de celulosa
(paja de trigo y paja de maz) y en la 12 el efecto de la urea en la paja y paja
con sacarosa en la digestibilidad de la MS, celulosa, amonaco y protena
bacteriana.
Tabla 11. Efecto de la urea en la actividad celuloltica ruminal en dos

fuentes de fibra
Tratamiento
Control *
Control
+
Urea/100ml
Control +
Urea/100ml
Control +
Urea/100ml
Control +
Urea/100ml
% digestibilidad de la
celulosa
Paja de
Mazorca
trigo
de maz
5mg
30.3
31.6
19.9
21.2
10mg
32.5
24.7
25mg
36.6
25.7
50mg
36.6
29.9
* 2g de paja + lquido de rumen
Tabla 12. Efecto de la urea en la actividad celuloltica del rumen en paja de

arroz
34
Medida
Consumo de MS, Kg/da
Digestibilidad de la MS, %
Digestibilidad de la celulosa, %
Protena bacteriana, mg/100ml
Amonaco ruminal, mg/100ml
Paja sola
Paja + Urea
2.06
31.1
50.0
11.3
1.8
2.54
45.4
59.5
17.8
18.2
Paja + Urea
+ Sacarosa
2.35
40.9
56.3
18.8
10.5
Las vitaminas del complejo B tambin actan como activadores en el proceso

de degradacin de la celulosa en el rumen. As en investigaciones que se
realizaron bajo condiciones in vitro, se demostr que la mezcla de cido
valrico, Biotina, cido para amino benzoico (PABA) y vitamina B12, producen
incrementos en la digestibilidad de la celulosa. Igualmente, el uso de productos
biofermentados con base a levaduras tambin incrementa el nmero de
microorganismos celulolticos y la actividad de las enzimas secretadas por los
mismos.
Como se observa en la tabla 13, el cido valrico la biotina y el cido para
amino benzoico (PABA) suministrados de manera conjunta como suplemento
en dietas de paja de cebada, son capaces de incrementar la digestibilidad de la
celulosa bajo condiciones in vitro. Sin embargo, el lquido de rumen contiene
factores de crecimiento no identificados, los que son capaces de producir una
mayor degradabilidad de la celulosa.
Tabla 13. Efecto de las vitaminas en la digestibilidad de la celulosa

Adiciones al medio de cultivo
Biotina y PABA
cido Valrico
cido valrico + Biotina
cido valrico + PABA
cido valrico +Biotina + PABA
cido valrico +Biotina + PABA + B12
Lquido de rumen centrifugado
% digestibilidad de la celulosa
22.8
41.8
44.3
36.4
56.9
54.6
61.4
Adaptacin de Microorganismos a la dieta

Como se estableci anteriormente, los microorganismos que viven en el rumen
son capaces de utilizar diferentes fuentes de carbohidratos y muchos son
capaces dos o tres de esas fuentes. Un cambio de dieta, por ejemplo, de
forraje o concentrado, es decir de una dieta de lenta fermentacin ruminal a
una de carbohidratos fcilmente fermentables, produce una accin rpida por
parte de los microorganismos. Esos, atacaran rpidamente el concentrado y se
desarrollaran mejor las bacterias amilolticas. El gran desarrollo de estas
bacterias producir suficiente cido, capaz de descender el pH del ruminal.
35
Estos cambios pueden ser tan violentos que produzcan disturbios digestivos
como la acidosis y timpanismo, que pueden llegar a ocasionar la muerte del
animal.
Si el cambio de dieta se hace lentamente y se aumentan las cantidades de
alimento nuevo a introducir diariamente, los cambios en la poblacin
microbiana ruminal no sern tan bruscos. De esta forma se podrn desarrollar
no solamente los microorganismos que utilizan las nuevas fuentes de energa,
sino que tambin la de los microorganismos que utilicen parte de los cidos
orgnicos. Estos no permitirn que se acumule una cantidad que provoque
intoxicacin en el animal.
Manipulacin de la fermentacin microbiana ruminal
Concepto de Manipulacin de la fermentacin microbiana ruminal
A partir del conocimiento de los principios que rigen el desarrollo de las
poblaciones microbianas, sus principales interacciones y productos del
metabolismo microbiano se deriva el concepto de manipulacin de la
fermentacin ruminal.
Manipular la fermentacin microbiana ruminal no es ms que utilizar un
conjunto de biotcnicas con el propsito de activar o modificar los sitios
sensibles de desarrollo microbiano, produccin de enzimas, productos finales
de la accin microbiana especficamente el patrn de fermentacin, pasaje de
nutrientes, entre otros. Este concepto fue descrito, primeramente, en Cuba por
Marty (1972), como alternativa para los pases cuya base alimentaria para el
ganado esta compuesta por alimentos de baja calidad. Desde entonces, este
concepto se ha ampliado y en la actualidad se pueden emplear para modificar
la fermentacin microbiana ruminal en dependencia del propsito que se
desee.
Para nutrir a los animales rumiantes a partir de manipular los procesos
fermentativos en el rumen aqu es necesario tener en consideracin los
siguientes principios o requisitos:
1. Establecer una fermentacin eficiente
Optimizar el crecimiento microbiano, lo que se logra al
incrementar la eficiencia de sntesis de protena microbiana
ruminal
Maximizar la digestin de la fibra
2. Lograr un metabolismo y balance de nutrientes eficiente
3. Tener en consideracin la nutricin de los microorganismos del rumen y
la del animal hospedero
Protena de sobrepaso, que provee de aminocidos esenciales al

animal.
Almidn de sobrepaso, que provee un suministro de glucosa
adicional
36
Suministro de lpidos que contienen cidos grasos de cadena

larga para la sntesis de tejidos y grasa de la leche.
El propsito de un sistema ruminal eficiente es alcanzar altas tasas de sntesis

de protena microbiana en relacin a la produccin de cidos grasos de cadena
corta (AGCC) y, consecuentemente, un mayor consumo de alimentos (2.5-3%
del P.V.). Esto depende de diversos factores, entre ellos: disponibilidad de
nutrientes esenciales, fundamentalmente amonio, azufre, aminocidos
ramificados, fsforo, pptidos y minerales trazas. Igualmente, se deber
trabajar en la obtencin de una alta digestin de compuestos estructurales
(celulosa, hemicelulosa, lignina, y otros); incrementos en la proporcin molar de
cido propinico y sustratos glucognicos totales; as como en la reduccin de
la proteolisis, amilolisis y metanognesis ruminal.
La figura 3 muestra los sitios ms probables de manipulacin de la
fermentacin ruminal y en los cuales puede incidir el hombre para obtener un
mejor aprovechamiento de los alimentos de que se dispone.
Una de las prcticas ms acertadas y relativamente fciles de realizar en
materia de manipulacin, es la referida a balancear la dieta teniendo en
consideracin los requerimientos nutricionales del animal y de los
microorganismos que habitan en el rumen. As por ejemplo, si los rumiantes se
alimentan con fuentes proteicas como las leguminosas, algunas de las cuales
presentan protenas solubles altamente degradables en el rumen, es necesario
garantizar la energa suficiente para que se produzca la adecuada sntesis de
protena microbiana o la inclusin de agentes protectores de la misma a la
proteolisis ruminal. En Cuba se han desarrollado diferentes estudios que dan
respuesta a esta problemtica.
Para manipular la fermentacin microbiana ruminal a partir de la dieta que se
suministra, se pueden utilizar dos vas: la primera comprende un conjunto de
acciones encaminadas a optimizar dicha fermentacin mediante el empleo de
diferentes mtodos de manejo de la racin y la segunda se refiere a la
modificacin del alimento antes del suministro a los animales.
Situacin geogrfica
Condiciones
climticas
y fertilidad
del suelo
Metabolitos
producidos por
microorganismos
del rumen
Intervencin del
hombre
Especies de
plantas
Caractersticas fsico
qumicas del alimento
Concentracin de nutrientes
Condiciones ambientales del
rumen (pH, CO2, temp, otros)
Productos finales de la
fermentacin
Velocidad de crecimiento
ndice de eliminacin de
microorganismos
Equilibrio de las especies
microbianas
Comportamiento animal
(Velocidad y seleccin en
la toma del alimento)
Caractersticas genticas
de los rumiantes
Estado fisiolgico del

animal
Adaptacin de las distintas

especies a las condiciones
del rumen
37
Figura 3. Sitios ms probables para la manipulacin de la fermentacin

microbiana ruminal
Tratamiento del alimento antes del consumo
Desde el punto de vista fsico se han conducido estudios que se enmarcan desde
tratamientos trmicos hasta modificar el tamao de partculas, los cuales causan
mejoras en la digestibilidad de unos componentes y actan sobre la proteccin de
otros.
El efecto que producen los tratamientos qumicos en las clulas lignificadas de
los vegetales, hace que los mismos sean ms digestibles, de modo que la
respuesta al tratamiento debe ser proporcional al nmero relativo de clulas
lignificadas que contenga el material. De esta forma se han empleado
compuestos tales como el hidrxido de sodio, urea y el amonaco en dietas de
residuos fibrosos de la caa de azcar as tambin el formaldehdo para reducir
el ataque a la protena dietaria en el rumen
La aplicacin de los procedimientos biotecnolgicos es una de las vas que se
puede utilizar para mejorar el valor nutritivo de forrajes y residuos fibrosos de
baja calidad. Al respecto, Elas et al, (1990) desarrollaron la tecnologa de
enriquecimiento proteico de la caa de azcar a partir de un proceso de
fermentacin en estado slido y como resultado se obtuvo un producto
denominado Saccharina. En este proceso se generan cantidades variables de
diferentes metabolitos, entre los cuales se destacan: cidos grasos de cadena
corta, enzimas, vitaminas, aminocidos, los cuales quedan en el alimento y
constituyen una valiosa fuente de nutrientes para el animal.
Por su parte, las bacterias del rumen tambin requieren para su crecimiento de
los cidos grasos voltiles valrico, isovalrico, butrico, isobutrico, caproico y
metilbutrico. Similar efecto producen las vitaminas del complejo B, niacina,
tiamina, cido p- aminobenzoico, biotina, las que adems de ser altamente
requeridas por las bacterias celulolticas, participan como cofactores en
numerosas reacciones enzimticas. Galindo et al, (1996) demostraron que la
sustitucin del 50; 70 y 90% de las materias primas del concentrado para vacas
lecheras por Saccharina increment la poblacin de la bacterias celulticas
ruminales, as como la actividad especfica del complejo de enzimas celulasas
(Tabla 14)
Tabla 14. Efecto de la caa biofermentada en la poblacin de bacterias celulolticas1
(10 7 ufc/ml) y actividad especfica de las enzimas celulasas2 (U actividad/mg
protena)
38
Alimento
Bacterias
celulolticas1
Actividad
celuloltica2
Caa
0.59
0.09
Caa biofermentada, 50% inclusin en pienso
0.95
0.37
1.03
1.63
0.81
0.36
Fuente: Galindo et al, (1996)

El tratamiento biotecnolgico a la fibra mediante fermentacin en estado slido, es
una prctica que puede incrementar la degradabilidad de la MS y la FDN. Dentro
de las fuentes que ms se han utilizado en Cuba con estos fines se encuentra la
pulpa y cascarilla de caf, residuos de cosecha, la caa de azcar, el bagazo
(Valio, 1999).
Las races y tubrculos como: boniato, remolacha, patata, yuca y Topinambur as
como granos tales como sorgo, cebada, maz, trigo, avena, entre otros, tambin se
pueden fermentar mediante estas tecnologas para producir alimento animal, el que
provee a los animales de protena de origen microbiano a partir de sustratos
energticos. Diferentes microorganismos se pueden utilizar como inoculantes y su
eleccin depende del sustrato a emplear, as como el propsito productivo de los
animales.
Optimizacin de la fermentacin ruminal mediante el manejo de la dieta
Empleo de aditivos
Una de las vas que se han desarrollado para propiciar modificaciones
importantes en la fermentacin, es la utilizacin de aditivos, entre ellos, los
denominados Suplementos Nitrogenados Activadores (SNA). stos consisten
en formulaciones que abarcan diferentes relaciones de nitrgeno no proteico
(NNP) y protena verdadera (PV), as como la adicin de premezclas de
vitaminas y minerales. La tabla 15 presenta diferentes formulaciones de SNA.
Tabla 15. Composicin de los suplementos activadores de la fermentacin

ruminal (SNA)
Componentes
Bagacillo
Urea
Miel final
Harina de girasol
Na2 SO4
premezcla vitamnica AD-1
Premezcla mineral M-6
SNA-100%
46.00
13.00
30.00
2.00
1.00
5.00
SNA-85%
39.04
11.30
25.00
13.66
2.00
1.00
5.00
SNA-70%
32.07
9.6
20.00
27.33
2.00
1.00
5.00
39
NaCl
3.00
3.00
3.00
Total
100
100
100
Relacin NNP: PV
100:0
85:15
70:30
La composicin de la premezcla mineral M-6 en g/Kg es la siguiente: (PO4)2
Ca3, 500; Cl Na, 400; CO3 Zn, 20; SO4 Cu, 10; SO4 Fe, 27; SO4 Mg, 23; SO4
Co, 0.1; Selenito de sodio, 0.02 y 19.86 de maz molido.
La premezcla vitamnica AD-1 aporta 1 200 000 UI de Vitamina A, 300 000 UI
de Vitamina D y se mezclaron con 937.5 g de maz molido.
Los SNA se han utilizado en dietas de bajo valor proteico, como son las dietas
a base de caa de azcar (Muoz et al, 1987; Galindo et al, 2004), en las que
se reducen los grupos ms importantes de bacterias celulolticas del rumen, y
casi desaparecen los microorganismos que deben degradar la celulosa. En
tales circunstancias la suplementacin nitrogenada, ya sea en forma de
protena verdadera o NNP, incrementa la poblacin y actividad de los
microorganismos ruminales debido, principalmente, al hecho de que el primer
factor que limita la accin de los microorganismos y su actividad, es el bajo
valor nutritivo de los alimentos que consumen los animales. Cuando
desaparece esta limitante, se observa una alta proliferacin de
microorganismos y consecuentemente, se obtiene una mayor degradabilidad
ruminal de la materia seca (MS), fibra detergente neutro (FDN) y fibra
detergente cido (FDA).
En este sentido, la mayor respuesta a la suplementacin nitrogenada se
obtiene cuando se formulan suplementos que combinan el NNP con la
protena verdadera. sta proporciona los aminocidos que se requieren para la
sntesis de Novo de la protena en el rumen y contribuye a la actividad
enzimtica debido a la naturaleza proteica de las enzimas. La tabla 16 muestra
el efecto de tres formulaciones: SNA 100%; SNA 85% Y SNA 70% en la
representacin de diferentes grupos morfolgicos de bacterias del rumen
Tabla 16. Efecto de tres formulaciones de suplemento nitrogenado

