DARSA

Curso
Validación de Métodos de Ensayo
Actualización de cambios ISO 17025
Vesión 2005 vrs 2017

Estuardo Monroy Benítez

Ingeniero Químico
Asesor Experto ISO 17025
Consultor Calificado BANCO MUNDIAL, PTB, GTZ, UNION
EUROPEA, USAID, VISION MUNDIAL, OGA, OSA, OHA, etc.
 VALIDACION

Es el proceso por el cual se establece por

estudios de laboratorio que la metodología,
por sus características de desempeño
cumple con los requerimientos que se
pretenden para el método
 REQUERIMIENTOS DE LA NORMA
ISO 17025:2005

5.4.2Selección de los métodos

El laboratorio debe utilizar los métodos de ensayo o de calibración,
incluidos los de muestreo, que satisfagan las necesidades del cliente y
que sean apropiados para los ensayos o las calibraciones que realiza.
Se deben utilizar preferentemente los métodos publicados como
normas internacionales, regionales o nacionales.
 REQUERIMIENTOS DE LA NORMA

ISO 17025:2005

5.4.2Selección de los métodos

Cuando el cliente no especifique el método a utilizar, el laboratorio

debe seleccionar los métodos apropiados que hayan sido publicados
en normas internacionales, regionales o nacionales, por
organizaciones técnicas reconocidas, o en libros o revistas científicas
especializados, o especificados por el fabricante del equipo. También
se pueden utilizar los métodos desarrollados por el laboratorio o los
métodos adoptados por el laboratorio si son apropiados para el uso
previsto y si han sido validados.
 REQUERIMIENTOS DE LA NORMA
ISO 17025:2005
5.4.2Selección de los métodos

El cliente debe ser informado del método elegido.

El laboratorio debe confirmar que puede aplicar correctamente los
métodos normalizados antes de utilizarlos para los ensayos o las
calibraciones. Si el método normalizado cambia, se debe repetir la
confirmación.

5.4.5Validación de los métodos

5.4.5.1La validación es la confirmación, a través del examen y el
aporte de evidencias objetivas, de que se cumplen los requisitos
particulares para un uso específico previsto.
 REQUERIMIENTOS DE LA NORMA
ISO 17025:2005

5.4.5.2El laboratorio debe validar los métodos no normalizados,

los métodos que diseña o desarrolla, los métodos normalizados
empleados fuera del alcance previsto, así como las ampliaciones y
modificaciones de los métodos normalizados, para confirmar que
los métodos son aptos para el fin previsto.

La validación debe ser tan amplia como sea necesario para

satisfacer las necesidades del tipo de aplicación o del campo de
aplicación dados. El laboratorio debe registrar los resultados
obtenidos, el procedimiento utilizado para la validación y una
declaración sobre la aptitud del método para el uso previsto.
 REQUERIMIENTOS DE LA NORMA
ISO 17025:2005

NOTA 2 Es conveniente utilizar una o varias de las técnicas

siguientes para la determinación del desempeño de un método:

calibración utilizando patrones de referencia o materiales de

referencia;
comparación con resultados obtenidos con otros métodos;
comparaciones inter-laboratorios;
evaluación sistemática de los factores que influyen en el
resultado;
evaluación de la incertidumbre de los resultados basada en el
conocimiento científico de los principios teóricos del método y
en la experiencia práctica.
 REQUERIMIENTOS DE LA NORMA
ISO 17025:2017
7.2.1 Selección, verificación y validación de métodos
7.2.1 Selección y verificación de métodos
7.2.1.1 El laboratorio deberá utilizar métodos y procedimientos apropiados para
todas las actividades de laboratorio y, cuando corresponda, para la evaluación de
la incertidumbre de la medición, así como técnicas estadísticas para el análisis de
datos.

7.2.1.2 Todos los métodos, procedimientos y documentación de respaldo, tales

como instrucciones, estándares, manuales y datos de referencia relevantes para las
actividades de laboratorio, se mantendrán actualizados y estarán disponibles para
el personal (ver 8.3).

