Clase 1 martes 13 de septiembre:
inmunidad debe saber distinguir cuando un
El tema que veremos es la inmunidad adaptativa,
cuando hablamos de esta inmunidad es que los distintos
microorganismos poseen una serie de moléculas que
son propias y características, típicas y que estas las
agrupamos en los patrones moleculares asociados a
patógenos, la característica molecular de estas
biomoléculas como los hidratos de carbono, lípidos,
ácidos nucleicos, mayoritariamente, también hay
proteínas en caso de la flagelina que es una proteína que
funciona como un PAMPs, esto es el reconocimiento
genérico, entonces podemos tener una bacteria gram+, -
un virus, etc, en el sistema inmune cuando cualquier
microorganismo se vuelve persistente, es decir, los
mecanismos innatos que tenemos son varios,
fagocitosis, el sistema del complemento, opsonización
por proteínas de fase aguda, ataque citotóxico por las
células NK, si toda esta inmunidad innata no puede
contra microorganismos que tienen una persistencia,
esta persistencia está dada por los factores de virulencia,
los vuelve más infectivos, moléculas que expresan, que
secretan que producen en el medio extracelular que
permiten romper las uniones entre las células, pero
particularmente se ha descubierto que los patógenos
poseen mecanismos de evasión de la inmunidad,
entonces, en una típica balanza cuando ponemos el
patogeno activa mecanismos de virulencia y la balanza
se carga para el patogeno, el sistema inmune activa los
macrofagos de inflamacion y la balanza se carga en
beneficio de la inmunidad, el patogeno activa los
mecanismos de evasión de la inmunidad, y la balanza se
carga en función del patogeno, entonces esta dinamica
es la que permite un continuo equilibrio desequilibrio
hasta que alguien tiene que cargar, nuestro interes es
que gane la inmunidad sobre el patogeno, pero nosotros
nos dedicamos a ver todos los mecanismos inmune de la
defensa, y tal parece que con la inmunidad innata
podriamos sobrevivir, de hecho hay organismos en el
planeta que solo viven con esa, pero los patogenos han
evolucionado con nosotros, son 2 biologías que van en
paralelo, y estas se conocen y van generando una serie
de mecanismos de evasión, existen proteínas que
bloquean a las proteínas del complemento, por ej, por
ver un ej a las proteínas del complemento estos
mecanismos de evasión podrían bloquearlos, como los
patógenos tienen moléculas que bloquean este ataque
inmune, es una guerra hasta que alguien tiene que
vencer, una de las estrategias que desarrolló nuestro
sistema inmune que apareció en los vertebrados fue el
de seleccionar específicamente sobre qué patógeno
dirigir el ataque del sistema inmune, porque no
olvidemos que la inmunidad está en contacto con un
bloque de microorganismos de microbiota, lo que son
patógenos, los de la microbiota que se pueden volver
patógenos, es decir que hay una mezcla que la
microorganismo en particular es capaz de ser
persistente, y este tiene una serie de moléculas y no nos
olvidemos nunca que lo que lo caracteriza es su
fenotipo, lo hemos definido, el fenotipo de un patógeno
son las proteínas que expresa es el proteoma, cuando
hacemos un análisis proteico, ¿como se hacen? ¿Cómo
obtener la secuencia de una proteína? por digestión
enzimática, el MALDI TOF, el espectrómetro de masa da
el peso exacto de una proteína en concreto, la
secuenciación de edman era una técnica para poder
obtener secuencias de péptidos, siempre se fragmenta
una molécula grande y se van secuenciando los
fragmentos pequeños, primero teníamos el DNA un
fragmento largo y con una enzima se cortan hasta
generar pequeños y se ponen en un gel y se ven las
bandas y las bases nitrogenadas se unen y se arma la
secuencia, tomando como modelo eso no se podía
generar para las proteínas, por la cantidad de
aminoácidos, para poder identificar la relación entre
DNA y proteínas cada 3 bases nitrogenadas 1
aminoácido, desde la proteina al genoma, hay muchas
técnicas para purificar, pero ¿cual es la secuencia
aminoacídica? se va desde la proteína a buscar el gen y
desde el gen se proyecta la secuencia de la proteína, se
tiene que buscar el extremo amino, ese es el extremo de
inicio y se encontraba el fragmento de DNA que
corresponde al extremo amino y esa secuencia se
comenzaba a saber sus bases nitrogenadas. Es decir,
desde el N terminal se iba al gen. a lo menos es
necesario conocer los primeros 20 residuos de
aminoácidos del extremo N terminal que identifican a
una proteína en particular y a un gen en particular.
EDMAN inventó la secuencia de edman que permite
reconocer los 20 residuos, para eso hay que hacer un
proceso del desbloqueo del N terminal por reducción y
alquilación con lo que el N terminal quedaba expuesto y
fragmentado y el trozo se somete a una digestión que va
aminoácido por aminoácido, lo que estaba conectado a
un HPLC que después de sacar cada aminoácido iba
entrando al HPLC y daba un valor de detección y había
un estándar para cada aminoácido. Pero el concepto de
secuenciación de edman, es fragmentación, digestión,
aminoácido por aminoácido y HPLC que informa de un
feed específico para cada hidrólisis un pick específico,
este aproximado resultante permite obtener el N
terminal. Se obtenían las letras y se pasaban a bases
nitrogenadas, y la secuencia se hibridaba y se pasaba al
gen, esto es de los años 80-70. Ahora es al revés, desde
el gen a las proteínas porque se utiliza la secuencia de
bases nitrogenadas para predecir la secuencia de
proteínas, la mayor cantidad de información de las bases
de datos de proteínas es por predicción. Un maldi tof es
un espectrómetro de masas que está asociado a
distorsión de láser el que le da a la muestra y se despega
de la plataforma de la que está y se ioniza donde
experimenta el tof, entonces, el láser ioniza y entra al tof
que es tiempo de vuelo, entonces mientras más grande
va a tener un peso molecular mayor, el que da el peso
molecular exacto de una proteína, pueden ser proteínas
completas o fragmentos. Entonces, fingerprint tengo la
muestra, la hidrolizo, se lleva al maldi el láser genera los
fragmentos ionizados vuela y el aparato me dice tienes 4
fragmentos y estos son los pesos moleculares exactos, y
esto es lo que se llama la huella peptídica o fingerprint,
lo que se mete a una base de datos que hidroliza todas
las secuencias de proteínas conocidas, es un análisis in
silico, entonces compara la huella peptídica con billones
de proteínas existentes en la base de datos y dice que
proteína es como una lisozima. El maldi tof es la técnica,
el fingerprint es digerir llevar al maldi tof para tener una
huella pero luego tenemos que tener la base de datos
que nos permita buscar y encontrar de qué molécula se
trata, esta fue la primera luego vinieron otras. En la
actualidad la proteómica puede tomar un proteoma
digerir toda y el propio motor de búsqueda ordena
todos esos trozos.
La bacteria tiene un proteoma, y ese proteoma es único.
Si nosotros hacemos un análisis del proteoma de una
muestra vamos a encontrar un perfil exclusivo único y
mayoritario, aquellas moléculas que son típicas o
características de un patógeno van a ser sus moléculas
más abundantes, y por lo tanto el sistema inmune lo que
hace es responder. Porque dará una respuesta contra
aquel componente masivo de proteínas que contenga
ese patógeno, y ese componente masivo de proteínas
que contienen ese patógeno va a constituir lo que se
denomina el antígeno. Entonces, tenemos el patógeno
completo, pero tiene su estructura de proteoma, y
dentro de su estructura de proteoma tiene proteínas
abundantes en particular que son las que circulan por el
organismo y se convierten en un antígeno.
Un antígeno es que al conejo se le inyecta un antígeno x,
y del antígeno sale un anti x, (inmunología de colegio) el
antígeno x se inyecta en el conejo y del conejo obtener
el anti x, esto es un anticuerpo anti x, es inmunidad
adaptativa porque se da una respuesta inmune frente a
esa molécula, entonces ¿este conejo produce anti x o
produce anti y? anti y porque tiene el antígeno y,
antígeno x, entonces sabemos desde tiempo del colegio
que los anticuerpos son producidos por los animales en
respuesta a un antígeno, entonces el antígeno lo
definimos si pensamos en la selección clonal, esta
capacidad de activar a estos componentes de la
inmunidad adaptativa por ej los linfocitos B, anticuerpos,
ahora tomando esa idea ¿cómo lo asociamos con
selección clonal? cuando vimos selección clonal, vimos
que muchos linfocitos B en su superficie exponen la mIg
que es una inmunoglobulina de membrana que es capaz
de reconocer distintos antígenos, entonces el antígeno
es reconocido por un linfocito B, entonces el antígeno es
una molécula que es reconocida por el mIg del linfocito
B, ahora ¿qué se reconoce del antígeno? se reconoce un
epítopo, en el lab vimos que se pueden producir
anticuerpos en un animal si le inyecto un antígeno y
recuperar los anticuerpos por técnicas inmunológicas,
pensando en inmunidad la molécula que va del N- al C
terminal posee secuencias específicas que son
reconocidas por el linfocito B, entonces estudiamos en el
lab que son secuencias epitope, e incluso existen
buscadores específicos en donde por análisis
bioinformático podemos predecir eso porque se conoce
secuencia epitope, entonces hay una base de datos de
secuencias epítopo que reconoce estas secuencias y
luego podemos analizarlas, y tiene tal probabilidad de
serlo, esta es una región hidrofílica, hidrofóbica,
expuesta en la molécula, porque cuando diseñemos o
fabriquemos el epitope veremos esto, algo similar a esto
hace el sistema inmune de manera natural sólo,
entonces ¿cómo hacemos el concepto de epitope al de
selección clonal con la definición de antígeno, cómo lo
reunimos para definir antígeno? Un antígeno es una
molécula que posee una o más secuencias epitope que
pueden ser reconocidas por las mIg de los linfocitos B.
En ese concepto está aplicado antígeno, respuesta, la
hipótesis de selección clonal, debe ser reconocida por la
mIg del linfocito B. Ahora ¿sólo en las respuestas
adaptativas participan los linfocitos B, cómo ampliamos
la definición? La clave es el reconocimiento del antígeno
el que es una molécula que posee una o más secuencias
epitopes, 4,7, 7-9, 11-13, son secuencias de esa cantidad
de residuos, no es grande, estas secuencias epítopes son
reconocidas por una mIg del linfocito B, por una parte,
estos son los antígenos que andan libres a los ganglios
linfáticos, circulan libre, pero nosotros sabemos que las
células dendríticas toman estos antígenos enteros con el
patógeno y lo toman, lo procesan y lo presentan a los
linfocitos T. Un antígeno es una molécula que posee 1 o
más secuencias epitope reconocidas por un mIg de un
linfocito B o por un TCR de un linfocito T.
Primero vamos a hablar de lo que pasa con los
anticuerpos, luego vamos a hablar de los linfocitos T. La
capacidad adaptativa, la capacidad de respuesta contra
el patógeno, el sistema inmune actúa como un
laboratorio de proteómica, hace un analisi de los que
dará respuesta, es sencillo como seleccionar a las
moléculas del análisis proteómico, es por abundancia,
cualquier proteína que no tenga el fenotipo típico del
patógeno va a estar en menor proporción y quedara por
ahi perdida comida por algun macrofago y no
prosperará, pero aquellas moléculas que son
mayoritarias van a ser procesadas y empezaran a
convertirse en el antígeno, entonces el antígeno es esta
molécula que posee estas secuencias epitopes
(péptidos) que se reconocen libres por mIg o se
reconocen por péptidos presentados por los TCR, estos
son los 2 puntos claves que son importantes. Después
estudiaremos lo de los linfocitos T y la presentación de
antígenos porque hay que hablar del MHC y el TCR,
ahora hablaremos de los linfocitos B que sabemos que
son los que producen estos anticuerpos y estos van a
reconocer de manera específica a esa secuencia epitope.
Los anticuerpos se caracterizan por poseer 2 cadena
pesada y 2 livianas, básicamente si uno los dibuja tienen
esta región pesada y la cadena liviana y existen las
regiones del extremo amino, al carboxilo, las cadenas
ligeras, que están allí las de afuera y la central es la
cadena pesada, ahora está región del anticuerpo es lo
que se llama las regiones constantes, es decir, son
iguales para todas las moléculas, y el extremo amino se
encuentra la región variable que es la que tiene la
capacidad de reconocimiento del antígeno. La variable y
la región constante, esa región variable está en el
extremo amino, la región constante está en el extremo
carboxilo, la clásica división de cuando se empezó a
estudiar estas moléculas es que se logró determinar que
se podía degradar enzimáticamente y la degradación
enzimática por esta forma es que las inmunoglobulinas
se representan como un Y, la cadena pesada y liviana,
básicamente esto cuando se degradó dio origen a esto,
la región variable que se llamó fracción Fa la región Fa es
la fracción anticuerpo, porque este pedacito es que el
reconoce al antígeno, la fracción de anticuerpo es Fac y
por lo tanto, esta Fa está asociada a esta región variable
mientras que esta otra se llama Fc que está asociada a la
región constante, la región Fc no se llama Fc por
constante, la región Fc se llama c porque es la región
cristalizable de la molécula. Recordemos que cuando
vimos los receptores Fc gamma R, Fc alfa R, son los
receptores que reconocen a esta región Fc, finalmente
hay 3 características de los anticuerpos, que debemos
recordar para su nomenclatura, y esa características son
el isotipo, que tiene que ver con la clase el halotipo que
en el fondo son subclases y el ideotipo que tiene que ver
con el reconocimiento del antígeno, el isotipo que es la
clase está determinado por la cadena de la región
constante, esta cadena aminoacídica puede tener
variantes, y las variantes son alfa, epsilon, gamma, delta
y mu. Son 5 variables de la secuencia de la cadena
constante de la Ig y esas 5 variables dan origen a los
isotipos que son las clases y cada clase le da el nombre a
la inmunoglobulina, la cadena alfa IgA, la epsilon es la
IgE, la gamma es la IgG, la delta es la IgD y la mu es la
IgM, entonces las 5 clases de inmunoglobulina es la IgA,
IgE, IgG, IgD e IgM. Las principales solubles son las
clásicas de funciones de anticuerpos son la IgM y la IgG,
la IgA es la típica de sueros y mucosas (lágrimas). La IgE
también es sérica pero está en mucho menor proporción
que está relacionada con las alergias fuertes y la IgD es
porque casi no existe en el suero está solo en la
membrana de los linfocitos B, entonces se dice que es la
Ig, es una IgD, la IgD prácticamente no existe en el suero,
entonces se dice que está siempre pegada al linfocito B y
aparentemente la mIg es una IgD. El halotipo son
subclases por ej IgG1, IgG2, IgG3. Entonces, en la cadena
constante existen diferencias en la secuencia que son
para variantes más halotípicas, son alelos, son variantes
halotipicas, el halotipo, y el ideotipo es una
característica que está en la región variable. El ideotopo
es el que reconoce el epitope. El isotipo es importante
porque tiene que ver con la clase, la cadena liviana
puede ser de 2 tipos, kappa o lambda, y no define (no
está involucrada en la clase), en la clase está involucrada
en la cadena pesada.
20 - 26 - 27 septiembre fueron los seminarios. 3
octubre mercado dio día libre por la prueba de
seminario.
Clase 2 martes 4 octubre 2022
En la clase de hoy nos enfocaremos en los péptidos
antimicrobianos, como su nombre lo indica son
pequeñas proteínas que tienen actividad contra
diferentes microorganismos, pero les voy a contar un
poco las características generales, cuál es el rol que
tienen, los mecanismos de defensa, y después vamos a
terminar con una exposición más de investigación de
péptidos antimicrobianos de invertebrados marinos.
Entonces los péptidos antimicrobianos es una familia de
moléculas que está virtualmente representada en
cualquier organismo vivo, generalmente se describieron
en insectos, en cualquier organismo que las han buscado
las han encontrado, vienen de un origen ancestral inicial,
de hecho están en bivalvos (imaginense en el nivel
primitivo en el que están) la gracia es que se clasifican
gracias a sus características fisicoquímicas estos péptidos
(todos tenemos la noción de lo que es un péptido, una
secuencia de aminoácidos de 4 kDa) los péptidos
antimicrobianos originalmente fueron caracterizados
como proteínas catiónicas, osea altamente enriquecidos
en aminoácidos cargados positivamente como lisina,
arginina y en algunos casos histidina, pero también a la
medida que se ha ido investigando y descubriendo estas
moléculas se ha descubierto que también hay péptidos
ricos en prolina, triptófano e incluso también en los
últimos años ha aparecido un grupo de los péptidos
antimicrobianos de carácter aniónico, entonces esta
característica de que eran peptidos de carácter
cationico, incluso tuvo que ampliar su definicion a los
péptidos antimicrobianos que existen en la mayoria son
catonicos, pero tambien hay un grupo con cargas
negativas, es importante la clasidicacion a nivel
fisicoquimico porque obviamente va a tener un rol en su
funcion.
Como son proteínas pequeñas, vamos a hablar de
estructura secundaria, vamos a hablar de péptidos que
tienen una estructura alfa hélice o que pueden una
estructura de hojas beta, beta plegadas, también existen
péptidos que son lineales, de hecho no tienen una
estructura determinada, si bien al azar,y también
pueden haber estructuras mixtas, ya veremos los
péptidos que tienen alfa hélices junto con una hoja beta
plegada y las hojas beta muchas veces están
estabilizadas por puentes disulfuro, sigo que recuerden
estas características porque después las veremos.
Y por último, otra gran área que es el tipo de espectro
de actividad que tienen estas moléculas, originalmente
descritos como antibacterianos, luego si vio que tenían
actividad contra virus, hongos, células tumorales, y ahí
hay un sinfín de actividades, de hecho antiparasitarios y
se a propuesto que se descubrieron en los año 80
estamos en el 2022 y ya existen varios que están en un
nivel de como antimicrobianos como alternativa a los
antibióticos, pero ninguno de estos péptidos ha entrado
en la industria farmacéutica, hay un par pero de origen
bacteriano, como la misina, un antibiótico llamado
misina es un antibiótico que genera una bacteria que se
ve en las cremas tópicas antibacterianas.
Para dar un contexto más biológico, estos péptidos son
clave de la respuesta inmune innata, son moléculas que
son expresadas por diferentes tejidos de los organismos,
pueden ser expresados a nivel constitutivo y son
reguladores esenciales de la microbiota que están
asociados a los organismos, también son inducibles en
respuesta a una infección, hay algunos péptidos
antimicrobianos que tienen toles en la cicatrización, en
la reparación de tejidos. Estos péptidos pueden tener 2
orígenes, originados en el genoma por un RNAm que es
traducido en el ribosoma y estos péptidos después
tienen algunas modificaciones postraduccionales que
generan un péptido maduro o bien son producto de
proteólisis de proteínas más grandes, proteínas que no
tienen una función antimicrobiana ni una función
inmune específica, pero que frente a ciertas proteasas
de origen bacterianos generan fragmentos peptídicos
que estos si tienen actividad contra las bacterias, vamos
a hablar de algunos de estos ejemplos que son
producidos por proteolisis, si los tenemos que clasificar
los péptidos son tan diversos y son expresados por
tantos tejidos diferentes y por todos los organismos que
existen, que existen diferentes clasificaciones de estas
moléculas, no se va a encontrar una sola que es
estándar, hay investigadores que los clasifican en base a
su estructura como lo que hablamos recién de alfas
hélices, etc. Hay otros que los clasifican según su
identidad de secuencias, debido a que son tan iguales en
la evolución hay muchos que se han ido conservando y
se puede encontrar un péptido con una estructura muy
particular que se puede encontrar en un hongo, en un
vivaldo que también se encuentra en un humano, y esas
son familias de péptidos antimicrobianos. Un ejemplo
son las defensinas, las defensinas existen en diferentes
organismos, pero cuando se comparan las estructuras de
estas proteínas son extremadamente similares y la
función es equivalente.