activador (SNA) en la poblacin de bacterias ruminales
Tratamiento
Bacterias
viables totales
1010 ufc/ml
Caa
1.97b (7.17)
Caa + SNA-100% 2.03ab (7.61)
Caa + SNA-85% 2.08a (8.00)
Caa + SNA-70% 2.13a (8.41)
EE SIG.
0.03**
Bacterias,
proteolticas
106 ufc/ml
0.59b (1.80)
0.77ab (2.16)
0.92a (2.50)
1.15a (3.16)
0.21*
Bacterias
amilolticas
106 ufc/ml
1.55 (4.53)
2.28(9.77)
2.22 (9.23)
2.32 (10.17)
0.25
Bacterias
celulolticas,
106 ufc/ml
0.42d (1.52)
0.79c (2.20)
1.28b (3.59)
2.01a (7.46)
0.04**
Por las razones anteriormente expuestas, en un grupo de trabajos que se

desarrollaron durante ms de 10 aos, se demostr que cuando se incluyeron
diferentes fuentes de protena verdadera, la poblacin de las bacterias del
40
rumen se incrementaba. En este sentido, es importante que se seale que en

la actualidad, el empleo de activadores de la fermentacin ha cobrado un gran
auge, y los mismos se pueden utilizar de diferentes formas: polvo, granulados,
en bloques multinutricionales, etc. Lo importante es que en su formulacin, se
tenga presente la necesidad de cubrir los requerimientos nutricionales de los
microorganismos ruminales y los del animal hospedero.
Los bloques multinutricionales (BMN) juegan un papel importante al
suministrar nitrgeno fermentable (NNP), mejoran el ecosistema del rumen ya
que regulan el nivel de amonaco de ste, lo cual permite incrementar la
poblacin de microorganismos, incrementan la degradacin o digestin de la
fibra y logran una menor degradacin de la protena que entra al rumen
procedente de la dieta. Como resultado del efecto directo en la fermentacin
ruminal, se estimula el consumo del alimento base con efecto beneficioso para
el estado energtico del animal. Al respecto, Mejas et al, (2004) demostraron
que cuando se utilizaron los BMN para la alimentacin de hembras en
desarrollo y vacas lecheras, mejor la respuesta productiva.
Diferentes mtodos ms sencillos, como son, la suplementacin con
leguminosas, pueden ser capaces de producir resultados similares o
superiores. Las leguminosas constituyen una fuente valiosa de protenas, ricas
en aminocidos, minerales y vitaminas, las que son altamente requeridas por
los microorganismos celulolticos para su crecimiento y actividad enzimtica. La
respuesta a la suplementacin con leguminosas fue, de hecho, mucho mayor
que cuando se utiliz la mejor relacin NNP/PV (70:30). As por ejemplo, se
encontraron 101.7 x 10-5 ufc/ml bacterias celulolticas en el rumen cuando se
suplement con el SNA que contena la relacin NNP: PV de 70:30; mientras
que la suplementacin con Leucaena leucocephala propici conteos de 416.7
x 10-5 ufc/ml, cuatro veces superior (Galindo et al, 2002). En la tabla 17 se
muestra el efecto de diferentes formas de suplementacin nitrogenada en la
poblacin de bacterias celulolticas ruminales en animales que se alimentan
con tallo de caa de azcar como dieta bsica.
Tabla 17. Efecto de diferentes formas de suplementacin nitrogenada en
la poblacin de bacterias celulolticas ruminales (10 5 ufc/ml)
Alimento
Caa sin suplementar
0.50
Caa + SNA-77
1.56
Caa + SNA-77+ Heno
2.45
Caa + SNA-77 + 2.5% forraje verde
18.40
Caa + SNA-77 + 5% forraje verde
15.60
Caa + SNA-100% (NNP/PV =100:0)
97.70
Caa + SNA- 85% (NNP/PV = 85: 15)
97.30
41
Caa + SNA- 70% (NNP/PV =70:30)
101.7
Con la finalidad de manipular la fermentacin microbiana ruminal, tambin se han

utilizado diferentes sustancias qumicas, denominadas amortiguadoras que son
capaces de mantener el pH en los rangos adecuados para lograr una actividad
microbiana efectiva. De esta forma se describe el uso de sales minerales o
tampones como carbonatos, bicarbonatos y fosfatos de sodio, potasio, calcio y
magnesio, entre otras, las que producen modificaciones en el pH ruminal y
favorecen las bacterias celulolticas, incrementan la digestibilidad de la materia
seca y la proporcin molar de acetato y adems mejoran la sntesis proteica
(Fisher, 1982; Marrero et al ,1987 y Galindo et al ,1990).
Las zeolitas naturales se han usado como aditivos en la alimentacin del
rumiante (Kvahli et al 1978, Garca et al 1981 y Mumpton 1984),
fundamentalmente cuando se incluye en la racin nitrgeno no proteico (NNP)
como urea o Biuret, que se hidrolizan rpidamente en el rumen (Aurora et al
1973).
El carcter electronegativo de la zeolita, le permite intercambiar cationes mono y
divalentes del medio circundante, en ste caso fluido ruminal, con el NH4+ que
se encuentra libre en el lquido ruminal procedente de la fermentacin de los
compuestos proteicos o el NNP. Esta propiedad se manifiesta en dependencia
de la afinidad que posea la zeolita por los elementos electropositivos (Mumpton
1984).
El NH4+ retenido en las canales de la zeolita se libera lentamente al ambiente
ruminal en la misma magnitud que la zeolita regenera su estado natural debido a
los cationes procedentes de la saliva o de los alimentos (White y Ohbrogge
1974). Estos autores sealan que aproximadamente el 15% del amoniaco
presente en el rumen puede ser captado por la zeolita lo que se convierte en una
mejor utilizacin del nitrgeno por los rumiantes (Swcenwy et al 1980).
Los estudios que se realizaron en Cuba permitieron demostrar que las zeolitas
naturales incrementan la poblacin de bacterias celulolticas ruminales y su
actividad en vacas que consumen ensilaje como dieta fibrosa, mientras que en
estudios desarrollados recientemente por Gutirrez et al, (2004) qued
demostrado que las zeolitas naturales y la bentonita sdica, tambin se pueden
utilizar para manipular la proteolisis ruminal. Ambos minerales ejercen efectos
reductores en la fermentacin ruminal de las protenas dietarias, aunque los
mecanismos de accin se diferencian entre s. Mientras que la bentonita hace a
la protena inaccesible a la accin por las proteasas microbianas, la zeolita capta
los iones amonio que se liberan por la accin de las deaminasas y los libera,
lentamente, a la vez que intercambia con iones libres en el lquido ruminal.
En las tablas 18 y 19 as como en la figura 4 se muestran los resultados que se
han alcanzado en el Instituto de Ciencia Animal en relacin al efecto de las
42
zeolitas naturales en la poblacin de microorganismos ruminales y su actividad

en vacas
Tabla 18. Efecto de la zeolita en algunos grupos de bacterias y protozoos
ruminales 1 en ensilaje de 4.22% de PB (Galindo et al 1987)
Bacterias totales viables 4.13a

u.f.c. x10-10/ml
(62.42)
Ensilaje
+
0.5% zeolita
.80a
(44.67)
Ensilaje
+
EE
0.5% zeolita
3.60b
0.07**
(38.86)
u.f.c. x 20-5/ml
1.60
(34.80)
1.66
(39.30)
1.92
(46.00)
0.19
Protozoos totales
N x 10-5/ml
0.09b
(2.59)
1.29a
(3.64)
1.27a
(3.56)
0.06**
Medida
Ensilaje
El efecto ms importante que produjo la zeolita en el rumen fue el de propiciar

un incremento en la actividad celuloltica ruminal. No se han informado con
anterioridad trabajos que avalen el efecto de la zeolita en la actividad de las
bacterias ruminales, pero se conoce que este mineral cede al medio iones tales
como Ca2+, K+, Mg2+, Na+, Fe3+, Mn2+, Zn2+ y Co2+ (Mumpton y Fishman 1977,
Hatiganu et al 1984 y Anon 1985) los cuales son requeridos por las bacterias
celulolticas ruminales para su crecimiento, al mismo tiempo el Mg2+ y el Mn2+
actan como cofactores de las enzimas celulasas
300
250
ensilaje
200
ensilaje + 0.5 zeolita
150
ensilaje + 1 de
zeolita
100
50
0
0
Figura 4. Efecto de la zeolita en la actividad especfica del complejo de

enzimas celulasas, U de actividad/mg de protena
43
Los resultados que se muestran en la figura corresponden a la actividad

celuloltica de las bacterias del rumen de vacas que consumen ensilaje de bajo
valor proteico (4.22% PC), pero cuando se utiliz ensilaje de girasol: millo con
un contenido en PB de 12.8%, la respuesta a la suplementacin con zeolita fue
ms notable en la poblacin de bacterias celulolticas viables, las que fueron
del orden de 106 ufc/ml comparado con 105 ufc/ml que se obtuvo cuando se
utiliz ensilaje de bajo contenido en protena. Estos resultados se muestran en
la tabla
Tabla 19.
Efecto del complejo mineral Zeolita en la poblacin de
bacterias del rumen y actividad de las celulasas microbianas en dietas
con alto contenid en PB (12.8% PC)
Medida
ensilaje
ensilaje + 1% zeolita
Bacterias
Viables totales, 1011
ufc/ml
Bacterias celulolticas, 106 ufc/ml
Bacterias amilolticas, 106 ufc/ml
28.7
19.8
12.8
3.7
20.3
1.6
Bact. proteolticas, 106 ufc/ml

Protozoos totales, 106 cel/ml
43.8
21.8
14.7
17.1
Actividad especfica de las enzimas

celulasas, U activ/mg protena
20.2
248.0
Fuente: Galindo, (1988)

La reduccin de la poblacin de bacterias proteolticas y amilolticas que
produjo la zeolita puede resultar de inters ms an si se tiene en cuenta que
los referidos grupos fisiolgicos se identifican por su actividad. Esto puede
indicar una menor actividad proteoltica y a amiloltica en el rumen. En este
sentido, es lgico pensar que gran parte del almidn y la protena alimenticia
escapa del rumen hacia las parte bajas del tracto digestivo donde son digeridas
por las enzimas especficas.
Se ha informado diferentes resultados en la literatura acerca del efecto de los
complejos minerales en la degradacin de los almidones. Los mecanismos
mediante los cuales se produce esta respuesta son an una incgnita, pero se
sugiere que el incremento en el pH del intestino que produce estas sustancias
conduce a un ambiente ms favorable para la digestin del almidn por las
enzimas-amilasa pancretica Para tratar de identificar si el efecto que produce
la zeolita en la poblacin microbiana se debe al efecto de ella como tal o a los
iones minerales presentes en su micela y que son liberados al medio, se
estudi el efecto de algunos iones minerales componentes de la zeolita en la
actividad microbiana.
Se desarrollaron varios trabajos para comprar el efecto de la zeolita, y los
iones minerales K+, Mg2+ Ca2+ y las combinaciones de K+, Na+ en la
degradabilidad ruminal de la celulosa y rendimiento microbiano
bajo
44
condiciones in vitro. Como resultado se pudo comprobar que la zeolita y todos

los iones minerales componentes de ella que se estudiaron, incrementaron el
rendimiento en biomasa por gramo de celulosa y hemicelulosa fermentadas por
hora. Esto confirma la importancia de la suplementacin mineral para el
crecimiento microbiano.
Se evidenci una vez ms, que la zeolita incrementa la celulolisis ruminal pero
el K+ no fue el in mineral ms importante en estimular la celulolisis ruminal.
En este sentido, se destac la combinacin del Mg2+ y el Ca2+ como los iones
minerales que mayor efecto producen en la digestin de la celulosa.
En la figura 5 se presenta la degradacin de la celulosa que hacen las
bacterias en relacin con la suplementacin mineral efectuada. Cuando se
incluy el Na+ en el medio de fermentacin, la degradacin de la celulosa se
reduce. Esta observacin reviste gran importancia debido a que permite decidir
el tipo de zeolita que debe ser utilizada para suplementar a los animales con el
objetivo de incrementar la celulolisis ruminal. Si la zeolita presenta como in
mvil, preferentemente el Na+, la misma no se debe utilizar para suplementar a
los animales que se encuentran en pastoreo o consumen dietas fibrosas. En tal
caso, se pueden utilizar zeolitas potsicas, clcicas o magnsicas.
60
50
40
30
20
10
0
ensilaje
zeolita
Mg
Na + K
Mg +Ca
Figura 5. Efecto de la zeolita y algunos de sus iones minerales en la

degradabilidad ruminal de la celulosa, % Fuente, Galindo, 1988
Proteccin de las protenas y los almidones

Los rumiantes, al igual que los animales de las especies monogstricas
presentan en las partes bajas del tracto gastro intestinal, enzimas digestivas
capaces de digerir las protenas y los almidones y utilizarlos con una eficiencia
mayor.
Estas son las razones que justifican el hecho de que en los ltimos aos se
trabaja intensamente en la bsqueda de mtodos que atenen en alguna
magnitud la degradabilidad ruminal de las protenas y con ello lograr que las
mismas sobrepasen el rumen y se digieran ms eficientemente en las partes
bajas del tracto gastro intestinal (TGI). Las protena que escapan de la
45
fermentacin ruminal se denominan protena de sobrepaso, sobrepasante o de

by pass.
El esquema siguiente muestra el procedimiento de fermentacin ruminal y
pasaje de la protena a travs del tracto gastro intestinal de rumiantes.
La glucosilacin no enzimtica de protenas, denominada reaccin de Maillard

