ACTIVIDAD MICROBIANA: METANOGÉNESIS

Alejandra Flórez-Restrepo1, Madeleiner García-Jimenez2, Marcela avellaneda3,

Jazbleidy Noreña-Galeano4

RESUMEN
Para cuantificar y cualificar la actividad de las poblaciones microbianas existen, varias
técnicas entre las que se destaca la evaluada con métodos indirectos, utilizando el
desplazamiento de volumen en las cuales se producen sustancias durante el
metabolismo microbiano, llamada actividad metanogénica. En este se genera la
producción de metano como consecuencia de la transformación anaerobia de la
materia orgánica en ambientes de reducción. En el laboratorio se llevó a cabo la
preparación de reactores en los cuales se utilizaron lodos activados como: lodo LAR y
lodo digestor (ambos con ácidos grasos volátiles) y sus respectivos controles (sin ácidos
grasos volátiles), a los cuales se le evaluó la actividad metanogénica gracias al
desplazamiento del NaOH en recipientes Mariotte.

Palabras clave: metabolismo microbiano, actividad metanogénica, transformación

anaerobia, materia orgánica.

INTRODUCCIÓN que son favorables para el desarrollo

La confianza que se tiene en la microbiano se caracterizan por su
actualidad en los microorganismos del limitada extensión en el tiempo y el
suelo es por las actividades metabólicas espacio [2].
que se desarrollan y por su importancia En la naturaleza los microorganismos
en la fertilidad del suelo. En la llevan a cabo diferentes funciones con
actualidad esa confiabilidad ha el fin de obtener energía y los
aumentado puesto que se acepta que requerimientos necesarios para su
los organismos del suelo constituyen supervivencia [3].
uno de los indicadores disponibles más Unos de estos procesos es la
sensibles para detectar ecosistemas metanogénesis, este proceso de
contaminados [1]. digestión es llevado a cabo por una
Los microorganismos, en el caso de los sucesión de reacciones específicas en
presentes en los suelos, no están las cuales cuenta con microorganismos
distribuidos regularmente, debido al específicos para cada una de ellas. En
mosaico discontinuo de este proceso se pueden distinguir
microambientes presente en ellos; los cuatro fases principales como son la
1. Estudiante de pregrado en Microbiología Industrial y Ambiental, Escuela de Microbiología. Universidad
de Antioquia, Medellín, Colombia. Contacto: aleja.f.restrepo@hotmail.com
2. Estudiante de pregrado en Microbiología Industrial y Ambiental, Escuela de Microbiología. Universidad
de Antioquia, Medellín, Colombia. Contacto: madeleinergj@hotmail.com
3. Estudiante de pregrado en Microbiología Industrial y Ambiental, Escuela de Microbiología. Universidad
de Antioquia, Medellín, Colombia. Contacto: marcela.avellanedaj@gmail.com
4. Estudiante de pregrado en Microbiología Industrial y Ambiental, Escuela de Microbiología. Universidad
de Antioquia, Medellín, Colombia. Contacto: jaz-yur@hotmail.com
hidrólisis, acidogénesis, acetogénesis y
metanogénesis. En las dos primeras
fases mencionadas se produce más
energía y los organismos responsables
crecen con mayor velocidad; por el
contrario en la acetogénesis y
metanogénesis los rendimientos de
energía son tan bajos que la actividad
de las bacterias asociadas es
extremadamente lenta y cualquier
alteración tarda mucho tiempo en
corregirse [3].
Con este trabajo se pretende realizar
un montaje anaerobio y determinar la
actividad metanogénica de la
comunidad presente en 4 reactores con
lodos específicos.
METODOLOGIA
Para la práctica, con anterioridad, se
realizó la estimación de solidos
suspendidos volátiles (SSV), para lo cual
se filtró el lodo por un filtro de fibra de
vidrio y se dejó secar hasta peso
constante a 90℃, así se halló los
sólidos suspendidos totales (SST). El
filtro se puso en una porcelana
calcinada y se llevó a la mufla a 550℃,
posteriormente se dejó secar y se halló
los sólidos suspendidos fijos (SSF),
después se calculó los SSV que es igual
a los SST menos los SSF.
Para la preparación de los reactores
metanogénicos se utilizó como reactor
un recipiente de 2,5L en el que se
inoculó el lodo anaerobio con el medio
mineral, las vitaminas, el agente
reductor y el sustrato; generando así
las condiciones más adecuadas para la
metanogénesis, el reactor solo se llenó
un 70% de su volumen. Se adicionaron
1428,14 mL de medio mineral, 87,5 mL
de solución reductora, 17,5 mL de
vitaminas y 6,86 mL de ácidos grasos
volátiles (AGV). Después de adicionar
los componentes, se agitó y se esperó
entre 20 y 30 minutos para adicionar el
lodo digestor o inóculo del cual se
adicionaron 210 mL. Con una manguera
se conectó el “biorreactor” a una
botella Mariotte que contenía una
solución de NaOH al 1,5% con adición
de fenolftaleína (esta solución actúa
como trampa del CO2, gas que también
se produce durante la metanogénesis).
Finalmente se selló el sistema con
silicona y se dejó gotear la solución
hasta que la presión del NaOH se
igualara con la atmosférica, luego se
selló con unas tijeras. A esto se le
realizo un control al cual no se le
adicionaron ácidos grasos. Se llevó al
cuarto caliente a 30◦C durante 8 días.
Al sistema se le realizó lecturas de
producción de gas lo cual se observaba
por el desplazamiento del NaOH.
CALCULOS
Ecuación utilizada: C1V1=C2V2
1.Volumen efectivo del reactor:
2,5L 100%
X 70%
X = 70% x 2,5L = 1,75L
100%
Volumen efectivo del reactor: 1,75L
 2.Cálculo del volumen de lodo
5.Cálculo del volumen de solución
digestor (inóculo):
reductora:
V1= Inóculo (mL) V1= Volumen de solución reductora
C1= 20,9g/L (mL)
V2= 1,75L C1= 100%
C2= 2500mg/L V2= 1,75L
V1= C2V2 C2= 5%
C1 V1= C2V2
V1= 2,5g/L x 1,75L = 0,21L C1
20,9g/L V1= 5 x 1,75L = 0,0875L
V1= 0,21L x 1000 mL= 210mL 100
1L V1= 0,0875L x 1000 mL= 87,5mL
V1= 210mL 1L
V1= 87,5m