Entonces vamos a hablar de estas estructuras, aca les
pongo un ejemplo de péptidos antimicrobianos de
origen rana, un alfa hélice clásica, de ahí tenemos las
típicas hojas beta plegadas en conjunto con otras
estructuras o bien lineales son estructuras
determinadas, la gracia de los péptidos antimicrobianos
cuando uno trata de probar un efecto didáctico para
probar cómo es que funcionan vamos a probar cómo es
que los péptidos antimicrobianos funcionan, su
estructura alfa hélice es un ejemplo muy fácil de
entender en el sentido de que las características
conservadas de los que los agrupan a todos, y
hablaremos de los péptidos antimicrobianos catiónicos
van a tener una repartición de los aminoácidos en su
estructura secundaria que se llama que van a tener una
estructura anfipática y tenemos que a un lado de la
molécula absolutamente apolar y al otro lado polar
catiónica, imagínense que estos péptidos matan
bacterias, de ahí vamos a tener al otro lado que son los
microbios, las bacterias conocen (estructura microbiana,
pared de bacterias gram-, LPS, el peptido glicano, los
PAMPS, los MAMPS) una de las caracteristicas clasicas
de los microbios es que su membrana o la pared está
cargada negativa, más negativa que la celula eucariota,
entonces al mirar esta molecula al hablar de que tiene
una fase con todas las cargas positivas a un extremo y las
otras hidrofobicas, entonces lo que pasa con estas
moleculas es que van a interactuar con las cargas
negativas de las moleculas que le dan esa carga a los
microorganismos, entonces en este caso el LPS
(lipopolisacarido de las bacterias gram-) esta compuesto
por diferentes moleculas, tienen el antigeno 0, tiene un
polisacaridado con el lipido A, el lipido A es el que le da
la carga negativa al LPS, entonces si tenemos estos
peptidos que son solubles, estan dentro de las celulas
inmunes, pueden estar secretados hacia el espacio
celular, y se encuentran con ese microorganismo que
tiene esa caracteristica en su pared se van a unir, esa es
la primera interacción entre un péptido antimicrobiano y
el microorganismo será una interacción electrostática, y
entonces cuando se van a unir empiezan una cantidad
de funciones diversas, pero la primera es que la
originalmente se reconoció en estas moléculas es que el
péptido adquiere una función activa una vez que entra
en contacto con las membranas microbianas, alfa hélice
que tenemos una fase positiva y la otra hidrofóbica,
entonces la fase hidrofóbica ¿qué pasaría con ella? Una
vez que entra en contacto la positiva con la negativa y la
otra fase de esta estructura anfipática es hidrofóbica
¿qué pasaría? Se une, entonces imaginense lo básico de
lo que estamos hablando, es una proteína que se pega
por cargas y como queda expuesto el lado hidrofóbico, el
espacio hidrofóbico no quiere estar expuesto al
ambiente polar, y por lo tanto se va a insertar en las
membranas bacterianas, y al insertarse hay diferentes
modelos de inserción, cualquier sea el tipo de modelo va
a generar la permeabilización de la membrana
bacteriana, al crear estos poros para derramar el
contenido intracelular y por lo tanto la bacteria va a
morir, no hay manera de reparar esos poros y por lo
tanto, este tipo de efectos se llaman efectos
bactericidas, porque matan a las bacterias y estas
bacterias no pueden volver a proliferar, ahora hay
péptidos antimicrobianos que no tienen este tipo de
mecanismo acción pero son bacteriostáticos por
ejemplo en que se unen a ciertos blancos intracelulares
o de pared que inhiben la proliferacion bacteriana, pero
si despues de un tiempo el peptido se degrada por
proteasas o se diluye en una concentracion de liquido la
bacteria vuelve a recuperar su actividad de proliferacion,
entonces vamos a tener péptidos antimicrobianos
bacteriostaticos, bactericida, obviamente hay péptidos
antimicrobianos mejores que otros, y por muchos años
se creyó que este era el mecanismo de accion de los
péptidos antimicrobianos formadores de poros, ¿vieron
las proteinas del complemento? se acuerdan del poro
final que se arma, un poco lo comparado, son mucho
más chicos los antimicrobianos pero había una como
una analogía de mecanismo de accion, tambien un
origen super ancestral, pero a medida que se fueron
estudiando se descubrió que existían diferentes modelos
de perturbación de la membrana bacteriana. Está este
modelo en el cual se forman poros, habían otros
péptidos que lo que hacían era desestabilizar los lípidos
de la membrana y por lo tanto creaba especie de micelas
como el jabón y la membrana le iba sacando pedacitos, y
por lo tanto se destruyen las membranas como un tipo
más micelar. También hay otro modelo en el cual se
llama del flip flop, en el cual los péptidos también
perturban la membrana bacteriana entrando y saliendo
y girando dentro de la membrana, pero después
aparecieron péptidos que no formaban poros, que
cuando se medía el potencial de membrana de una
bacteria en contacto con el péptido, no había ningún
cambio, pero si todas las bacterias morían, entonces
empezaron a aparecer mecanismos sin afectar la
permeabilidad de membrana. Estos son algunos de los
que se han descrito hasta ahora, normalmente hay
muchos de estos péptidos que son capaces de entrar por
la membrana bacteriana hacia el citoplasma bacteriano,
sin disrupción de la membrana en sí, pero se puede unir
a ciertas moléculas que son esenciales para la vida de la
bacteria, ejemplo se une a ciertos DNA polimerasas,
replica DNA y en la síntesis de RNAm o inhibe la síntesis
de proteínas uniéndose a ribosomas, ahora esos
mecanismos de acción de antimicrobianos se parece
mucho a los antibióticos convencionales, también
mucho cuando aparecieron estos péptidos los vendían
como los nuevos antibióticos, como una revolución
porque no tienen los mecanismos de los clásicos
antibióticos, como el cloranfenicol, pero ahora hay un
montón de estas moléculas que actúan igual como los
microbianos convencionales, blancos intracelulares
específicos y por lo tanto, las bacterias después de un
tiempo son capaces de desarrollar resistencia, entonces
esta se le llama la carrera armamentista entre la que
evolución de patógenos libres del sistema inmune,
entonces los péptidos antimicrobianos no es que sean
los nuevos antimicrobianos del futuro, pero son una
molécula extremadamente modificable en el curso de la
evolución, los péptidos antimicrobianos están bajo una
presión de selección evolutiva muy fuerte, entonces los
patogenos crean nuevos mecanismos de resistencia,
pero los mecanismos crean nuevos peptidos
antimicriobinanos, por seleccion positiva, cambios en los
aminoacidos, nuevas moleculas con otras funciones, la
familia de péptidos antimicrobianos se expande, no es
uno, todos los grupos de ellas siempre se puede poner
en veremos porque son muy diversos, por ej en los
humanos, tenemos 2 grandes familias de defensinas las
alfa y las beta y cada una de esas familias está
compuesta por 10-8 isoformas diferentes, y cada una de
esas isoformas tiene actividades diferentes, pero todas
vienen de una isoforma ancestral que se fue duplicando
en el genoma a lo largo de los millones de años y al irse
duplicando, los genes que se van duplicando es porque
estan bajo una presion de seleccion que se forman
nuevas formas, entonces los péptidos antimicrobianos
se usan mucho en estudios de evolución.
Como términos generales, si tenemos que hablar donde
funcionan en términos de inmunidad, podríamos hablar
de 2 grupos, podríamos hablar de péptidos que ayudan
a la protección local, que son los péptidos que están
expresados en los epitelios porque no solamente vamos
a hablar de moléculas inmunes o de efectores inmunes
porque estos efectores que son expresados en la última
etapa de la activación. ¿se acuerdan cuáles son las
etapas de la inmunidad? reconocimiento, activación de
vías de señalización y producción de efectores
antimicrobianos, entonces de esas 3 etapas los péptidos
antimicrobianos van a estar en la última, responden
muchas veces a un estímulo de reconocimiento, pero
estos péptidos antimicrobianos pueden ser expresados
en células móviles inmunes en los que se llama muy
general fagocitos o toda célula con capacidad inmune,
neutrofilos, macrofagos, linfocitos, y por lo tanto,
pueden circular a través del cuerpo, se le asocia una
categoría de protección sistema, pero los epitelios de la
piel, del epitelio mucoso intestinal, respiratorio, todos
los epitelios, el bucal, nasofaringe, todos los epitelios ya
están extremadamente probados en todo animal que
tenga epitelios, los epitelios están recubiertos de
moléculas inmunes que nos protegen, y una de esas
moléculas que recubren los epitelios son los péptidos
antimicrobianos, y estos péptidos antimicrobianos están
expresados a nivel basal y además pueden ser regulados
por un estímulo microbiano o un estímulo inflamatorio
no esteril, y cuando uno habla de que están estimulados
a nivel no es que nadie los esté estimulando, recuerden
que todos los organismos vivimos en un continuo
contacto con toda la microbiota y microbioma y está
archi probado también de que cualquier organismo
como metaorganismos que no estén en contacto con
microorganismos no es capaz de sobrevivir, los
microorganismos están super de moda con los
probioticos, hemos visto comerciales de chamito, pero
en el fondo cada vez está más claro los efectos que tiene
la microbiota sobre los organismos, la alimentación
afecta la microbiota y como la microbiota afecta el
animo también afecta a todos los metabolitos, entonces
esas bacterias que colonizan todos nuestros tejidos son
las responsables de estar estimulando continuamente a
las celulas epiteliales para que secreten este tipo de
peptidos, entonces ¿cómo los péptidos antimicrobianos
y los efectores antimicrobianos en general son capaces
de reconocer las bacterias benéficas de las patógenas?
Es un tema de investigación superen boca porque
todavía no se sabe bien, hay ciertas pistas, ciertas
bacterias que colonizan el epitelio y van a captar y
resisten estos péptidos, tienen su nicho, tienen
nutrientes pero todavia no esta claro como nuestro
sistema inmune tiene la particularidad de diferenciar lo
propio de lo no propio, esa es la gran fase de las células
NK que van circulando y cuando ven que algo que no es
propio activan la destrucción, pero ¿qué pasa con los
microorganismos que si son benéficos? Es una pregunta
que todavía no se puede responder, pero por lo menos
esos microorganismos activan la transcripción de los
péptidos antimicrobianos, y esos péptidos
antimicrobianos regulan la composición de la microbiota
presente en todos los animales, entonces en esta foto se
ve la regulación constituvia o bien inducible, estos
péptidos pueden estar bien producidos dentro de una
célula, pero no secretados, aquí nos vamos a la clase de
biología molecular, la vía de secreción reguladas o
constitutivas, vía reticular, se parte con una célula en su
núcleo, del núcleo el retículo endoplasmático de ahí
viene el golgi, entonces el retículo que está lleno de
ribosomas, entonces cuando alguna proteína tenía un
péptido señal que marcaba para secreción, lo que
pasaba con ese péptido señal llegaba el retículo y la
proteína era sintetizada hacia el lumen del retículo
endoplasmático porque tenía que entrar a la vía
reticular, esto es importante entenderlo, entonces los
péptidos antimicrobianos vesículas llegan al golgi, pasan
por el golgi no hay muchas modificaciones más que los
puentes disulfuro, son bastante simples, algunos tienen
modificaciones pero en general no, las vesículas quedan
almacenadas que puede ser en el lisosoma, bi
intermediario lisosoma, o quedan acá que puede ser vía
de secreción constituva en el cual van saliendo y llegan a
la membrana, se unen a la membrana y el contenido de
la vesícula es secretado al medio, o bien se acumulan
estas vesículas justo en la trans y quedan ahí las
vesiculas con las proteínas ya producidas no es así que
se activen los RNAm es la proteína almacenada en una
vesícula y frente a cierto estimulo en el cual el receptor
de membrana celular detecta un ligando si es una
citoquina o que detecte directamente un PAMPs o un
MAMPs la vesícula se activa la secreción se dirige a la
membrana y se libera el contenido al medio extracelular,
eso es lo que pasa con las defensinas de los neutrofilos
en humanos, almacenan tienen a la proteína lista
porque echaron andar la maquinaria de RNAm para que
sintetice la proteína y entre al retículo, demora un poco
más de lo que es necesario, si bien este péptido que está
en contacto con las bacterias. Ahora también los
neutrófilos expresan otro péptido que es la
catenidilserina, la catenidilserina va a contradecir lo que
les hable hace un rato, hay un solo gen que se llama
LR37 pero la LR37 es como el ejemplo que uno le
encanta que le contradiga las teorías porque es un
péptido que como que pareciera que no necesitó
duplicarse porque tiene una actividad ridícula, es
extremadamente activo, mata gram+, gram-, virus mas
encima tiene otras funciones como de inmuno
regulador, puede ser quimiotáctico, entonces pareciera
ser que el por si solo desarrolló un montón de
neutrófilos, en eso también están neutrófilos, y aparte
tenemos defensinas en el intestino humano y de los
mamíferos en general que están continuamente siendo
secretadas hacia el lúmen intestinal, pero ese
constitutivo es estimulado por las bacterias intestinales,
estos son defensinas humanas 5 y 6 , y estas también
péptidos vamos a hablar de la clásica, hablamos de
péptidos señal y los péptidos antimicrobianos pueden
ser sintetizados, la secuencia puede ser madura en
cuanto se libera el péptido señal y aquí llega un péptidos
antimicrobianos activo o bien estas proteínas tienen un
propéptido y el péptido maduro porque, ¿por qué se
imaginan esto? Porque tiene que ser activado en ciertos
lugares porque se necesita la enzima que va a producir
la escisión del propéptido, entonces a veces tiene ese
tipo de estrategia, se sintetiza, se secreta pero aún no
está activa hasta que llega al lugar donde funcionar,
entonces tenemos también ese tipo de floculación
postraduccional.
Algunos ejemplos para que veamos más fotos, ¿que
tenemos acá? la foto de un macrofago de raton en el
cual con un anticuerpo se marca la catenidilserina y la
gracia es que en este estudio se dieron cuenta porque
salmonella es tan patogénica, nadie quiere pegarse
salmonella tomando agua poco limpia, y esta es la
historia en el fondo, macrofagos que expresan la
catenidilserina que es altamente activa contra
salmonella, el que toma salmonella toma catenidilserina
y se ponen en un pocillo muere la salmonella,
salmonella marcada con GFP (les encanta mutar a las
bacterias para que brillen bajo el microscopio) fue
fagocitada por el macrofago como cualquier bacteria,
pero si nos damos cuenta la bacteria está
perdfectamente dentro del macrofago, no hay ninguna
ruptura en las bacterias, las bacterias cuando están rotas
por el ataque de un antimicrobiano las membranas se
esparcen no quedan así perfectas con esa forma de
bacilo, y cuando uno hace una sobreposición en
microscopía uno lo hace para asegurar o evaluar si es
que 2 moléculas se encuentran en el mismo
compartimiento intracelular, pero una cosa es que estén
en la misma célula, pero otra totalmente diferente es
que estén las 2 juntas, y acá se ve que no hay
coincidencia, si la catedinilserina roja y la bacteria verde
estuvieran en el mismo compartimiento como un
lisosoma o fagolisosoma, vamos a volver a las clases de
biologia, si estuvieran juntas y se viera verde con rojo se
vería un color medio mezclado, estarían en contacto,
pero está foto muestra que es una estrategia que
muchas bacterias tienen que inhiben la función del
fagolisosoma, entonces queda el fagosoma dentro de la
celula quedan los lisosomas pero la bacteria secreta
proteinas que inhiben y por lo tanto el peptido nunca
entra en contacto con la bacteria porque las bacterias si
se toman entonces aqui es cuando ya dijeron como ya
tenemos que ver donde el macrofago pero no estaba acá
entonces por eso se ve como fucsia, esa es la membrana
no hay fusión, eso entonces es la estrategia que usan las
patogenos, entonces las bacterias son capaces de mutar
para volverse resistentes a los péptidos antimicrobianos,
pero les es más fácil no encontrarse osea es mucho más
fácil inhibir que se encuentren a tener que cambiar
características de ellas mismas para el péptido no lo
reconozca, pero lo hacen igual.
Esta es una foto también de microscopía de
fluorescencia en el cual se ocuparon 2 anticuerpos
específicos, para 2 isoformas de las beta defensinas,
tenemos la beta defensina 2, 3 y ambas isoformas si bien
son de una misma familia tienen actividades
diferenciales frente a ciertas bacterias, entonces la
pregunta de estos investigadores era si es que esa
actividad diferencial tiene que ver con la localización de
estas bacterias en la boca, porque nosotros no tenemos
una colonia de bacterias iguales en todos los epitelios, lo
que uno tiene en las encías es diferente a la que se tiene
en la cavidad intrabucal entonces dependiendo del
tejido y localización del tejido se expresaba un péptido y
otro no, entonces dentro y fuera de un epitelio, por
ejemplo esto puede ser algo específico sobre la
expresión de una molécula que viene determinada por
la presión de las bacterias que habitan sobre estos
genes, no son solo péptidos antimicrobianos son puntos
importantes porque se me va la tendencia hablar de
ellos, hay muchisimas moleculas que nos protegen a
nivel de epitelio, moleculas inmunes por ejemplo el
intestino del mamifero va a ser un poco más grande, el
intestinto delgado tienen lo que se llaman las criptas de
libercook, son las criptas que tienen células madres
intercalas con unas celulas que son las celulas de banef y
que está intercaladas con las celulas caliciformes que
son las celulas que secretan el mucus, entre el mucus las
células madres que renuevan el epitelio intestinal cada
siete días y las células de panef con esos 3 tipos
celulares nosotros mantenemos la protección intestinal
que podrían entrar y que entra una de vez en cuando en
una persona sana, y es porque las celulas de panef que
serían como estas tienen unos granulos superdensos, y
cuando estos se ven y se toman y se purifican las
proteínas y se hace un analisis de masas se obtiene toda
esta lista de proteinas que tienen alguna actividad
reguladora de microorganismos, y dentro de esta lista
con factores del complemento algunas que hayan visto
ustedes, inmunoglobulina A, la mucinas, este también es
un factor antimicrobiano, la IL-17 es la citocina clásica y
característica y específica de mucosas es un T helper
específico que es el 17 que secretan IL 17 que tiene la
regulación de inmunidad mucosa, la fosfolipasa y las alfa
defensinas, entonces estos gránulos son como unas
bombas de protección que secretan continuamente las
células de panef.
Es interesante porque un modelo los ratones son
modelos entretenidos porque uno tiene mucho que
hacer, yo personalmente no puedo trabajar con ratones
porque no puede nomás, pero en algún postdoc me tocó
trabajar con los tejidos, y trabajé con estos, la historia es
que los péptidos antimicrobianos. la protección que
otorgan no estaba probada in vivo hasta el 2003, porque
llevaban 20-30 años estudiando péptidos pero era un
enfoque como bioquímico de tomar muestras, purificar
proteínas, tener la proteínas pura, ver la estructura, ver
como la actividad y después sugerir strangle suggest que
tenía una participación en la inmunidad hasta que una
científica increible se le ocurrió que los ratones en
general son mucho más sensibles a salmonella tifi que
los humanos, un humano cuando le da salmonella uno
sobrevive, un ratón con una dosis muy baja de
salmonella muere inmediatamente, entonces la
investigadora hizo unos ratones transgénicos que
expresaban la defensina humana en las células de
paneth en las criptas de libercoop, esto lo validó por
inmunohistoquímica, validó que se expresaba a la misma
concentración que una defensina de ratón cosa de que
no hubiera una hiper expresión de proteínas y por eso lo
pudiera hacer al conferir resistencia a una enfermedad,
entonces este es un corte de intestino y aquí lo que se
ve es la expresión de la defensina 5 humana en estos
ratones y estos son los controles donde no hay expresión
del peptido y cuando les dió de comer salmonella a los
ratones los transgenicos no murieron nunca. Mientras
que con la misma dosis los ratones wild type murieron al
segundo día, entonces fue la primera vez que se vió
esto. El mensaje del paper dice que se demostró in vivo
el efecto protector de un péptido antimicrobiano a nivel
de epitelio porque estos ratones cuando les inyectaban
la salmonella a los transgénicos, osea que la entrada era
vía sanguínea, no de epitelio de mucosa intestinal los
ratones morían, entonces era realmente ligado a la
protección que tenía en el intestino como salmonella no
podía atravesar la barrera intestinal, entonces este es un
paper bonito como finamente trabajos en demostrar
algo que la gente tenía como ya quien demuestra el rol
del péptido tanto. Bueno y con estos mismos ratones, y
esta misma investigadora varios años después tomaron
los ratones transgénicos para la defensina humana, los
compararon con el wild type, pero tomaron otro
fenotipo de ratones que eran los knock out para, ¿por
qué son 2 y no son lo mismo? porque son diferentes
cepas, los ratones hay 80 mil cepas para trabajar en los
ratones estos son los bal six y los BLFB y tomó 2 líneas
de ratones uno que era un transgénico para defensina
humana y el otro era knock out para la enzima que
procesaba a los péptidos que venían con un propéptido,
los ratones tienen unos péptidos antimicrobianos que se
llaman criptidinas porque vienen de las criptas y estos
son producidos con un propéptido y para que el
propéptido sea eliminado y el péptido se vuelva activo
se necesita de una proteína que es una
metaloproteinasa 7 que es para los que se acuerdan de
la diapo 2 estaba dentro de estos gránulos, entonces los
péptidos se secretan junto a su propio activador, pero
estos ratones no tenían la metaloproteinasa 7 si bien
producían las criptidinas estas no eran activas, entonces
era como un fenotipo inverso, sin péptidos
antimicrobianos con su péptido normal con un humano
y un ratón normal. Y por lo tanto, el estudio y estos
gráficos son grupos de bacterias intestinales, entonces
estos fueron los primeros análisis que empezaron a
haber, que los péptidos antimicrobianos aparte de tener
un rol protector inmune, tenían un rol regulador de las
comunidades bacterias que habitan en todos nosotros,
entonces lo que les dije al principio de la clase era esto.
Si se dan cuenta cada color es un grupo bacteriano y es
diferente en cada ratón, pero uno puede decir ya pero él
péptidos antimicrobianos mató parte un grupo
bacteriano, pero cuando vieron el número total de
bacterias en las diferentes segmentos del intestino el
número de bacterias no había cambiado, entonces no
era que desapareciera un grupo porque hubiera un
efecto antimicrobiano en sí porque el número de
bacterias era igual, entonces es un efecto regulador de
las poblaciones si hay un péptido cambian las bacterias
que pueden colonizar, entonces los péptidos
antimicrobianos están regulando quien coloniza y quien
no. Esas son las primeras partes de este concepto.
Hace unos años que a los péptidos antimicrobianos se
les llama péptidos de defensa del hospedador o house
peptide porque ya van muchos péptidos más que las
actividades microbianas directas y las antitumorales que
muchas veces ocupan las mismas membranas de las
células empezaron a caracterizar péptidos que no tenían
tanta actividad volvemos al test in vitro de las placas,
entonces para la duda estamos tan lejos de como
realmente ocurre el encuentro entre péptidos y
bacterias, pero la única manera que tenemos de evaluar
la actividad de una molécula es realizar ensayos in vitro,
pero siempre estaba la duda, aun asi se dieron cuenta de
que los péptidos antimicrobianos tienen actividades
inmunomoduladoras, osea eran capaces de ser
reconocidos por receptores inmunes y que estos
receptores eran activados por los péptidos, entonces
había activación de actividades de leucocitos, podrían
solo expresar o reprimir algunas moleculas alteraban la
secreción de citocinas la quimitoxasis osea la atraccion
de celulas para que vinieran a atacar, entonces tienen
actividades de la antimicrobiana directamente, e incluso
inmuno propiedades indirectas, entonces está un poco
la duda, ya pero estamos hablando de proteínas
pequeñas con características fisicoquímicas tan que
pueden ser aplicadas para cualquier cosa, como son
cationicas, hidrofobicos, anfipaticos algunos no todos,
entonces uno podría estar agarrando más moléculas de
las que son estas familias, estos peptidos han ido
agarrando funciones debido a lo que hablabamos de
expresión.