y ms recientemente llamada glicacin se ha estudiado sistemticamente
desde hace aos, a partir de su aplicacin en la industria alimentaria en el
mejoramiento del aspecto y el sabor de los alimentos.
Por ms de 50 aos, el avance en la comprensin qumica de esta reaccin
estuvo directamente vinculado con la ciencia y la tecnologa alimentarias. Su
relevancia fisiolgica se puso de manifiesto a partir del descubrimiento de
molculas de hemoglobina glucosiladas en la sangre de individuos sanos y del
aumento en su proporcin en personas que padecen diabetes (Koenig et al.,
1976). Desde el punto de vista qumico, la glucosilacin se define como la
reaccin de grupos amino primario de aminocidos, pptido y protenas con el
grupo carbonilo de los azcares reductores. A lo largo de esta reaccin se
pueden distinguir tres etapas: inicialmente se produce la asociacin del azcar
con la protena, formando un compuesto denominado base de Schiff; la
estructura de este compuesto se reordena hacia una forma ms estable,
denominada producto de Amadori. ste, posteriormente sufre una serie de
complejas transformaciones que conducen a la formacin de compuestos
generalmente coloreados y/o fluorescentes.
En condiciones fisiolgicas la aparicin de estos compuestos est determinada
por la concentracin de azcares reductores y por el tiempo de exposicin de la
protena a los mismos (vida media de la protena). En protenas de recambio
rpido, el proceso de glucosilacin no enzimtica no supera, en general, las
etapas iniciales (formacin de la base de Schiff y eventualmente del producto
46
de Amadori), mientras que las de vida media larga llegan a formar los
productos de glucosilacin avanzada.
Tanto la reaccin para la formacin de la base de Schiff, como la de formacin
del producto de Amadori, son reversibles. El hecho de que ambas reacciones
sean reversibles y consecutivas determina que de acuerdo al tiempo de
evolucin del sistema considerado, habr predominio de uno u otro producto.
La interrupcin del contacto de la glucosa con la protena en cualquiera de
estas etapas produce la reversin completa del efecto.
Estos conocimientos sugieren la posibilidad tcnica de que la protena o los
almidones que se protegen del ataque enzimtico ruminal, pueden liberarse en
las partes bajas del tracto gastro intestinal (TGI) como resultado de la accin de
los jugos gstricos y entricos.
El tratamiento trmico y la adicin de azcares reductores disminuyen la
solubilidad de las protenas. Aunque en relacin a la soya sin proteger en todos
los casos hubo un efecto significativo en la solubilidad de la protena. El mayor
efecto se encontr en el tratamiento con xilosa y con la mezcla equimolar de
glucosa y fructosa. Estos resultados conducen hacia la profundizacin de
estos dos tratamientos, para analizar la factibilidad de su uso a una mayor
escala. El tratamiento con xilosa y con la mezcla equimolar de glucosa y
fructosa produjo un efecto depresivo en la actividad de las enzimas proteasas
as como en la actividad especfica de las referidas enzimas. En los
tratamientos con azcares reductores a la protena de la soya, se reduce la
degradacin de la protena en rumen, determinado por la menor concentracin
de amonaco al nivel del rgano.
De la misma manera cuando se utiliz la miel B invertida para provocar la
reaccin, se redujo la solubilidad de la protena y se alcanzaron incrementos
en la degradabilidad de la MS del forraje que se utiliz como dieta base en
todos los casos, siendo superior en el tratamiento donde se protegi la protena
con miel B invertida y diluida al 50%.
La digestibilidad ruminal in situ de la protena se redujo en 18% mediante el
presente procedimiento y la digestibilidad intestinal de las harinas de soya
tratadas con las diferentes mezclas de miel B invertida indican que a pesar de
la proteccin de la protena a nivel ruminal que se produjo con este
procedimiento tecnolgico, la digestin intestinal no se afecta, razones por las
cuales es factible su uso debido a que no se produce una sobreproteccin en el
intestino. De manera que esta tcnica de proteccin posibilita una protena de
by pass, que se libera en las partes bajas del TGI para su digestin intestinal.
El tratamiento a la protena con miel B invertida y calor, redujo hasta el 75% la
poblacin de bacterias proteolticas. Esto demuestra la efectividad del
tratamiento a la protena, lo que hace inaccesible la misma al ataque por las
proteasas microbianas. Efectos sinrgicos entre las bacterias proteolticas y los
hongos celuloliticos se han podido observar en el presente trabajo, al quedar
evidenciado el efecto beneficioso de este tratamiento en la poblacin de
hongos celulolticos. No se encontr efectos de la proteccin de la protena con
47
el presente mtodo, en el pH de lquido ruminal. Las mayores poblaciones de

protozoos se encontraron a las 2 horas despus de iniciada la fermentacin en
el tratamiento donde la soya no se trat (tratamiento control) y a las 4 horas en
aqul en el cual protena de la soya se trat con miel B invertida y calor. Los
ms bajos estuvieron en el tratamiento con miel a la soya a las 2 horas de
fermentacin. Igual efecto se observ a las 24 horas para ambos tratamientos.
Al parecer, no parece que exista un efecto directo del tratamiento a la protena
en la poblacin de protozoos del rumen.
El almidn es el hidrato de carbono ms importante de todos los cereales, as
por ejemplo, constituye aproximadamente el 64 % de la materia seca del grano
completo de trigo y un 70 % de su endospermo. Las molculas de almidn son
macromolculas formadas por una gran cantidad de molculas de glucosa
unidas entre s. La notacin qumica general es (C6H10O5)n donde n es un
nmero grande. Las macromolculas se encuentran bajo dos formas, un
polmero esencialmente lineal de alfa-(l - 4) glucosa que es la amilosa (25
27%) y una estructura unida por ramificaciones alfa-(1 - 6) denominada
amilopectina.
Los almidones que entran al rumen procedente de los alimentos, tambin se
fermentan por los mismos grupos microbianos que degradan la celulosa o por
otros integrantes de la microflora y micro fauna ruminal. Generalmente se
plantea que el almidn que escapa de la fermentacin ruminal se denominan
almidn de sobrepaso, sobrepasante o de by pass.
Numerosos son los mtodos empleados para stos fines. En Cuba, se han
obtenido resultados satisfactorios con el uso del formaldehdo por Coto (1990),
Delgado (1988) para el caso de la proteccin de las protenas. En este mismo
sentido, Galindo et al (2004) demostraron la posibilidad de proteger la protena
de la soya mediante la reaccin de glucosilacin no enzimtica de las protena.
Estos conocimientos hacen posible la utilizacin del formaldehdo y los
azcares reductores para proteger los almidones de la fermentacin ruminal y
sugieren la posibilidad tcnica de que los almidones que se protegen del
ataque enzimtico ruminal, pueden liberarse en las partes bajas del tracto
gastro intestinal (TGI) como resultado de la accin de los jugos gstricos y
entricos.
El tratamiento al almidn contenido en la fuente harina de maz con miel B
invertida y calor, no produce modificaciones significativas en la poblacin de
bacterias viables totales del rumen, en la poblacin total de hongos ni en el pH
del rumen (tabla 20).
De gran importancia significa el efecto del tratamiento al almidn en el nmero
total de bacterias amilolticas. Este efecto significa que el tratamiento trmico
en presencia de miel B invertida a pH bsico, redujo la accesibilidad de las
amilasas microbianas a la molcula de almidn. Se debe destacar que la
tcnica de determinacin de la poblacin de bacterias amilolticas se
fundamenta en la accin de las enzimas bacterianas sobre los enlaces
glucosdicos del almidn, ya que se produce un halo de digestin indicativo de
la amilolisis (figura 6)
48
Tabla 20 Efecto del tratamiento al almidn de maz con miel B invertida

en la poblacin microbiana ruminal
Indicador
Harina de
maz
Harina de
EE
maz
tratada
bacterias viables totales, 1011 ufc/mL
1.59
1.73
0.32
6
Hongos, 10 uft/mL
0.70
0.96
0.26
pH
7.70
7.74
0.08
AGCC, mmo/l
158.93
104.29
9.22***
Para los microorganismos, datos transformados segn ln X, medias originales
entre parntesis
12
10
8
6
4
2
0
1
Figura 6. Efecto del tratamiento al almidn con miel B invertida y calor en

la poblacin de bacterias amilolticas ruminales (10 6 ufc/mL) (1) Harina de
maz; (2) Harina de maz tratada
En la tabla 21 se presentan los resultados acerca del efecto de la proteccin
del almidn de maz con formaldehdo y miel B invertida con el residuo de
destilera del maz en la poblacin de bacterias viables totales y bacterias
amilolticas.
Como se puede apreciar, todos los tratamientos al maz incrementan la
poblacin de bacterias viables totales del rumen. Los mayores conteos se
encontraron en el rumen cuando se incluy el residuo de destilera del grano de
maz. Se debe destacar, que el tratamiento redujo la poblacin de bacterias
amilolticas. La reduccin fue superior cuando se trat el almidn de maz con
formaldehdo y miel B invertida, sin deferencias entre ellas.
Tabla 21. Efecto de diferentes mtodos de proteccin de los almidones en

la poblacin de bacterias viables totales y amilolticas ruminales
Tratamientos
bacterias viables
totales
1011 ufc/ml
Bacterias
amilolticas 106
ufc/ml
49
maz
Maz con formaldehdo
Maz con calor +miel B invertida
Residuo de destilera del grano de maz
EE
20.3
42.48
34.11
50.71
6.15***
18.3
4.51
4.93
6.3
0.97***
La metanognesis ruminal. Medida de atenuacin

La metanognesis es un componente importante del ciclo del carbono en la
naturaleza. Este proceso tiene lugar en una amplia gama de hbitat anaerobios
y es llevado a cabo por un pequeo pero nico grupo de bacterias
denominadas metanognicas. Ellas pueden ser encontradas en pantanos,
sedimentos marinos, reactores anaerobios y tambin en el tracto digestivo de
animales, como es el caso del intestino de algunos monogstricos y el rumen.
Los rumiantes son responsables de alrededor del 23% de la produccin de
metano global. Esto es una consecuencia inevitable de la fermentacin de los
carbohidratos en el rumen. El gas se emite a la atmsfera mediante la
eructacin y la cantidad liberada depende del volumen de alimento consumido
y de la composicin de la racin, siendo menor en dietas bajas en fibra (Gil
2004).
El proceso de formacin de metano en el rumen posee ciertas particularidades,
determinadas por las caractersticas fisiolgicas de este rgano, que lo
distingue de la metanognesis en otros hbitat (Zinder 1992). Las bacterias
metanognicas ruminales forman parte de un consorcio de microorganismos,
que llevan a cabo la degradacin de los alimentos, utilizando los productos
finales de la hidrlisis de los polmeros para la formacin de metano.
Formacin de metano
El mecanismo exacto para la formacin de metano no ha sido determinado
pero es objeto de intensas investigaciones. Evidentemente, esta es una va
metablica nica, en la cual el paso principal en el aporte de energa esta
asociado a la reduccin del grupo metilo a metano. Todos los metangenos
comparten estas reacciones bioqumicas, aunque los electrones para el paso
reductivo pueden ser obtenidos por la oxidacin de H2, formiato, metanol,
metilaminas o acetato, en dependencia del sustrato y las especies (Mackie et
al. 1992).
La reduccin del dixido de carbono ocurre por un nuevo ciclo en el que el
grupo C1 es pasado, unido a una coenzima, mientras que ste se reduce
secuencialmente a travs de etapas formil, metenil, metilen y metil a metano. El
primer producto estable de la fijacin de CO2 es el formil-metanofurano (CHOMFR). El grupo formilo se transfiere entonces, por la formilmetanofurano:tetrahidrometanopterina
formiltransferasa
a
la
tetrahidrometanopterina (H4MPT), una pterina nica de los metangenos. El
50
hecho de que el metanofurano y la tetrahidrometanopterina sirvieran como

transportadores de grupo C1 en la reduccin del CO2, fue sugerido por Jones et
al. (1987). El grupo formilo se convierte prximamente a grupo metenil por la
enzima 5,10-metenil-tetrahidrometanopterina ciclohidrolasa. El deazaflavin,
coenzima F420, reducido, dona los electrones para la reduccin del doble enlace
del grupo metenil, formndose un grupo metilen en una reaccin catalizada por
la enzima metilen-tetrahidrometanopterina:coenzima F420 oxireductasa. El
grupo metilen se transforma a metil. Seguidamente el grupo metilo se transfiere
a la CoM y finalmente tiene lugar la reduccin de la metil-CoM a metano,
reaccin que cataliza la enzima metil CoM reductasa (Mackie et al. 1992 y
Thauer et al. 1993). La reaccin terminal resulta en la activacin de la sntesis
del formil MFR y completa el ciclo (Mackie et al. 1992).
Produccin de metano en el rumen
La principal diferencia entre la produccin de metano en el rumen y otros
sistemas anaerobios es que los rumiantes degluten suficiente saliva y agua, de
forma tal, que el tiempo de retencin es menor de un da. Este corto tiempo de
retencin no permite el crecimiento de organismos consumidores de cido de
crecimiento lento: acetogenos productores de H2 (oxidan sustratos como
etanol, butirato o propionato y disponen de electrones por reduccin de H+ a
H2) y metangenos acetotrficos (metangenos capaces de descarboxilar
acetato a CH4 y CO2). Por tanto, los cidos grasos de cadena corta como el
acetato, propionato y butirato, no se utilizan como sustrato para la
metanognesis ruminal (Zinder 1992). Estos compuestos son absorbidos como
nutrientes por el animal.
Como consecuencia de lo anterior, en el rumen, la mayora del metano se
sintetiza a partir de H2 y CO2, otros sustratos potenciales pueden ser formiato,
metilaminas y metanol de la demetilacin de polmeros de plantas (Zinder
1992, Mackie et al. 1992). Para muchas bacterias metanognicas el H2 y CO2
son los nicos sustratos que pueden utilizar. El H2 que los metangenos usan
en la naturaleza, es generalmente un producto del metabolismo de la materia
orgnica de otros anaerobios incluyendo bacterias, hongos y protozoos.
Cultivos puros de estos microorganismos producen H2 de la oxidacin de
piruvato a acetil-CoA y CO2. El formiato se considera un transportador esencial
de electrones. Estos electrones se separan del formiato por la enzima formiato
deshidrogenasa y se usan para reducir CO2 a CH4 (Zinder 1992):
HCOOH CO2 + 2H+
4 H2 + HCO3- + H+ CH4 + 3H2O
Sin embargo, no es sorprendente que muchos de los metangenos que utilizan
H2 para reducir CO2 a CH4 pueden tambin utilizar formiato y entonces crecen
en tasas similares en los dos sustratos. El formiato se forma como producto de
la fermentacin por varios anaerobios facultativos como Escherichia coli que
desdobla el piruvato en acetil CoA y formiato, aunque este ltimo se convierte
en ocasiones en H2 y CO2 por la formiato hidrgeno liasa (Zinder 1992).
51
Las bacterias metanognicas del gnero Methanosarcina, pueden utilizar el

metanol y las metilaminas como sustratos para la metanognesis. El metanol
proviene de la demetilacin de azcares metiladas como la pectina y otros
compuestos como los fenoles metilados, componentes de la lignina. Las
metilaminas son ms comunes en los sistemas naturales (Zinder 1992).
La conversin anaerbica de materia orgnica a CH4, en el rumen involucra un
consorcio de microorganismos donde los metangenos intervienen en el paso
final. Primeramente las bacterias, hongos y protozoos hidrolizan las protenas,
polisacridos y lpidos para producir aminocidos y azcares, y fermentan
estos ltimos a cidos grasos de cadena corta, H2 y CO2. El CH4 se forma
entonces por los metangenos ruminales, usando H2 (80 %) y el formiato (18
%) como sustratos (Bryant 1979 y Demeyer y Fievez 2000).
La produccin de metano en el rumen tiene un efecto significativo en los
productos finales de la fermentacin. Las bajas presiones parciales de
hidrgeno creadas por los metangenos causan un cambio termodinmico en
la produccin de este elemento por los microorganismos fermentativos en un
proceso de transferencia interespecfica de hidrgeno lo que resulta en la
produccin de H2 y acetato como principales intermediarios del consorcio
(Bryant 1979, Russell y Wallace 1988). Sin embargo cuando las
concentraciones de hidrgeno se incrementan producto de un acortamiento en
el tiempo de retencin (incrementando la tasa de dilucin) o sobrecargando el
sistema con materia orgnica de fcil degradacin, los electrones del NADH
generados en la fermentacin se utilizan en el catabolismo del piruvato a
productos reducidos especialmente propionato ms que acetato, CO2 y H2. Se
incrementan tambin el cido butrico, el valrico y el caproico, y en casos ms
extremos, se puede ver una formacin significativa de otros productos
reducidos como etanol y lactato. En un sistema metanognico que opera
eficientemente, en el cual las presiones parciales de H2 se mantienen a muy
bajos niveles, la mayora de los carbohidratos se fermentan va formacin de
acetato, CO2 y H2 y sin mayores producciones de otros cidos grasos (Wolin y
Miller 1988). Un ejemplo de los anterior lo constituye la influencia de los
metangenos en la fermentacin de la celulosa por Ruminococcus albus. Esta
bacteria produce etanol, acetato, H2, CO2 y en ocasiones formiato, en cultivo
puro; sin embargo, en el rumen al crecer junto a metangenos que utilizan
rpidamente el H2, no se produce etanol (Wolin y Millar 1988).
Los metangenos pueden establecer una relacin mutualista con protozoos
anaerobios, muchos de estos ltimos producen H2 como producto final del
metabolismo y contienen organelos llamados hidrogenosomas, los cuales
convierten piruvato a acetil CoA, CO2 y H2. Esta simbiosis se descubri
mediante microscopa de fluorescencia. Muchos metangenos contienen altas
cantidades del transportador de electrones fluorescente, cofactor F420, que
causa la fluorescencia azul verdosa de las clulas cuando se iluminan con luz
cercana a los 420 nm, al observarse bajo un microscopio epifluorescente. Las
bacterias azul-verdosas fluorescentes, es decir metangenos, pueden aparecer
adheridos a la superficie de los protozoos del rumen o en su interior como
endosimbionte. En algunos casos, el endosimbionte metangeno ha sido
aislado del protozoo, confirmndose su identidad. Se cree que la interaccin
52
entre los protozoos y los metangenos se parece a la transferencia de

electrones interespecie, ya que permite al protozoo disponer de sus electrones
como H2 (Zinder 1992).
Control de la metanognesis ruminal

