Universidad Autónoma Chapingo

Departamento de Ingeniería Agroindustrial

Bioquímica

Práctica 4: Determinación de
la actividad de la enzima
Succinato Deshidrogenasa en
mitocondrias
Equipo:
Integrantes:
 Espinosa Flores Daniela
 Morales Tavera María Dolores
 Pedro Enríquez Martha Cecilia
 Toledo Medina Edgar Emilio
Profesor: Santos Moreno Armando

Fecha de entrega: 27 de abril 2023

I. Introducción

El complejo enzimático succinato deshidrogenasa está formado por cuatro subunidades,

codificadas por el genoma nuclear. Además, este complejo es el único que no bombea
protones a través de la membrana mitocondrial interna durante su acción catalítica. El
complejo succinato deshidrogenasa consiste en: ● Una cabeza hidrofílica que se extiende
desde la membrana mitocondrial interna hacia la matriz mitocondrial (2 subunidades) ●
Una cola hidrofóbica que está embebida en la membrana mitocondrial interna y que posee
un pequeño segmento que se proyecta hacia el espacio intermembrana soluble de la
mitocondria (2 subunidades).

Estructura de la porción hidrofílica La cabeza hidrofílica está compuesta por las

subunidades SdhA (70 kDa) y SdhB (27 kDa) y esta comprende el centro catalítico del
complejo. Subunidad SdhA posee un cofactor FAD unido covalentemente a su estructura,
justo en el sitio de unión para el succinato (el principal sustrato de la enzima). Subunidad
SdhB tiene 3 centros hierro-azufre (Fe-S) que median la transferencia de electrones hacia
la ubiquinona. Estructura de la porción hidrofóbica El dominio membranal del complejo
consta de las subunidades SdhC (15 kDa) y SdhD (12-13 kDa) que son proteínas
integrales de membrana formadas, cada una, por 3 hélices transmembranales. Este
dominio contiene una porción hemo b unida en la interfase entre las subunidades SdhC y
SdhD, donde cada una provee uno de los dos ligandos de histidina que las mantienen
unidas.

Función ● Está presente en todas las células aeróbicas. ● Esta enzima se encarga de la
oxidación del succinato a fumarato en el ciclo del ácido cítrico.

● Alimenta el complejo III de la cadena transportadora de electrones con los electrones

derivados de la oxidación del succinato, lo que ayuda a reducir oxígeno y formar agua.

Su función en el metabolismo ● La subunidad A del complejo (la que está unida

covalentemente a la coenzima FAD) se une a los sustratos, fumarato y succinato, así
como a sus reguladores fisiológicos, el oxalacetato (inhibidor competitivo) y el ATP. ● El
ATP desplaza la unión entre el oxalacetato y el complejo SDH y, entonces, los electrones
que son “pasados” desde el succinato hacia la subunidad SdhA son transferidos hacia los
grupos de átomos de hierro y azufre presentes en la subunidad SdhB por medio de la
coenzima FAD. ● Desde la subunidad B, dichos electrones alcanzan los sitios hemo b de
las subunidades SdhC y SdhD, desde donde son “entregados” a coenzimas quinonas a
través de sus sitios de unión a quinonas. ● El flujo electrónico desde el succinato a través
de estos transportadores y hasta el aceptor final, que es el oxígeno, está acoplado a la
síntesis de 1 moléculas de ATP por cada par electrónico a través de la fosforilación ligada
a la cadena respiratoria.

Función en el ciclo de Krebs

● · Está presente en la parte final del ciclo, en la reacción 6 que va de succinato a

fumarato.

● Consiste en la reorganización de moléculas a cuatro átomos de carbono hasta la

regeneración de oxalacetato.

● Para que eso sea posible, el grupo metilo presente en el succinato tiene que convertirse
en un carbonilo.

● Tal conversión ocurre mediante tres pasos:

● Una primera oxidación, una hidratación y una segunda oxidación.

● Estos tres pasos además de regenerar oxalacetato, permiten la extracción ulterior de

energía mediante la formación de FADH2 y NADH

II. Objetivo de la Práctica

Examinar una de las reacciones dentro del ciclo del ácido cítrico, la conversión de
succinato a fumarato, catalizado por la enzima succinato deshidrogenasa y la coenzima
FAD para comprender mejor el ciclo de Krebs.

III. Materiales
 2 tubos de ensayo
 2 pipetas de 5 mL
 Baño María a 50°C
 Pinzas para tubo de ensayo
 Mortero
 Gotero
  NaOH al 10%
 Acido succínico al 3% neutralizado con NaOH al 10% hasta pH=7.4
 Fenol al 90%
  Azul de metileno al 0.1%
 Aceite mineral
 Hígado de pollo

IV. Metodología

Preparación del experimento

En el mortero colocar 1 g de hígado de pollo recientemente sacrificado y molerlo con 3 o 4

mL de ácido succínico hasta obtener una masa. Transferir en partes iguales a 2 tubos y
proseguir según se expresa en el cuadro.

Reacción enzimática

1. Incube ambos tubos 10 minutos en el baño María a 50°C.

Lectura de resultados

1. Observe los cambios

V. Resultados
 Como lo podemos observar en la imagen, el tubo dos
tuvo un ligero cambio de color, pigmento una tonalidad
anaranjada lo que nos indica que existe la presencia
de algún inhibidor.

VI. Cuestionario

1. ¿Qué células se utilizaron en el laboratorio para observar la actividad de la enzima

succinato deshidrogenasa?

Se utilizaron células de tipo animal, exactamente el hígado de pollo.

2. ¿Qué sustrato se utilizó en el laboratorio como sustrato de la enzima succinato

deshidrogenasa?

Hígado de pollo recientemente sacrificado.

3. ¿Cuál el propósito de utilizar fenol en el experimento?

Lo ocupamos como inhibidor de la reacción.

4. ¿Cuál es el propósito de utilizar el azul de metileno en el experimento?

Cumple el propósito de hacer visible la reacción, esto debido al cambio de color,

teniendo como ejemplo el caso del tubo 2 que fue el que cambio de color por el
inhibidor.

5. ¿Cuál es el propósito de usar el aceite mineral en el experimento?

Ya que estamos tratando con una sustancia insoluble en el momento en que la

reacción sucede se puede apreciar la separación de los colores en el tubo 2, esto por
la diferencia de las densidades.

VII. Conclusión
Como lo pudimos observar durante el desarrollo de la práctica ambos tubos obtuvieron
distintos resultados; en el primer tubo nos damos cuenta que el hígado fue catalizado por
la enzima, y por lo contrario, en el segundo tubo se logro ver un cambio de tonalidad (de
azul a naranja) esto ocurre debido a la inhibición de esta reacción, que fue ocasionada por
el Fenol al 90%.

VIII. Bibliografía
- Tondo, M., Marin, I., & Ma, Q. (2015). Pyruvate Dehydrogenase, Pyruvate
Carboxylase, Krebs Cycle and Mitochondrial Transport Disorders. ScienceDirect.
sciencedirect/science/article/pii/B
- Kim, HJ y Winge, DR (2013). Conceptos emergentes en la flavinilación de
succinato deshidrogenasa. Biochimica et biophysica acta, 1827 (5), 627–636.
doi/10.1016/j.bbabio.2013.01.