3. Volumen del sustrato (AGV) Cálculo del volumen de medio mineral:

V1= 1750 mL
V1= Volumen de AGV (mL)
V2= 1750mL-(210+6,86+17.5+87,5) mL=
C1= 510g DQO/L
1428,14 mL
V2= 1,75L
C2= 2 g DQO/L
Volumen de medio mineral: 1428,14
V1= C2V2
C1
V1= 2 g DQO/L x 1,75L = 0,00686L
R x 24
510g DQO/L AME=
FC x V x SSV
V1= 0,00686L x 1000 mL= 6,86mL
1L Dónde:
Volumen AGV: 6,86mL
R = tasa de producción de metano en ml de
CH4 / hora (pendiente de la recta)

24 = número de horas en un día

4.Cálculo del volumen de
vitaminas: V = volumen efectivo del reactor (L)
V1= Volumen de vitaminas (mL)
FC = factor de conversión en ml de CH 4/ g
C1= 100%
DQO
V2= 1,75L
C2= 1% SSV =concentración de sólidos suspendidos
V1= C2V2 volátiles del inoculo en g SSV / L
C1
V1= 1 x 1,75L = 0,0175L V1 P1 T1 = V2 P2 T2
V1 = FC
100
FC= 2170,14 mL CH4/ g DQO
V1= 0,0175L x 1000 mL= 17,5mL
1L
Volumen de vitaminas= 17,5mL