Ms del 10% de la energa bruta en el alimento se pierde en forma de metano.
Adems la produccin de metano por los microorganismos del rumen es
estimada en 300-600 L al ao en ganado adulto, lo que representa
aproximadamente 80 000 000 T al ao (Jouany 1994) y representa alrededor
del 23% de la produccin de metano total. Este gas es uno de los que ms
contribuye al efecto invernadero, siendo responsable del 18% del fenmeno
(Johnson et al. 1991). Por estas razones muchas investigaciones se dirigen a
encontrar vas para reducir la emisin de metano por los rumiantes.
En los rumiantes la produccin de metano se afecta por una variedad de
factores dietarios y microbianos. Se conoce que muchos agentes qumicos son
capaces de inhibir la produccin de metano (Itabashi et al., 2000). Varios
autores han probado la adicin de compuestos halogenados homlogos del
metano, y han resultado efectivos. Entre estos compuestos se encuentran el
hidrato de cloral (1-4 g/d/carnero), los derivados de cido 2,4-bis
(triclorometil)benzo[1,3]dioxin-6-carboxlicos, que han sido reportados como
potentes inhibidores de metano (Davies et al. 1982). Otro inhibidor muy
especfico es el cido 2-bromoetanosulfnico (BES), un sustituto de la
coenzima F (Wolfe 1982 y Martin y Macy 1985). En la dcada del noventa se
encontr un nuevo compuesto, un complejo de bromo-clorometano y ciclodextrina, que inhiba la produccin de metano en el rumen
significativamente (Itabashi et al. 2000). Algunos de estos productos han sido
empleados en animales en produccin. Se observaron efectos beneficiosos
cuando se alimentaron los animales con dietas ricas en forrajes, que producen
grandes cantidades de metano (Davies 1982). Los microorganismos del rumen
se pueden adaptar a estos aditivos, los cuales son capaces de degradar
despus de alrededor de un mes de tratamiento (Chalupa 1980). Solo el
cloroformo es capaz de resistir, pero por otras razones (volatilidad, toxicidad),
es difcil de usar.
En Cuba se han desarrollado estudios con la inclusin de BES. En los mismos
se ha demostrado que no se produce efectos en la poblacin de bacterias
viables totales, celulolticas y protozoos del rumen. (Tabla 22)
Tabla 22. Efecto del BES en la poblacin de microorganismos del rumen
Indicador
Bacterias viables totales,
1011 ufc/ml
Bacterias celulolticas, 106
(ufc/ml)
Conteos
alfalfa
2.30
(10.47)
3.34
(34.85)
Alfalfa + BES
2.24
(10.42)
2.65
(15.33)
EE Signif
0.19
0.22
53
Protozoos, 102 clulas/ml
3.30
3.51
0.37
(32.33)
(44.3)
ufc- unidades formadoras de colonias, uft- unidades formadoras de talo
bact.
metanognicas
La utilizacin del BES redujo a la mitad la poblacin de metangenos (figura 7 )

as como tambin la produccin de metano (figura 8 ) lo que es indicativo de
que ste producto se puede utilizar para el control de las poblaciones
metanognicas y consecuentemente, la metanognesis ruminal ya que no
modifican el resto de las poblaciones ruminales.
40
30
20
10
0
sin BES
con BES
Figura. 7. Efecto del BES en la poblacin de bacterias metanognicas del

rumen bajo condiciones in vitro
Produccin de metano (ml)
sin BES
con BES
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
0
12
24
Horas de fermentacin
Figura 8. Efecto del cido bromoetano sulfnico (BES) en la produccin

de metano ruminal en condiciones in vitro
Los compuestos halogenados y otros como sulfitos, nitratos y cidos grasos de
cadena larga tienen un efecto txico directo en las bacterias metanognicas
(Prins et al. 1972, Sparling y Daniels, 1987). El efecto observado no se limit a la
produccin de metano. Cuando el inhibidor de metano tiene un efecto txico en
bacterias metanognicas, el hidrgeno acumulado en el rumen disminuye la tasa
de fermentacin, especialmente la degradacin de la pared celular de la planta y
la protenas, y la sntesis de protena microbiana se inhibe parcialmente. Esto
confirma el papel esencial de los metangenos en el mantenimiento de una baja
54
presin parcial de hidrgeno, lo que posibilita que la fermentacin contine

(Russell y Martin 1984, Hino y Russell 1985). Cuando se acumula hidrgeno, la
formacin de H2 a partir de NADH es inhibida; el NADH formado durante la
gliclisis no puede reoxidarse y consecuentemente se afectan los procesos
fermentativos. Esto explica la baja desaminacin de aminocidos, en particular
aquellos de cadena ramificada, que se observa cuando se inhibe la produccin de
metano (Hino y Russell 1985). As, en la mayora de los casos, la inhibicin de
metano se acompaa frecuentemente por un incremento en la produccin de
propionato y butirato.
Tambin los lpidos han sido considerados por algunos autores como inhibidores
de metano (Jouany 1994 y McAllister et al. 1996). La adicin de grandes
cantidades de lpidos a la dieta (ms del 10%) disminuye la produccin de
metano asociado a una disminucin del porciento molar de actico y butrico y un
aumento en la proporcin de propinico (Jouany 1994). Esta adicin de grasas o
aceites, adems de incorporar energa, tienen efecto txico sobre las bacterias
metanognicas y con este fin se pueden utilizar aceite de coco, de canola (Gil
2004). La adicin de 6.7 % de aceite de linaza a la dieta de carneros produjo el
doble de propionato (en base al porciento molar) en la mezcla de AGV (Ikwuegbu
y Sutton 1982). Correlativamente, la produccin de metano decrece
grandemente. Czerkawski et al. (1966) notaron una disminucin de 25% en
metano despus de 5% suplementacin de aceite de linaza en la dieta de
carneros.
Otras sustancias muy utilizadas en los ltimos aos, en la inhibicin de la
metanognesis, son los antibiticos ionforos (Dong et al. 1999, Bagg et al. 2000
y Buchko et al. 2000). Estos compuestos incrementan significativamente la
produccin de propionato (+ 25% de la proporcin molar de propionato) a
expensas de la produccin de acetato y butirato (Jouany 1994) y disminuyen la
liberacin de hidrgeno de ciertos compuestos como el formiato (Gil 2004). En
correlacin, disminuyen la produccin de metano. Dentro de los ionforos se han
puesto en prctica especialmente el monensn y el lasalocid. El primero es un
antibitico polieter carboxlico producido por Streptomyces cinnamonesis.
Adems de incrementar la proporcin molar de de propionato en el rumen, este
compuesto, es capaz de inhibir el crecimiento de bacterias metanognicas (Van
Nevel y Demeyer 1988). Galindo et al. (2003) encontraron que la inclusin de
monensn, en tres dietas diferentes, redujo la concentracin de metano en el
lquido de rumen y la poblacin de bacterias metanognicas y celuloltica. Estos
autores no encontraron modificaciones significativas en el patrn de fermentacin
ruminal ni en la relacin actico-propinico. Sin embargo, la respuesta al
monensn es contradictoria, lo que limita su aplicacin. La adicin de este
antibitico reduce la poblacin de bacterias celulolticas en el rumen de los
animales, as como la degradabilidad de la materia orgnica, la celulosa y la
hemicelulosa (Dong et al. 1999). El lasalocid es otro ionforo carboxlico
producido por Streptomyces lasaliensis, en experimentos in vitro increment la
produccin de propionato y disminuy la produccin de metano (Van Nevel y
Demeyer 1988). De manera general, estos antibiticos no son de larga duracin,
posiblemente por aparicin de resistencia en las bacterias metanognicas. Habra
que rotar entre distintas drogas ionforas (Gil 2004).
55
Los antibiticos ionforos, constituyen aditivos que se utilizan con el fin de

manipular la fermentacin microbiana ruminal. Entre ellos el Monensn es uno de
los ms conocidos y se utiliz, primeramente, como un coccidiosttico en aves
de corral. Provee un beneficio econmico desde el punto de vista de la eficiencia
de alimentacin y propicia una mejora del 7.5.
Se ha identificado que otros ionforos proveen beneficios similares, entre ellos,
Lasalocid, Salinomicin, Lisocelin, Narasin, Tetronasin, y Ovoparcin. El modo de
accin de estos compuestos provoc mucho inters e investigacin y la
toxicidad surge de su capacidad de traslocar iones a travs de membranas
biolgicas y consecuentemente desorganiza los gradientes inicos a travs de
las membranas.
No todos los microorganismos se afectan por la accin de los ionforos. As por
ejemplo, el Monensn y otros similares inhiben a las bacterias Gram positivas (+)
ms que a las bacterias Gram negativas (-). Esta selectividad es el principal
efecto que permite su utilizacin para manipular, y depende de la permeabilidad
de la envoltura celular o pared celular y otra membrana exterior en las bacterias
Gram negativas y pared celular en las bacterias Gram positivas.
El efecto de los ionforos en la fermentacin, consiste en producir cambios en
la estequiometra de la fermentacin y el flujo de protena del rumen, como
consecuencia directa de la accin selectiva sobre determinados
microorganismos. Algunos autores han sugerido que se producen cambios en la
tasa de produccin de propionato y que su efecto en la digestin intestinal fue
menor. No obstante, se han encontrado cambios en la concentracin plasmtica
de glucosa posterior a la infusin de monensn en el duodeno, lo cual de
ninguna manera se puede atribuir a las alteraciones ruminales en los perfiles de
AGCC. Es bien conocido que este antibitico afecta la clula del mamfero as
como a la membrana microbiana.
El antibitico Ovoparcn, tiene un espectro similar de actividad antibacterial pero
destruye clulas sensibles debido al bloqueo en la sntesis de pared celular. Por
lo tanto, la toxicidad y selectividad son mecanismos diferentes, aunque ambos
tienen una gran eficacia.
Los protozoarios y los hongos son tambin sensibles a los ionforos en diferentes
grados pero no se han dilucidado los mecanismos de accin.
Galindo et al, (2004b) al utilizar Monensn para manipular la poblacin de
bacterias metanognicas, celulolticas y reducir la metanognesis ruminal in
vitro en tres sistemas ecolgicos ruminales, encontraron que se reduca la
concentracin de metano en el lquido de rumen cuando se incluy a razn de
1.33 g/l. La poblacin de bacterias metanognicas se redujo a de la
poblacin inicial y las celulolticas entre 3 y 5 veces para las dietas de caa
biofermentada (Saccharina) y forraje de pasto estrella, respectivamente. (tabla
23). En stos trabajos se hall que el monensn redujo la actividad especfica
de las enzimas celulasas en el rumen, desde 0.2 x 10-2 a 0.09 x 10-2 unidades de
actividad/ mg de protena, as como la produccin de metano en le rumen (tabla
24).
56
Tabla 23. Efecto del Monensn en la poblacin de bacterias viables totales,

celulolticas y metanognicas del rumen
Tratamientos
Bacterias totales
viables, 10-9ufc/ml
Saccharina + monensn
3.03
Forraje + monensn
2.94
Almidn + monensn
4.53
Saccharina
3.82
Forraje
3.94
Almidn
5.87
Bacterias
metanognicas,
10-6/ml
2.08
2.03
2.29
3.92
4.48
4.09
Bacterias
celulolticas
10-6/ml
0.66
0.89
0.44
3.33
3.11
0.78
Tabla 24. Efecto del Monensn en la cantidad de metano producido en el

rumen
Medida
Volumen de CH4 producido, ml
Produccin de CH4(moles x 10-3)
Prdidas ( CH4/ Energa Total,%)
S+M
8.93d
0.35d
0.49 d
F+M
4.49e
0.18e
0.26e
A +M
3.66e
0.14e
0.21e
S
48.34a
1.9 a
2.65 a
F
35.0b
1.4 b
2.10 b
A
15.62c
0.62 c
0.89 c
Se conoce que diferentes bacterias metanognicas, tales como