Este es como el ejemplo que les acabo de decir, pero
bien detallado, los neutrófilos humanos producen la
catenidilserina humana que se llama HK18 cuando está
en su forma precursora la proteinasa 3 es como la MMP
7 de las criptidinas, osea es la enzima que libera el
péptido tio y el péptido activo y madura NLP 37 es uno
de los que están en farmacología como de venta, porque
ya pasaron todas las bases de la FBA porque a pesar de
tener una actividad fuerte antimicrobiana neutraliza el
LPS, ¿que es neutralizar el LPS? son proteínas como las
LBP lipopolisacáridos son proteínas que agarran el LPS y
lo esconden entonces el LPS no estimula la respuesta
inmune, entonces baja la respuesta inmune para que
uno no muera de inflamación porque el LPS lo que hace
es provocar la inflamación, entonces este tipo de
proteínas son super importantes para poder regular la
respuesta en las primeras etapas, la angiogénesis, todas
esas actividades, incluso tiene actividad quimiotáctica
de más neutrófilos para que haya más NLP 37, entonces
se auto regula positivo negativo, pero todas estas
características no ocurren al mismo tiempo, todas han
salido de diferentes papers y por lo tanto tienen que
siempre considerar con el contexto con el cual se
estudió la molécula.
PREGUNTA COMPA: ¿Qué hace el HK? es el precursor del
L37 que es como se produce la proteína originalmente,
el RNAm viene con esa secuencia de proteína completa,
entonces los péptidos antimicrobianos se pueden
producir como un precursor que necesita ser activado
por una enzima y por lo que trae un propéptido y un
péptido maduro, tiene que ser procesado para liberar la
molécula activa, ahora el pedacito que queda como el
propéptido no se si alguien se ha encargo de estudiar si
tiene otras funciones. ¿Se acuerdan del complemento
cuando se van escindidos los fragmentos uno menor y
otro mayor? Y el menor tiene actividad
inmunomoduladora pero por muchos años cuando el
complemento recién se estaba estudiando los
fragmentos menores eran desechos, entonces quizá
tienen una función los propéptidos pero en general es
activación.
Existen diferentes mecanismos descritos hace ya varios
años de bacterias que han mutado para contrarrestar los
efectos de los péptidos antimicrobianos naturales
expresados por los hospedadores, entonces unos
ejemplos bien didácticos las bacterias patógenas aparte,
aquí ya vamos a pasar la parte de cuando inhiben la
función fagolisosoma, entonces la bacteria entra en
contacto con péptido, se pillan y van a tener que pelear,
las bacterias pueden secretar proteasas que digieren y
eliminan degradan a los péptidos antimicrobianos sobre
todo a los lineales, los que vienen por los puentes
disulfuro son un poco más resistentes a las proteasas,
los péptidos marinos son muy resistentes a la sal, frente
a altas concentraciones de sal son muy estables, pero la
bacteria son capaces de secretar proteínas porque se
unen a los péptidos y no hacen que se unan a ellas,
como que evitan el contacto íntimo del péptido con la
membrana, hay bacterias que incluso han desarrollado
bombas específicas de expulsión de péptidos, de los que
no hacen poros, hay bacterias sobre todo estas
estafilococos que son resistentes a todo las MRCA tienen
este tipo de bombas de expulsión y finalmente estas
mismas MRCA es una de las caracteristicas que más
discutían los originales que descubrieron estos peptidos
que es imposible, yo lo escuché en unos congresos, es
imposible que una bacteria modifique su carga en la
pared porque es demasiada inversión de energía tener
que cambiar la carga, y como estos peptidos tienen una
función electrostatica inicial eran, bueno aparecieron
bacterias que cambiaron las cargas del LPS y se cambió
la teoría, las bacterias pueden hacer todo. Ahora el año
pasado aparecieron bastantes otros mecanismos de
resistencia a los péptidos antimicrobianos como ejemplo
entre gram+ y gram- porque las 2 grandes grupos
bacterianos tienen serios problemas, tienen una manera
bastante diferente por lo mucho que creamos que son
similares el LPS es el tipo de peptidoglicano que tienen,
las diferentes moléculas y cargas que van armando,
entonces el ejemplo que hablábamos que era más
didáctico pero aquí es mucho más completo, osea las
proteasas, el secuestro de péptidos, bombas de
expulsión, etc. Y las modificaciones de ciertos residuos
para volver la membrana más positiva, y para terminar
el mismo contexto es que incluso ya están claros cuales
son los operones o las proteínas implicadas en la
adquisiciones de resistencia en ciertas bacterias,
estamos hablando de diferentes incorporaciones de
alanina en diferentes estructuras, aumento de la carga
positiva de la pared celular o expresan proteínas binding
para agarrar a los péptidos, y todo eso produce a
resistencia a los péptidos antimicrobianos. Aún así hay
varios péptidos antimicrobianos que han pasado las
miles de fases de prueba este es de un paper no tan
nuevo pero se les pongo esto para que si sepan que hay
péptidos antimicrobianos en venta. osea nosotros ni
siquiera lo sabemos, pero miren la columna para que se
usa para las úlceras de los pies de diabéticos, mucositis,
acné, gingivitis,entonces veamos hacia donde van, son
tópicos no son inyectables, son moléculas que necesitan
estar en contacto rápido, un péptidos antimicrobianos
en la sangre humana no creo que tenga por lo que leo
no tenga una vida media muy larga, el suero, mientras
que cuando son aplicados en terapias tópicas es mucho
más efectivo. Sólo los que producimos nosotros mismos,
hay un mundo de investigación porque muchas veces se
pueden ocupar este tipo de moléculas y otras moléculas
inmunes como marcadores de selección asistida, cuando
cualquier tipo de producción animal se busca producir
animales que se enfermen menos para no tener que
ocupar antibióticos y hacer las producciones más
sustentables, entonces sí se pueden hacer marcadores
de selección varios y vemos estas moléculas podemos
aumentar la probabilidad de que un humano no muera
producto de alguna enfermedad, entonces algunas
conclusiones de lo que acabamos de ver, tenemos
péptidos antimicrobianos que ya está demostrado que
tienen un rol clave en al defensa contra patógenos,
también contribuyen a la inmunidad estética, la
característica clásica de lo que vimos al menos aquí son
péptidos antimicrobianos catiónicos, anfipáticos si bien
algunos tienen la estructura anfipática cuando están en
un ambiente polar cuando están en contacto con las
membranas microbianas adquieren la conformación, eso
muchas veces se ve por ejemplo el dicroismo circular, la
técnica de dicroísmo circular se puede ver la estructura
secundaria de las proteínas, pero se les puede cambiar
el ambiente en el cual se encuentran, entonces puede
ser la estructura en agua, pero tambien se puede forzar
a un poquito hidrofobica, con un poquito de TF, no me
acuerdo, y ahí es cuando se ven que está cambiando su
conformación y cuando entra en contacto con las
membranas tiene una actividad diferente, ahora tienen
un motón de variedades de estructuras y de
mecanismos de acción, pero todos tienen este contacto
inicial de tipo electrostatico, ¿entonces que pasa con los
peptidos anionicos? y yo les digo nunca los entendí bien,
NO jajaja son péptidos que por lo general no actúan por
uniones de tipo electrostáticas, pero son bastante
consistes, son péptidos que ingresan que ingresan a las
células y se unen a blancos celulares, y estos péptidos
antimicrobianos tienen otras funciones y actividades
antimicrobianas, y aquí nos salen estas conclusiones
pero también tienen un rol en las regulación de las
comunidades microbianas que nos colonizan.
Los péptidos antimicrobianos pueden actuar en
conjunto, si bien uno puede romper la pared de
bacterias y formar poros, luego puede otro ingresar a la
célula que tenga blancos celulares citoplasmáticos. Del
mismo modo, no se necesitan producir tantos para tener
una actividad.
Los biofilms parten con moléculas orgánicas, en el área
clínica los péptidos antimicrobianos se están utilizando
para recubrir los materiales quirúrgicos. Cosa de que no
parte el proceso de biofilm mínima, la cantidad de
enfermedades e infecciones intrahospitalarias es porque
no estaban bien esterilizados los materiales.
Hay unos péptidos que realizan nano reds como redes
oligomerizar y atrapan bacterias, son tipo de actividades
o de funciones que empiezan a arrancarse de lo clásico,
lo que causa más interés por la sinergía, mientras más
mecanismos diferentes haya mayor probabilidad de
sinergia hay entre las moléculas, entonces tiene estas
redes vedes el péptido pero cuando está la bacteria
crece no solita hace este biofilms perfecto y cuando se
pone en presencia del péptido se rompe por completo
porque hace esta especie de red.
Los péptidos que se generan por proteolisis, las histonas
son proteínas en cual el ADN se enrolla, compactación
de ADN, pero en las histonas en el extremo N terminal
es extremadamente catiónico y tiene aminoácidos
hidrofóbicos, entonces cuando uno purifica proteínas de
una célula, muchas veces salen historias que tienen
actividad antimicrobiana, pero la misma historia antigua,
ya estás purificando proteínas obvio que te van a salir
histonas de una célula eucariota, entonces ¿cuál es la
prueba in vivo que este extremo N terminal tenga
actividad antimicrobiana? Hace como 10 años
encontraron que los neutrofilos humanos tienen una
actividad que se llama expulsión de trampas
extracelulares, net, neutrofile extracelular trap significa
que los neutrofilos están a punto de morir crean un
proceso de apoptosis en el cual expulsan el material
genetico junto con las histonas, cuando ya se ven
superados por los microorganismos ys saben que van a
morir pum expulsan el DNA con las histonas y las
histonas como tienen este extremo atrapa las bacterias y
las mata, este fue un modelo las bacterias están en
morado y esta es la trampa extracelular y haya el
neutrofilo reventado y eso también lo observamos en
ceélulas inmunes de moluscos, entonces es un
mecanismo ancestral.
Clase 3 martes 11 octubre 2022
Dentro de los antígenos podemos encontrar diferentes
epítopes que son pequeñas porciones de los antígenos,
la gracia es que los epítopes interacciona directamente
con la región del anticuerpo, entonces hay diferentes
determinantes antigénicas dependiendo de la
conformación o de la proteína que estemos hablando,
entonces podemos encontrar determinantes
conformacionales, determinantes lineales y
determinantes antigénicas estas funcionan con la
estructura de las proteínas que se vayan a procesar, por
ej si tengo una proteína en su conformación natural
estas 3 regiones conforman el epitope, por lo tanto el
anticuerpo va a detectar específicamente esa región, si
yo denaturo esa proteína por temperatura, pH, voy a
linealizar esta proteína y se van a separar estas regiones
y el anticuerpo no va a poder detectarlas porque
requiere de la estructura para detectarlas a eso se le
llama determinantes conformacionales y se necesita
saber como cuando se hace un western blot o cuando se
quiere analizar una proteína en particular se tiene que
saber la interacción entre el antígeno y el anticuerpo,
cuando se usa un anticuerpo comercial se tiene que
saber cual es la región antigénica, si se hace un western
blot denaturante va a pasar esto y no va a servir. Y si
ocupo otra técnica por ej un ELISA si me va a servir, y ahí
se eligen entre otras técnicas. Otra cosa clásica son las
determinantes lineales por ej no es muy común un trozo
lineal es el epitope pero pasa todo lo contrario se
necesita denaturar la proteína para que el anticuerpo
puede detectar ese epitope que se encuentra dentro de
las conformaciones tridimensionales de la proteína, por
eso cuando se diseñan anticuerpos se busca que los
epítopes estén expuestos, y la determinantes neo
antigénica que es extraña que es que uno al clivaje
diferentes trozos de la proteína se genera un nuevo
epitope que va a detectar el anticuerpo. Entonces la
interacción entre el anticuerpo y el antígeno depende de
la estructura antigénica, si es accesible, hidrofóbica, la
hidrofobicidad es importante, los aminoácidos
hidrofóbicos si están hacia el interior el anticuerpo no lo
puede detectar, por esto es importante la
hidrofobicidad. Los epitopes son chiquitos entre 10-20
aminoácidos máximo, puede ser que hayan 2-2-2 loop
en las secuencias y esos que están juntos forman un
epítope, no es común pero pueden ocurrir.
Los microbios pensemos en una bacteria va a traspasar
el epitelio la barrera física y va a ser detectada por las
células dendríticas a través del TLR detectando PAMPs,
para detectar a la bacteria lo que ocurre en la dendrítica
es que al activarse va expresar muchos receptores de
quimioquinas, la dendrítica expresa muchos receptores
de quimioquinas, las quimioquinas producen
quimiotaxis llaman células de un lugar a otro, como esta
célula se activó por el patógeno y expresó muchos
receptores justo en los nodos linfáticos se expresan
muchas quimioquinas y van a atraer a las dendríticas
activadas a los nodos linfáticos y en los nodos linfáticos
las dendríticas activan a los linfocitos B y T, los B
producen anticuerpos, entonces es importante el BCR el
receptores de las células B que son las células inmunes
que producen los anticuerpos porque van a madurar
hasta un tipo celular que producen anticuerpos.
La naturaleza de los epítopes que pueden detectar es
diferente por ejemplo los TCR detectan péptidos
pequeños de aminoácidos, en cambio los BCR detectan
proteínas completas incluso polisacáridos, el tamaño, el
tipo, la posición, y ahora por cada linfocito B podemos
encontrar hasta 200 mil BCR por célula, es una célula
super especializada que si se asocia a un patógeno se
activa inmediatamente.
Hay 2 formas de producir anticuerpos, la primera es
como un patógeno rompe la barrera física e ingresa y es
detectado por una célula por ej un macrofago, una
dendritica y lo proceso y lo expresa en su MHC y va
activar células T helper CD4+, van a activar al linfocito B
y ese linfocito B va a madurar y proliferar en una célula
plasmática y esa célula plasmática va a generar
anticuerpos contra ese antígeno. Y la forma directa es
que el BCR detecte al antígeno y se active
inmediatamente.
Para las vacunas tenemos líneas celulares de memoria,
la gracia es que se van a recordar del patógeno y cuando
lo vean de nuevo van a sobreproducir anticuerpos.
Activación de linfocitos B, esto es lo que pasa cuando se
activa un linfocito B y los tipos celulares que se van a ir
diferenciando, un linfocito B nativo o virgen va a
detectar antígeno y se va a activar; otra forma que se
active es que una célula T helper lo active, le presenta o
le muestra el antígeno para generar anticuerpos, ocurre
una proliferación de las células y después ocurre una
diferenciación de la célula a través de diferentes señales
y citocinas que van a estar dando vueltas a través de
este ambiente, van a estar dando vuelta y
diferenciándose, pero principalmente vamos a tener
células plasmáticas productoras de IgM, que es el primer
anticuerpo, la gracia de la IgM es de membrana o
soluble de las 2 formas, entonces podemos producir
células plasmáticas productoras de IgM, células
productoras de IgG que es el principal anticuerpo que
nosotros tenemos, y luego IgG de mayor afinidad para
finalmente células de memoria que son fundamentales
para el reconocimiento y recordar la infección que nos
afecta.
Cuando uno se expone por primera vez a un patógeno la
producción de anticuerpos es medianamente baja pero
sin embargo cuando nos exponemos por segunda vez a
un patógeno la producción de anticuerpos es casi
exponencial, por eso las vacunas son tan exitosas.
Porque nosotros le enseñamos a nuestro sistema
inmune como defenderse.
La vía AKT Toll es la vía de crecimiento y diferenciación
de la célula, y que se activa por diferentes señales como
la activación del BCR como también la disponibilidad de
aminoácidos, hay unas vías asociadas directamente a la
inmunidad por ej la vía NTk B que es un factor de
transcripción que promueve la expresión de moléculas
que activan a las células y también la expresión de
citocinas proinflamatorias, el proceso de activación es
complejo y hay fármacos que pueden inhibirse.
Cuando una bacteria se opsoniza se le unen muchos
anticuerpos la región que queda expuesta hacia afuera
es la región constante y para que pueda ocurrir la
fagocitosis los macrofagos tienen receptores de
membrana que se unen específicamente a la región
constante de los anticuerpos y de esa forma reconocen a
bacterias opsonizadas y se las comen.
El principal dominio de la estructura del IgG es el
dominio Ig y si vemos son las beta plegadas que están
unidas por puentes disulfuro que le da la estabilidad a
las IgG.
Existen varias técnicas enzimáticas que nos permiten
romper estos anticuerpos y usarlos para diferentes
cosas, por ej la papaína que rompe la región o separa la
región constante de la variable y un fragmento Fc, y
estos fragmentos se pueden usar para diferentes cosas
estas moléculas como puentes entre otras moléculas y
cómo se pueden utilizar como marcaje y de bloqueo de
moléculas para verlas en el microscopio a través de
técnicas de inmunocitoquímicas, la pepsina es otra
molécula que en vez de formar 3 moléculas forma 2 que
también sirve para potenciar la detección de moléculas y
fragmenta la región Fc.
Otra cosa de las proteínas de la familia de las Ig son
diferentes, tenemos el TCR que tambien es de las familia
de las Ig, el MCH 1, el CD4, CD8 e iCAM 1 que es
fundamental para la adhesión de células entre sí y que
se puedan comunicar, entonces no solamente está
asociado a proteínas o moléculas de la inmunidad sino
que también con esta iCAM que permite por ej la
presentacion de antigeno entre un linfocito y una
dendrítica.
Los isotipos de los principales anticuerpos que podemos
encontrar en humanos porque entre especies van
variando, la IgG que es un monómero, la IgA que es un
dímero, la IgM es un pentámero entonces la gracia de
estos anticuerpos es que tienen diferentes
características y la función también y lo más importante
es el número de sitio de unión al antígeno, mientras
mayor avidez es porque tiene una capacidad mayor de
unirse al antígeno y es importante por eso las IgM son
tan potentes y se producen en una etapa temprana de
una enfermedad, están diseñadas para detectar con
mayor éxito un patógeno. El porcentaje que podemos
encontrar en el suero es 6% IgM, 80% IgG, 13% IgA y
0,02%, y 1%, y hay diferentes tipos de IgG 1,2,3,4
algunas opsonizan y otras no, tienen diferentes
funciones.
Hay 2 tipos diferentes de anticuerpos que se pueden
producir en el laboratorio monoclonal y policlonal, el
policlonal son anticuerpos que vienen de diferentes
clones si yo tengo un ratón y le pinchó un antígeno va a
tener 2 epítopes diferentes y en su suero va a haber una
activación de células inmune y haber unas células B van
a producir anticuerpo contra el epitope rojo y otras
contra el verde, y cuando recupere el IgG del suero va a
haber un mix de anticuerpos contra el epitope rojo y
verde, entonces las proteínas van a ser procesadas por
las células presentadoras y se van a generar un montón
de anticuerpos es policlonal porque se generan muchos
anticuerpos que provienen de diferentes clones. Y
también puede pasar que las células B generan
anticuerpos con alta afinidad para el epitope rojo, otras
células B con afinidad mediana y otras de baja afinidad,
entonces muchas veces se critica el uso de policlonales
porque aumenta la probabilidad de obtener reacciones
cruzadas con otras proteínas cuando se detecta algo.
Ahora en monoclonal uno hace lo mismo se pincha con
el antígeno al ratón se recolectan las células B, las
células se cultivan y se fusionan con células tumorales
que son los hibridomas, y cómo las células tumorales
están en constante crecimiento y su metabolismo activo
estos hibridomas producen anticuerpos siempre y se
pueden seleccionar el mejor hibridoma que produce el
mejor anticuerpo, entonces el mejor anticuerpo tiene
mejor afinidad y en un ELISA tiene una gran señal de
detección, por lo tanto lo separo, lo obtengo y cultivo
ese anticuerpo, entonces como es 1 hibridoma que
viene de una célula B es monoclonal. Con citometría de
flujo podríamos separar poblaciones específicas para
esas células B, titular es la cantidad de anticuerpos que
tenemos.
Hay otra opción que tiene que ver con los policlonales
de hacerlos monoespecíficos en vez de pinchar a los
ratones o conejos con el antígeno completo se
inmunizan con un epitope entonces se asegura que las
células B que se van a activar van a ser contra un epitope
y van a formar un tipo de anticuerpo contra una
molécula, va a seguir siendo policlonal porque va a ser
formado de diferentes clones pero ser monoespecífico
porque no habrá mix de anticuerpos al final sino que
mismos anticuerpos que reconocen el mismo epitope.
