1. ¿Cuál es el rol de la ARN polimerasa T7 que alberga E. coli BL21 (DE3)?

 
 La cepa de BL21 alberga una copia de tipo cromosómico del gen ARN polimerasa T7 la cual es
controlada bajo el efecto del promotor lac, el cual es producto de la derivación del lac L8-UV5
(Lara, 2011). Este promotor posee un tipo de mutaciones específicas que plantea una
diferencia característica con respecto al promotor lac salvaje, por ello, alrededor de dos
mutaciones son identificadas en la región-10 la cual tiene la función de aumentar la fuerza del
promotor mencionado anteriormente y eliminar la dependencia presentada con respecto al
CAP y al AMP cíclico, esto es lo que hace posible un inducción considerablemente alta de la
ARN polimerasa de T7 incluyendo el IPTG aún cuando existe la presencia de glucosa (Santos,
2019). Últimamente el gen de ARN polimerasa T7 como siempre controlado por el lacUV5
también se lo ha utilizado para una llamada expresión no T7además de la producción de
nuevas vacunas contenidas con ADN plasmídico.

2. ¿Cuál es la utilidad de un tag SUMO para la purificación de una enzima?  

El tag Sumo Small Ubiquitin-like Modifier es una secuencia contenida con alrededor de 100
aminoácidos que tiene entre otras funciones el control en la transcripción de las células
eucariotas y es utilizada en forma de secuencia de fusión en el extremo N para elevar el índice
de expresión y solubilidad con respecto a la proteína recombinante seleccionada
(Starokadomskyy & Burstein, 2014). En la expresión de proteínas de E.coli muchas veces
resulta afectada debido a la insolubilidad proteica para lo cual es muy utilizado el sumo ya que
mediante las proteínas de fusión sumo hace posible la eliminación del llamado resto sumo
mediante la utilización de proteasas específicas

3. ¿Cuál es la diferencia entre los medios de cultivo Luria Bertani y Terrific Broth? 
Los dos medios de cultivo tanto el de Luria Bertani como el de Terrific Broth son utilizados
como medios para bacterias sin embargo poseen ciertas diferencias las cuales se mencionan a
continuación:

Luria Bertani
 Es un medio estándar que posee un alto contenido en sal para el cultivo de E.coli
 Es un cultivo prometedor para la preparación de plásmidos
 El cultivo tiene una presentación en forma granulada
Terrific Broth
 El caldo terrífico es de alta densidad e ideal para cultivos de E.coli
 Es prometedor para expresión de proteínas y preparación de plásmidos
 Su presentación es en forma granulada (Roux, 2010).

El medio de Luria-Bertani también conocido como LB es un medio muy utilizado cuando se

trata de cultivo de E.coli debido a que posee un enriquecimiento en el aspecto de nutrientes,
tomando en cuenta en que su proceso de elaboaración es poco complicado permitiendo de
esta forma un crecimiento de muchas variedades de cepas, sus constituyentes principales son
NaCl, Triptona y extracto de levadura. En cambio el medio TB (Terrific Broth) es un medio rico
con tampón fosfato el cual posee un 20% más de peptona y un 380% más de extracto de
levadura que el LB y además de esto posee glicerol como fuente de carbono indicando de esta
forma un contenido rico en nutrientes lo cual permite la producción de altas densidades de
cultivo, lo cual es ideal para que se produzcan proteínas y ADN plasmídico (Francisco et.al
2011).

4. Explique como convertir 5000 g a rpm 

1. Cómo primer paso se mide el radio del rotor correspondiente a la centrífuga

 2. Sustituir las variables en la fórmula en donde:
 g = fuerza centrífuga relativa
 r = radio del rotor
 rpm = revoluciones por minuto

Fuerza g=¿

rpm=
√ RCF
r 1.118
−5
(1 x 10 )

Finalmente si se está trabajando con la centrifuga colocar las RFC o rmp en el rotor que se va a
utilizar no pasando por alto equilibrar el rotor de la centrífuga.

Bibliografía.-

Lara, Á. R. (2011). Producción de proteínas recombinantes en Escherichia coli. Revista

Mexicana de Ingeniería Química, 10(2), 209–223. http://www.scielo.org.mx/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1665-27382011000200006&lng=es&nrm=iso&tlng=es
Roux, W. (2010). Introducción Al Cultivo Celular.
Santos, J. (2019). PROTEÍNAS Estructuras fascinantes.
Starokadomskyy, P., & Burstein, E. (2014). BAP: a variation of TAP with Multiple Application.
Methods in Molecular Biology, 1177, 193–209. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-1034-
2
Garboza, Fátima, Frontado, Ronald, Noguera, Nirza, Ávila, Horacio, Ojeda, Luis, Ramírez,
Ninoska, Triana, Juana, & Triana, Francisco. (2011). Uso de medios alternativos a base de
hidrolizado de caseína y extracto de Aspergillus niger y su efecto sobre la expresión genética
de una cepa de Escherichia coli. Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología, 31(2),
138-143. Recuperado en 08 de mayo de 2023, de http://ve.scielo.org/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1315-25562011000200010&lng=es&tlng=es.