Methanobacterium bryantii, Methanobacterium formicicum y Metanosarcina
barkeri, son Gram +. Al respecto, Buchko, et al, (2000) efectuaron un estudio
acerca de la super vivencia de Escherichia coli, bacteria Gram cuando se
suplementa con 0, 5, 15, 25 o 50 mg/l de monensn y demostraron que la cepa
ATCC25992 es resistente, mientras que una cepa nativa solamente es sensible a
dosis de 50 mg/l despus de 24 horas de fermentacin. Esto indica su efecto
selectivo al tiempo que orienta hacia la bsqueda de niveles adecuados.
Por otra parte, se conoce que numerosas bacterias celulolticas, tales como
Ruminococcus albus, Ruminococcus flavefaciens, Clostridium cellobiosparum,
Clostridium lockheadii y Micromonospora ruminantium son Gram +. Es posible
que el monensn ejerza efecto depresivo sobre estos grupos microbianos, por lo
que la poblacin de bacterias celulolticas es menor cuando el mismo se utiliza
como aditivo.
Algunos autores han estudiado el efecto de la adicin de cido fumrico en la
produccin de metano (Asanuma et al. 1998 y Itabashi et al. 2000). Itabashi et al.
(2000) demostraron que la suplementacin con 2% de cido fumrico disminuy
la emisin de metano e increment la proporcin molar de propinico. Estos
autores no encontraron afectaciones en los conteos de protozoo, las
concentraciones de amonio y la digestibilidad aparente de la fibra. En un
segundo experimento con una dieta diferente, la produccin de metano se redujo
en slo un 3%. Esto sugiere que el cido fumrico puede ser un aceptor de
electrones alternativo, que causa disminucin en la produccin de metano y
57
aumento en la produccin de propionato, y que esto depende de las condiciones

dietarias.
Los compuestos pertenecientes a la familia de los diariliodonio que inhiben la
proteolisis o la deaminacin ruminal, pueden tambin, causar una disminucin en
la metanognesis durante la fermentacin de la protena sin cambiar las
proporciones de propionato (Chalupa et al. 1983). Con la adicin de estas
sustancias la concentracin de hidrgeno libre no cambia, por lo que se piensa
que acten en los precursores de metano ms que en
las bacterias
metanognicas.
La adicin de compuestos qumicos para reducir la metanognesis, a pesar de sus
efectos demostrados tanto en condiciones in vitro como in vivo y de su empleo a
nivel global, no resulta una prctica econmicamente viable en pases en
desarrollo. En estos casos es ms apropiado utilizar la suplementacin estratgica
y prcticas de manejo dirigidas a desviar la fermentacin hacia la produccin de
propionato sin afectar la produccin de los rumiantes. Las investigaciones
desarrolladas en este campo confirman que los cidos grasos libres,
particularmente los insaturados de cadena larga, inhiben la metanognesis. Por
otro lado, las prcticas de alimentacin que aumenten el consumo y la velocidad de
digestin o acorten la estancia de los alimentos en el rumen disminuyen la
produccin de metano por unidad de forraje digerido. La utilizacin de sustancias
con poder defaunante puede ser otra va de disminuir los metangenos, ya que
stos se adhieren directamente a los protozoos y cohabitan simbiticamente, lo
que facilita la transferencia de H2 entre especies (Moss 1992, Mc Allister et al.
1996)
Manipulacin de la dieta para controlar la metanognesis ruminal
Los mtodos que se han utilizado para el control de la produccin de metano
en el rumen no se ajustan, desde el punto de vista econmico, a las
condiciones actuales de explotacin ganadera en Cuba. Por ello se ha hecho
necesario la bsqueda de mtodos ms sencillos y adaptados a las
condiciones de que se dispone. El empleo de una estrategia de suplementacin
con productos activadores de la poblacin microbiana ruminal, que reduzcan
las poblaciones de metangenos ha resultado viable. En tal sentido Galindo et
al (2005) evaluaron el efecto de incluir 0, 20, 25 y 30% de un activador con
ncleo activo de Leucaena leucocephala como suplemento de una dieta bsica
de pasto estrella (Cynodon nlenfuensis).
Encontraron que el activador increment la poblacin de bacterias celulolticas
en relacin al tratamiento control sin suplementar y la mejor respuesta se
observ cuando se utiliz 20 y 30% del mismo en la dieta (Tabla25 ). Por su
parte, los hongos celulolticos incrementaron su poblacin cuando se incluy el
activador en todas las variantes empleadas, sin diferencias entre las mismas
58
Tabla 25. Efecto del nivel de activador de la fermentacin microbiana

ruminal en la poblacin de bacterias viables total y organismos
celulolticos en dietas fibrosas de baja calidad
Indicador
Bacterias viables totales, 1012
ufc/ml
Bacterias celulolticas, 107
ufc/ml
Hongos celulolticos, 105 uft/ml
0
3.00bc
20
3.75a
25
3.24b
30
2.93c
EE
0.30*
1.96c
2.67a
2.52b
2.64a
0.16**
0.73b
1.25a
1.33a
1.50a
0.21*
Ufc- unidades formadoras de colonias, uft- unidades formadoras de talo

Datos transformados segn Ln X, a, b, c medias con letras diferentes dentro de la
misma fila, difieren a p<0.05 (Duncan, 1955)
Bacterias Metanognicas,Ln
La figura 9 muestra el efecto del producto activador de la fermentacin microbiana

ruminal en la poblacin de bacterias metanognicas ruminales. El nivel de inclusin
de 20% del activador no produjo modificaciones en la poblacin de bacterias
metanognicas. Sin embargo, valores de inclusin de 25 y 30%, reducen de manera
significativa el nmero total de metangenos en el rumen. Los valores de las medias
de bacterias metanognicas fueron de 34.46; 33.44; 16.11 y 12.93 x 107 ufc/mL para
los tratamientos con 0, 20, 25 Y 30% de activador, respectivamente
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0
1
Nivel
del Activador,
0
20 %
4
25
30
Figura 9. Efecto del nivel de un producto activador de la fermentacin

microbiana en la poblacin de bacterias metanognicas ruminales (Ln)
59
En la tabla 26 se presenta el efecto del nivel del activador de la fermentacin

microbiana ruminal y el tiempo de fermentacin en la poblacin de protozoos
totales del rumen. Las poblaciones de estos grupos microbianos se encontraron
entre 1.50 -6.00 x 105 clulas/mL en el rumen bajo las condiciones experimentales
desarrolladas.
Antes de iniciar la fermentacin (hora 0), se encontraron las mayores poblaciones
de protozoos en el tratamiento control y aqul en el cual se incluy 20% del
activador (5.13 y 6.00 x 105 clulas/mL, respectivamente). Con la inclusin de 25 y
30% del suplemento se observ, casi de manera inmediata decrecimientos en las
poblaciones de infusorios. Este decrecimiento se mantuvo en igual magnitud en
todos los muestreos correspondientes a los diferentes tiempos despus de
iniciada la fermentacin y con todos los tratamientos, lo que pudiera indicar que
las condiciones de cultivo in vitro que se emplearon, deprimen esta poblacin
microbiana independientemente a la dieta experimental. Sin embargo, a las 12
horas con los niveles de inclusin de 25 y 30% se observ una recuperacin.
Tabla 26. Efecto del nivel de activador y el tiempo de fermentacin en la poblacin

de protozoos del rumen en dietas fibrosas de baja calidad 105 clulas/mL)
nivel de activador
20
25
30
1.48cd
1.82 d
0.18 a
0.98 abcd
1.04 abcd
0.47 ab
0.50 ab
0.63 abc
abc
abc
abc
abc
Tiempo, h
0
EE
0.27**
12
0.65
0.32 a
0.71
0.79 abc
0.61
1.26 bcd
0.94
0.84 abc
Datos transformados segn Ln X, a, b, c medias con letras diferentes, difieren a

p<0.05 (Duncan, 1955)
Los resultados que se obtuvieron en este trabajo demuestran que es posible
utilizar tcnicas manipuladoras de la fermentacin microbiana ruminal con el
propsito de modificar las poblaciones microbiana, entre ellas la de metangenos
y que no se comprometa la microbiota responsable de fermentar la fibra y
coincide con reportes de Chung (1972, 1976); Dowson y Boling (1984) los que
indicaron la existencia de interrelaciones entre las bacterias celulolticas y las
metanognicas al nivel del rumen. Al respecto, Galindo (2001) seal que la
fermentacin completa de la celulosa hasta productos asimilables por los
animales, se efecta por una poblacin mixta integrada por microorganismos
celulolticos puros; especies microbianas que fermentan los glcidos producidos
por la hidrlisis de la celulosa; especies que degradan los compuestos como
cido succnico y cido frmico y bacterias metanognicas. Estas utilizan el
hidrogeno metablico o el formiato para la produccin de CH4.
60
De gran importancia es el incremento que se encontr en la poblacin de

bacterias celulolticas, razones por las cuales se puede plantear que el producto
formulado con el propsito de activar la fermentacin microbiana ruminal y reducir
los metangenos, es efectivo y puede contribuir a la optimizacin en la
utilizacin de la fibra en el rumen,dado a que se debe esperar una mayor
degradabilidad de la FDN.
Estos resultados comunican que la poblacin de bacterias metanognicas en el
rumen cuando se utilizan dietas fibrosas de baja calidad y suplementadas con
un producto activador de la fermentacin microbiana ruminal, que contiene
leguminosas, se encuentra en el orden de 107 ufc/mL. Al respecto, Loyley et al.,
1984 report en animales alimentados con dietas ricas en concentrado
poblaciones de 107-108 metangenos ruminales por gramo. Sin embargo en
dietas basadas en gramneas se observan 109-1010 metangenos ruminales por
gramo (Joblin 2004).
Es evidente que mtodos sencillos, como son, la suplementacin con
leguminosas, pueden ser capaces de producir resultados alentadores. Las
leguminosas constituyen una fuente valiosa de protenas, ricas en aminocidos,
minerales y vitaminas, las que son altamente requeridas
por los
microorganismos celulolticos para su crecimiento y actividad enzimtica. La
respuesta a la suplementacin con leguminosas es, de hecho, mucho mayor que
cuando se utiliz (Galindo et al 2002).
Uso de cidos orgnicos

El uso de cidos orgnicos tales como el mlico y el fumrico es otra va
mediante la cual se puede modificar la fermentacin microbiana ruminal. Estos
cidos estimulan el crecimiento de Selenomonas ruminantium, lo que puede
resultar de gran importancia en sistemas de alimentacin que se sustentan en
altos niveles de concentrados. Se conoce que esta bacteria es capaz de
metabolizar el cido lctico y producir actico y propinico, adems de
metabolizar el cido mlico y el fumrico hasta propinico, lo que previene el
descenso del pH del rumen bajo estas condiciones.
El efecto que produce la inclusin de los cidos orgnicos como manipuladores
de la fermentacin ruminal, tales como, aumento de la produccin de cido
propinico, disminucin de la concentracin de cido lctico, estabilizacin del
pH ruminal y disminucin de la produccin de metano son similares a los que se
obtienen cuando se utilizan antibiticos ionforos. Sin embargo, las respuestas
productivas de los animales no son consistentes y no se han informado,
definitivamente, las dosis ms adecuadas. Su principal inconveniente es su
elevado costo y dificultades con el manejo
Defaunacin.
La defaunacin es una prctica ventajosa para manipular los microorganismos
del rumen de animales que se alimentan con dietas de bajo valor proteico y se
sustenta en el conocimiento de que los protozoos tienen altos requerimientos de
61
protena para su mantenimiento. Esta prctica causa un incremento en el nmero

total de bacterias y hongos en el rumen porque los protozoos engolfan bacterias
y zoosporas de hongos, las que utilizan como fuente de nitrgeno y cidos
nucleicos. Los niveles de amoniaco ruminal disminuyen con la defaunacin y la
actividad deaminasa de la poblacin microbiana se incrementa en presencia de
los protozoos.
Se ha podido conocer que la cantidad de bacterias que puede engolfar un
protozoo se encuentra en el rango de 130 a 21200 bacteria/protozoo/hora para
una densidad poblacional de 109 clulas/ml. Esto equivale a calcular que los
protozoos son capaces de consumir aproximadamente entre 2.4-45 g de
bacterias /da.
Los estudios que se han realizado acerca de las interacciones microbianas en el
ecosistema ruminal, han evidenciado que los protozoos ruminales ejercen su
efecto depredador sobre las poblaciones de bacterias en forma selectiva. De sta
forma, por ejemplo, los pertenecientes al gnero Entodinium y otras especies de
protozoos de gran tamao consumen, preferentemente, bacterias celulolticas a
pH ruminales cercanos a 6.
Los protozoos, tambin ejercen efecto depredador sobre las zoosporas de los
hongos celulolticos del rumen, las utilizan como una fuente adicional de protena
para sus procesos metablicos lo que reduce, notablemente, la poblacin de
hongos. Este grupo microbiano es de gran importancia, debido a que es
responsable de aproximadamente el 60% de degradacin de las paredes
celulares de los vegetales, lo que se sustenta en que pueden penetrar a travs de
los poros y reas daadas a lugares que son inaccesibles a las bacterias, como
resultado de que colonizan y segregan una potente maquinaria enzimtica.
Esta informacin posibilita comprender que cualquier factor que deprima la
poblacin de protozoos puede propiciar incrementos en la poblacin de bacterias
celulolticas as como en los hongos celulolticos ruminales, y como resultado, se
debe esperar una mayor degradacin de la fraccin fibrosa por los rumiantes.
Se han utilizado varios mtodos con fines defaunantes, pero en general, han
resultado muy costosos. La utilizacin de plantas como rboles y arbustos de
leguminosas se presenta como un mtodo promisorio para la manipulacin de la
poblacin protozoaria. Estos vegetales presentan en su composicin qumica
metabolitos secundarios, los que constituyen una forma de defensa de los
mismos a las condiciones de estrs ambiental.
La importancia del empleo de diferentes plantas como estrategia para manipular
la poblacin protozoaria ruminal e incrementar selectivamente otros grupos
microbianos, fundamentalmente los celulolticos qued comprobado los trabajos
que se presentan. La magnitud de la reduccin en la poblacin total de protozoos
est comprendida entre 4 y 17.79 veces con relacin a los animales que no
reciben rboles y arbustos de leguminosas como suplemento, lo cual es de
significacin. Es evidente que la reduccin en la poblacin protozoaria produce
62
incrementos en la poblacin total de bacterias y en las especies de organismos

celulolticos.
La reduccin en la poblacin de protozoos que producen stas plantas al nivel de
rumen, reviste una gran importancia desde el punto de vista de vista que
posibilitan una mejor eficiencia de utilizacin de los alimentos ya que se mejora la
relacin energa / protena.
En estos trabajos se demostr que la poblacin de protozoos y el nmero de
zoosporas de hongos se encuentran inversamente correlacionadas y la ecuacin
que relaciona stas actividades es la siguiente: Y= 0.8210 3.415 X + 4.311 X2;
R2=0.7***
Para ilustrar las aseveraciones anteriormente sealadas, se presenta a
continuacin y en forma muy resumida la informacin que se obtuvo al evaluar
el efecto de diferentes plantas en la ecologa microbiana del rumen.
Gliricidia sepium
La suplementacin con 15 y 30 % de la MS como G. sepium en la dieta para

rumiantes, produce un marcado efecto defaunante, al tiempo que propicia una
mayor poblacin de bacterias y hongos celulolticos ruminales, lo cual puede
incrementar la celulolisis ruminal, la degradacin de la fraccin fibrosa y,
consecuentemente, el consumo de los animales (tabla 27 ).
Tabla 27. Efecto de 15 y 30 % de Gliricidia sepium en la poblacin

microbiana y parmetros fermentativos
medidas
Bacterias viables totales, 1011ufc/ml
0
70.791
6.31a
Nivel de G. sepium
15
30
79.43
26.92
7.94a
13.90b
EE
0.42
0.14*
63
Hongos celulolticos, 106uft/ml

Protozoos, 105 cel/ml
AGCC, mmol/ml
cido actico, mmol/ml
cido propinico, mmol/ml
cido butrico
Fuente: Galindo et al 2004
7.41a
45.71c
101.89
74.99
12.23
9.61
8.34a
11.22b
103.64
78.08
16.36
9.20
15.53b 0.29*
2.57a 0.09***
110.42 5.04
82.40
3.86
13.68
2.11
10.76
0.72
Enterolobium cyclocarpum
Esta planta produce incrementos en la poblacin de hongos celulolticos

ruminales cuando se incluy a razn de 15 y 20 % del consumo de MS. El
nmero y la actividad de organismos celulolticos totales y bacterias viables
totales, son mayores cuando se suplementa con esta planta, aunque la misma
no ejerce efectos defaunantes, al menos, bajo las condiciones experimentales en
que se desarrollaron las investigaciones (tabla 28).
Tabla 28. Efecto de Enterolobium cyclocarpum en la poblacin microbiana

ruminal
medidas
Bacterias viables totales, 1011ufc/ml
Protozoos, 105 cel/ml
Nivel de E. cyclocarpum
0
15
30
b
a
18.7
24.9
24.9a
4.5
9.1
7.9
5.3b
12.3a
13.2a
3.9
3.6
4.9
64
Sapindus saponaria
La inclusin de Sapindus saponaria a razn de 2.5; 5 y 10 % de la MS, para
evaluar su efecto como posible planta defaunante, produjo una reduccin
significativa en los protozoos (tabla 29). Las especies protozoarias que ms
fuertemente se afectaron por la presencia de esta planta fueron Ostracodinium
obtusum y Dasytricha ruminantium. Polyplastrom multivesiculatum reduce su
poblacin a 1/3 de la original. La suplementacin con esta planta activa la
poblacin de hongos celulolticos viables, los que duplican su representacin a
partir del nivel de inclusin de 5 %. Igual comportamiento presentaron las
zoosporas de los referidos hongos. (Tabla 30)
Tabla 29. Efecto de Sapindus saponaria en la poblacin de protozoos

ruminales
medidas
Nivel de S. saponaria
0
2.5
5
10
7.2
5.4
4.5
3.8
Protozoos totales, 10 6 cel/ml