7.2.1.5 El laboratorio verificará que puede realizar correctamente los métodos

antes de introducirlos asegurándose de que puede lograr el rendimiento requerido.
Se conservarán los registros de la verificación. Si el organismo emisor revisa el
método, la verificación se repetirá en la medida necesaria
 REQUERIMIENTOS DE LA NORMA
ISO 17025:2017
7.2.2 Validación de métodos
7.2.2.1 El laboratorio validará los métodos no estándar, los métodos desarrollados
en el laboratorio y los métodos estándar utilizados fuera de su alcance previsto o
modificado de otra manera. La validación debe ser tan extensa como sea necesaria
para satisfacer las necesidades de la aplicación o campo de aplicación dados.

NOTA 1 La validación puede incluir procedimientos para el muestreo, la

manipulación y el transporte de los elementos de prueba o calibración.
 REQUERIMIENTOS DE LA NORMA
ISO 17025:2017
NOTA 2 Las técnicas utilizadas para la validación de métodos pueden ser una de,
o una combinación de, las siguientes:
a) calibración o evaluación de sesgo y precisión utilizando estándares de referencia
o materiales de referencia;
b) evaluación sistemática de los factores que influyen en el resultado;
c) robustez del método de prueba mediante la variación de los parámetros
controlados, como la temperatura de la incubadora, volumen dispensado;
d) comparación de resultados logrados con otros métodos validados;
e) comparaciones entre laboratorios;
f) evaluación de la incertidumbre de medición de los resultados basada en la
comprensión de los principios teóricos del método y la experiencia práctica del
rendimiento del método de muestreo o prueba.
 REQUERIMIENTOS DE LA NORMA
ISO 17025:2017

7.2.2.2 Cuando se realicen cambios en un método validado, se determinará la

influencia de dichos cambios y, cuando se descubra que afectan a la validación
original, se realizará una nueva validación del método.
7.2.2.3 Las características de funcionamiento de los métodos validados según se
evalúa para el uso previsto, deberán ser relevante para las necesidades de los
clientes y consistente con los requisitos especificados.

NOTA Las características de rendimiento pueden incluir, entre otras, el rango de

medición, la precisión, la incertidumbre de medición de los resultados, límite de
detección, límite de cuantificación, selectividad del método, linealidad,
respetabilidad o reproducibilidad, robustez frente a influencias externas o cruces -
sensibilidad a la interferencia de la matriz de la muestra o el objeto de prueba, y
sesgo.
 REQUERIMIENTOS DE LA NORMA
ISO 17025:2017
7.2.2.4 El laboratorio conservará los siguientes registros de validación:
a) el procedimiento de validación utilizado;
b) especificación de los requisitos;
c) determinación de las características de rendimiento del método;
d) resultados obtenidos;
e) una declaración sobre la validez del método, detallando su idoneidad para el uso
previsto.
METODOS DE ENSAYO EN DESTILERÍAS:
I. Determinación del grado alcohólico volumétrico
Apéndice I. Preparación del destilado
Apéndice II. Medida de la densidad absoluta del destilado
— Método A: picnometría
— Método B: densimetría electrónica
— Método C: densimetría

II. Determinación del extracto seco total (por gravimetría)

III. Determinación de las sustancias volátiles y del metanol
III.1 Observaciones generales
III.2 Congéneres volátiles: aldehídos, alcoholes superiores, acetato
de etilo y metanol (cromatografía de gases)
III.3 Acidez volátil (p.m.)
MÉTODO B:
DETERMINACIÓN DEL GRADO ALCOHÓLICO
VOLUMÉTRICO REAL DE LAS BEBIDAS ESPIRITUOSAS
POR DENSIMETRÍA ELECTRÓNICA (BASADO EN LA
FRECUENCIA DE LA OSCILACIÓN DE RESONANCIA DE
UNA MUESTRA EN UNA CÉLULA OSCILANTE)

B.1. Principio
La densidad absoluta del líquido se determina mediante la
medición electrónica del período de oscilación de un tubo
vibratorio en U. Para efectuar este tipo de medición, la muestra se
introduce en el sistema oscilante (tubo en U) cuya frecuencia de
oscilación específica se ve consiguientemente modificada por la
masa añadida.
 CUANDO VALIDAR Y
REVALIDAR UN METODO
• Cuando validar un método: Antes de
introducirlo como método de rutina.

