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Universidad Autónoma de Chiapas

ENSAYO SOBRE LA APLICACIÓN DEL ANALISIS DE VARIANZA EN LAS


Facultad
CIENCIAS de Ciencias Químicas Ext. Ocozocoautla
DE LA SALUD

Nombre del Catedrático:


Dra. Ana Olivia Cañas Urbina.

Materia: bioquímica.

Nombre de los Integrantes:


Ariana Archila Jiménez
Emmanuel López Ochoa
Dalver Yeudiel Pérez López
Catherin Concepción Pérez Sánchez

Nombre de la práctica:
Determinación de la actividad de la enzima succinato deshidrogenasa.

Modulo:
Cuarto semestre único

Practica: 5

Fecha:
30 de Marzo de 2016
Universidad Autónoma de Chiapas

Facultad de Ciencias Químicas Campus IV

INTRODUCCION.
Las enzimas son proteínas que tienen como función disminuir la energía de
activación en una reacción; para cada reacción tiene una enzima específica, las
enzimas suelen clasificarse en seis clases: oxidorreductasas, transferansas,
hidrolasas, liasas, isomerasas y ligasas.

En este caso hablaremos de la enzima succinato deshidrogenasa o succínico


deshidrogenasa es un complejo proteico ligado a la membrana interna
mitocondrial participa en el ciclo de Krebs y en la cadena de transportes de
electrones.

Esta enzima participa en la reacción número seis del ciclo de Krebs produciendo
fumarato y de igual manera participa en la cadena de transportes de electrones en
el complejo II. En Bioquímica (2007) se afirmó que la enzima succinato
deshidrogenasa es la única enzima del ciclo de Krebs que no se encuentra en la
matriz mitocondrial, sino que en la membrana mitocondrial interna, con el sitio de
unión del sustrato accesible desde la matriz. Es además la única en el ciclo
asociada a un grupo prostético flavínico (FAD) mediante el cual los equivalentes
de reducción del succinato son transferidos a la ubiquinona, componente de la
cadena de transporte de electrones. En general la función bioquímica del FAD es
oxidar alcanos a alquenos, mientras que el NAD + oxida alcoholes a aldehídos o
cetonas. El malonato es un fuerte inhibidor competitivo de la enzima.

De acuerdo a Gunawardena & Fernando (2008) El colorante azul de metileno


puede funcionar como aceptor de electrones artificial (agente oxidante),
reemplazando al NAD+ en la reacciones enzimáticas en sistemas vivientes.
Cuando el azul de metileno sustituye al NAD+, se torna incoloro a medida que se
reduce, mientras los compuestos orgánicos involucrados en este metabolismo se
van oxidando. El NADH o azul de metileno reducido pueden ser oxidados
nuevamente en presencia de oxígeno molecular, por el sistema de transporte de
electrones de la mitocondria, en la cadena respiratoria. Esta reacción causa que el
colorante vuelva a adquirir su color azul propio de su estado oxidado.
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OBJETIVO:
Que el alumno aprecie la actividad de le enzima Succinato Deshidrogenasa
mediante una reacción colorimétrica.

MATERIALES Y METODOS.
Se trabajó de acuerdo a Alvarado, Dávila, Ramos, García & Flores (2008) con las
siguientes modificaciones:

Se utilizó hígado de pollo fresco.

RESULTADOS.
A continuación se presentan los cálculos realizados en la práctica:

Figura 1. Calculo de ácido succínico al 3%


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Figura 1.1 cálculo de fenol al 90%.

Figura 1.2 NaOH al 10%


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Figura 1.3 Tubo número 1 (con una coloración azul) y tubo 2 (coloración naranja).

DISCUSION DE RESULTADOS.
Al realizar la práctica identificamos el cambio de coloración en los tubos al
agregarle azul de metileno, lo cual este cambio se identificó más en el tubo 1, ya
que tenía como reactivo el fenol y el azul de metileno, lo cual ocurrió una oxidación
y presento un color azul brillante. En el tubo 2 la muestra no cambio de color
debido a que sufrió una reducción.

Gunawardena & Fernando (2008) dijeron que el colorante azul de metileno puede
funcionar como aceptor de electrones artificial (agente oxidante), reemplazando al
NAD+ en la reacciones enzimáticas en sistemas vivientes. Cuando el azul de
metileno sustituye al NAD+, se torna incoloro a medida que se reduce, mientras
los compuestos orgánicos involucrados en este metabolismo se van oxidando.

CONCLUSION.
Llegamos a la conclusión que el azul de metileno es un aceptor de electrones
artificial, ya que remplazo al NAD+ en la reacción. Cuando ocurre una oxidación,
la muestra torna un color azul brillante y cuando se reduce es incoloro. En el caso
del fenol inhibe la enzima de tal manera que desnaturaliza las proteínas.
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ANEXOS.
Cuestionario.

1. ¿Cuáles son los colores del azul de metileno en sus estados oxidado y
reducido? Cuando esta oxidado se encuentra en color azul y cuando esta
reducido se vuelve incoloro.
2. ¿Cuál es la función del fenol en la reacción? Inhibe la actividad de las
enzimas ya que desnaturaliza las proteínas.

3. ¿En qué vía metabólica está involucrada la enzima succinato deshidrogenasa?


Lista los activadores, inhibidores, Km y mecanismo de rx de ésta enzima.
Está involucrada en el ciclo de Krebs y en la fosforilación oxidativa. En el
ciclo de Krebs participa en la reacción número 6 actúa en el succinato
para producir fumarato.
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Diagrama de flujo.
Practica 5. Determinación de la actividad de la enzima succinato
deshidrogenasa.

En el mortero molerlo con


Pesar 1g de hígado de
3 o 4 ml de ácido succínico
pollo recientemente
hasta obtener una masa.
sacrificado.

Transferir en partes
iguales a 2 tubos

proseguir según la tabla


del manual de laboratorio
de bioquímica.

Incumbe ambos tubos 10


Observe los cambios.
minutos en el baño María a
50 °C.
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Referencias
Bioquimica. (2007). Obtenido de
http://www.bioquimicaqui11601.ucv.cl/unidades/krebs/metcdek3fid.html

Alvarado, H. D., & Flores, M. (2008). Manual de laboratorio . Obtenido de


http://quimicosfarmacobiologos.bligoo.com.mx/media/users/10/523320/files/51871/

Gunawardena, A., & Fernando, S. (2008). La respiracion celular como sistema redox. obtenido de
http://congresosadbia.com/ocs/index.php/tucuman2010/tucu2010/paper/viewFile/526/3
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Montenegro, N. (2014). Enzima succinico deshidrogenasa. Obtenido de


http://es.slideshare.net/nataliamontenegro104/enzima-succinico-deshidrogenasa