Ophryoscolex purkynei, 10 5cel/ml
Eremoplastrom sp,10 5cel/ml
Eudiplodinium magii,10 5 cel/ml
Ostracodinium obtusum,10 5 cel/ml
Entodinium sp,10 5 cel/ml
Diplodinium sp 10 5 cel/ml
Dasytricha ruminantium, 10 5 cel/ml
Polyplastrom multivesiculatum,10 5 cel/ml
0.6
0.4
0.0
1.2
3.5
3.6
1.1
1.2
0.8
0.2
0.2
0.8
3.5
3.0
0.0
0.4
1.1
0.6
0.5
0.1
2.3
3.6
0.0
0.8
0.4
0.9
0.2
0.6
2.0
4.4
0.0
0.3
Tabla 30. Efecto de la hoja de Sapindus saponaria en la poblacin de

bacterias viables totales y organismos celulolticos ruminales
medidas
Nivel de S. saponaria
11
Bacterias viables totales, 10 ufc/ml

Zoosporas de hongos, 105cel/ml
0
19.1
5.5
4.9
17.8
2.5
21.9
4.5
5.7
21.4
5
30.9
3.0
11.2
27.5
10
1.4
0.7
11.8
30.2
Styzolobium aterrimum y Arachis pintoi

S. aterrimun es otra de las plantas que ejerce efecto depresivo en la poblacin
de protozoos en el rumen. La inclusin de esta leguminosa redujo la poblacin
de protozoos ruminales en la misma magnitud en que se increment su
participacin en la dieta desde 0 hasta 40% de la MS. Sin embargo, tambin
65
ocasiona una reduccin en las bacterias celulolticas, aspecto ste que indica la
presencia de algn metabolito txico a este grupo microbiano y permite
recomendar que se tenga precaucin en su uso, al menos, con niveles
superiores a 20 % de inclusin.
Styzolobium aterrimum
Arachis pintoii o man forrajero, por su parte tambin se utiliz en la dieta para
rumiantes a razn de 0, 20 y 40 % y no produjo modificaciones en la
poblacin y actividad de las bacterias ruminales. Esta planta no tiene una
influencia en las poblaciones de bacterias viables totales, proteolticas y
celulolticas (tabla 31).
Arachis pintoi
Tabla 31. Efecto del consumo de S. aterrimum y A. pintoi en la poblacin

protozoaria y organismos celulolticos ruminales
66
Medida
M. aterrimum
A. pintoi
B. celuloltica, 10 ufc/ml
0
35.5
20
24.6
40
10.2
0
4.4
20
4.2
40
4.6
Hongos, 107ufc/ml
5.8
9.3
18.6
83.9
37.8
98.8
Protozoos, 106 n/ml
33.4
15.7
11.2
8.0
9.3
10.1
Entre los metabolitos secundarios que se han indicado que pueden ejercer
poder reductor de la poblacin protozoaria se encuentran los polifenoles totales,
taninos condensados y las saponinas. Galindo et al (2000; 2001 y 2001b)
informaron el efecto de Leucaena leucocephala, Enterolobium cyclocarpum,
Gliricidia sepium, Sapindus saponaria y otras plantas con estos propsitos. En
otro grupo de trabajos se encontr que los taninos condensados, aislados a
partir de hojas y pecolos en Leucaena leucocephala ejercan efecto depresivo
en la poblacin total de protozoos del rumen y que tanto los protozoos
Entodiniomorfos como los Holotricos se modificaron en presencia de los taninos
condensados. La tabla 32 muestra el efecto que se describi con anterioridad.
Tabla 32. Efecto de taninos condensados en la poblacin de protozoos

ruminales (106 clulas/ml)
Tratamientos/ Tiempo
control
taninos condensados
control
taninos condensados
0
Protozoos totales
64.75
62.50
Entodiniomorfos
62.63
60.50
Holotrichos
81.00
31.00
126.50
24.50
77.38
29.63
120.00
23.63
67
control
taninos condensados
Fuente: Galindo et al, (2001b)
2.38
2.00
4.13
1.38
6.50
1.63
Para finalizar, como aspecto de relevancia, la defaunacin reduce el recambio

bacteriano y consecuentemente, se incrementa el rendimiento neto de
nitrgeno bacteriano expresado como g N incorporado / Kg. de MO fermentada
en rumen.
Otra ventaja de la reduccin en la poblacin de protozoos es que mejora el
metabolismo energtico y reduce las prdidas por concepto de produccin de
metano, el que es un contaminante ambiental. Este efecto se debe a que los
metangenos realizan su accin en forma endo y exocitsicamente en relacin
a los protozoos.
Manipulacin gentica de microorganismos ruminales.

Uno de los mtodos ms novedosos para manipular la fermentacin microbiana,
consiste en la obtencin y posterior incorporacin al rumen de cepas super
productoras de celulasas, a travs de mtodos basados en la transferencia
gentica. Otra tcnica que de ha empleado en la manipulacin gentica es la
mutagnesis. Mediante ella se puede incrementar la frecuencia de aparicin de
mutantes inducidos principalmente de tipo celulolticos resistentes a planos
nutricionales bajos o con mayor capacidad para degradar determinados
sustratos de inters como la celulosa. A pesar del gran nmero de trabajos
realizados con estos y otros fines (Krumholz et al 1999; Sprenger et al ,1999;
Xiang et al, 2001; Lynd et al ,2002 y Swanson, et al, 2002), no existen
resultados alentadores ya que no se logra el comportamiento deseado cuando
se incorporan las cepas modificadas a un ecosistema tan complejo como el
rumen.
Segn Wallace y Newbold, (1992), la utilizacin de la ingeniera gentica en los
microorganismos del rumen debe cumplir con tres requisitos esenciales. El
primero es introducir material gentico nuevo en especies ruminales y asegurar
que se exprese; el segundo, seleccionar algunos productos o el producto del
gen que beneficiar la alimentacin del animal hospedero, y el tercero est en
establecer los medios para que un organismo nuevo pueda sobrevivir bajo el
complejo ecosistema ruminal. A esto se adicionan aspectos o limitaciones y
consideraciones ticas, las cuales son complejas y cambiantes en el tiempo.
Establecimiento de Organismos Nuevos en el Rumen.
Empleo de Leucaena leucocephala
La leguminosa Leucaena leucocephala contiene un aminocido denominado
mimosina. Tanto la mimosina como sus productos de hidrlisis, el 3 - hidroxi - 4
(1H) - piridona (3,4-DHP) son txicos para los animales si no poseen en su
rumen bacterias capaces de degradarlo. Galindo et al (1998, 2001) demostraron
68
que bajo las condiciones edafoclimticas de Cuba en el rumen existen bacterias

que fermentan a la mimosina y sus metabolitos txicos. Sin embargo, en otros
pases como Australia los rumiantes carecen de las referidas bacterias.
El mayor contenido en mimosina DHP en Leucaena se encuentra en las hojas
tiernas, rebrotes, aspa tambin como en las flores, frutos y semillas
En la tabla 33 se presenta la informacin acerca de la presencia de bacterias que

degradan la mimosina, el 3,4- DHP y el 2,3-DHP en el rumen de bovinos, ovinos y
caprinos que se sometieron a diferentes sistemas de alimentacin (Galindo et al
1995)
Tabla 33. Poblacin de bacterias que degradan la mimosina y el DHP en
diferentes especies de rumiantes en Cuba
Animal
Toro
Carnero
Vaca
Carnero
Carnero
Carnero
Carnero
Cabra
Dieta
Forraje+ 30% Leucaena
Forraje+ Saccharina
Caa +50% Leucaena
Heno
Heno:Leucaena (80:20)
Pasto +50% Leucaena
mimosina
24.0
1.67
7.0
1.67
12.0
2.0
4.0
2.1
3,4- DHP
24.0
1.67
40.0
2.0
0.67
1.30
3.30
1.8
2,3-DHP Dilucin
3.6
105
1.5
105
17.0
106
105
105
105
105
3.0
106

Esas razones justifican como el mejor ejemplo de la introduccin exitosa de
bacterias que degradan el 3 - hidroxi - 4 (1H) - piridona (DHP), las experiencias que
se obtuvieron con los rumiantes australianos. Antes de la inoculacin, los animales
no se podan suplementar con Leucaena leucocephala porque experimentaban los
efectos "goitrognicos del referido metabolito. Sin embargo, cuando los animales
se inocularon con el fluido ruminal de cabras adaptadas para consumir L.
leucocephala, el DHP se pudo metabolizar en el rumen a cidos grasos de cadena
corta, lo que evit de esta forma la toxicidad por efectos de DHP. Tambin son de
inters los informes de ciertas especies de microorganismos ruminales que se
69
pueden utilizar para re- inocular el rumen y mejorar su funcin. Por ejemplo, la
introduccin de Megasphaera elsdenii, intraruminalmente, disminuy la acidosis con
una recuperacin en el pH ruminal de bovinos en ceba a base de granos. La
inoculacin de corderos con cultivos de hongos al rumen, Neocallimastix frontalis,
mejoraron la funcin ruminal y se obtuvieron destetes precoces.
Uso de microorganismos viables
En la ltima dcada los nutricionistas han mostrado gran inters en una amplia
variedad de microorganismos, que aadidos en pequeas cantidades a la dieta,
mejoran la salud y la productividad de los animales.
El concepto original de utilizar microorganismos en la alimentacin animal, abarc la
administracin de grandes cantidades de stos a animales estresados. Esto se
fundament en los estudios donde la inclusin de determinados microorganismos
prevena el establecimiento de patgenos o reestableca la microbiota normal. Por
ello se les llam probiticos. Este trmino no result adecuado debido a las
regulaciones gubernamentales de los Estados Unidos respecto a los productos con
actividad curativa o teraputica. Para evitar estas contradicciones, la Industria
alimenticia junto a la Administracin de Alimentos y Medicamentos y el
Departamento de Agricultura en este pas determinaron el nombre de alimentacin
directa con microorganismos (DFM) para incluir los aditivos basados en cultivos
microbianos, y adems emitieron una lista de los microorganismos autorizados con
este fin (Blezinger, 2002). Es por todo lo anterior que se utilizan diferentes nombres
para identificar a los productos donde se emplean bacterias, hongos y levaduras que
ejercen un efecto beneficioso cuando se incluyen en la dieta animal.
La obtencin de enzimas para lograr aditivos enzimticos capaces de aumentar la
digestin ruminal, se prob tambin por varios investigadores (Morgani et al, 2000).
sta constituye una importante alternativa ante la problemtica de la liberacin de un
microorganismo recombinante en el rumen.
En Cuba no se haban realizado trabajos en este sentido y el uso de probiticos se
ha estudiado con mayor amplitud en especies monogstricas. En la actualidad se
desarrollan varios proyectos de investigacin encaminados a determinar el efecto de
la inclusin de microorganismos que acten como activadores biolgicos, en la
poblacin microbiana ruminal, parmetros fermentativos y en la degradabilidad de la
fibra y la protena.
Otro objetivo es obtener productos biolgicos a partir de estos microorganismos
capaces de activar la fermentacin microbiana ruminal en animales que consumen
dietas fibrosas de baja calidad y que sean econmicamente factibles de utilizar bajo
las condiciones productivas de nuestro pas.
Se han definido dos microorganismos como los ms promisorios con estos fines: la
levadura Saccharomyces cerevisiae y el hongo conidial Aspergillus oryzae. La
adicin de estos microorganismos a la dieta de rumiantes: incrementa el consumo
voluntario, el nmero de bacterias celulolticas y bacterias totales, la concentracin
de AGCC, el pH ruminal, disminuye la concentracin de cido lctico.
70
Al respecto, se ha demostrado que la inclusin de preparados microbiales con estos

microorganismos incrementa la degradabilidad ruminal de la fibra detergente cido
(FDA) y el nitrgeno, incrementaban la produccin de leche y mejoraba su
composicin.
En todos estos estudios tanto Saccharomyces cerevisiae como Aspergillus oryzae
se adicionaron, individualmente, a la dieta. Existen pocos estudios donde se
combinen ambos microorganismos, aunque se hall un efecto aditivo en la
digestibilidad de la materia seca, protena bruta y la hemicelulosa cuando se
incluyeron juntos.
En algunos pases de Amrica Latina, donde se ha utilizado la levadura
Saccharomyces cerevisiae como suplemento de las dietas fibrosas se han
encontrado alteraciones en los patrones de fermentacin, mejoras en la eficiencia
de utilizacin y disponibilidad de los nutrientes.
Algunos de los efectos encontrados se han explicado por el incremento del
consumo del lactato por parte de Selenomonas ruminantium, hecho que provoca
una estabilizacin del pH en niveles cercanos a la neutralidad que favorecen la
propagacin de bacteria y por ende sus acciones fermentativas y esto implica a un
incremento en la palatabilidad, el apetito y en el consumo de materia seca.
Acerca del empleo de Saccharomyces cerevisiae hay un consenso general, en la
literatura disponible, acerca de que se producen incrementos en las poblaciones de
bacterias viables totales (Figura 10), as como en la tasa de degradacin de fibra en
el rumen e incrementos en el flujo de protena microbiana desde el rumen hacia el
intestino delgado. No todas las bacterias del rumen se estimulan por la inclusin de
la levadura. Estas observaciones pueden ayudar a explicar algunos de los efectos
que se han encontrado cuando se utiliza esta tcnica de manipulacin. Bajo
condiciones in vivo las bacterias celulolticas se incrementan en mayor proporcin
71
que las bacterias totales. As, un incremento en la poblacin de bacterias

celulolticas en el rumen pueden explicar los incrementos en la digestibilidad de
materia seca y fibra detergente cido en animales que reciben levaduras. Estos
autores indican que la inclusin de levaduras estimul el crecimiento de Fibrobacter
succingenes pero no el de Ruminococcus albus.
As mismo, no todas las cepas de S. cerevisiae son capaces de estimular la
digestin en el rumen y se debe tener cuidado en la seleccin de la levadura que se
va a utilizar con estos fines para asegurar que se utilice aqulla capaz de activar la
fermentacin en el rumen. La figura muestra el efecto de la levadura S. cerevisiae
en la poblacin de algunas bacterias del rumen
Figura 10 . Efecto de la inclusin de levadura en el crecimiento de