• Cuando revalidar un método: Cuando el

método ha cambiado y provoca
modificaciones en los resultados.
 COMO EMPEZAR
•Definir la aplicación, propósito y alcance del
método:
Cuantificación de componentes principales y/o trazas.

•Definir parámetros de desempeño (Performance)

•Para definir estos parámetros de desempeño es necesario
hacerse las siguientes preguntas:
Que debe ser analizado?
Cual es la matriz?
Cuales son las expectativas del desempeño
 COMO EMPEZAR
• Características de desempeño (Performance)
• Calificación de materiales : (Estándares y Reactivos).
• Calificación de equipos (Instrumental y cristalería)
• Desarrollo del método (Investigar y Seleccionar)
• Desarrollar el procedimiento/Instructivo estándar de
operación –método de rutina-.
 COMO CONTINUAR
• Protocolo y desarrollo de validación
(Procedimiento/Instructivo)
• Definir los experimentos de validación
• Definir criterios de validación.
• REALIZAR LAS PRUEBAS DE VALIDACION
Y constatar contra los criterios aceptables de validación

• DOCUMENTAR LAS PRUEBAS DE VALIDACION Y

RESULTADOS EN EL REPORTE O DECLARATORIA DE
VALIDACION.
 Parámetros claves …

• Cómo asegurar que estamos haciendo las mediciones a los

compuestos correctos (Selectividad/ Especificidad).
• Como aseguras la exactitud de los resultados (Exactitud)
• Como asegurar que la cuantificación sobre un rango es
exacta (Linealidad).
• Como asegurar la detección del analito (Límite de
detección).
• Como Asegurar la cuantificación exacta rango mínimo y
máximo ( Rango de trabajo y Límites de
cuantificación).
 Parámetros claves …
• Como deben ser los resultados de precisión
del método usándolo en diferentes laboratorios
(Reproducibilidad).
• Como deben ser los resultados de precisión
del método usándolo en un mismo laboratorio
(Repetibilidad).
• Como es la precisión con variaciones normales en
trabajo de rutina (Tolerancia / Robustez).
 Parámetros de validación
• Especificidad/Selectividad
• Linealidad del sistema
• Precisión
• Repetibilidad
• Reproducibilidad
• Exactitud y linealidad del método
• Límite de detección
• Límite de cuantificación
• Tolerancia/ Robustez
 Especificidad / Selectividad
• Especificidad: Es la habilidad de un método
analítico para obtener una respuesta debida
únicamente a la sustancia de interés y no a otros
componentes de la muestra.

• Selectividad: Es la capacidad que tiene un método

analítico, para “distinguir” o separar la respuesta
de la sustancia de interés del resto de los
componentes de una muestra.
 Linealidad
• Es la habilidad para asegurar que los
resultados analíticos son proporcionales a la
concentración de la sustancia de interés
dentro de un intervalo o rango determinado.
• Este resultado analítico puede ser obtenido
directamente o por medio de una
transformación matemática.
 Linealidad
• Se determina construyendo una curva de
calibración (Concentración vrs Respuesta)
utilizando mínimo 5 diluciones preparadas a partir
de una misma solución patrón y haciendo análisis
cuando menos por duplicado para cada dilución.
• Criterios:
• CV < 1.5%
• r > 0.99
r2 > 0.98
• b=O m = Sensibilidad del Sistema
 Precisión
Es el grado de concordancia entre una serie
de determinaciones obtenidas de repetir el
análisis de una muestra homogénea.