Clase 4 lunes 17 octubre 2022
La última clase que tuvieron fue de inmunoglobulinas
porque habías hablado más de los antígenos, hicimos
énfasis en el antígeno pensando que son las moléculas
frente a las cuales se producen los anticuerpos, los
conceptos fundamentales es que la inmunidad
adaptativa molecular se sustenta en los anticuerpos y los
anticuerpos son estas moléculas que van a reconocer
antígenos, todo ese trabajo está relacionado con poder
reconocer de manera específica a un agente que se ha
convertido en patógeno, cuando hablamos al inicio del
curso de la inmunidad innata que está en el rango de
horas, para poder generar una respuesta adaptativa se
requieren días porque el proceso de generación de
respuestas adaptativas a través de anticuerpos o a través
de los receptores de los linfocitos T que pueden
reconocer específicamente a un antígeno obviamente
toma un tiempo y ese tiempo está determinado por
encontrar a la célula, encontrar al linfocito B que sea
capaz de producir anticuerpos que reconozcan ese
antígeno y encontrar al linfocito T que posee un TCR
capaz de reconocer a ese antígeno, para ese trabajo es
necesaria la participación de moléculas importantes y
una molécula importante es el TCR que es el receptor
del linfocito T pero además en este proceso los
macrófagos cuando presentan antígenos lo hacen a
través del complejo mayor de histocompatibilidad y por
lo tanto 2 moléculas que son claves para las respuestas
inmunes adaptativas son las moléculas del MHC
(complejo de histocompatibilidad) y el TCR (receptor del
linfocito T).
El sistema inmune genera una gran cantidad de clones
de linfocitos con diferentes especificidades, nosotros ya
sabemos que a partir del progenitor linfoide se producen
múltiples linfocitos, cada uno de esos linfocitos posee un
TCR que reconoce un epítope, se generan de manera
natural, se generan en base a la información de los
genes que están en nuestro propio DNA y ahí dice que
por cada millón de linfocitos hay 1 linfocito específico
para un antígeno en particular, es decir, cuando se
quiere buscar un linfocito que sea específico para un
antígeno en realidad es como buscar una aguja en un
pajar, porque ¿cómo conecto al antígeno con este
linfocito que es capaz de reconocer a ese antígeno?,
segunda afirmación, es imposible que los pocos
linfocitos T específicos patrullen constantemente por
todos los tejidos, por lo que los antígenos pueden entrar
o producirse, entonces el mecanismo que resuelve este
problema es el mecanismo de la presentación de
antígeno, ya habíamos visto que existen los ganglios
linfáticos y el bazo, que son los lugares donde residen los
linfocitos que se llaman los órganos linfoides
secundarios, para que pueda el antígeno encontrar al
linfocito T que posee el TCR que lo reconoce, tienen que
desplazarse hacia los ganglios linfáticos unas células que
son estas células presentadoras de antígeno que
habíamos hablado que son las células dendríticas,
entonces los linfocitos T reconocen y responden a
antígenos que están asociados a células y no antígenos
solubles fuera de ellas. Los linfocitos T no reconocen
antígenos libres, los antígenos circulan pero no son
reconocidos de manera libre por el linfocito T sino que
deben ser presentados y por ello es que hemos hablado
en otras ocasiones de las células presentadoras de
antígenos.
La última frase dice que la tarea de presentar los
antígenos que están asociados a la célula del
hospedador a los linfocitos T pueden ser CD4 o CD8, la
realizan proteínas especializadas llamadas moléculas del
complejo principal de histocompatibilidad, los MHC y los
linfocitos T reconocen al complejo MHC-péptido a través
de su complejo receptor que es del linfocito T que es del
TCR, entonces los 2 elementos fundamentales para la
presentación de antígenos es que la célula presentadora
presente al antígeno a través de las moléculas de
histocompatibilidad (MHC) y el TCR no lo reconoce libre
sino que lo reconoce presentadas por el MHC y quien los
reconoce es el complejo receptor del linfocito T que es el
TCR.
Pregunta compa: El MHC no cambia, el MHC debe
reconocer también al antígeno, el MHC se produce de
manera natural así como se produce el TCR o una
inmunoglobulina, estas 3 moléculas (MHC, TCR e
inmunoglobulinas) tienen una región constante y una
región variable y esa región variable del TCR reconoce
distintos epitopes, de la inmunoglobulina reconoce a
distintos epitopes y la del MHC también reconoce
distintos epitopes, es decir no se presenta cualquier
péptido, se presenta un péptido que es reconocido por
la región variable del MHC, entonces las células
presentadoras producen MHC y en esa región variable
pueden insertar el péptido que proviene del antígeno,
entonces no es que se modifique cuando va a presentar,
siempre la región variable, genéticamente que se está
produciendo siempre es idéntica, van a aparecer un
montón de péptidos que están siendo digeridos por el
sistema y los péptidos que son reconocidos por MHC
esos van a encajar a MHC y esos se presentan, porque
esos que son reconocidos tienen una relación con el TCR
que también es capaz de reconocerlo y con la
inmunoglobulina que también es capaz de reconocerlo.
El antígeno lo presenta el MHC de la célula
presentadora, el MHC va en la presentadora y el TCR del
linfocito T reconoce ese MHC presentado. Recordemos
que el antígeno es una molécula gigante pero que
algunos segmentos, secuencias específicas pueden
funcionar como epítopes y ese epitope cuando es
presentado por el MHC se llama péptido, el complejo
péptido-MHC.
En ese cuadro aparecen las características del
reconocimiento del antígeno que es dependiente del
MHC por los linfocitos T, abajo dice, la mayoría de los
linfocitos T.., en esto hay otra afirmación en inmunidad
que se utiliza que es que las respuestas antigenicas a
proteínas son T dependientes porque todos los linfocitos
T lo que hacen es reconocer y procesar respuestas frente
a péptidos presentados, siempre se habla de la mayoría
porque también hay producción de anticuerpos frente a
otras moléculas pero no es lo habitual.
Aquí habla de características de los antígenos que son
reconocidos por los linfocitos T, la primera dice que la
mayoría de las células T reconocen péptidos y no otras
moléculas, la mayoría reconoce péptidos, no otras
moléculas y la explicación es que solo los péptidos se
unen a las moléculas de MHC, entonces si solo los
péptidos se unen a las moléculas de MHC el TCR va a
reconocer mayoritariamente péptidos presentados.
Las células T, los péptidos que reconocen son péptidos
lineales, no son péptidos conformacionales, cuando un
anticuerpo reconoce un antígeno, el anticuerpo puede
reconocer al antígeno conformado o al antígeno en una
sección lineal, entonces los anticuerpos reconocen
antígenos lineales que es una secuencia o conformados
y cuando están conformados puede reconocer un trocito
de la secuencia, pero si lo ponemos lineal corresponden
a partes diferentes, no es una misma secuencia, sino que
son lugares distintos de la molécula, ¿por qué se
produce el reconocimiento conformacional? es
básicamente por la característica que como el
anticuerpo reconoce una molécula lineal, cuando
adquiere conformación también lo puede reconocer
porque está mejor expuesto, son temas que tienen que
ver con la solubilidad del antígeno, pero la respuesta que
hacen los linfocitos T es que ellos reconocen a péptidos
lineales, los péptidos lineales que son presentados por el
MHC, la molécula MHC hace como una “camita o lecho”
en donde se extiende ese péptido que están
presentando, entonces siempre el MHC hace
presentación de péptidos lineales y TCR reconoce esos
péptidos lineales en ese lecho que está presentando la
presentadora de antígeno, las células T reconocen a
antígenos presentados y no de forma soluble, puede in
circulando un péptido y el TCR no se va a activar, tiene
que ser presentado, y esto es porque la mayoría de las
células T el receptor solo reconoce ese complejo
MHC-péptido.
Ahora, las células T que son CD4 o CD8, ya sabemos que
los CD4 son los T helper y los CD8 son los T citotóxicos,
CD4 y CD8, las células T preferencialmente reconocen
antígenos que han sido ingeridos desde el ambiente
extracelular o desde vesículas y antígenos producidos en
el citosol, esto lo vamos a estudiar porque esta
afirmación es lo que se llama las vías del MHC. Existe el
MHC de clase 1 y el MHC de clase 2, el MHC1 procesa
por una vía distinta que el MHC2 y por eso dice que
estas células CD4 y CD8 procesan desde moléculas
extracelulares que han sido digeridas intracelularmente
o vesículas que han producido moléculas en el citosol,
entonces, la vía del CD4, los linfocitos T CD4 reconocen
péptidos que han sido procesados desde el exterior y la
vía del CD8 reconoce a péptidos que han sido
procesados intracelularmente, eso lo explicaremos a
continuación.
Hemos mencionado que la presentación de antígeno es
fundamental para la respuesta de los linfocitos T, y los
linfocitos T reconocen los péptidos antigénicos que son
presentados por el MHC y que existen distintas vías de
tratamiento de los péptidos que son las distintas rutas
del MHC y que están relacionados a los linfocitos T tanto
los CD4 como los CD8, normalmente cuando se explica
la presentación de antígenos se explica la vía del CD4, lo
que pasa es que la vía del CD8 es lo mismo pero tiene
una finalidad distinta. También vimos que existen
distintos lugares a través de los cuales pueden ser
susceptibles al ingreso de un patógeno, el tracto
gastrointestinal, las vías respiratorias, en todos estos
lugares existe un epitelio y cuando los microorganismos
superan ese epitelio llegan y se encuentran con el
sistema inmune porque tiene que defenderse, ya
cuando el microorganismo se vuelve invasor se activan
los mecanismos de defensa, aquí se ve el
microorganismo, está atravesando el epitelio, entonces
hay células que lo pueden procesar y estas células que lo
procesan internamente lo que hacen es degradar
antígenos y a medida que van avanzando hasta un sitio
de presentación de antígeno ellos van preparándose en
el procesamiento y es esto lo que vemos allí la célula
dendrítica toma estos antígenos, lo clásico que
esperamos que pase es que hayan células tipo
macrófago que fagociten, se pueden liberar antígeno
libres y la célula dendrítica puede tomar esos antígenos
libres y los procesa y entra un camino por la vía linfática,
llega a los ganglio linfáticos donde estas células
dendríticas, ahí expresan en su superficie las moléculas
de MHC presentando esos péptidos, aquí nos muestra la
vía sanguínea porque los antígenos libres pueden llegar
al bazo y en el bazo principalmente van a ser
reconocidos por los linfocitos B los antígenos libre, estos
son los antígenos presentados a los linfocitos T hacia los
ganglios linfáticos ¿Qué va a pasar en los centros de
presentación de antígeno, los lugares donde llega la
célula dendrítica? Si al lado derecho en ambos, hay un
esquema aquí y acá, hacia el lado derecho en ambos se
representa a la célula presentadora de antígeno que es
esta que está en verde y que es potencialmente una
célula dendrítica, veamos este caso, en el ganglio
linfático hay linfocitos T que son CD4 positivos y que son
“Naiv” estas células Naiv son completamente ingenuas,
no hay interactuado con otro tipo celular y el primer
encuentro es el que van a tener entre la célula
presentadora a través de MHC2 expone en su superficie
un antígeno, esto quiere decir que esta célula dendrítica
proceso internamente estas moléculas que están
representadas ahí en amarillo y finalmente la que es
reconocida por el MHC en su región variable es
presentada y esta presentación es reconocida por el TCR,
entonces el TCR es del linfocito T y el TCR posee la
habilidad de reconocer ese complejo
antígeno-anticuerpo, ¿qué pasa de ese proceso de
presentación? estas células Naiv, lo que dijimos al
principio, ¿de que manera se puede dar con el linfocito
sea capaz de reconocer ese antígeno? con una célula
dendrítica que va y recorre los sitios donde están los
linfocitos T y cuando encuentre al que lo reconoce lo
activa, entonces esta célula dendrítica cuando encontró
al TCR que reconocía a ese antígeno lo que ocurre aquí
es que esta célula se va a convertir en una célula CD4
activa, esto pasa de ser Naiv a ser un efector, de aquí a
acá obviamente lo que ocurre es expansión clonal,
recuerden que esto es selección clonal y después de la
selección va haber expansión, va haber muchos tipos de
este linfocito T que está maduro y que puede interactuar
con otras células y los principales tipos de linfocito T que
van a interactuar con otras células son Th1 y Th2, lo más
importante que me interesa recordar es que cuando
ocurre el proceso de presentación de antígeno este
linfocito experimenta expansión clonal, hay copias
clónicas y este linfocito se convierte en un linfocito T
efector lo cual quiere decir que puede interactuar con
otras células, los principales tipos son el Th1 y el Th2 y
esta célula logra su acción, logra su actuar a través de la
secreción de citoquinas, estos se empiezan a comunicar
con las células que interactuan a través de la secreción
de citoquinas, esto es basicamente interferón gamma y
TNF-alfa que son las principales citoquinas que produce
el Th1, produce citoquinas, esa es la idea más general,
entonces se dice que la presentación de antígeno entre
una célula presentadora y un linfocito T helper está
restringida por el MHC, ¿qué tipo de MHC puede
presentarle a un CD4? MHC2
Pregunta compa: en el caso de la presentación de
antígenos a los linfocitos T son dependiendo de la vía del
MHC como es el procesamiento, técnicamente sí
podríamos decir que antígenos libres pueden ser
tomados y procesados sí, técnicamente sí pero podrían
ser restos celulares que contienen un antígeno, podría
ser un patógeno entero que sea ingresado y se procese,
entonces mejor es decir que la vía del MHC2 procesa
para presentar al CD4, ahora el cómo vamos a ver luego
que en el caso del MHC2 provienen desde el exterior
pero no necesariamente podemos decir que son
antígenos libres pero si provienen del exterior.
Una vez que se produce la presentación de antígeno, la
dendrítica lo presenta al T Naiv, esto es selección clonal
y aquí lo que viene es expansión clonal, en la expansión
clonal las células nuevas que aparecen, que todas
provienen de esa misma porque son copias clónicas, ya
no se van a llamar T Naiv porque dejaron de ser
ingenuos sino que pasaron a llamarse T efectores y esos
T efectores van a la periferia, los Th1 van a recorrer el
organismo y van a la periferia y los Th2 se van hacia la
zona de las células B, dentro del ganglio linfático se
desplazan y se localizan en la zona de las células B, estos
ganglios linfáticos en la región medular hay linfocitos T y
dendríticas, ahí se puede producir expansión clonal, la
idea es que los Th1 salen del ganglio, salen a recorrer el
organismo y los Th2 se van a esta zona periférica que es
donde están los linfocitos B, la razón que los Th2 se van
a las zonas B es porque los B les presentan a los Th2,
recuerden que el timo es órgano linfoide primario y
ganglio/nodo linfático son órgano linfoide secundario,
aquí ocurre la activación de célula linfoides, el timo esta
antes en el proceso de maduración. La célula T madura
que sale del timo y que está capacitada para que se le
presente un antígeno es la célula Naiv, entonces aquí en
esta zona medular del nodo está lleno de linfocitos T,
todos son Naiv, no han interactuado con una
presentadora pero cuando llega la presentadora e
interactúan con ella y se activan se convierten en
efectores, esta llegó al ganglio linfático proveniente del
timo, madura, activable, cuando le presentan el único
requisito en la presentación es que está restringido por
el MHC, MHC2 reconoce al T Naiv, ¿por qué este
reconocimiento está restringido? porque el MHC2
interactúa con el CD4 del T Naiv helper, la restricción del
MHC está dada justamente por este determinante que
caracteriza al linfocito T helper que es CD4, entonces
MHC2 tiene una interacción molecular con CD4 y de ahí
viene el tope de la restricción, MHC2 presenta a otra
célula, si esa célula no tiene CD4 no hay interacción pero
cuando tiene CD4 puede interactuar con ella.
Maduración es cuando esa ya es madura (Naiv) y luego
esta es una siguiente etapa funcional (T efectora), como
efectora se caracteriza por producir citoquinas que van a
regular otros procesos, ¿qué hace al final el efector?
secreta una citoquina que va a regular procesos, pero
para que secrete eso le tienen que volver a presentar el
antígeno, aquí hemos visto la primera fase que es de un
Naiv a un efector, del Naiv al efector basta con que haya
presentación de antígeno y los requisitos son que el
MHC2 interactúe con un CD4 y que el antígeno que está
siendo presentado sea presentado a través del complejo
MHC2-péptido, el péptido solo no hace nada y el MHC
solo no hace nada, tiene que ser MHC-péptido y lo
reconoce el TCR, cuando todo esto coincide CD4 con
MHC2, MHC2 péptido con TCR y esto hay
reconocimiento esta célula selección clonal, expansión
clonal, lo que aparecen aquí son efectores, los Th1 van
en la periferia, los Th2 van hacia la zona de las células B
y cuando estos les vuelvan a presentar el antígeno
secretan citoquinas y aquí recordemos una característica
de la inmunidad adaptativa que es clonal, que cuando
hay una célula que sirve para defenderse de este
antígeno proliferan, entonces las respuestas son clonales
y como las respuestas son clonales se vuelven eficientes.
Este mismo esquema de los linfocitos T helper ocurre
para los linfocitos T citotóxicos, existen las células CD8
Naiv que son células que maduraron en el timo, van a
llegar a los ganglios linfáticos y en los ganglios linfáticos
van a estar en la zona central como Naiv CD8, llega la
célula presentadora de antígenos, y estos antígenos van
a ser presentados de la misma forma, la diferencia es
que es otro MHC el que los presenta, MHC1, entonces
MHC1 procesa y pone antígeno en su superficie y son
presentados como MHC1-péptido, ¿cuál es la restricción
de MHC? es que solo MHC1 interactúa con los CD8,
entonces CD8 reconoce MHC1, el TCR del citotóxico
reconoce el complejo MHC1-péptido y cuando el TCR lo
reconoce, esto es selección clonal, aquí hay expansión,
van haber varios linfocitos T efectores que tienen la
característica de ser CD8+ y estos en el interior poseen
moléculas de citotoxicidad que están listas para el
ataque que hacen en la periferia, estas células en la
periferia, quiere decir circulando en distintos órganos se
encuentran con una célula que está infectada por un
virus o un patógeno intracelular la reconocen y
degranulan lo que tienen en su interior y pueden
destruir a células propias y como estas tienen la
capacidad de destruir células propias es por esa razón
que funcionan a través de MHC1 como marcador,
porque recuerden que MHC1 está en todas las células
del organismo y es el conjunto de proteínas que
distingue a una célula como parte de un mismo
organismo, todas las células de nuestro cuerpo tienen el
mismo MHC1, pero cuando se infectan, cuando se
alteran, ese MHC1 cambia y por eso la citotóxica la
puede reconocer y la destruye.
MHC2 para las células T helper MHC1 para las células T
citotóxicas, son dos tipos de linfocitos T pero el proceso
es exactamente el mismo. ¿Cuál es la diferencia de los
efectores? En ambos casos a estos efectores para
activarlos, para interactuar con ellos es necesario
presentarle el antígeno, ¿a través de qué vía? siempre el
CD8 por MHC1 y siempre el CD4 por MHC2, siempre al
efector hay que volver a presentarle el antígeno, no
quiere decir que esta célula sale a recorrer tirando
citoquinas a cualquier célula, tiene que haber un
proceso y esta no significa que sale a recorrer matando
células propias, tiene que reconocerlas por presentación
de antígeno vía MHC1.
La presentación siempre va a existir, la otra característica
que aparece en esta explicación es que la célula
dendrítica puede presentar antígenos vía MHC1 y vía
MHC2, que es una gracia que solo poseen las células
dendríticas y por eso las células dendríticas se les llama
doble presentadoras.
El homeing que es el ir a la casa, todas las células
inmunes tienen un homeing, es decir, todas llegan
donde tienen que llegar ¿y cómo llegan? ahí se
descubrió que estas quimioquinas que son
quimioatrayentes son secretadas por el órgano, por
ejemplo, ¿cómo llegan los linfocitos T Naiv o los
linfocitos B a este nodo linfático? porque de aquí se
producen quimioquinas que hacen que las células sean
atraídas químicamente y se instalen aquí, entonces
cuando los T efectores están circulando, es, una vez que
salen los efectores ¿van a recorrer todo el organismo o
van a llegar donde esté el foco de infección? llegan al
foco de infección porque ahí hay una inflamación y ahí
se están produciendo quimioquinas, señales que hacen
que preferentemente los T helper o citotóxicos vayan a
ese lugar.
Entonces a las células dendríticas se les llama doble
presentadoras, los antígenos los puede procesar vía
MHC1 o los puede procesar vía MHC2, ¿de qué depende
que sea una u otra vía? básicamente de donde empezó a
procesarlo, no olvidemos que MHC1 está restringido por
un linfocito T que posea un CD8 o un linfocito T que
posea un CD4, entonces el CD4 reconoce a MHC2, el
CD8 reconoce a MHC1 pero además este posee un TCR y
este TCR puede reconocer al MHC2-péptido, con esto de
que el TCR reconoce al MHC2-pèptido tenemos que
tener claro que el TCR reconoce ambas moléculas, tiene
sitios de contacto para el MHC y para el péptido, ambos,
y luego este T, esto sería selección clonal y aparecen
muchas copias clónicas de CD8 y lo más importante de
este CD8 si es una copia clónica ¿que es lo más
importante que este clon debe heredar de su
progenitor? su TCR, lo que importa es que todos posean
el mismo TCR, porque el CD8 es claramente el mismo, lo
que debe ser idéntico es el TCR, cuando decimos
idéntico TCR es que todos estos TCR van a reconocer al
mismo epitopo, y estos son citotóxicos, pero en el caso
de los helper es lo mismo, todas las copias clónicas que
deriven de este primer linfocito que fue activado es que
posean el mismo TCR, mismo TCR quiere decir que va a
reconocer el mismo epitope toda su descendencia.
Similitudes MHC-péptido, TCR reconoce al MHC-péptido.
Diferencias CD8 MHC1, CD4 MHC2, los efectores, CD4
producen citoquinas y los CD8 destruyen cuando
reconocen. A ambos efectores se les debe presentar el
antígeno.