bacterias ruminales en un cultivo puro (Wallace y Newbold, 1992)
La respuesta de los animales lactantes y en crecimiento a la inclusin de la

levadura es variable y depende de la dieta bsica que reciben los animales.
Esta variabilidad, al menos en parte, se explica en el modelo de la Figura 11
As, la inclusin de la levadura estimula la sntesis de protena microbiana en
el lquido ruminal, lo que propicia incrementos en el flujo de protena microbiana
y aminocidos hacia las partes bajas del tracto gastro intestinal. Sin embargo,
este incremento en el flujo de protena microbiana solamente se debe esperar
cuando la protena es limitante en la dieta.
La inclusin de un preparado microbial con base a levaduras como aditivo en
vacas lecheras que se encontraban a principios de la lactancia y alimentadas
con una dieta baja en protena bruta, increment la produccin de leche.
Respuestas similares a la inclusin de levadura se han obtenido cuando se
incluy a inicios de la lactancia. Posiblemente esto refleja la magnitud en la
cual la disponibilidad de protena limita la productividad.
72
Viabilidad
microbiana
Tasa de celulolisis Concentracin de

nutrientes
Condiciones ambientales del rumen (pH,
CO2, temp, otros)
Productos finales de la fermentacin
ruminal
AUMENTO
DE LA
PRODUCTIVIDAD
Flujo de protena microbiana
Figura 11. Modelo que explica el incremento en la poblacin microbiana

como el factor que determina los incrementos productivos cuando se
utiliza levadura
La respuesta a la inclusin de levadura puede variar debido a otros factores

relacionados con la dieta. Se ha observado que la respuesta productiva del
ganado alimentado con ensilaje de maz tendi a ser mayor que aqulla donde se
utilizaron dietas a base de ensilaje de pasto. En otro grupo de trabajos se
encontr que la levadura estimul la produccin de leche en vacas que
consumieron dietas a base de alfalfa con trigo, pero no se observaron respuestas
cuando el trigo se sustituy por el maz.
Utilizacin de levaduras como activadoras de la fermentacin ruminal
Desde 1924 Eckles et al, publicaron un informe acerca del uso de levaduras como
un suplemento alimenticio para vacas lactantes. La levadura de cervecera es la
de mayor uso para estos fines, as tambin como fuente de protena en las dietas
para rumiantes. La aplicacin de bajos niveles de levadura (< 1% de la materia
seca de la dieta) a vacas lecheras recibi la atencin por primera vez a partir de
los hallazgos de Renz (1954). El autor inform que la inclusin de
50 g/d de
una levadura activa increment la produccin de leche, mientras Beeson y Perry
(1952), informaron un incremento en la ganancia diaria de peso de novillos
suplementados con 8 g/d de levadura seca activa.
73
La utilizacin de la levadura Saccharomyces cerevisiae como aditivo en dietas

fibrosas produce modificaciones en los patrones de fermentacin del rumen. De
esta forma, se hallaron mejoras en la eficiencia de utilizacin y disponibilidad de
los nutrientes; aumentos en el nmero de bacterias celulolticas; incrementos en el
pH ruminal; disminucin de la concentracin de cido lctico; incrementos en la
digestin ruminal de la MS, MO y FDN tanto in vivo como in vitro y en la
degradabilidad de FDA y el nitrgeno.
Se ha encontrado que S. cerevisiae estimula el desarrollo de las bacterias

celulolticas en animales jvenes y previene los desbalances microbianos que se
producen como resultado de los cambios de alimentacin y se ha comparado el
efecto de la utilizacin de esta levadura y monensina sdica en la poblacin
protozoaria sin encontrar diferencias entre ellos.
Muchos son los trabajos donde se plantea que la adicin de levadura afect el
nmero y la composicin de las poblaciones microbianas en el rumen. Sin
embargo, en estudios con cultivos puros y en cultivos mixtos se concluye que no
todas las especies de bacterias se estimulan como resultado de la inclusin de
levaduras. Resultados similares se encontraron en la respuesta de los
protozoarios en el rumen a la inclusin de levaduras con efectos variables
(estimulacin o inhibicin), posiblemente debido a la cepa de levadura que se
emplea. Lo anterior demuestra una especificidad de accin de las cepas de
levaduras en determinadas especies de microorganismos ruminales.
Ejemplo de lo anterior lo constituyen estudios in vivo, donde las bacterias
celulolticas se incrementaron en mayor proporcin que las bacterias totales, lo
que puede explicar el incremento que se hall en la digestibilidad de materia seca
y fibra detergente cido en todo el tracto digestivo de animales que se alimentaron
con levaduras. Sin embargo se ha mostrado claramente que no todas las
bacterias celulolticas se estimularon de igual manera. As, la levadura estimul el
crecimiento de Fibrobacter succinogenes pero no el de Ruminococcus albus.
Por otra parte, en algunos estudios, la levadura estimul el crecimiento de
bacterias que utilizaban cido lctico (Selenomonas ruminantium y Megasphaera
elsdenii), pero no de bacterias productoras de cido lctico (Streptococcus bovis).
Esto se confirm en cultivos mixtos, donde la inclusin de levadura en simuladores
de fermentacin ruminal (Rusitec) estimularon los nmeros de S. ruminantium.
Lo anteriormente expuesto, constituye la causa de que la adicin de levaduras
est en estrecha relacin con las ms bajas concentraciones de cido lctico y la
ms estable fermentacin ruminal.
Mecanismos de accin
Existen diferentes hiptesis acerca de los mecanismos de accin que emplean las
levaduras para ejercer sus efectos en la digestin de los rumiantes. La mayor
parte de las investigaciones dirigidas en este sentido, se han realizado con dietas
con altos niveles de concentrado.
74
Dentro de los mecanismos propuestos se encuentra el abastecimiento, por parte

de las levaduras, de cidos orgnicos o vitaminas que estimulan el crecimiento de
bacterias y hongos, y la produccin de pequeos pptidos estimulantes.
Otro de los procesos que se estudiaron se relaciona con el consumo del oxgeno
libre en el rumen. Los autores plantean que en la composicin de la fase gaseosa
del rumen hasta el 1% puede ser oxgeno y que la adicin de microorganismos
aerbicos produce un consumo de este gas y potencia la anaerobiosis ruminal.
Otros efectos que se encuentran, cuando se adicionan levaduras en dietas para
rumiantes, se explican por la estimulacin del crecimiento de Selenomona
ruminantium. Esta bacteria consume lactato, lo que provoca una estabilizacin del
pH en niveles cercanos a la neutralidad y favorece el crecimiento de las bacterias
celulolticas y por ende de sus acciones fermentativas, lo cual conlleva a un
incremento del apetito y el consumo de materia seca.
Por otra parte, existen estudios que plantean que la inclusin de levaduras
produce un reordenamiento del funcionamiento del rumen por la estimulacin de
las poblaciones acetognicas que compiten con las metanognicas por la
utilizacin del hidrgeno. La reduccin
de la actividad de las bacterias
productoras de metano y una estimulacin en la formacin de los AGCC modifican
el metabolismo de la energa glucosdica de la masa microbiana y
consecuentemente de las protenas digestibles. El uso de levaduras propone una
opcin para disminuir las grandes prdidas econmicas que por este concepto
ocurren a nivel mundial, as como la contaminacin ambiental que este gas
provoca.
Sin embargo, la mayora de los modelos se probaron de manera individual y
aunque algunos autores intentaron evaluar de manera crtica los diferentes
mecanismos de accin, hay una escasez de estudios comparativos, que permitan
cuantificar la importancia de cada uno de los procesos propuestos.
Factores que afectan la respuesta a la inclusin de levaduras
Si se consideran los resultados productivos o las caractersticas ruminales, es
claro que las respuestas a la adicin de levadura son. Como se discuti
anteriormente, parte de la variabilidad se relaciona con la dieta, que determina el
predominio de una poblacin sobre otra en el rumen y por ende hay cambios en la
respuesta a la presencia de la levadura, debido a su especificidad de accin.
Tambin existen trabajos que demuestran que la cepa de levadura empleada
influye en la efectividad del producto.
Newbold et al (1995 y 1996), demostraron que no todas las cepas de S. cerevisiae
son capaces de estimular la digestin en el rumen, por lo que se debe tener
cuidado en la seleccin de la levadura, para asegurar que la cepa sea capaz de
estimular la fermentacin en dicho rgano. De la misma manera, la levadura es un
organismo biolgico y como tal se afecta de manera negativa como resultado del
calentamiento excesivo. Actualmente se desarrollan productos comerciales con la
capacidad de sobrevivir al peletizado pero las comparaciones directas entre cepas
no estn dentro del dominio pblico y asimismo se debe tener cuidado para
75
asegurarse que, de ser necesario, el producto que se utilice sea capaz de

sobrevivir a las condiciones durante el peletizado de la dieta.
Tambin se ha visto que la dosis y frecuencia de oferta de la levadura puede
afectar la respuesta a la inclusin y se ha encontrado diferencias en las
modificaciones ruminales cuando se ofreci el alimento dos veces al da.
Para evaluar el efecto de la de la mejor manera de incluir S.cerevisiae en la

dieta para rumiantes bajo condiciones in vitro (Marrero et al, 2005) compararon
medio de cultivo inoculado con S.cerevisiae, el pellet de la centrifugacin del
medio de cultivo inoculado con S.cerevisiae, el sobrenadante de la
centrifugacin del medio de cultivo inoculado con S.cerevisiae con un control
sin inocular.
Los autores encontraron que los mayores conteos de bacterias viables totales
se obtuvieron a las 4 horas despus de iniciada la fermentacin cuando se
incluy S. cerevisiae y que existe un mejor comportamiento de los crecimientos
de bacterias viables totales en el tratamiento que incluye la levadura en su
medio de cultivo (tabla 34)
Tabla 34 Efecto de la inclusin de S. cerevisiae en la poblacin de
bacterias viables totales, 10 10 ufc/ml)
Medio +
S.cerevisiae
2.69 a b
Pellet
Tratamientos
Control
Medio
LRF
solo
2.55 a b
4.51 efg
1.73 a
Sobrenadante
2.39 a b
2.74 abc
3.05 bcd
4.73 g
4.08defg
4.01cdefg
4.01cdefg
4.13defg
4.55fg
3.64bcdefg
3.52bcdefg
12
3.23bcdef
2.67 a b
4.50 efg
3.20 bcde
3.27 bcdef
Horas
E. E
0.39
***
Datos transformados segn Ln X. () medias originales

La produccin de gas acumulada in vitro por los microorganismos ruminales a
diferentes horas de incubacin hasta las 24 h para los tratamientos sobre
materia seca de C. nlemfuensis como sustrato se observa en la figura 12. La
adicin de producto completo de levadura (PCL) caus un marcado incremento
en la produccin de gas, indicando un aumento en la actividad microbial, sobre
la materia seca de C. nlemfuensis. En todos los tratamientos, la produccin de
gas acumulativa por los microorganismos ruminales incremento rpidamente
durante el tiempo de incubacin. Se encontr diferencias significativas (P <
0.05) entre el tratamiento con PCL con respecto al resto de tratamientos,
siendo la produccin de gas 26.9% mayor que el tratamiento control (Fluido
Ruminal, FR) y los tratamientos PLL y SL durante toda la incubacin.
76
El tratamiento PLL tuvo un incremento de 5.8% (P < 0.05) en produccin de

gas con respecto al tratamiento control y fue el segundo mejor despus de
PCL. El tratamiento SL se comporto estadsticamente igual al control, pero la
produccin de gas acumulada a las 24 h fue un 13% menor.
Produccin de gas (m l/ g
MS)
La produccin de gas acumulada in vitro por los microorganismos ruminales a

diferentes horas de incubacin hasta las 24 h para los tratamientos sobre FDN
de C. nlemfuensis se observa en las figuras 12 y 13. La adicin de producto
completo de levadura (PCL) y de pellet del cultivo de levadura (PLL) elevaron
significativamente (P<0.05) la produccin de gas, en 48.3% y 22.35%
respectivamente, con respecto al tratamiento control. En todos los tratamientos,
la produccin de gas acumulativa por los microorganismos ruminales se
increment, rpidamente, durante el tiempo de incubacin. Entre el tratamiento
PCL y el PLL, el primero fue 21.2% mayor que el segundo (P<0.05), mientras
que SL no difiri del tratamiento control.
20
15
10
5
0
0
10
15
20
25
Tiem po (horas)
E+F
E + PL
E + PC
E+S
Produccin de gas (m l / g FDN)
Figura 12. Efecto de la adicin de S. cerevisiae en la produccin de gas

acumulada para materia seca de Cynodon nlemfuensis (0.1/g
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
0
10
15
20
26
Tiempo (horas)
E+F
E + PL
E + PC
E+S
Figura. 13.
77
Dinmica de la produccin de gas in vitro determinada a 4 tiempos de

fermentacin de la FDN y adicin de S. cerevisiae
La inclusin de PCL increment en casi tres veces la poblacin de bacterias
celulolticas en relacin al tratamiento donde no se suplement (1.7 x 108 ufc/ml
vs. 0.6 x 108 ufc/ml, respectivamente) (figura 14).
Figura 14. Efecto de la suplementacin con S. cerevisiae en la poblacin de

bacterias viables totales (10 8ufc/ml) y celulolticas del rumen (10 8ufc/ml)
Uso de Hidrolizado de levaduras