Tabla 1. Actividad metanogénica del lodo REACTORES g DQO

 LAR 1 4,03 x 10-4
LAR 2 2,25x 10-4
LAR Control 3,09 x 10-4
Lodo Digestor 1,48x 10-4
Lodo Digestor Control 7,43x 10-4

RESULTADOS

Tabla 2. Medición diaria del desplazamiento de gas durante 8 días

Fecha Hora LAR (AGV) (mL) LAR LODO LODO

LAR 1 LAR 2 (CONTROL) DIGESTOR DIGESTOR
(mL) (AGV) (mL) (CONTROL)
(mL)
25 abril 2:00 pm 26,00 18,00 4,00 18,50 28,00
26 abril 9:00 am 3,00 2,00 3,00 4,00 30,00
2:00 pm 9,50 0,50 0,75 12,25 28,00
28 abril 9:00am 0,30 0,00 0,00 0,15 34,00
2pm 0,00 9,00 19,50 14,75 31,00
29 abril 9:00am 0,25 0,00 0,00 0,335 38,50
2:00pm 4,00 0,00 5,00 5,50 24,00
30 abril 9:00am 5,00 6,00 0,50 1,50 20,00
2:00pm 26,00 5,00 7,25 6,50 33,00
2 mayo 9:00am 5,00 0,00 1,665 0,61 25,00

Tabla 3. Medición del desplazamiento del gas durante 8 días

Fecha Hora LAR (AGV) (mL) LAR LODO LODO

LAR 1 LAR 2 (CONTROL) DIGESTOR DIGESTOR
(mL) (AGV) (mL) (CONTROL)
(mL)
25 abril 0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
4 26,0 18,00 4,00 18,50 28,00
26 abril 23 29,0 20,00 7,00 22,50 58,00
28 38,5 20,50 7,75 34,75 86,00
28 abril 47 38,8 20,50 7,75 34,9 120,00
52 38,8 29,50 27,25 49,65 151,00
29 abril 71 39,05 29,50 27,25 49,985 189,50
76 43,05 29,50 32,25 55,485 213,50
30 abril 95 48,05 35,50 32,75 56,985 233,50
100 74,05 40,50 40,00 63,485 266,50
2 mayo 119 79,05 40,50 41,665 64,095 291,50
Grafico 1. Volumen acumulado de metano según el tiempo

Volumen acumulado de CH4

vs Tiempo
300
f(x) = 2.45864618559065 x + 11.4029632601593
270 R² = 0.988537125197913
240
volumen acumulado de CH4

210
180
150
(mL)

120
90
60 LAR 1
f(x) = 0.486034848398005
0.489502493265318 x + 14.1307789304752
13.5719060583481 Linear (LAR 1)
R² = 0.803569317375525
0.89096437283103
30 0.372099845245601 x +− 10.6473892359718
f(x) = 0.271347509600504 0.106945893276784 LAR 2
0.912405521248867
R² = 0.844029815999151 Linear (LAR 2)
0 Digestor control
0 15 30 45 60 75 90 105 120 135 Linear (Digestor
tiempo (Horas) control)
LAR control