¿Qué pasa cuando el CD8 ya es efector? se va a la
periferia, eso quiere decir que está en circulación, va a
llegar a algún lugar en donde haya un proceso de
infección y va a suceder esto, se va a encontrar con una
célula que está infectada y esta célula infectada con su
MHC1 deposita ahí en su superficie este péptido
antigénico de lo que la tiene infectada, entonces CD8
con el TCR reconoce al MHC1-péptido, el CD8 reconoce
que esto es MHC1 y en ese momento se activa la
degranulación de granzima y perforina, hemos hablado
por las NK que perforina hace estas perforaciones,
atraviesan transmembranalmente la célula y granzima
ingresa y se comporta como una serin proteasa, es como
tener una caspasa activa, es una muerte de esta célula,
la idea es que las células que están infectadas al
destruirlas se les acaba el lugar donde vivir a ese
patógeno. El linfocito T que mató a la célula se puede ir
a matar a otra célula pero la otra célula infectada ya
murió.
Pregunta compa: el MHC2 es un heterodímero, son 2
moléculas y el MHC1 es una sola molécula que está
asociada a una betamicroglobulina extracelular,
estructuralmente son distintas, pero luego en su
conjunto son funcionalmente similares.
En síntesis tenemos 2 vías del MHC, la vía de clase 1 en
donde un antígeno que está en el interior de una célula,
porque si una célula está infectada por un virus tiene al
virus en el interior, entonces internamente, esa molécula
ese antígeno es procesado, se presenta, lo reconoce un
T citotóxico y el resultado es la muerte porque libera
granzima y perforina, en la vía de MHC2 hay un proceso
de presentación de antígeno a un T helper, entonces
para la presentación un macrofago fagocita a una
bacteria o a un patógeno extracelular, el macrofago lo
fagocita y desde la fagocitosis lo procesa y lo presenta y
cuando lo presenta el T helper este que es CD4+ secreta
citoquinas pero en este caso secreta citoquinas que lo
vuelven mucho más destructivo, por eso es que el Th1
produce interferon gamma, TNF-alfa, interferon gamma
es el principal estimulador de los macrofagos M1, es
decir estos se vuelven iNOS+ y se vuelven super
destructivos y son pro oxidativos y destructivos, en el
caso de un linfocito B posee en su superficie
inmunoglobulinas, el linfocito B maduro posee la
inmunoglobulina que es capaz de producir, el B
reconoce al antígeno libre y este antígeno libre entonces
lo procesa y cuando lo internaliza, en el fondo la
inmunoglobulina es como una endocitosis mediada por
receptor, lo internaliza, lo procesa y lo presenta a un
CD4+, estos son los Th2, los que reciben una
presentación del linfocito B. Recuerden que le dije que el
Th1 se va a la periferia porque se va a encontrar con
macrofagos y el los va a estimular para que se vuelvan
destructivos, el Th2 se queda en la zona de los linfocitos
B, porque los B cuando capten un antígeno lo procesan y
se lo van a presentar al helper y ese es un helper de tipo
2, que hace el Th2? secreta otras citoquinas como IL-4,
IL-5, IL-6, la más característica es IL-4 que ayuda a la
expansión clonal del B, básicamente el B le presenta al T
porque esas citoquinas inducen la expansión clonal, la
expansión clonal del B es más compleja que la del T
porque está regulado por este proceso de presentación
y por un conjunto de citoquinas, entonces el B expande
clonalmente y produce anticuerpos, la vía del MHC esta
es interna y esta es externa, proviene desde una
fagocitosis o proviene desde una endocitosis de la
inmunoglobulina, pero algo que viene del exterior se
procesa y se presenta. Interna en el sentido de que si
esto es un virus el virus obvio vino del exterior, le inyecto
el RNA o lo que contenga y esta célula empieza a
producir y la proteína la sintetiza en el interior, sintetiza
la proteína en el interior y por lo tanto la proteína está
en el citosol y hay que procesarla de una manera distinta
a estos 2 que son procesos fagocíticos o endocíticos en
donde la proteína está dentro de una vesícula y se
procesa en la vesícula.
Las 3 presentadoras son la dendrítica, macrofago y
linfocito B, el linfocito B lo tiene que presentar vía
MHC2-péptido.
Clase 5 martes 18 octubre 2022
Las moléculas claves son las APC, que son las células
presentadoras de antígeno, las moléculas del complejo
mayor de histocompatibilidad, el complejo principal de
histocompatibilidad y que los pueden encontrar también
como las HLA, cuando se habla de los marcadores HLA
es lo mismo que las moléculas MHC, entonces existen
los HLA 1 y los HLA 2 y esto es lo mismo que MHC 1 y
MHC2, nombre antiguo y nombre nuevo, a veces se usan
indistintamente y se presta a confusión pero esto aludía
a un determinante antigénico de los linfocitos humanos
que después descubrieron que era un complejo de
histocompatibilidad que estaba en todas las células por
ello se usan los nombres indiscriminadamente, pero lo
importante es que las APC presentan antígenos a través
de este complejo MHC péptido, entonces siempre es
MHC-péptido y este péptido es lo mismo que el epítopo
que hemos mencionado que forma parte del antígeno, y
por lo tanto, esta estructura de cómo se organizan estas
respuestas que son del tipo fenotípica. Una mIg es una
inmunoglobulina de membrana, una mIg que poseen los
linfocitos B y son las inmunoglobulinas que son capaz de
producir, ¿cuál es el isotipo? recuerden que el isotipo es
la clase y la clase está determinada por el tipo de cadena
pesada de la inmunoglobulina, alfa, mu, epsilon, delta,
gamma. ¿Cuál de todas esas clases es la mIg? la delta es
una Igd, la mIg es una Igd o mayoritariamente es una Igd
y por eso se dice que los linfocitos B a medida que
avanzan en maduración se convierten en células
plasmáticas que son productoras de anticuerpos y estas
células plasmáticas que son productoras de anticuerpos
tienen una primera fase donde producen un tipo de
inmunoglobulina que es pentamérica y luego en una
segunda fase producen otro tipo de inmunoglobulina,
¿cómo definimos una producción de inmunoglobulinas
del proceso de maduración? El mIg en el linfocito de
naive que no ha experimentado expansión ni selección
clonal, pero ese mIg cuando reconoce el antígeno libre
puede ingresar en el proceso de expansión clonal y se
producen muchas copias clónicas del linfocito B, y la idea
es que cada una de esas copias clónicas produzca la
misma inmunoglobulina, y ¿qué sentido tiene este? que
contenga el mismo idiotipo, y que contenga el mismo
idiotipo significa que es capaz de reconocer al mismo
antígeno, su región variable no varía, la región variable
es la misma, suena raro pero es así. Ahora cuando el
linfocito B es activado es como un mIg de membrana
que es una Igd, la célula plasmática cuando madura al
principio de su vida produce anticuerpos pentamericos y
luego produce esos anticuerpos monoméricos que es
una sola unidad, ¿qué inmunoglobulina es pentamérica?
La IgE, entonces primero se produce Igm, y luego se
produce mayoritariamente IgG porque tienen que saber
esto por qué acabamos de vivir una tremenda pandemia
y ¿qué aprendimos durante la pandemia? lo decían los
periodistas de tvn, nos enseñó que cuando nos
hacíamos un test de anticuerpos cuando había IgG
contra el Sars cov 2 es que llevábamos ya, habían pasado
varias semanas en contacto con el virus o se media el
efecto de la vacuna, pero cuando recién nos vacunaban
si se hacía en esto lo que marcaba era la IgM, o si habían
tenido contacto reciente con el virus marca la IgM.
Googleen el test de anticuerpos para sars cov2, el test
de anticuerpos tiene un control para IgM y para IgG, y se
pueden ver el control que es control que va a haber
inmunoglobulinas en el suero, el de IgG son anticuerpos
específicos contra el Sars cov 2 que son del tipo IgG, y el
de IgM son anticuerpos específicos del tipo IgM,
entonces se sabe que la primera producción de
anticuerpos son las IgM y las siguientes producción son
las IgG.
¿cómo diríamos esto de forma científica? ¿Cómo le
diríamos a la abuelita que ese linfocito B produce una
inmunoglobulina que es la misma que se va a producir
por esta célula plasmática en el reconocimiento del
antígeno pero que va variando a lo largo del tiempo? se
supone que en la clase con el profesor cristian teníamos
que aprender lo que era el isotipo, haplotipo e ideotipo,
recuerden que las inmunoglobulinas tenemos una
región variable y una región constante, la región variable
es la que llamamos Fab que es la fracción anticuerpo y
esta Fc está relacionado con la región constante, cuando
hablamos de inmunoglobulinas una definición clara es la
clase y que existen 5 clases que están relacionadas con
la cadena pesada, alfa, mu, epsilon, delta, gamma, y que
cada una da origen a cada clase, la IgA, la IgM, la IgE, la
IgD, y la IgG, esto es clase, y ¿como se llama entre ellas
que tienen diferente? isotipo, el prefijo uso significa
igual, entonces ¿cuales son los tipos iguales porque
todas son inmunoglobulinas? Los isotipos son la IgA, la
IgM, la IgE, la IgD, y la IgG, ¿donde radica la clase que
determina el isotipo? en la región constante, pero en la
región variable, acá esto era el ideotopo, el ideotopo es
el que reconoce al epitope, el idiotipo entonces estas las
región variable que está en el extremo de la
inmunoglobulina es lo que determina el idiotipo, si una
inmunoglobulina posee el mismo idiotipo que otra
inmunoglobulina ¿que quiere decir eso? que reconoce al
mismo antígeno, podrían provenir del mismo clon que
les dió origen, pero básicamente reconocen al mismo
antígeno, al mismo epítope, así de específico y por eso
deberían provenir del mismo clon, entonces si 2
inmunoglobulinas que poseen el mismo idiotipo
¿pueden poseer diferentes isotipo? esto es lo que les
estoy diciendo una misma inmunoglobulina puede
poseer el mismo idiotipo o diferente isotipo o diferente
clase y así es la producción de las inmunoglobulinas,
cuando se produce la selección clonal, este idiotipo
reconoce una antigeno y el isotipo IgD cuando se
produce la expansión clonal la célula empiezan a
producir IgM que posee el mismo idiotipo, pero que
tiene otra clase o otro isotipo y después del tiempo
mantiene el idiotipo porque reconoce el mismo antígeno
y cambia a otra clase, entonces en la producción de
anticuerpos genera que se producen inmunoglobulinas
sin variantes idiotípicas, es decir que mantiene el
idiotipo pero que posee variantes isotipicas a lo largo del
proceso de maduración y producción de anticuerpos, y
esa característica que el anticuerpo conserve el idiotipo,
pero varíe la clase es lo que permite este test tan
sencillo que decir que es primera fase de producción de
anticuerpos o los que están almacenados hace mucho
tiempo, si es primera fase si detectan IgM ya anticuerpos
que son producidos hace tiempo detecta IgG, ¿como se
lo explicamos a la abuelita entonces? lo que ocurre es
que cuando te infecta el virus se procesa y hay células
presentadoras que lo hacen a través del MHC de clase 2
se lo presentan al T helper y el T helper ayuda al linfocito
B que por su parte detectó al antígeno libre y cuando
detecta al antígeno libre le pide ayuda al T helper clona y
después se producen las células maduras que generan el
anticuerpo, entonces cuando reconoce el antígeno, es el
ideotipo de la inmunoglobulina lo que lo reconoce,
entonces ese idiotipo no va a cambiar, todos son
anticuerpos que se producirán después corresponden al
mismo idiotipo, pero sí variantes de clase y se genera
primero en las membranas una IgD luego IgM y luego
IgG, por eso cuando hacen el test de anticuerpos si
marca IgM quiere decir que se tiene una infección
reciente o te vacunaron hace poco, y si marca IgG quiere
decir que tienes anticuerpos con una infección que ya ha
pasado hace tiempo o te vacunaste hace mucho tiempo
y si se hace un test y dice que decayó la respuesta sérica
es porque ni siquiera te marca la IgG. El isotipo es clase,
G, A, M, idiotipo la región variable.
Hecha la explicación todas estas explicaciones se debe a
que me preguntaron que eran las mIg, pero la mIg es la
inmunoglobulina de membrana del linfocito B virgen
naive que está esperando reconocer un antígeno libre,
esta molécula reconoce antígenos libres, pero nosotros
ya sabemos que de todos los antígenos lo que se
reconoce es esa secuencia epitope, entonces esta
molecula reconoce una secuencia epitope, este TCR
reconoce una secuencia epitope con la diferencia no lo
reconoce solo sino que debe estar presentado por un
MHC, esa es la importancia del MHC que deposita en
una camita ese trocito de péptido para que el TCR lo
reconozca, pero el TCR lo reconoce solo asociado a MHC
no lo reconoce libre porque si el T reconoce antígenos
libres sería una complicación estaríamos repletos de
enfermedades autoinmunes, la regulación del proceso
está aquí en lo que el MHC le presenta a los T, entonces
cuando se trata de estudiar como es la regulacion de las
respuestas a las enfermedades autoinmunes, si
estudiamos ese tema le echaron la culpa a los B,
despues a las dendriticas, despues a los T, pero el fallo es
que el MHC une péptidos que no deberia unir y activa
estos T, entonces la culpa es el MHC, entonces ¿qué
aprendimos ayer?
El halotipo se refiere a las diferencias alélicas por
ejemplo el halotipo existe dentro de una misma clase
existen variantes de esa clase, IgG1, IgG2, IgG3, es el
caso y casi único ejemplo en humanos y esas variantes
halotipicas son alelos distintos que generan fragmentos
más largos o cortos entre las regiones constantes,
lugares de glicosilaciones entonces varía la longitud,
varía el tipo de glicosilaciones y azúcares que tiene y eso
le da distinta habilidades para activar el complemento
hay unas que lo activan y otras que no, son más
sensibles, pero esas son las variables alélicas. La region
constante se llama Fc porque es la región que reconoce
el sistema inmune, los Fc receptor o receptores de Fc
que lo tienen los macrofagos que reconocen cuando una
bacteria esté opsonizada esa constante se llama
constante porque es reconocida del sistema inmune de
una misma especie, osea si yo tengo inmunoglobulinas
de otro humano mis FcR lo van a reconocer por mi
región constante y si tengo inmunoglobulinas en
contacto con mis macrofagos de una especia no humana
no lo van a reconocer, esa región constante es de
constancia intraespecífica es igual para toda una
especie, como región constante, ahora si vas a la
secuencia aminoacídica específica es distinta entre las
distintas clases, y esas secuencias en algún momento se
les bautizó como alfa, gamma, mu, y finalmente le dió el
nombre a la clase. La cadena pesada es la porción Fc es
la primera parte de la secuencia, ese es otro juego de
palabras que hay que entender. La constancia del Fc es
intraespecífica es en una misma especia y por lo tanto,
entre los distintos anticuerpos de distintas especies no
se reconoce como región constante sino que se
reconoce como el antígeno por eso es que existen
anticuerpos anti inmunoglobulina de raton que se hacen
en un conejo o anticuerpos anti inmunoglobulina de
conejo que hacen en una cabra, ¿han visto estas
técnicas? saben primer anticuerpo, segundo anticuerpo
en una inmunofluorescencia, en citometría, se hacen
anticuerpos contra la región constante porque es la
misma para toda una especie, entonces si yo tomo
inmunoglobulina de conejo y se las inyecta a una cabra
la cabra va hacer anticuerpos contra esa
inmunoglobulina de conejo contra la molécula completa,
lo que va en contra de la región constante va a servir
para identificar siempre anticuerpos de conejo IgG. Sin
embargo, la región variable puede ser constante de
manera interespecífica, la región variable el idiotopo
porque yo me podría encontrar con un mismo idiotopo
en un anticuerpo de ratón que de un anticuerpo de
conejo, en donde ambos idiotopos pueden reconocer el
mismo epitope, entonces raramente podemos decir que
la región variable puede presentar constancia
interespecífica entre especies, no juguemos mas al
trabalenguas y volvamos a la clase.
Lo que me interesa que entienden y que no olviden
nunca es el protagonismo de esas 3 moléculas MHC son
las presentadores de antígeno, TCR del T mIg del B,
todas ellas hacen lo mismo, el MHC toma un péptido y lo
presenta en esta camita el TCR reconoce ese péptido
presentado, la mIg reconoce ese péptido pero sin ser
presentado sino que está libre, y luego cuando vemos
que hay presentaciones de antígeno en la respuestas
inmunes adaptativas contra lo ajeno en que participa es
el MHC de clase 2 y toma lo que está fuera, toma un
macrofago una bacteria la fagocita la procesa y se la
presenta a un T, un linfocito B con su anticuerpo
reconoce un antígeno que está fuera que es parte de
una bacteria, de un virus, de un protozoo de lo que sea
extraño y esta inmunoglobulina esta mIg que es una IgD
lo que hace es generar una endocitosis mediada por
receptor, ingresa el antígeno lo procesa y se lo presenta
a un linfocito T, ahora dijimos que este T helper son los 2
principales poblaciones de helper el helper 1 y 2, el
helper 1 que está relacionado con la inmunidad de tipo
1 que es helper 1 macrofago M1, inmunidad de tipo 1 y
el T helper está relacionado con la inmunidad de tipo 2
que es el linfocito B presentando el antigeno al T helper,
Th2 Th1, que pasa el Th1 convierte este en M1 aumenta
la producción de iNOS, aumenta la produccion de RNS
por lo tanto, el macrofago es asesino es un destructor de
microorganismos, y el linfocito B cuando interactua con
el T es este paso, aqui tiene que estar la interaccion con
el Th2 este tiene que presentarle al T para que este
estimule al B, osea las respuestas en la produccion de
anticuerpos son un 90% T dependeinetes, el linfocito B
depende del T para llegar a ser una celula madura y
producir anticuerpos. Este B en un porcentaje muy
menor empieza a producir anticuerpos sin haber pasado
por el Th por la presentación del T helper, por eso es tan
importante el proceso de presentación MHC2 está
completamente marcado con lo ajeno y recuerden que
las 3 presentadoras son las dendríticas, el macrofago y el
linfocito B, esos son los 3 presentadores ahora aquí
venía la pregunta de cuales eran las 3 presentadoras. El
B se encuentra con un T, el macrofago se encuentra con
un T pero este T es un efector, este no es un naive, el T
efector cada vez que se hace la diferencia el T naive este
es el ingenuo que nunca ha interactuado pero cuando
este le presentan un antígeno y experimenta expansión
clonal todas estas copias clónicas que aquí aparecen,
¿que tienen de similar? el TCR y todas estas copias
clónicas se llaman efectores, naive sin presentación
cuando hay expansión clonal son T efectores, entonces
un macrofago está fagocitando esta bacteria, se la
presenta a un T, el T la refuerza por citocinas, el linfocito
B se encuentra con este antígeno se lo presenta al T, el T
lo activa por citocinas, ahora esto son efectores, ¿que
tuvo que haber pasado antes? Presentación de
antígenos, y ese rol que tienen las células dendríticas y
son estas que ahora están en los ganglios linfáticos y
presentan el antígeno y permiten que estas células
aparecen, ahora estos van a estar los T helper Th2 en la
región de los linfocitos B en el ganglio linfático y estos
otros T helper van a la periferia a encontrarse donde
está el macrofago actuando en contra de un patógeno
específico y que me preguntaban ese patógeno, como
hay una respuesta inmune activa obviamente que se van
emitir señales que harán que los efectores vayan a ese
lugar, en el homing que les hablaba ayer, esto es lo
ajeno, pero lo propio igual se puede alterar, y cuando se
altera lo propio que es el MHC de clase 1 que es la que
tiene que ver con lo propio, el MHC de clase 2 tiene que
ver con la ajeno y lo expresan solo las presentadores, el
MHC 1 con lo propio y lo expresan todas las celulas, las
células dendríticas también activan linfocitos T
citotóxicos, lo dijimos ayer a traves de MHC 1 por eso las
dendriticas son doble presentadora y esta presentación
a traves del CD8 hace que existan T citotoxicos efectores
y estos efectores cuando se encuentran con una celula
que esta infectada tiene un virus intracelular, una
bacteria intracelular, un patogeno, una alteracion
tambien puede ser una celula tumoral expresa asociado
por via MHC 1 entonces el T reconoce el MHC 1 alterado
como no propio y lo destruye, entonces ¿por qué existen
estas 2 vías? porque el MHC 1 es lo propio, MHC2 es lo
ajeno, entonces aquí no van a decir, sí pero el virus que
tiene adentro es ajeno pero es para destruir lo propio,
entonces la señal es lo propio alterado lo que se
destruye.
Ahora cuando se dice células presentadoras de antígeno
APC se entiende que son las MHC2, porque al final todas
presentan porque si esta es una somática alterada
puede presentar para la destrucción por citotóxica
entonces todas presentan, pero en inmunología cuando
se habla de APC es MHC2, son las células que están
presentando antígenos que es la Igm, el caso de la MHC1
cualquier célula puede presentar y ser objeto de
destrucción, pero MHC1 todas, MHC2 las presentadoras.
Esto es una gran historia filogenética, hay algunos
invertebrados que tienen la capacidad de reconocer lo
ajeno, a una estrella de mar si le cortamos la piel se
regenera si le cortamos la piel y le ponemos un trozo de
molusco o otra estrella lo rechaza es igual que un injerto
en vertebrados, y las estrellas de mar pertenecen a un
grupo que son los equinodermos al igual que los erizos y
los equinodermos estan igual que los artrópodos, es la
primera forma de vida de los invertebrados que empieza
a tener un endoesqueleto los otros tienen un
exoesqueleto, claramente un esqueleto es una concha
que está por fuera, los insectos que son artrópodos
tienen un exoesqueleto que esta por fuera, pero los
erizos y estrellas tienen un termomento externo que lo
puede tomar que es como una piel, el erizo la estrella de
mar y entonces se están acercando al modelo que
aparece despues de los invertebrados con el esqueleto
interior, y curiosomanete ellos tienen esta capacidad
entonces son las primeras organizaciones moelculas que
tienden a reconocer lo propio, porque en lo ajeno todos
son capacesde matar microbios, bacterias,
microorganismos, pero esto es un proceso de
presentación de antigeno no existe porque no hay
inmunidad adaptativa en los invertebrados, pero cuando
aparecen los peces esto empieza a cambiar, y es de lo
más rudimentario esto que nosotros estudiamos es en lo
más derivado que son las aves y mamiferos.