Bocourt et al (2001, 2002); Prez et al (2000, 2001 y 2002) informaron el
efecto que producen los hidrolizados enzimticos de levaduras Saccharomyces
cerevisiae en la fisiologa digestiva de especies monogtricos.
Se conoce que las levaduras viables o sus hidrolizados son capaces de
producir en los animales domsticos monogstricos, efectos probiticos. Dentro
de las sustancias consideradas con una actividad probitica activa se
encuentran algunos de los componentes estructurales de la pared de las
levaduras; encontrndose entre las fuentes ms abundantes cepas
pertenecientes a la especie Saccharomyces cerevisiae. Estos polisacridos y
sus productos de hidrlisis producen sus efectos probiticos, principalmente,
mediante el estmulo a la respuesta inmunolgica y la prevencin de
enfermedades infecciosas en animales y el hombre (Rodrguez et al., 1996;
Spring et al., 1996; Stanley et al. , 1996 y Savage et al., 1996).
En la obtencin de estos productos de hidrlisis de la pared de Saccharomyces
cerevisiae se han empleado principalmente la hidrlisis qumica y trmica
(Tanaka y Watanabe, 1995; Snchez, 1997 y Otero, 1997). Sin embargo
actualmente axisten argumentos de ndole biolgico que hacen factible tambin
78
el empleo de las enzimas hidrolticas para estos fines (Frost y Moss 1987 y
John y Hampel 1991).
Gunther (1995), quien al clasificar los probiticos como: Aditivos alimentarios y
en una acepcin ms amplia incluir a organismos microbianos vivos o muertos
de las especies Lactobacillus, Streptococus, Enterococus, Bacillus y
Saccharomyces; a sustancias derivadas de dichos microorganismos como
oligosacridos, vitaminas, nucletidos, pptidos, cidos lctico, ctrico, actico y
fumrico, adems de enzimas microbianas principalmente de tipo hidrolticas,
ofrece
un mayor nivel de precisin sobre los diferentes tipos de
microorganismos y sustancias capaces de producir este efecto.
En el caso de los rumiantes estos efectos se manifiestan en incrementos en su
capacidad productiva y a nivel de rumen se pudieran modificar la actividad de
los microorganismos que habitan en ese reservorio. Al respecto no se dispone
de informacin que demuestre el efecto directo en los grupos fisiolgicos de
bacterias, aunque se comunican efectos en las poblaciones totales de
microorganismos.
Entre los microorganismos ms empleados en la produccin de probiticos se
encuentran las levaduras, tal y como se indic en el acpite precedente,
fundamentalmente especies del gnero Saccharomyces, ya sean vivas o
muertas o componentes de su pared celular como son oligosacridos de
glucano y manano (Spring et al., 1996; Nagendra, 2000).
Las levaduras, son capaces de destruir bacterias patgenas, debido a la
habilidad que poseen de ligar estos microbios a sus paredes celulares o de
unirse a los sitios receptores de patgenos al nivel de la mucosa intestinal
(Dawson, 1992; Spring y Dawson, 1996). Se ha comprobado
experimentalmente que los oligosacridos de manosa derivados de la hidrlisis
de paredes celulares de levaduras son capaces de reducir la adherencia de
muchas bacterias a la mucosa intestinal y ejercer un efecto inmuno estimulante
(Stanley et al., 1996; Prez, 2000).
Hidrolizados de levaduras.
Cuando muere una clula de levadura, cesan las transformaciones qumicas
normales precisas para la conservacin de la vida, pero con la muerte no se
apaga la actividad de la enzimas de la clula y por ello en la clula muerta
tienen lugar transformaciones qumicas relacionadas con la actividad de las
enzimas. Este proceso se llama autlisis o digestin y puede ser controlada
teniendo lugar en un ptimo de temperatura de 45-55 oC. Se ha encontrado
que a 30 0C y 600 C transcurre con marcada lentitud (Otero, 1992).
Para la obtencin de los productos de hidrlisis de la pared de levaduras se
han empleado, principalmente, las hidrlisis qumica y trmica (Tanaka y
Watanabe, 1995; Snchez, 1997 y Otero, 1997), siendo la hidrlisis enzimtica
con el empleo de enzimas microbianas de ms escasa aplicacin (Frost y
Moss, 1987). Hong et al 1994 desarrollaron un mtodo para extraer, mediante
hidrlisis, los componentes de la pared de una cepa de Saccharomyces
79
cerevisiae, para ello utilizaron una combinacin de hidrlisis bsica con

hidrlisis enzimtica, alcanzando un alto rendimiento de -1,3 y -1,6
glucanos, quitina y mananoprotenas con este procedimiento. Similares
resultados alcanzaron Hartland et al (1994), pero en este caso mediante
hidrlisis con NaOH precedida de destruccin mecnica con agitador rotatorio y
perlas de vidrio.
En Cuba se ha diseado un mtodo para la obtencin de un hidrolizado
enzimtico a partir del fondaje de destilera (Saccharomyces cerevisiae),
considerando que este producto se encuentra disponible en grandes
cantidades en el pas y que constituye un contaminante del medio ambiente
(Prez, 2000).
Con la utilizacin de este producto no se observ disminucin del colesterol
srico de las aves tratadas con respecto al control. Sin embargo, al aplicar 100
C de mxima temperatura a la tecnologa se lograron niveles adecuados de
glucanos y mananos que constituyen el principio activo y se garantiz la
capacidad hipocolesterolmica del producto (Garca, 2002).
La primera consideracin, que debemos hacer de este nuevo producto, es
conocer que no se puede utilizar tal cual se lo obtiene en la industria del pienso
y es ineludible realizar algn tipo de procesamiento ya que posee un elevado
contenido de agua, que encarece el transporte y dificulta su almacenamiento y
conservacin.
En estudios realizados por Galindo et al, (2005) se demostr que la inclusin
de 100 ml/Kg concentrado / da de hidrolizado enzimtico de levadura
Saccharomyces cerevisiae incrementa de manera notable la produccin de
gas in vitro, lo que significa que activa la fermentacin microbiana ruminal. Las
dosis de 75 y 50 ml/Kg concentrado / da tambin producen efecto activador de
la fermentacin microbiana ruminal; pero el mismo es menos acentuado que la
de 100 ml/Kg concentrado / da. Sin embargo, la inclusin de 25 ml/Kg
concentrado / da de hidrolizado de levaduras no modifica la fermentacin
ruminal ( Figura 15)
Tratamientos
5
4
3
2
1
0
20
40
60
80
100
Produccin de gas
80
Figura 15. Efecto de la inclusin de un hidrolizado de levadura S.

cerevisiae en la produccin de gas acumulada a las 24 horas (1, 2, 3, 4 y 5
equivalen a 100; 75; 50; 25 y 0 ml/Kg concentrado / da
En otro grupo de trabajos realizado por los mismos autores, se evidenci que la
inclusin de 100 ml/Kg concentrado / da de hidrolizado de levaduras
Saccharomyces cerevisiae increment de manera significativa la poblacin de
bacterias viables totales, lo que coincide con la alta produccin de gas que se
produjo, as como no se encontr efectos debido a la inclusin del hidrolizado
en las poblaciones de bacterias proteolticas y hongos ruminales (tabla 35). Es
importante destacar que desde el punto de vista biolgico, la mayor poblacin
de hongos celulolticos que se encontr cuando se suministr 75 ml/Kg
concentrado / da de hidrolizado de levaduras pudiera duplicar la degradacin
de la fraccin fibrosa en el rumen.
La poblacin de bacterias viables totales se increment desde las 4 horas
despus de iniciada la fermentacin y no difiri con la poblacin que se
encontr a las 8 horas. La poblacin fungal, por su parte estuvo mayormente
representada a las 4 horas, lo que coincide con reportes efectuados por Jouany
et al (2002). Sin embargo, sta poblacin se estabiliz a las 8 horas y alcanz
valores similares a los encontrados antes de iniciar la fermentacin.
Las bacterias proteolticas y el pH del lquido ruminal no difiri en relacin al
tiempo de fermentacin, no obstante, el nmero de bacterias proteolticas que
se encontr con el nivel de 75 ml/Kg concentrado / da y 125 ml/Kg
concentrado / da es 9 y 3 x 105 ufc/mL superior, respectivamente. (Tabla)
Tabla 35. Efecto de un hidrolizado de levaduras (ml/Kg concentrado / da)

en algunos miembros de la poblacin microbiana y el pH ruminal
Medidas
Bacterias Viables Totales, 10
11
ufc/mL
Hongos, 105 uft/mL

Bacterias Proteolticas, 107 ufc/mL
pH
Fuente; Galindo et al, 2006
75 mL
100 mL
2.33 a
(20.89)
1.50
(10.59)
2.43 a
(22.37)
2.22
(20.81)
3.26 b
(50.41)
1.99
(11.59)
2.17
(22.26)
7.39
2.59
(19.48)
7.36
2.52
(17.59)
7.34
EE
Sign
0.27*
0.26
0.25
0.13
81
Tabla 36. Efecto del tiempo de fermentacin, horas, en algunos miembros

de la poblacin microbiana ruminal y el pH en dietas con hidrolizado de
levaduras
Medidas
EE
Sign
0.27***
1.73 a
3.20 b
3.09 b
Bacterias Viables Totales, 10 ufc/mL
(16.70)
(38.37)
(38.59)
ab
b
1.89
2.46
1.36 a
0.26 *
5
Hongos, 10 uft/mL
(12.74)
(20.56)
(9.70)
Bacterias Proteolticas
2.18
2.64
2.47
0.25
(15.89)
(24.78)
(18.67)
pH
7.17
7.40
7.52
0.13
a, b,c medias con letras diferentes difieren a P< 0.05, (Duncan, 1955)
*** P< 0.001; Datos transformados segn log X; valores entre
parntesiscorresponden a las medias originales
Fuente; Galindo et al, 2006
11
En la tabla 37 se presenta la informacin referida a la poblacin de bacterias

celulolticas ruminales y se muestra que hubo una interaccin significativa entre
los niveles de inclusin del hidrolizado de levaduras empleado y el tiempo de
fermentacin. Como se puede observar, las mayores poblaciones se
encontraron a las 4 horas despus de iniciada la fermentacin en los
tratamientos donde se suministr 75 y 100 ml/Kg concentrado / da Este
resultado pone de manifiesto que ste producto es capaz de activar la flora
celuloltica, en la hora de mxima fermentacin de la fibra, lo que posibilita
sugerir su uso como aditivo activador de la funcin ruminal..
Tabla 37. Efecto del nivel de un hidrolizado de levadura Saccharomyces

cerevisiae y el tiempo de fermentacin en la poblacin de bacterias
celulolticas ruminales, 107 ufc/mL
Nivel de hidrolizado, ml/Kg

concentrado / da
0
Tiempo de fermentacin, h
0
4
8
EE
Sign
1.55 ab
1.83 abc
1.16 a
(6.89)
(7.11)
(4.67)
0.33**
a
c
c
*
75
1.16
2.60
2.59
(4.67)
(20.78)
(14.11)
100
2.37 bc
2.83 c
1.39 ab
(13.22)
(23.33)
(6.78)
a, b,c medias con letras diferentes difieren a P< 0.05, (Duncan,
1955)
82
*** P< 0.001; Datos transformados segn log X; valores entre parntesis
corresponden a las medias originales
Los resultados acerca del efecto de un hidrolizado enzimtico de levadura
Saccharomyces cerevisiae en la poblacin de microorganismos del rumen
muestran que el mismo ejerce accin activadora de la poblacin microbiana
celuloltica, lo que repercutir de manera decisiva en una mayor degradacin
de la fibra en el rumen, pasaje hacia las partes bajas del tracto gastro intestinal
(TGI), consumo de materiales fibrosos, y consecuentemente, se debern
esperar mejoras productivas.
Consideraciones finales
La eficiencia de utilizacin de los alimentos por los rumiantes depende de un
ecosistema ruminal eficiente y estable, ste se logra a travs de la manipulacin
consciente de la poblacin de microorganismos que habitan en ese reservorio,
los factores que regulan los productos finales de la fermentacin, el balance
adecuado de nutrientes as como su flujo hacia las partes bajas del TGI. Si se
tiene en consideracin estos aspectos deben esperarse producciones
econmicamente viables y tcnicamente argumentadas.
Se prev continuar en la elaboracin de estrategias que conduzcan a obtener
alternativas para manipular la fermentacin microbiana ruminal, entre ellas, la
utilizacin de preparados con microorganismos viables, productos o derivados
microbiales, tales como hidrolizados de levaduras, enzimas, suplementacin con
plantas capaces de reducir la poblacin protozoaria, proteccin de la protena y los
almidones al ataque por las enzimas ruminales. Actualmente, se inician los
primeros ensayos en la utilizacin de herramientas moleculares con stos
propsitos.
Agradecimientos
Las autoras desean agradecer la valiosa ayuda y colaboracin de un grupo de
colegas, sin los cuales sta obra no hubiera sido posible, ellos son:
Nuestras tcnicas, Ana Irma Aldana Cruzata, Onidia Moreira y Milvis

Cueto
Los Drs. Ramn Bocourt Salabarra, Ren Stuart Montalvo, Arabel Elas
Iglesias, Eulogio Muoz Borges, Rogelio Gonzlez, Zoraya Rodrguez
Alonso, Denia Delgado, Toms Ruiz, Gustavo Febles, Verena Torres.
La MSc. Idania Scull y Martha Len Rodrguez
A todos ellos, muy agradecidas
83
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1

MANIPULACIN DE LA FERMENTACIN MICROBIANA RUMINAL

1. Nota de las autoras

Manipulacin de la fermentacin microbiana ruminal

Nota de las autoras

(CMCasa:EC), exoglucanasas, nombradas celobiohidrolasas y glucosidasas

En condiciones normales de manejo y alimentacin, el contenido ruminal se

Aporte regular de nutrientes para los microorganismos y el animal

Tabla 1. Composicin de la mezcla de gases del rumen, %

El rumen como sistema de fermentacin continua

Esquema del rumen

Microorganismos que habitan en el rumen

Grupos fisiolgicos de bacterias del rumen

Peptostreptococcus elsdenii. Muchas cepas de Selenomonas ruminantium

Estas bacterias poseen las caractersticas bioqumicas y genticas propias de

rango de temperatura para este grupo es amplio, con un ptimo de 35 a 40C

Tabla 3. Caractersticas morfolgicas y fermentativas de algunas

Acetato, formiato, lactato, Celulosa

Acetato, formiato, H2 y Celulosa

Acetato, formiato, butirato Celulosa

Acetato, formiato, butirato Celulosa

Acetato, formiato, lactato, Pectina

Formiato, butirato, lactosa Xilano

CH4 (de H2 + CO2

CH4 (de H2 + CO2 o Metangenos

Tabla 4. Algunas especies de bacterias que fermentan principios

Fotos de algunas de las bacterias del rumen (extrado de Kaufmann)

Caractersticas Generales de los protozoos del rumen

bien separados, los cuales fueron primeramente denominados: Holotricha y

La defaunacin frecuentemente resulta en una disminucin en la produccin de

Caractersticas Generales de los hongos del rumen

Son organismos anaerobios estrictos que ataca, colonizan y crecen sobre

Relacin entre los microorganismos del rumen y el animal hospedero

microorganismos (bacterias, protozoos y hongos) proveen un servicio digestivo

La quitina, un componente comn en la pared celular de los hongos, es un

Los protozoos engolfan las bacterias mediante vesculas citoplasmticas y la

relativas de los tipos de bacterias presentes. Por ejemplo, el nmero de

Tabla 5. Factores nutricionales de los microorganismos del rumen

Todas las fuentes energticas protenas,

Factores que afectan la poblacin de microorganismos del rumen.

consumo y su velocidad, la selectividad al pastar, la fertilidad del suelo, la

Cantidad y frecuencia en el suministro de alimentos

se les suministra de nuevo alimentos, se observa, inicialmente, un incremento

El efecto de la especie y la raza de los rumiantes se ha encontrado que

La figura 1 muestra el efecto de la edad en la poblacin de bacterias viables en

Figura 1. Efecto de la edad en la poblacin de bacterias viables terneros,

Fermentacin microbiana de Nutrientes

Carbohidratos de fcil fermentacin

Protenas, Pptidos y Aminocidos

AGCC, cido lctico y gases

Fermentacin de fuentes energticas

Estos componentes son atacados por las bacterias celulolticas ms

Tabla 7. Efecto de la dieta en el pH y patrn de fermentacin ruminal

1.83 2.24 2.03 0.73

Fermentacin de compuestos nitrogenados

Tabla 8. Efecto de la urea

N-NH3 ruminal (ppm)

Aumenta el crecimiento bacteriano, ya que los cidos grasos insaturados

Anaerovibrio lipolytica es responsable de la hidrlisis de los triglicridos,

Los organismos que degradan la fibra viven en la superficie o en el interior de

Aspectos estructurales que afectan el ataque enzimtico

pueden alcanzar alrededor de 200 de dimetro, aunque comnmente poseen

Enzimas que intervienen en la celulolisis ruminal y modo de accin

celulolticos, intervienen en el proceso de degradacin cuando la molcula de