DISCUSIÓN ciclo del carbono ya que lo devuelven a

El metabolismo anaeróbico es un la atmosfera y no permiten que se
proceso complejo que requiere acumule.
condiciones anaeróbicas estrictas para En los habitats naturales, los diversos
proceder, y depende de la actividad grupos de microorganismos compiten
coordinada de una asociación entre sí explotando sus fuentes de
microbiana para transformar el energía, jerarquizadas sobre una base
material orgánico en biogás, que se de disponibilidad de sustrato y de
compone principalmente de metano y rendimiento energético [7]. Los
dióxido de carbono [5]. metanógenos se encuentran en
El dióxido de carbono es común en la hábitats altamente reducidos. En
naturaleza y es un producto importante algunos sedimentos los metanógenos
del metabolismo energético de los son predominantemente
organismos quimioorganotróficos. Los endosimbiontes dentro de diversos
procariotas reductores de CO2 más protistas anaeróbicos [8].
importantes son los metanógenos, un
grupo de arqueobacterias anaeróbicas El impacto de los metanógenos en su
estrictas que emplean generalmente H 2 ambiente es considerable, ya que
como donante de electrones [5]. Estas convierten los productos finales de la
bacterias son muy importantes en el fermentación, en un producto gaseoso
que se puede difundir en una zona
aeróbica, eliminando de ese modo la
perdida de cantidades importantes de
materia orgánica [7].
Hay por lo menos 10 substratos que se
convierten en metano por la acción de
microorganismos metanógenos, los
cuales liberan anergía adecuada para la
síntesis de ATP, incluyendo formiato,
acetato, metanol, etc. La conversión de
acetato a metano aparece como un
proceso ecológico muy importante en
digestores de residuos y en medios
anóxicos de agua dulce, donde no hay
una competencia excesiva por el
acetato con otras bacterias. A pesar de
que la producción de metano está muy
extendida, son pocos los compuestos
de carbono que sirven como
precursores directos de la
metanogénesis. Por lo tanto, es un
proceso que depende de la producción
de esos compuestos por otros
organismos, a partir de la materia
orgánica compleja [5].
Durante la práctica se evaluó la
actividad metanogénica de un
consorcio microbiano presentes en una
muestra de lodo de EPM, la cual se
pudo analizar a través del
desplazamiento de NaOH, en varios
reactores, dos reactores con LAR, y su
control, y un reactor con lodo digestor
y su respectivo control. Cada control se
basaba en que no se le agregaron AGV,
con la intención de observar cómo
afectan estas fuentes de carbono la
actividad metanogénica en cada uno de
los sistemas.
Como se observa en el grafico 1, para la
curva del lodo digestor y su control, se
ve una gran diferencia en los
volúmenes desplazados, esto se puede
deber a que el lodo ya estaba
suficientemente rico en AGV, y al
agregarle más de estos se inhibió la
producción de metano por parte de
microorganismos metanogénicos, pero
por otro lado los grandes volúmenes
desplazados del control del lodo
digestor, con respecto a los demás
reactores podría deberse a fugas en las
mangueras del reactor.
Sin embargo es muy posible que la
adición de AGV inhibiera la
metanogénesis, ya que en la literatura
se encontró que; la etapa limitante de
la digestión anaerobia es la
transformación de ácidos grasos
volátiles (AGV) hasta acetato e
hidrógeno que pueden ser usados por
las metanobacterias. La acumulación de
AGV en los fermentadores
(acidificación), es la causa más
frecuente del fracaso de este tipo de
sistemas. Se ha demostrado que el
ácido propiónico (el cual fue usado) y
no el acético produce ce toxicidad en
metanobacterias. Las formas no
ionizadas de los AGV son las
responsables de la inhibición,
dependiendo ésta, por tanto, de la
concentración total así como del pH del
medio. Estas formas no ionizadas de los
AGV penetran la pared celular
actuando en el interior de las bacterias
disminuyendo el pH, generando
toxicidad celular [8].
Para los reactores con LAR, se observó
que los que contenían AGV tuvieron un
mayor desplazamiento de volumen de
NaOH, causada por una mayor
producción de metano por parte de los
organismos metanógenos, los cuales
tomaron el CO2 presente y lo redujeron
por medio de la utilización de