El modelo de reconocimiento es un complejo peptídico
MHC o péptido MHC con el linfocito es más o menos
esto que aparece donde dice que un receptor T
interactúa con un MHC a través de este modelo donde
un bolsillo en el MHC en donde pueden meterse o
afirmarse el péptido, entonces es el lecho donde está el
péptido y el receptor T reconoce el péptido pero
también reconoce el MHC esto es una representación
esquemática no quiere decir que esto sea así, en el
fondo lo que quiere decir es que hay sitios de anclaje
para el MHC y que hay sitios de reconocimiento por
parte del T, que reconoce el MHC y que reconoce al
péptido, es para existir y reforzar la idea del
reconocimiento MHC péptido, ahora geneticamente este
es un mapa como dice arriba esquemetica de los noci
del complejo mayor de histocompatibilida humano con
el murino, siempre se comparan porque son muy
identicos en algun momento de la vida se dijo que todo
lo que existia en el raton existia en humanos, entonces
todo lo que se vería en raton se veia en humanos y luego
se comprobaba y el mayor avance en el estudio de la
inmunidad fue cuando apareció el virus de la inmuno
deficiencia humana, porque el blanco de la VIH es el
linfocito T helper, entonces que un virus ataque al T
helper, ataca a la célula clave en el reconocimiento de lo
ajeno y por eso es que afecta la producción de
anticuerpos, la atvicación de los macrofagos, afecta lo
elemental de la respuesta entonces el individuo se
queda con una inmuno deficiencia que le impide
enfrentar a otros patogenos, entonces para conocer
como afectar el virus todo lo que se sabe de los
principales temas de la inmunidad fue sobre el estudio
de ese patogeno, porque si vemos un libro de inmunidad
a mediados de los 80 y otro en los 90 los avances son
gigantescos, en el ratón se descubrio los sitios
especificos donde estaba y los loci para los genes del
MHC y luego se vió que el esquema en humanos era
identico. Hay un caso diferente que el caso de las células
NK que el marcador molecular de NK en humanos no
son para nada equivalentes con lo que ocurre en
ratones, para las NK los ratones no son un modelo útil,
aquí dice el locus el lugar específico del cromosoma
donde está ubicado un gen o una secuencia de DNA y
aquí vean un dato curioso que los locus para las MHC2
se escriben de una manera que los locus que para el
MHC 1 este se escribe con 2 letras de T,K,R este con una
letra B,C,A hay otros. Ayer le preguntó cómo eran las
diferencias entre estos MHC1 y clase 2, el MHC 2 es un
heterodímero y el MHC 1 es un homodímero es una sola
molécula, es un monómero, y por eso que la
representación porque este es un gen, estos son 2 genes
el heterodímero del U,R,V monómero, esta región para
las moléculas de clase 2 y 1 tienen una región
intermedia donde hay otras proteínas muy importantes
de la inmunidad entre la región del MHC 2 y 1 están por
ejemplo las proteínas del complemento, hay una región
del cromosoma que está relacionada con la defensa y
con moléculas bastantes ancestrales con la defensa,
complemento, citocinas, TNF alfa que es clásica de las
citocinas proinflamatorias y la región en medio tiene
estos proteosomas que son moléculas importantes para
la interacción de la vía del MHC 1.
Aqui vemos esta representación esquematica del MHC 1
con el 2, el MHC 1 está esta molecula monomerica que
se llama alfa, distribuida en distintas regiones, alfa 1, alfa
2 y alfa 3, alfa 1 y alfa 2 corresponden al dominio más
externo del extracelular, y alfa 3 corresponde al dominio
más cercano a la membrana, esa molécula del complejo
mayor de histocompatibilidad el MHC 1 se estabiliza a
través de una molécula globulina una micro globulina
que es está beta 2 microglobulina está beta 2
microglobulina es una pequeña proteína globular que
interactúa con la región más cercana del MHC 1 y
básicamente su función es estabilizar, aquí está la
representación esquemática, aquí está la representación
medianamente estructural, aparecen datos importantes
que tanto alfa 3 como la beta 2 microglobulina poseen
una rigidez que está dada por estas estructuras beta y
que alfa 1 y alfa 2 tambien tienen una rigidez de
estructuras beta, pueden ser es una molécula que tiene
que estar expuesta no puede ser demasiado soluble,
aparentemente la estructura beta le da mayor rigidez,
pero donde tiene la mayor estabilidad es en la parte
donde deposita el péptido, donde hay estructuras de
alfa hélice, porque las alfa helices son mas flexibles a
diferencia de las beta plegadas que son más rigidez, ahí
se ve que entre alfa 1 y alfa 2 está la camita donde se
deposita el peptido que ahí se presenta, en el caso de
MHC2 es un heterodimero alfa y beta y vemos que
desde la región más extrema está la región alfa 1 luego
alfa 2 y acá beta 1 y luego beta 2, estas se estabilizan
entre sí y no requierend e una beta globulina porque se
estabilizan entre sí en la membrana plasmatica y la
organización es extremadamente identica si vemos la
identificacion esquematica alfa 2 con beta 2 tienen estas
estructuras beta rigidez cercano a la membrana y alfa 1
beta 1 tienen lo mismo una base de hojas beta pero la
parte más extrema donde está la camita por el peptido
es una región de hélices alfa, entonces aquí estaría el
sitio con el péptido entre alfa 1 y beta 1 y en el caso de
un MHC 1 entre alfa 1 y beta 2, un sitio importante
porque dijimos que la interacción de los linfocitos estaba
restringido por el MHC hay algunos que interactúan con
el MHC 1 y otros con el 2 y eso está determinado por el
marcador CD, entonces ¿como pueden ser? porque el
MHC 1 tiene un sitio de unión para CD8 y acá está el sitio
de unión para el CD4 ambos están localizados en una
región análoga, CD8 y CD4. Y aquí hay una tabla
resumen con lo mismo que les estaba contando.
La célula sana es así sin ningún péptido, cuando tiene
péptidos cuando presenta y presenta cuando está
infectada o alterada o tumoral, es la célula alterada la
que presenta la normal es MHC solo sin péptido. Si es
autoinmunidad es vía MHC 2 no vía MHC 1, MHC 1 está
en todas nuestras células, las NK lo utilizan como el
receptor de inhibición, todas las NK todas una célula que
si tocan un MHC 1 se inactivan porque el MHC es propio,
hay presentación cuando las células están alteradas,
cuando necesitan morir se encargan de matarse, es un
caso particular de células alteradas. No debe tener nada
si está sana.
Las cadenas polipeptídicas para MHC 1 tiene cadenas
alfa que es el MHC 1 y la beta 2 microglobulina, para el
de clase 2 son alfa y beta, característica en la localización
de los residuos polimórficos, la historia del polimorfismo
del MHC cuando se descubrió que el MHC era el que
deposita el péptido, pensemos en el MHC2 esto aplica
para los virus intracelulares, etc, cuando se descubrió
que el MHC tiene un lugar donde pone el péptido y lo
presenta, ese péptido tienen que interactuar con el MHC
no es que cualquier camita puede cualquier péptido,
sino que esta camita debe tener interacción
reconocimiento con el péptido, no se representa
cualquier péptido, por eso es que la culpa es del MHC 2
que presenta lo que no tiene que presentar, entonces
¿cómo es que puede tener en un espacio tan pequeño
estos péptidos 8-11 o 10-14 residuos son 10 pequeñas
regiones, 7-9 residuos son los que van a marcar el sitio
de reconocimiento, entonces la pregunta es ¿cómo
puede una región tan pequeña generar tanta diversidad
de reconocimiento de péptidos? entonces ahí se
descubrió el polimorfismo del MHC donde una región
dentro de una población los individuos de esa población
presentan polimorfismos, es decir, no todos formamos
las mismas combinaciones para unir péptidos, entonces
hay variantes que son poblacionales y esas variantes
polimorfismo determinar mientras que más
polimorfismos más capacidad de reconocer más
péptidos distintos, otra de las explicaciones es como les
fue tan mal o bien con el covid, con los que les fue
tienen un mayor polimorfismo mayor capacidad de
reconocer distintos péptidos pero a los que les fue mal
no hay comentarios no se reproduzca por favor, no deje
esos genes que no sirven.
Entonces se empezó a aplicar mucho a producción
animal que se estudia por ejemplo se hace un desafío,
animales que son resistentes a un patógeno vs los que
son susceptibles se va a estudiar el DNA y se encuentran
regiones del DNA que están relacionadas con el
polimorfismo del MHC, entonces cerrando ayuda a ser
mejores genéticas seleccionando solo a ese tipo
reproductor, entonces el problema en humanos y
animales vertebrados que pueden durar más tiempo
antes de ser cosechados, un buen polimorfismo nos dice
si sobreviví al covid pero también te pone en riesgo de
una enfermedad autoinmune.
lunes 24 octubre charla inglés
Clase 6 martes 25 octubre 2022
MHC1 tiene que ver con las alteraciones de lo propio
porque es para destruir células propias cuando falla, lo
reconocen las células CD8+ y MHC2 tiene que ver con lo
ajeno porque está involucrado en el proceso de
presentación de antígenos, en ambos casos hay un lugar
en donde se depositan estos péptidos que son epítopes
y que permiten la presentación para que un TCR lo
reconozca, en esta tabla está descrita la característica es
que clase 1 son el polipéptido alfa y la
betamicroglobulina que es libre, osea esta se sintetiza
por separado y se asocia al MHC1alfa para constituir
esta molécula más estable donde la región más extrema
es la que tiene que ver con la presentación de antígeno,
en el caso de MHC2 es alfa 1 y alfa 2, son 2 dominios es
por eso que se habla de un heterodímero y la unión del
co-receptor, recuerden que esto está restringido por
MHC CD8 para MHC1 y CD4 para MHC2, aquí están los
sitios de contacto con el CD8, ahí está el sitio de
contacto con el CD4. El péptido se acomoda en esta
región que se habla de 8 a 11 residuos y acá se acomoda
en esta región de 10 a 30, pero en la práctica de 9 a 11
no supera ese número y las nomenclaturas en humanos
y en ratones siempre se hace la comparación, nos
fijamos solo en humanos, era lo que comentabamos que
clase 1 como es un gen que es este alfa que esta
asociado a la molécula que se expresa en superficie,
siempre se denomina por un gen HLAA, HLAB, HLAC,
esta letra A, B, C, E, etc es la que determina ese gen del
HLA que les dije que era lo mismo que el MHC y que el
HLA significa el antígeno del linfocito humano que este
es el nombre antiguo, para el caso del MHC2 que es
cuando se habla de los genes siempre son 2 letras
porque un gen para cada uno de los componentes del
heterodímero HLAdr, HLAdq, HLAdp, cada vez que lean
algo del MHC si les dice HLAA o HLAE, si solo aparece
una letra ustedes saben que les están hablando de
MHC1 si les dice HLAdp, HLAdq y pone 2 letras saben
que les están hablando de MHC2. HLA significa antígeno
linfocito humano y el A, B, C, E hace referencia al gen A,
al gen B, etc, menciona el locus del gen que expresa una
letra, alfa de MHC1, 2 letras uno es de alfa y la otra es de
beta (MHC2).
Básicamente hemos hablado que cuando la vía de
procesamiento del antígeno está relacionado con el
origen de la molécula, en el caso de MHC1 si se trata de
un virus o de una bacteria intracelular se va a producir
proteínas virales o proteínas bacterianas en el interior
de la célula clásicamente en el citosol, ustedes saben
que la síntesis de proteínas siempre empieza en el
citosol y luego sigue vías, o se queda en el citosol o se va
al retículo, entonces si hay algo interno por patógeno,
virus, bacteria, por alteración de la célula, proteínas que
tienen que ver con el desarrollo de actividad tumoral,
todo esto va a aparecer en el citosol, entonces cuando
aparecen proteínas en el citosol ustedes saben que son
objeto de degradación en los proteosomas y desde el
proteosoma salen trozos que son péptidos, esto
péptidos son transportados por una molécula que es un
transportador de proteínas que los lleva hacia el interior
del retículo, estas son las proteínas TAP y las
mencionamos cuando hablamos de los genes que
expresaban para MHC, hay un gen de TAP, TAP es el
transportador de péptidos a través de la membrana
reticular, entonces por la vía reticular va la molécula alfa
de MHC1 y se encuentra con estos péptidos, si hay
afinidad de unión, no todo se puede unir a MHC,
recuerden que tiene que haber afinidad, si hay afinidad
de unión entonces estos péptidos de todos los péptidos
habrá alguno que se una a MHC y esto va a seguir
avanzando por la vía reticular y luego va a salir hacia la
clásica ruta de destino que va hacia la membrana
plasmática y queda en la membrana el MHC1 con el
péptido, que si es reconocido por un linfocito T efector
TCR reconoce al MHC-péptido y el CD8 reconoce a
MHC1, si esto ocurre esta célula destruye a esa célula,
entonces estas son las principales características de la
vía del MHC1, proteosoma transporta retículo,
exposición en la membrana, la vía para el MHC2 es un
poco distinta porque parte con un proceso fagocítico o
endocítico en donde se esta tomando una proteína
desde el medio extracelular y se va a procesar a través
del proceso de digestión intracelular, es decir va a venir
a este endosoma, se le va a unir un lisosoma y se va a
formar este lisosoma secundario o el fagosoma si fuera
fagocitosis y allí en el interior ocurre digestión
intracelular, entonces las moléculas de MHC2 que
vienen en la vía reticular salen en vesículas y se van a
encontrar con estos fagosomas secundarios o lisosomas
secundarios o fagosomas maduros, se van a fusionar
estas 2 vesículas y ahí se va a encontrar los péptidos con
MHC, ahora, MHC2 como es una molécula que presenta
antígeno normalmente en la vía reticular va bloqueada
el sitio de unión a los péptidos va bloqueado por una
molécula específica que cuando se produce la fusión
como hay un cambio de pH, porque esta de digestión
suele ser más ácida, se separa y estos péptidos pueden
unirse y finalmente se expresa en la membrana el MHC2
con el péptido, esto lo reconoce el TCR de un T helper
efector, el CD4 reconoce al MHC2 y se produce la
activación del T.
Aquí hay otro cuadro habla de la composición, habla del
polimórfico, esta región polimórfica eso se refiere a que
hay variaciones en la secuencia de aminoácidos en la
parte que reconoce al péptido, eso le permite reconocer
una variedad de péptido y eso permite que hay
diferencias poblacionales en el reconocimiento de los
péptidos y no todos los individuos pueden responder
igual, como lo que pasa con el covid que hay personas
que pueden responder como asintomáticas mientras
que otras morían, entonces hay una diferencia
poblacional y también les comentaba que mientras
mayor el polimorfismo la capacidad de presentar
antígeno es mayor pero también dijimos que en el caso
de MHC2 puede producir problemas de autoinmunidad.
El tipo de presentadoras todas las células nucleadas
porque todas las células poseen MHC1, mientras que
acá las presentadoras son las células dendríticas, los
fagocitos (macrófagos) y los linfocitos B, ahora se
reconoce que hay células que son, que expresan MHC y
que expresan unos co-estimuladores que son los CD83,
80, 86, lo veremos después y que pueden tener un nivel
de presentación antigénico, el protagonismo que tiene
en la inmunidad no es tan grande pero sí es importante
y son las células endoteliales, las células del endotelio
recuerden que una vez dijimos que era el epitelio que
reviste al vaso sanguíneo, esa célula es el endotelio,
entonces las células endoteliales son consideradas
sobretodo a nivel de los capilares como presentadoras
de antígeno. CD8 para MHC1 y CD4 para MHC2, se
degrada en el proteosoma, se degrada en los endosomas
tardíos el péptido, la fuente son proteínas citosólicas,
provienen de la síntesis celular y que tienen que estar
relacionadas con el ingreso de algún patógeno de esta,
estas son degradación endosomal en el lisosoma.
Clase 7 lunes 7 octubre 2022
​La vía de presentación por MHCII, las proteínas del
complejo principal de histocompatibilidad de clase 2 no
olvidemos que está relacionado con la respuesta a lo
ajeno por lo tanto estas moléculas ya sabemos que
MHCII es un heterodímero mayoritariamente en la célula
presentadora de antígenos en el tipo alfa beta y este
heterodímero alfa beta lo que hace es presentar un
antígeno y eso va a corresponder a una secuencia
peptidica que es el epitope, siempre hablamos de
péptidos que son los que caracterizan fenotípicamente a
un antígeno, no olvidar que si tenemos una bacteria, la
bacteria tiene una serie de moléculas cuando es
incorporada a una célula que la puede fagocitar en el
interior estas moléculas que tiene el potencial de ser
antígeno puede ser procesada y finalmente se presenta,
entonces esta respuesta en lo ajeno, la idea es que esta
respuesta en MHCII sea reconocido por el TCR que es el
receptor de los linfocitos T y este linfocito T puede
reconocer al MHC pero esto siempre está restringido con
el Reconocimiento del MHCII gracias a ese determinante
de los helper que es el CD4, ahora cuando una célula
experimenta una alteración de lo propio por una
alteración interna, por un virus, por algo que le pasa en
su interior, la alteración de lo propio también es
presentada a través de MHCI y este MHCI tiene el mismo
objetivo, presentar estos péptidos reconocidos por TCR y
en este caso cuando es MHCI la restricción del MHC es
por esta molécula el CD8 que es típico del T citotóxico,
no olvidar que MHCI está en todas las células del
organismo, mientras que MHCII está solo en las
presentadoras que son dendríticas, los linfocitos B y los
macrofagos, ese proceso de presentación está asociado
a que aparezca una inmunidad adaptativa celular y una
inmunidad adaptativa molecular, la adaptativa celular es
que todos los macrófagos que estén fagocitando y que
puedan presentar este mismo antígeno aquí, estos
macrófagos puede ser reconocido por el linfocito T
helper a través de sus tcr y CD4, este sería macrófago y
este sería el Th, inmunidad adaptativa celular el
macrófago presenta al antígenos y este lo reconoce,
¿cuál es la respuesta del Th sobre el macrofago? lo
vuelve mas destructor y ¿cómo son los macrófagos
destructores? M1, ya sabemos que ese fenotipo se llama
M1 y una de las rutas de producir M1 es a través de la
secreción de citoquinas como interferón gamma,
entonces los Th1, esos Thelper se les conoce como Th1 y
los Th1 son capaces de cuando se produce este
reconocimiento es secretar interferón de tipo 2 que el
más conocido es el interferón gamma y también TNF-alfa
y estas moléculas ayudan a que esté macrófago se
convierta en un M1, este proceso de activación de los
macrofagos es un proceso que va por la vía adaptativa,
nosotros habíamos hablado de que iba por la vía innata,
cuando las NK producían interferon gamma, la otra ruta
es la que va por la vía adaptativa cuando el Th1 induce
vía interferón gamma o TNF-alfa a que estos macrófagos
se vuelvan M1, ya sabemos que M1 es iNOS+, este
proceso contra lo ajeno y ahí claramente se está, ayuda
a la destrucción de lo ajeno que estaría fagocitado, este
proceso además tiene la vía adaptativa molecular, en
donde los linfocitos B que están en los ganglios linfáticos
y en los sitios de presentación de antígeno, ya sabemos
que todas las inmunoglobulinas que produce un mismo
b son idénticas en su idiotipo, esta región variables
identificas, entonces puede reconocer al mismo epítope,
por lo tanto el mismo antígeno ese linfocito b, el
linfocito b reconoce antígenos libres, este mismo es
parte de un antígeno más grande, pero esta secuencia
epítope es reconocida por linfocito b el linfocito b la
integra y también puede presentar vía MHCII, allí el
trocito de péptido a un tcr y este tcr es del linfocito
Thelper que diferencia de éste va a ser el Thelper2 que
recibe la presentación de antígeno del linfocito B esto es
MHCII y esa presentación induce que, ¿qué es lo que
ocurre cuando se induce esa presentación? primero ese
linfocito b tiene que madurar, cuando el B le presenta el
antígeno al Th2 ¿qué pasa? cuando el antígeno libre
reconoce al B eso es selección clonal, es porque ess
linfocito b producen inmunoglobulina que es capaz de
reconocer al antígeno, entonces recuerden que la
respuesta adaptativas son clonales y lo que se va a
producir es el clonamiento del B, entonces ese proceso
¿cómo se llama cuando el antígeno es reconocido por la
inmunoglobulina del B? selección clonal. Entonces
cuando el antígeno reconoce al B o cuando el B a través
de su inmunoglobulina reconoce al antígeno, eso es
selección clonal y ¿qué viene después de la selección
clonal? la expansión clonal, que es una expansión de
muchas copias clónicas identicas, entonces quien
interviene en esa expansión clonal, quien permite que
ocurra la expansión clonal, quien genera las señales para
esa expansión clonal es el Th2, este Th2 en esta
expansión clonal este Th2 secreta IL-4, IL-5, IL-6, estas 2
primeras particularmente la 4 es el principal inductor a
que ocurra la expansión clonal y aparecen aquí muchas
copias del B y después estas células maduran a células
plasmáticas y aquí vamos a tener muchas
inmunoglobulinas.