La precisión se expresa como la desviación

estándar relativa o el coeficiente de
variación.
Precisión y Exactitud
 Precisión
Repetibilidad
• Es la precisión de un método analítico
expresado como la concordancia entre
determinaciones independientes realizadas bajo
las mismas condiciones (Analista, tiempo,
aparato, reactivos, laboratorio, etc)
* Se determina mediante el análisis por
sextuplicado de una misma solución estándar a
la concentración del 100 % establecido en la
linealidad.
• Criterio de aceptación
• CV < 1.5 %
 Precisión
Reproducibilidad
• Es la precisión de un método analítico expresado
como la concordancia entre determinaciones
independientes realizadas bajo las diferentes
condiciones (Analista, tiempo, aparato, reactivos,
laboratorio , etc.)
• Se determina mediante el análisis por triplicado
de una muestra homogénea del producto final,
valorada por dos analistas y en dos días
diferentes, siendo un total de 12 análisis.
• Criterio de aceptación
• CV < 2%
 Exactitud
• Es la concordancia entre un valor obtenido
experimentalmente y el valor de referencia.
• Se expresa como el % de recobro obtenido del análisis
de muestras a las que se les ha adicionado cantidades
conocidas de la sustancia.
• Criterio de aceptaci6n
• 0/o Recobrado: 98 a 102%

• CV < 20/o
• % Recuperado vs. % Adicionado
• m = 1 b = 0 r2 > 0.98
 Sensibilidad
• Capacidad que tiene un sistema analítico
para detectar pequeñas variaciones en la
concentración de la sustancia de interés
(Pendiente “m” de la curva).
 Límite de detección
• Es la concentración mínima de la sustancia
de interés que puede ser detectada por el sistema
analítico propuesto, pero no necesariamente
cuantificada.

Criterio de aceptación:
• Mínimo 2 veces el nivel de ruido

• Ruido: es la variación observada en la señal del

detector cuando la muestra no esta presente.
 Limite de cuantificación
• Es la concentración mínima de la sustancia de
interés que puede ser cuantificada de manera
confiable con una exactitud y precisión
adecuada.

• Es particularmente usada para determinación

de impurezas y/o productos de degradación.
• Típicamente 10 a 20 veces la altura del ruido.
 Tolerancia
• Tolerancia: Es el grado de reproducibilidad de
los resultados analíticos obtenidos por el análisis
de la misma muestra, cuando es influenciada por
condiciones operacionales o ambientales. Tales
como:
• Analistas
• Equipos
• Laboratorios
• Proveedores (Columnas, Reactivos, etc.)
 Robustez
Robustez: Es la medida de la capacidad que
tiene un sistema analítico de no ser afectado
por pequeñas variaciones en los parámetros
analíticos.
Tales como:
• pH
• Temperatura
 Métodos ??
Densimetría
electrónica ??
Código: IN-DES-MIN-01
Medición de Grado Alcohólico
Versión: 03
Página: 1 de 1

PROCEDIMIENTOS DE PORTADA
DARSA REVISION: 01
CALIDAD IDENT.: CCP014

CCR079
DARSA REV 001
Plan para la Validación o Verificación de Métodos
VERIFICACION DEL METODO
 INTERCOMPARACION DE ENSAYOS
Caso ejemplo en Cromatografía de gases / Análisis de alcoholes
 INTERCOMPARACION DE ENSAYOS
Caso ejemplo en Cromatografía de gases / Análisis de alcoholes
 INTERCOMPARACION DE ENSAYOS
Caso ejemplo en Cromatografía de gases / Análisis de alcoholes
 INTERCOMPARACION DE ENSAYOS
Caso ejemplo en Cromatografía de gases / Análisis de alcoholes
 INTERCOMPARACION DE ENSAYOS
Caso ejemplo en Cromatografía de gases / Análisis de alcoholes
 INTERCOMPARACION DE ENSAYOS
Caso ejemplo en Cromatografía de gases / Análisis de alcoholes
 TALLER PRACTICO

1. Revisar los procedimientos de verificación o validación de

uno o varios de sus método analíticos

1. Revisar un documento de cálculos de verificación o validación

de métodos para uno de sus métodos.

1. Revisar un registro de “Declaratoria de Validación de

métodos analíticos”
 GRACIAS POR SU ATENCION

ESTUARDO MONROY BENITEZ

Ingeniero Químico, USAC
Profesor Universitario de Gestión de Calidad
Consultor experto para ISO 17025 por PTB-Alemania, Unión Europea, USAID, etc.
Auditor interno ISO 17025 PTB 2004

Guatemala, C. A. – ingmonroy1@yahoo.com - Tel. (502) 57748672