electrones de hidrógeno [7].
En la tabla 3 se ve claramente cómo va
incrementando la generación de gas
con el transcurso de los días, siendo el
reactor del control del lodo digestor el
que más desplazamiento de NaOH tuvo
probablemente por fugas en el sistema.
Partiendo de lo anterior, podemos
decir que las condiciones óptimas para
el crecimiento y desarrollo de
microorganismos metanogénicos es
sumamente importante para la
producción de metano a partir de AGV,
ya que la concentración de estos
compuestos puede inhibir o satisfacer
el metabolismo de los organismos
presentes en los lodos activados que se
evaluaron.
La producción de CO2 en el proceso de
metanogénesis por parte de
microorganismos, implica que tanto los
microorganismos como la
metanogénesis estén estrechamente
relacionados. Las bacterias juegan un
papel importante en el ciclo del
carbono, ya que el metano producido
es liberado a la atmósfera en
condiciones de ausencia de oxígeno por
medio de las relaciones simbióticas que
se dan con otros microorganismos y de
esta manera impide que se acumule en
los lechos acuosos [9].
CONCLUSIONES
• Con respecto a los reactores
LAR, la adición de ácidos grasos
acelera el proceso de las
bacterias acetogénicas, lo que
se evidencia por una mayor
producción de metano, en
comparación con su control.
• Se logró evidenciar la
importancia industrial y
ambiental que representan las
bacterias metanógenas, ya que
al poder generar metano a
partir de un pool de sustratos
muy variado (H2, CO2, Acetato,
Metanol etc.), y al poder
degradar una serie de materia
orgánica para poder
transformarla y producir
metano, es una gran utilidad
sobre todo para los procesos de
tratamiento de aguas
residuales, en los cuales se
puede utilizar la materia
orgánica disuelta en el agua y
con el uso de este tipo de
bacterias poder generar gas
metano el cual es una molécula
generadora de energía, es decir
que se puede usar como
combustible.
• Los lodos activados son de gran
importancia, ya que se observa
que son un consorcio de
microorganismos activos, los
cuales pueden ser utilizados no
solo para generar metano, si no
otro tipo de moléculas en otro
tipo de procesos metabólicos,
las cuales pueden ser de gran
 utilidad biotecnológicamente a [3] Torres Lozada P, Pérez A.
partir de materia orgánica. Actividad metanogénica
• En dicha práctica se evidencio el específica: una herramienta de
rol ecológico que presentan las control y optimización de
bacterias metanogénicas como sistemas de tratamiento
bio-reductores, ya que son anaerobio de aguas residuales.
indispensables para la Ingeniería de Recursos
degradación de materia Naturales y del Ambiente; No 9
orgánica permitiendo la (2010). 2011.
estabilización de residuos [4] Winn, H; Allen; Janda;
orgánicos existentes en las Koneman; Procop. Koneman
plantas de tratamiento. Son Diagnóstico Microbiológico:
responsables del crecimiento de Texto y Atlas en color. Sexta
los lodos activos en plantas edición. Madrid, España. 2006.
domesticas de tratamiento de [5] Castillo Rodríguez, F.
aguas. Biotecnología Ambiental.
• Por los cambios tan bruscos que Editorial TÉBAR, S.L. Madrid.
se obtuvieron en las lecturas del 2005.
control para el biorreactor de [6] Martí Nuria. Phosphorus
lodos digestivos y el biorreactor Precipitation in Anaerobic
normal, se puede presumir que Digestion Process. Boca Raton,
la utilización de AGV en este Florida. USA. 2006.
último, genero una inhibición de [7] Jaramillo, Víctor J. El ciclo global
las bacterias metanogénicas, del carbono. Instituto Nacional
por lo que; y teniendo en de Ecología [En línea]
cuenta la literatura; el resultado Disponible.
del descenso de la actividad [8] Cámara Moguel Karla Cristel,
metanogénica pudo estar Laines Canepa José Ramón. La
causada por la adición de dichos digestión anaerobia y la
AGV, sobre todo del ácido bioquímica. Laboratorio de
propiónico. residuo de la DACBIOL. Pág. 89-
94.
BIBLIOGRAFIA [9] Bermudez, J.J; Canovas, M. La
digestión anaerobia.
[1] Biología del suelo. Marcelo A, Universidad de Murcia.
María Mandoles. Universidad Secretariado de Publicaciones.
Nacional del sur. Departamento
de Agronommia.2004.
[2] Leonor Carrillo. Actividad
microbiana. Microbiología
Agrícola. Capítulo 3. (2003)