Entonces la importancia del procesamiento vía MHCII es
que es el principio fundamental de la respuesta inmune
adaptativa, porque es el como se va presentando este
péptido que genera que estas Th aparezcan efectoras,
siempre recuerden la primera la Naiv, lo primero que
sufre expansión clonal es el Thelper y este Thelper su
expansión clonal se basa en también en la producción de
una citoquina y es que el Thelper produce IL-2 y al
mismo tiempo expresa el IL-2R qué es el receptor de la
interleuquina 2 y el principal o el más potente estímulo
para que se produzca la expansión clonal de los T es IL-2
incluso cuando se da un ejemplo de auto regulación o
regulación de la misma célula se suele dar el ejemplo de
el linfocito T cuando se va IL-2, principal señal y éste
genera copias clónicas y esto se convierten en los
efectores, uno va a ser Th1 otros Th2 y hay otro tipo Th
que han siido descritos, los más importante que ustedes
conozcan es el 1 y el 2 el más común también es el 17,
que existen los Th reguladores, los distintos tipos de Th
provienen de uno que alguna vez generó muchas copias
clonicas y todos los que derivan de aquí se llaman T
efectores, las copias clonicas de Thelper.
¿la diferencia entre el concepto de selección clonal y
expansión clonal? Hemos explicado 2 procesos, uno
cuando linfocitos t ya son efectores un efector proviene
de una expansión clonal, cuando son efectores está el
Th1 que actúa sobre el macrófago y esta el Th 2 que
actúa sobre el B, en ambos casos Th1 y Th2 actúan
produciendo citoquinas y esas son sus señales que van a
regular un proceso, en el caso del th2 se produce la
expansión clonal del B y la expansión clonal del B
depende de esas citoquinas que mencionamos y ahí
terminó la historia de la expansión clonal y las copias
clonicas, entonces luego les recordé que esto eran T
efectores pero estos T factores de dónde provienen? De
una expansión clonal que era Naiv y la primera vez que
le presentaron el antígeno tuvo expansión clonal,
entonces ¿cómo se regula la expresión clonal de un T
helper? Es porque el Thelper produce cuando le
presentan el antígeno, lo activan, esa es la selección
clonal y su expansión clonal es porque secreta IL-2 y
expresa el receptor de IL-2 entonces se autoestimula y
ese es el estímulo principal para que empiece a generar
copias clonicas. Cuando se procesa una respuesta contra
lo ajeno entonces finalmente hay macrófagos activados
destruyendo anticuerpos reconociendo antígenos y
actuando con todas las posibilidades que tienen los
anticuerpos, reconocer al patogeno directamente,
aglutinarlo, rodearlo, opzonizarlo, activar el
complemento, la activación del complemento lleva a
quimiotaxis y la optimización y también a distrucción
directa por lisis de superficie o sea todo el potencial que
tienen los anticuerpos es enorme es un marcador que va
finalmente a localizar el patógeno y va a destruir,
respuesta contra lo ajeno. Ahora en el caso de lo propio
cuando se produce la alteración de lo propio y eso
puede ocurrir porque las células se vuelven tumoral,
porque las células sufren algún tipo de estrés que le
lleva a generar un cambio en sus proteínas de
histocompatibilidad de clase uno (MHCI) o cuando es
infectado por un patógeno intracelular, normalmente los
virus pero también podría ser una bacteria en este
último caso es cierto que hay una respuesta contra lo
ajeno, pero es que es lo ajeno que está alterando lo
propio; virus, bacterias pero cuando hay una alteración
intracelular pero la vía de respuesta es que el linfocito t
citotóxico reconoce este MHC alterado y secreta
granzima y perforina que ya habíamos visto son las
mismas de los NK y esto altera la membrana y esta
célula va a experimentar citotoxicidad, esto sería un T
citotóxico efector porque está actuando sobre una célula
infectada, ahora si ese efector proviene de un Naiv que
en algún momento experimento selección clonal, el
proceso es el mismo, la expansión clonal del T citotóxico
también es por IL-2 pero la única diferencia es que se
activa via MHCI, la presentación del antígeno al
citotóxico es vía MHCI y también se produce debido a la
secreción de IL-2.
En este contexto, en este mini resumen de allí hemos
agregado un pequeño protagonismo a estas citoquinas
que en el fondo son las que van marcando, IL-2, IL-4,
IL-5, IL-6, TNF-alfa, interferon gamma, son las moléculas
que van haciendo la diferencia fenotípica entre una
célula y otra, porque por ejemplo ¿un Th1 con un Th2
qué tipo de células son? es un T helper CD3+ porque
todos los que poseen TCR son CD3, el TCR es del tipo 2+,
eso quiere decir que es alfa beta y el marcador de
estirpe CD4+ y esto puede ser un helper 1 o 2 ¿cómo
podríamos diferenciar el helper 1 del helper 2 si sus
marcadores superficie son los mismos? por las
citoquinas que producen, si es interferon gamma+ va a
ser Th1 o si es IL-4+ va a ser un Th2.
Otro tema es que estas estas moléculas comparten
características, TCR, estas moléculas MHC, TCR e
inmunoglobulinas son las 3 moléculas claves de la
inmunidad adaptativa ustedes la pueden activar por
separado y se darán cuenta que conociendo a las 3 van a
saber inmunidad adaptativa y esas 3 moléculas tienen
en común regiones constantes y regiones variadas, las
regiones constantes están asociadas a la célula origen, el
MHCII constante está hacia la célula presentadora, el
TCR constante está hacia el interior del helper o
citotóxico y la inmunoglobulina constante esta hacia el
interior del B y la región variable es la que reconoce a
estos peptidos epitopes, el MHCII, el MHCI, el TCR, la
inmunoglobulina, esa región variable es la que permite
ese reconocimiento.
Volvemos con estos resúmenes, es importante para
entender el contexto las células dendríticas son las
caracterizadas las que se asume, recuerden que todo
esto se basa en lo que se ha visto in vitro, muy poco se
ha podido ver en vivo entonces se derivan estas
hipotesis que la dendriticas que están por todas partes
son capaces de llegar a los sitios de presentación de
antígeno porque han tomado antígenos desde
microorganismos y pueden presentarlo la dendritica a la
célula T Naiv, siempre el primer encuentro es Naiv y esto
lleva a que existan los T efectores, siempre se tiene que
estar presentando el péptido por el MHC y el TCR lo va a
reconocer, importante que este proceso de presentación
de antígeno lo habíamos alcanzado a decir en la clase
anterior, no sólo involucran tcr con elMHC y al CD4 o
CD8 sino que además involucra a otras moléculas que se
llaman coestimuladoras, vamos a agregar ahora la
importancia de los coestimuladores y aquí aparece este
B7 que es un clásico estimulador que expresa la
dnedritica y que la célula T tiene otra molécula que es el
ligando de B7 que se llama CD28, entonces hay un
marcador importante en la superficie linfocitos T que es
el cd28, por lo tanto un linfocito T Naiv a lo menos debe
tener el tcr, , CD4 y el cd28 para poder interactuar con la
celula dendrítica, les comentaba también la clase pasada
que estas moléculas coestimuladoras deben activar a las
células, cuando no aparecen no se produce expansión
clonal, son tan importantes estos coestimuladores que
en ausencia de ellos esta célula Naiv en vez de clonar
experimenta muerte celular, esa muerte celular se llama
anergia clonal, cuando al T Naiv se le presenta el
antígeno experimenta expansión clonal pero cuando al T
Naiv se le presenta el antígeno sin coestimulantes, o sea
el puro MHC con el peptido, esta célula le falta otro
estímulo y en vez de experimentar expansión clonal
experimenta un mecanismo de muerte celular que se
llama anergia clonal, en vez de clonar se muere, eso es
un mecanismo de regulación de la auto tolerancia
periférica, si se acuerdan la auto tolerancia se
desarrollaba en el timo el, que en el timo se producen
linfocitos T maduros reactivos, pero esta reactividad no
puede ser contra antígenos propios sino que contra lo
ajeno para poder seleccionar linfocitos t no reactivos,
justamente en el timo se le presentan antígenos propios
y el que reconoce también es inducido a muerte,
entonces puede que se escape alguno del timo y
entonces en la periferia les pueden presentar antígenos
propios pero sin coestimulante y al no tener
coestimulante este experimenta anergia clonal ,
entonces si esa clonal que que ocurre en la periferia en
los centros de presentación antígenos es considerado un
mecanismo de regulación. Es un proceso de regulación
de la auto tolerancia eso ocurre normalmente cuando se
presenta un antígeno propio, entonces si le presenta un
antigeno propio y se activo es porque el TCR esta
reconociendo un antigeno propio y tiene que morir
porque si clona persiste el problema de la célula T que
esta reconociendo antigenos propios. Esa es la
explicación que se le ha dado al hecho de porque hay
procesos de estimulacion sin coestimulantes
aparentemente porque es un mecanismo de regulación
que se utiliza como regulación periférica en celulas que
estan presentando antigenos propios para que esa
célula piqué y se muera.
Normalmente en un proceso normal natural lo que debe
ocurrir es presentación de antigeno y coestimulante y
cuando se juntan todos estos elementos, el
coestimulante la presentación de antígeno que es el TCR
con el MHCII el CD4 o CD8, se activa las vias de
señalización en esta que por IL-2 expansión clonal,
entonces la célula T Naiv cuando se activa por expansión
clonal genera los diferentes tipos de T efectores, muchos
efectores, recuerden los efectores que no evolucionan a
un específico Th1, Th2, Th que sea se convierten en T de
memoria y bueno ya lo hemos explicado, inmunidad
adaptativa celular el macrófago interactuando con el
linfocito T efector, el macrófago ha procesado a la
bacteria, presenta restos antigenicos el T efector lo
reconoce y secreta interferon gamma y TNF-alfa que lo
convierte en una célula M1 que es iNOS+ prooxidativa
proinflamatoria y destructora, el linfocito B reconoce al
antigeno libre lo presentan via MHCII estos procesos
también necesitan la participación de coestimulantes y
este proceso lleva a que el Tefector secrete las moléculas
IL-4, IL-5 y IL-6 que llevan a la expansión clonal del B
entonces el T efector activa linfocito B esta genera
maduración y finalmente puede producir anticuerpos.
Entonces queda más que clarísimo la importancia de los
linfocitos T en la respuesta inmune adaptativa si no hay
estimulación para que se generen los T factores no se
puede desarrollar ninguno de los otros procesos, es
clave el estímulo del linfocito T. Por su parte así como
importante la estimulación del linfocito T es muy
importante la activación de la célula dendritica, la celula
dendritica que va a ser la responsable que se produzca la
activación de los linfocitos t debe por lo tanto llegar
activa a los sitios presentación antígenos, si es un nodo
linfático la celula dendritica debe llegar al nodo linfático,
tenemos las celulas de Langerhans en la piel es un
ejemplo de dendritica pero puede haber dendriticas en
la dermis en cualquier lugar y estas cuando se activan
esta puede venir de la epidermis o puede venir de la
dermis pero cuando se activan se convierte en una
célula que empieza a expresar molécula en la superficie
que le sirven para estimular a linfocito t explicado aquí
en el cuadro lateral una dendritica inmadura es ésta
antes de procesar el antigeno, esa dendritica inmadura
tiene capacidad de capturar antigenos, no ha madurado
pero tiene la capacidad de capturar antigenos, cuando
madura cuando ya va camino al ganglio linfático lo que
hace es presentar antigenos, inmadura captura y ya
madura lo que hace presentar al antigeno, la expresión
de receptores del tipo fc o receptores del tipo manosa
en la inmadura alta porque a través de este receptor fc
puede captar un microorganismo opsonizado un resto
de microorganismos opsonizado o manosa puede captar
trozos de bacteria y externalizarlo en el fondo expresa
receptores que le permiten captar estas partículas
extrañas de fuera, la madura ya no lo hace porque ya va
procesando algo pero la inmadura lo hace para capturar,
esta ya no Captura porque está presenta, la expresión de
moléculas activadoras de las células t como b7, b7
dijimos que era el coestimulador que era reconocido por
cd28 entonces b7 icam, icam qué es una molécula, estas
moléculas icam son moléculas de adhesión cómo se
tiene que producir estas sinapsis inmunológica entre las
células de presentación y los coestimulantes se expresan
muchas moléculas de adhesion que permiten que la
unión celula a celula sea proxima, entonces las
presentadoras de antígeno expresan estas de adhesión,
de coestimulacion y la principal citoquina que esta
relacionada con la presentación de antígeno es la IL-12
(o 2 no entendi bien) entonces la inmadura es negativo
para estas moléculas o es baja para la producción de
estas moléculas coestimulantes, de adhesión,
citoquinas, IL-12 pero cuando está madura obviamente
que expresa una mayor cantidad de coestimulante, de
adhesión y de citoquinas y IL-12 de hecho si empiezan a
subir los niveles de interleuquina 12 es una señal que
hay una actividad de presentación de antígeno
importante. ¿Cuál es el rol de la interleuquina 12? La
IL-12 tiene como rol estimular a la propia célula, tiene
múltiples roles estimula a células inmunitarias a sus
diferentes funciones, refuerza la inmunidad adaptativa,
es parte de la inmunidad adaptativa la IL-12 también la
producen los macrófagos y la IL-12 estimulan las células
NK y el puente entre la inmunidad innata y la inmunidad
adaptativa, así como la detrítica es la célula que va
desde lo innato a lo adaptativo la citoquina que la
acompaña es la IL-12 estimulando a las células NK para
reforzar la inmunidad innata pero inicia el proceso de
estimulación de los linfocitos T iniciando la primera fase
de la inmunidad adaptativa ya básicamente refuerza la
inmunidad innata terminal y estimula la adaptativa
inicial y luego las moléculas de MHCII, aquí dice la vida
media de una dendritica inmadura es de
aproximadamente 10 horas, vida media que está
expresada en la inmadura y en la madura es más de 100
horas, osea aquí la expresion de MHCII es importante
porque en la dendrítica maduras se está llevando a cabo
la presentación de antígenos y el número de moléculas
puede haber un millón en toda la células y esto supera
luego 7 u 8 millones a millones, o sea millones de MHC y
con una vida media más larga en la presentadora porque
es aquí donde el MHC juega el principal rol, el MHC de
clase 2 en esta presentadora.
Recordando entonces esta imagen de la dendritica
yendo a un nodo linfático sumando estos otros
componentes como la célula va cambiando su fenotipo
porque se va a convertir en presentadora ya el fenotipo
presentador está completamente madura a nivel del
nodo linfatico, ya habíamos hablado y en este proceso
cuando esta célula llega aquí va a haber procesado del
antígeno que que va a presentar y esto lo habíamos
mencionado, recordemos que cuando una célula tiene
una incorporación, llega a su interior ya sea porque
tomo desde el exterior proteínas virales o restos de virus
o un virus definitivamente el infecta o hay una infección
viral donde el material genético del virus induce la
producción de proteínas, cualquiera de las vias que lleve
a una presencia de proteínas no propias en el interior de
la célula va a ser esta proteína objeto de ubiquitinación y
la ubiquitinación la lleva al proteosoma generando estos
peptidos, estas proteinas cam (o tap), las tap son
transportadores que permiten el ingreso de estos
péptidos que van a ser presentados vía MHCI porque
viene aquí en la vía reticular MHCI y se presenta el
peptido y el requisito que sea un linfocito T CD8+ y
reconoce a un MHCI peptido TCR. ERAP son moléculas
que participan, bueno así como TAP es la la molécula
transportadora estas ERAP son moléculas que van a
permitir desacoplar, es que aquí hay restos de peptidos
si te fijas hay un proceso de esicion de este peptido a lo
que sería el peptido más activo, entonces básicamente
un procesamiento interno que ocurre en el retículo que
lleva a cabo esta molécula para que pueda ponerse
solamente el peptido que proviene de la degradación en
el proteosoma, pero hay una serie otras moléculas que
velan por la integridad etc, (pueden presentar en sus
vídeos las funciones específicas de estas molécula,
porque lo vimos en la vía de MHCII hay una serie de
moléculas adaptadoras que protegen el sitio de, bloquea
el sitio unión de los peptidos) cuando la ruta proviene
completamente del exterior y se forman estos
endosomas que fusiona con los lisosomas y tenemos
estos fagosomas ya maduros en donde ha habido
degradación, la declaración enzimática de las moléculas,
el procesado y aparecen estos restos peptidicos que se
unen con estas vesiculas que provienen de la via
reticular y golgi para que en este lugar cuando hay una
fusión se desbloquea el sitio de la molécula dónde está
el lecho para que se ponga el péptido y el péptido es
presentado via MHCII CD4 al TCR, lo principal que
interesa que recuerden es que la via MHCI parte desde
el interior, el proteosoma se transporta al retículo y que
la via MHCII viene desde el exterior entonces estos
endosomas que forman estos fagosomas va a unirse a
vesiculas que provienen del golgi para que se pueda
presentar, son rutas distintas.
Vamos a hablar de la otra molecula, lo que está al otro
lado del MHC que es el TCR, aquí aparece la
representación esquemática y al lado estructural de lo
que sería un TCR cuya sigla significa el complejo receptor
del linfocito T que básicamente es un hetero dimero que
el más abundante es el hetero dimero alfa beta y el otro
hetero dimero que existe es el gama delta, TCR alfa beta
o TCR gamma delta, éste es conocido como el TCR 2 este
como el TCR1, este es el más ancestral y que
aparentemente existen linfocitos t que expresan el TCR1
y al ser mas ancestral son linfocitos que conservan
respuestas mas rudimentarias normalmente son
citotóxicos pero no alcanzan a tener funciones de
linfocitos t helper que es más complejo que el tipo
citotoxico, pero el más abundante de los linfocitos T es el
TCR2+ que es el que claramente cumple todas estas
funciones como Th1, Th2 y T citotoxico, estos se
diferencian claramente a un CD4+ o CD8+ y como todas
estas moléculas que hemos estado estudiando posee un
extremo conservado que sería la parte constante de él,
la cadena alfa la parte constante de la cadena beta y
hacia la parte más externa o más exterior de la célula la
región variable que es variable alfa variable beta, entre
estas regiones entre alfa y beta es donde está el sitio de
unión al antigeno, alfa beta la parte variable es la que
tiene capacidad de conocimiento de estos péptidos
presentados por MHC ahora sí vamos a estructura al
igual que los MHC sobre todo en la parte constante o la
más cercana a la membrana hay una gran cantidad de
estructuras beta que la hace más rígida y en la parte
externa también hay rigidez de estructura beta pero
estas regiones loops o estas asas son las que van a tener
los sitios de reconocimiento del antigeno, aquí se ve un
ejemplo de MHC de clase 1 en dos vistas cómo podría
ser la interacción con TCR, estaba abajo MHCI esto
también tiene MHCI como les digo son 2 vistas cuando
se ve el lecho que hace MHCI de manera longitudinal
aquí se ve de manera lateral pero aquí lo que se
presenta en amarillo seria el peptido que está
presentando MHCI ahí se ve una vista desde el frente y
lo vemos desde el lado, aquí se alcanzan a ver 7 residuos
como les decia son peptidos pequeños, no mas de 9 u 11
pero los sitios de contacto estan en MHCI y el TCR que lo
va a reconocer tiene estas regiones en asa tanto en la
region, ambos son de la region variable pero tanto de
alfa como de beta estan los sitios de contacto para el
reconocimiento del peptido.
Para qu el linfocito T se pueda activar es necesario que
el tcr sea realmente un TCR, porque si uno piensa que el
receptor del linfocito T es un hetero dimero alfa beta
podríamos llamarle simplemente receptor del linfocito t,
pero en términos de cr alude a un complejo receptor del
linfocitos T y eso quiere decir que hay más moléculas
involucradas, repito la idea, cuando hablamos de tcr es
un complejo receptor del linfocito T lo que implica que
hay mas moleculas involucradas, cuando se habla
directamente el receptor del linfocito T es el hetero
dimero alfa beta o gamma delta, ahora cuando se le
entiende con un complejo es porque tiene otras
moléculas asociadas y una molécula que habíamos
nombrado ya con anticipación en otro momento que
tiene que ver con la maduración de los linfocitos T es el
que ven ustedes ahí como el cd3 ahora el cd puede
presentarse de 2 formas el hetero dimero es un hetero
dimero el cd 3 y puede presentarse como epsilon gama
o como epsilon delta y junto con cd3 en la región
transmembrana donde van a coincidir los dominios
transmembrana del cd 3 y del tcr existe el inicio de una
proteína que forma parte de este complejo que son esas
cadenas CED y que ustedes ven que se extiende hacia el
citosol, se penetra en el citosol hay una organización
morfológica que le permite proyectarse hacia el citosol,
la gran función de CED justamente es poder internalizar
la vía de señal del complejo TCR, entonces el tcr va a
estar asociado a los cd3 que tienen las variantes epsilon
gama y epsilon delta y en la región transmembrana
entre el cd3 y el TCR esta el inicio de una molécula que
se presenta como un homo dimero que son estas CED,
estas CED lo que tienen y los CD3 también son estos
dominios ITAM que son dominios en la proteína que
tienen actividad tirosina quinasa y estos dominios con
actividad tirosina quinasa pueden fosforilar sustratos
del entorno que sean sensibles a esa actividad y la
fosforilación de estos residuos del entorno en tirosina
activan las vías de señalización que finalmente permiten
que este linfocito T responda, ahora estas vías de
señalización deben asociarse con las otras moléculas
que participan en la sinapsis inmunologica, ¿Cómo se
logra esta activación? básicamente por la modificación
alosterica del TCR, cuando el TCR reconoce al MHC
peptido experimenta una modificacion alosterica
estructural que activa a sus CD3 y los CD3 activan
alostericamente a las CED, la modificacion alosterica es
lo que permite la modificación de estas moléculas y aquí
activa rutas de señalización que van directamente como
factores de regulación transcripcional al nucleo,
básicamente esa es la organización del complejo TCR, si
consideramos ahora todas las moléculas que hemos
hablado que hemos mencionado vamos a encontrarnos
en un ejemplo, si esta es la membrana del linfocito T
helper porque es un CD4, si esta es la membrana de una
celula presentadora de antigeno de clase 2, la
presentadora de antigeno posee MHCII con el peptido
que es lo principal pero ademas hemos visto que hay
moleculas coestimuladoras B7 y hay distintas variante o
tipos de B7, aquí se ven estos ejemplos B71, estas B7
ademas de las coestimuladoras estos por cierto tienen
otros nombres como CD, pueden ser CD80, CD86 o
CD83, (B7 es la denominación mas antigua) bueno estas
moléculas coestimulantes, presentación, coestimulación
e ITAM es una molecula de adhesión, presentación
coestimulación y adhesión, por esta parte por el linfocito
T hay moléculas asociadas a distintos procesos el
Reconocimiento, la señalización y también la adhesión,
el Reconocimiento es el que tiene que ver con lo que le
están presentando esta presenta y esta reconoce, los
otros componentes que se activan el cd4 o el complejo
receptor que recién hablábamos CD3 con CED, estos
CD3 con los dominios ITAM y CED son lo que van a
regular las vías de señalización junto con los los
coestimulantes, los coestimulantes también pueden
estimular vías de señalización.
Dato interesante, para que se pueda producir lo que
dibujamos allá piensen que cuando una celula
presentadora le presenta a un T helper Naiv, ese heper
va a experimentar expansión clonal y la expansion clonal
es clave para que la respuesta adaptativa sea eficiente y
si tengo muchas copias de una célula que es capaz de
reconocer a un antígeno de un patógeno, éxito, porque
lo voy a poder combatir pero también se equivoca y es
un autoantígeno o no es de un patógeno, puede
producir un problema, básicamente autoinmunidad o
una alteración en el reconocimiento, funcionar de
manera , etc, por lo que este proceso debe ser súper
regulado, por ello es que está la presentadora la
reguladora presentación la exclusión la limitación del
cd4, los coestimuladores, la activación para que todas
estas vías de señalización lleven a la producción de IL-2,
el receptor, y la adhesión también es importante.
Un detalle es que cuando descubrieron que en el
proceso de presentación de antígeno se podía inducir la
inhibición de linfocito T, estos dominios ITAM son
dominios activadores pero los dominios Itim son
dominios inhibidores entonces existe en la presentadora
una molécula que es ligando de PD, PD se expresa en la
superficie del linfocitos T y está es el ligando de PD, pero
cuando esta célula expresa el ligando de PD y activa PD
estos dominios ITIM en vez de activar inhiben al
linfocito T y se descubrió que cuando hay células
tumorales, las células tumorales normalmente debería
ser reconocidas y destruidas por el sistema inmune sin
embargo las personas igual pueden padecer cáncer
porque hay células tumorales que igual se desarrollan y
esto es porque las células tumorales evaden la
inmunidad y una característica es que las células
tumorales inducen la expresión de este ligando que
cuando se unen al PD1 inhibe a las células t para que
den respuesta, esta fue la primera intervención
inmunológica del cáncer se generaron anticuerpos
contra PD1 y al poner anticuerpos aquí no se inhibia el
linfocito T y se podía dar respuesta a antígenos, ese fue
el inicio de la inmunoterapia del cancer.
Clase 8 martes 8 octubre 2022
Estábamos comentando que, fuimos explicando paso a
paso MHC, TCR, inmunoglobulinas como estructura la
respuesta adaptativa y finalmente vamos a llegar a esto
que es la sinapsis inmunológica en donde una célula,
linfocitos cd4+ expresa en su superficie una serie de
moléculas que le permiten interactuar con la
presentadora de antigeno, estas moléculas que
presentan la primera es el TCR que es de reconocimiento
y los otros están asociados a la vía de señalización, CD4,
CD3, CED y estas particularmente CD3 y CED son parte
fundamental de la vía de señalización que está
relacionada con el TCR, cuando el TCR reconoce al
péptido que está presentado por MHC experimenta
modificaciones alostericas que van a generar una cadena
de activaciones que estimulan estos dominios ITAM que
son dominios de activación, se producen fosforilaciones
en residuos de tirosina y hay una actividad tirosina
quinasa importante que va a activar a distintos
reguladores transcripciones, esos reguladores
transcripcionales dependen del tipo de cd4, del tipo de
presentación si es Naiv, si es un Th1, un Th2 eso ya varía
dependiendo del tipo celular y lo que esta ocurriendo
pero lo importante que va al núcleo y en este caso
cuando es primer activación la gran respuesta que da
esta célula es producir interleuquina 2 y el receptor de
interleuquina 2 y se produce la expansión clonal, vías de
señalización también involucradas son estas otras
moléculas que están asociadas a los coestimuladores
junto con presentar el antígeno la presentadora expresa
coestimuladores en su superficie como estas proteínas
B7 que dijimos CD80, CD86 y CD83 estas moléculas van a
estimular a CD28 y ligandos de estas presentadoras que
van también a relacionarse con las vías de señalización y
las de adhesión también las mencionabamos que
también eran componentes de membrana importante
porque esto debe mantenerse estable, recuerden que
esas son moléculas pero en la membrana se expresan
muchas. Son marcadores genericos, se pueden llamar
B7 pero también se encuentra por cd80, cd86 o cd83
esto depende del tipo de célula presentadora porque
puede ser dendritica puede ser un linfocito, un
macrófago o incluso como las mencioné en algún
momento celulas endoteliales, así que lo decimos de
manera genérica cd80,86 y83 estas son una misma
molécula con una pequeña variante esta es una distinta,
bueno aquí tiene una tabla resumen donde aparece el
tipo de molécula en el linfocito t la función que ya
habíamos dicho traducción de señal transducción de
señal pero en el caso de los citotóxicos es exactamente
lo mismo lo único que cambia es que en vez del cd4 esta
el cd8 pero es lo mismo, en vez del cd4 esta el cd8 y el
presentador en el caso del cd8 es el MHCI, aquí están los
otros componentes están relacionados con la
señalización y recordar que esta molécula está asociada
a procesos de inhibición como les había dicho el PD1
está en el linfocito T y el ligando de PD1 que puede estar
en células presentadoras de antígeno o en células
tumorales tiene como finalidad inhibir al linfocito T.
Entonces si vemos ahora, lo que les decía es
exactamente lo mismo, en el caso del linfocito T helper
que en el caso de un linfocito cd8+ es decir un citotóxico,
los componentes de membrana van a ser los mismos, la
única diferencia es que el cd4 es el helper y el cd8 esta
en el citotóxico, pero los otros componentes estas
moléculas de adhesión, estas moléculas de señalización
que están asociadas al TCR, el cd3, el CED y esta
molécula el cd28 que está asociado también al
coestimulante son exactamente las mismas, aquí
aparece otro marcador que es propio del linfocito que es
el cd 2 pero este marcador está relacionado con
madurez, no lo había visto antes pero es un mercado de
madurez y por su parte la célula presentadora de
antígeno lo mismo Icam, ITAM, adhesividad, MHCII,
MHCI esta otra molécula también es de adhesión y aquí
están B7 1 y B7 2 que son estas moléculas
coestimulantes CD80, CD86 o CD83, son exactamente los
mismos componentes por ambos lados y la idea es que
tengamos el recuerdo que hay una serie de moléculas en
linfocito t Reconocimiento señalización y coestimulación
adhesión que van a permitir que ocurra esa sinapsis
inmunologica.
Si vemos ahora un proceso de activación cuando una
célula presentadora de antígenos interactúa con el cd4
Naiv o con el cd8 Naiv, el proceso es exactamente el
mismo, ahora por convención se acepta que esa célula
APC que interactúa con la Naiv esa que interactúa con el
Naiv es la célula dendritica, esto entonces se le atribuye
esta característica a las células dendriticas por su
capacidad de expresar tanto MHCI como MHCII como la
célula doble presentadora, doble presentadora de
antigenos, entonces por convención se le atribuye a esta
dendritica, porque insisto en por convención, porque
ustedes pueden leer que un macrófago actúe como
células presentadoras de antígeno a lo mejor un
macrófago puede llegar a un sitio presentación y
encontrarse con una célula Naiv, por orden tratamos de
asignar que el macrófago siempre esta en el tejido y está
interactuando con el linfocito T efector, pero podría un
macrófago encontrarse con un Naiv, tal vez hasta un
linfocito B podría activar un Naiv ahí dentro del ganglio
linfático, no sabemos, por convención por contar esta
historia ordenada, la dendritica con el Naiv y los otros
con los efectores, todos los efectores derivan de este
Naiv, entonces esta APC, celula dendrítica doble
presentadora puede procesar vía MHCII hacia la línea de
T helper y MHCI hacia la via T citotoxico, en ambos casos
luego de la selección clonal debe venir la expansión
clonal y en ambos casos como habíamos hablado ayer
depende poderosamente del estímulo de una citoquina
que es la interleuquina 2 y estas células tienen una
autoestimulación, las primeras, porque ya cuando hay
más se empiezan a estimular entre ellas secretando IL-2
y expresando receptor de IL-2 se produce entonces el
proceso mitótico de expansión clonal y estas células que
experimentan expansión clonal van a tener 2 grandes
Funciones, efectores o memoria ¿cuáles son las de
memoria? las que no siguen madurando y se quedan en
un estado como estaba la Naiv y se queda en los sitios
donde están los linfocitos T, las que siguen madurando y
normalmente eso se regula por la expresión de
receptores porque estas células van respondiendo a los
estímulos ambientales y de pronto hay unas células que
expresan una menor cantidad de receptores y por lo
tanto tiene menor efecto las citoquinas del entorno
sobre ella y se van quedando mientras que otras se van
activando completamente y ¿cómo se activan?
expresando una mayor cantidad de TCR, expresando la
mayor cantidad de moléculas de todas las moléculas que
vimos que debía tener el linfocito para que se le
presenten los antigenos, las Funciones de ese Theper
efector es activar macrofagos, ya lo vimos Th1 o activar
celulas B, Th2 que son las 2 principales poblaciones
otras son todos los otros tipos de Th que puedan
describirse y el más caracterizado el Th17, que funciona
como es como un T helper 1, en realidad es un activador
de procesos innatos de inflamación local, en el caso de
las citotóxicas pasa exactamente lo mismo memoria
efectoras y las efectoras van a ir a actuar sobre células
objetivos y estas células objetivo son células que están
infectadas por un virus, salen alteradas por un poceso de
estrés, alterada por un tumor y esa las detecta y las
destruye, además cuando se dice que esta T citotóxica es
activadora de macrofagos es porque la T citotóxica, esta
T citotoxica como su TCR esta detectando a estas células
que están infectadas o alteradas y las va a destruir si se
destruye una célula ¿que necesitamos que venga acá?
un macrófago a comer a limpiar los limpiadores como
esas películas de asesinos en serie, entonces ¿como
llama al limpiador? Las T citotoxicas producen interferón
gamma que puede activar a macrófagos y convertirlo en
m1 por eso cuando decimos que la T citotóxica activa
macrofagos porque secreta interferón gamma y eso
puede inducir la actividad de los macrofagos y estos por
lo tanto van a ir a limpiar, ojo que estas células es lo
propio alterado y es alterado por patógenos
intracelulares por lo tanto virus bacterias que posea ese
macrófago las va a procesar va a diseminar más
antígenos la idea es siempre mantener la alarma de la
respuesta inmune.
Ultimas grandes ideas hemos dicho que en el caso de los
citotóxicos grandes funciones de citotoxicidad,
activacion de macrófagos cuando está activo cuando
está destruyendo células pero en el caso de los T
efectores tenemos esta característica, los linfocitos T
helper son los grandes maestros de la inmunidad
adaptativa, los T helper son los que dirigen hacia dónde
se orientan la respuesta inmune, puede ser inmunidad
adaptativa celular puede ser inmunidad adaptativa
molecular, la aparición de los T helper es importante,
por ejemplo en los primeros estudios que aparecieron
respecto de la respuesta inmune al SARS CoV2 la
tendencia a pensar es que había un incremento
importante de los T citotóxicos porque es un virus y hay
que matar células para estudiar virus pero cuando se
hacían los análisis transcriptomicos que permitían
analizar poblaciones e incluso trabajos de que son de
single cell o que se hace análisis con una célula, lo que
mas se incrementaba en la respuesta de las personas
que eran más tolerantes eran los T helper porque el T
helper es el que está dirigiendo la respuesta inmune
independiente que se trate de un virus una bacteria de
un hongo, el T helper es super importante, la misma
explicación para entender por qué el VIH el virus de la
inmunodeficiencia humana genera tanto daño al sistema
inmune porque su célula blancos son las T helper, ataca
células que son CD4 positivas entonces le da directo a la
célula clave en la inmunidad particularmente la
inmunidad adaptativa.
Estos T helper se descubrió que se organizaban en
distintas poblaciones como ya lo he mencionado Th1,
Th2, Th17, Th regulador y estas distintas formaciones
tienen distintas funciones, esta es es una de las que se
caracterizó y el nombre está asociado a que produce
interleuquina 17 y es estimulado a esta diferenciación
por interleuquina 23 pero ese tipo de citoquinas lo
vincula a esa población de Th17 a respuestas
inflamatorias locales y que normalmente tiene que ver
con alguna infección persistente, Th1 ya hemos visto que
este es el que interactúa con los macrófagos y los ayuda
a M1 y Th2 es el que interactúa con los linfocitos B y los
ayuda a la expansión clonal y T regulador o Treg es el
que apaga la inmunidad, y en teoría cuando prolifera un
Naiv de aquí suelen salir estos efectores y de aquí a Th1.
Th2, Th17 y aparece posteriormente el fenotipo
regulador porque recibe señales inmunes que lo vuelven
regulador, la inmunidad el tema que no hemos
comentado muy profundamente pero la inmunidad se
caracteriza por tener un feedback positivo cada vez que
se levanta tiene una retroalimentación positiva es decir
una molécula pro inflamatoria activa otro pro
inflamatorio y esa activa a otra molécula conductora y
aparece o sea todo va a más, pero debe haber un
momento en que se produce la caída de eso que va a
más entonces después que se han levantado las
respuestas empiezan las señales de regulación por eso
es que dentro de todos los T que se activan para levantar
la respuesta inmune después tiene que aparecer un T
regulador que empieza a apagar estoy es por eso que
cuando abrimos la introducción al curso siempre la
respuesta inmune las vemos como estas curvas que
hacer un fic y luego hay una caída esa caída ¿a quien se
la debemos? a los T reguladores.
Cada vez que hay una respuesta inmune se habla de
polarización, así como en algún momento hablamos que
existían los macrófagos M1 y M2 y que la inmunidad
innata se polariza hacia acá o se polariza hacia allá o
tiene una primera fase de uno y una segunda fase de
dos, la destructiva y la reparadora, en la inmunidad
adaptativa pasa exactamente lo mismo hay una
respuesta inmune, se polariza hacia algunas de las
poblaciones de Th, puede que se activen todas pero se
polariza hacia alguna población de Th. En esta diapo se
presenta el regulador transcripcional maestro, el que va
a regular una población, los reguladores
transcripcionales maestros son los que regulan una
población y allí están los ejemplos característicos para
cada una de las poblaciones de linfocitos t, para él
fenotipo de th1 se requiere una inducción que
poderosamente está relacionada a interleucina 2 es
decir el estímulo es interleuquina 2 y esas células se
convierte en una célula que activa a su regulador
transcripcional maestro que es Tvet, cuando la célula
activa Tvet se induce la expresión de las moléculas que
les convierten en una típica célula Th1, entonces el
inductor interleuquina12 facilita que estas células se
conviertan en Tvet, esto ocurre durante el proceso de
presentación de antígeno la presentadora con respecto a
la Naiv en la presentación lo que va a ocurrir es
proliferación pero también va a ocurrir una polarización
hacia una población si esta secreta IL- 12 lo que
principalmente va a generar son th1, si esta secreta IL-4
lo que va a favorecer es la activación del regulador
transcripcional maestro gata 3 y gata 3 induce lo que es
el perfil de los Th 2, cuando se produce una estimulación
IL-6 y TGF-beta puede activar este regulador
transcripcional ROR que permite la producción de el
fenotipo de Th17 y cuando no hay nada, ante la ausencia
de señales estimuladoras puede inducirse la expresión
de un fox p 3 y el fox p 3 és el regulador maestro de los T
reguladores, entonces no olvidar jamás Tvet Th1, GATA3
Th2 y Fox p 3 para T regulador, ahora lo importante es
que recuerden Tvet para Th1 y IL-4 para GATA3 y la
ausencia de estimuladores va a ser fox p 3 pero también
alguna señal inhibitoria puede favorecer a fox p 3
¿cuáles son las señales inhibitorias? son las mismas que
produce este T regulador TGF-beta, el factor
transformante beta e IL-10 son las señales más potentes
de inhibición de la inmunidad donde aparece
interleuquina 10 algo se cae, si el macrófago era activo
con IL-10 se inactiva y es un M2, si hay un proceso
inflamatorio se convierte en un proceso
antiinflamatorio, si hay un T activo se convierte en un T luego de haber hecho todo este recorrido de como son
inactivo, gran inhibidor de la inmunidad IL-10 y también las respuestas inmunes de los patrones moleculares
TGF-beta factor transformante beta, ¿le enseñaron asociados patógenos porque de qué depende que la
alguna vez la historia de los factores de crecimiento? respuesta contra un virus, o sea la respuesta adaptativa
Todos los factores de crecimiento en algun momento se la final sea de una forma o sea de otra porque la
decubrio que habian pequeños peptidos que respuesta contra una bacteria sea distinta contra un
estimulaban y ahí se descubrió que había algunos que virus o la respuesta contra una bacteria intracelular sea
tenían función inhibitoria como el TGF-beta. distinta contra un virus, depende del tipo de patógeno y
Con los Th por ejemplo Th1 los que pasan a ser T el tipo de patógeno lo marcan los PAMPs, no existe un
regulador, entonces lo que estaban haciendo lo dejand solo criterio no existe un solo criterio porque hay virus
de hacer. que polarizan a Th2 y hay virus que polarizan Th1, hay
Sabemos que el Th1 activa macrófagos a través de la bacterias que polarizan a Th2 o a Th17 y otra puede
secreción de interferon gamma y TNF-alfa, los grandes polarizar a Th1, ya depende de la especie depende de
inductores del fenotipo M1 de los macrofagos, el Th 2 los PAMPs esto es una diapositiva de un paper que trata
induce a la expansión clonal de los linfocitos b primera de explicar un caso específico o sea por tanto no es
señal IL-4, IL-5 aparece dentro del fenotipo del th 2 que norma pero nos sirve de ejemplo, bacterias y virus
permite que se desarrolle la maduración de los linfocitos puede estimular a las células NK que produciendo
B, Th2 también esta relacionado con IL-10 y es porque la interferón gamma favorecen que esta célula dendrítica
inmunidad de tipo 2 se relaciona entre los M1 Th1, M2 produzca IL-12 y la IL-12 permite polarizar a un fenotipo
Th2, es decir cuando se está produciendo la activación Th1, la dendritica va a producir citoquinas que van a
del th 2 hay una tendencia a inducir la polarización a M2 marcar el destino de estas th cuando se produzca la
porque el fenotipo de Th2 compite con el Th1, pero su presentación de antigeno, aquí es muy interesante
función principal es la de IL-4 y IL-5, Th17 principal IL-17, porque esta relacionado con el por qué no es tan fácil
IL-6 es una citoquina mas bien sistemica y el T regulador Hacer una vacuna, porque la vacuna tiene que mutar lo
por vía Fox p 3 basicamente produce IL-10 y TGF-beta mas cercano a una infección natural, pero la infección
que son los inhibidores de inmunidad y que también naturales es el patógeno y es un PAMPs y por qué cada
permiten que los procesos innatos vayan hacia la respuesta inmune es distinta porque cada producción de
reparación y no a la destrucción. El principal estímulo PAMPs es distinta, en la diapo hay ejemplos.
para esto realmente es IL-23, entre estas células se
pueden inducir fenotipos, un fox p 3 que es un T
regulador puede contribuir a que estas células se
convierta en un Th17, las primeras células que dependen
directamente de las APC son las Th1 y las Th2, estas
secreciones son directamente de la APC, los otros tipos
dependen del ambiente que se vaya generando en el
lugar de presentación de antígeno, cuando empiezan a
interactuar con otras células entonces puede haber
ausencia de estimulación que induzca un fox p 3 y el
TGF-beta puede favorecer al Th17 básicamente por
polarizar a esta y no a este porque este es más sistémico
y este es más local porque la IL-6 es una interleuquina
sistémica y por lo tanto en un nodo linfático si se detecta
IL-6 es porque hay una actividad sistémica de respuesta
inmune porque se regula entre ellos entre ellos
compiten, ahora recuerda que esto no es absoluto va a
haber algunos Th1, algunos Th2 algunos Th17 y algunos
Treg, ¿cuando la respuesta es completamente inhibida?
cuando este empieza a predominar, se regulan entre
ellos. Siempre va a haber una polarización con la mayor
concentración de señales, ¿de que dependen las
señales? de qué depende que una APC este prouciendo
IL-4 o IL-12 o que a nivel sistemico se eleve IL-6, de los
PAMPs y con esto cerramos todo lo que hemos tratado,
partimos hablando de los patrones moleculares
asociados a patógenos y vamos a terminar hablando