ACCION DE INHIBIDORES ENZIMATICOS EN LA CADENA RESPIRATORIA
PROCEDIMIENTO
Arme el siguiente esquema de trabajo:
DISCUSIONES:
En la cadena respiratoria existen 4 diferentes complejos enzimáticos, que su función es
transportar electrones. Estas enzimas respiratorias serán inhibidas por el succinato de
sodio, malonato de sodio, cianuro de potasio y cloruro de [Link]ún los resultados
obtenidos, observamos que dentro de los 5 tubos, el quinto tubo es una precipitación la cual
fue producida porque presentaba un inhibidor, el bicloruro de mercurio, el cual inhibió el
complejo II, el bicloruro de mercurio es un metal pesado que bloqueo la enzima succinato
deshidrogenasa y por el cual el tubo terminó con un color azul intenso. El bicloruro de
mercurio, usado en el tubo 5 causó una inhibición irreversible.
El succinato de sodio se empleó en el tubo 1-3-4 Y 5, como sustrato para la enzima
succinato deshidrogenasa que se encontraba en el hígado. Esta enzima actúa como agente
oxidante deshidrogenado al succinato, este le quita dos H+ y al mismo tiempo le cede dos
electrones , lo cual hace que quede neutral y convierte el succinato en fumarato.
El succinato de sodio al reaccionar con la enzima, crea la respuesta enzima-sustrato, en la
cual se encargará de reducir al azul de metileno.
CONCLUSIONES:
● Se concluye que en el tubo 1 no presentaba ningún inhibidor para el complejo II y el
azul de metileno reconoció los electrones en el complejo II (succinato
deshidrogenasa) , reduciéndose y exponiéndose de manera casi incolora.
● Sin embargo, en el tubo 2 presenta un color azulado porque no se agregó succinato
de sodio que es el encargado de dar electrones por consiguiente el azul metileno no
se redujo.
● Asimismo los tubos 3 y 4 revelaban que había inhibidores para el complejo II,
actuando de manera incompleta es por ello que se observa de color no muy
turquesa y azul.
● Por último en el tubo 5 presentaba un inhibidor para el complejo II, Bicloruro de
mercurio, la cual este al ser un metal pesado, desnaturalizaba la enzima succinato
deshidrogenasa y por lo tanto, se le observaba de un color azul intenso.
CUESTIONARIO:
1) ¿Cuál es la estructura de la cadena respiratoria y explique su funcionamiento?
- Consta de 4 complejos, los transportadores y la ATP sintasa. Su funcionamiento
comienza cuando un NADH se convierte en NAD+, junto con dos electrones; los
electrones se introducen en el complejo 1 donde ahí dos iones de hidrógeno son
bombeados hacia el espacio intermembrana, los dos electrones luego pasas a la
ubiquinona(Q), la cual los transporta al complejo 3; en el complejo 3 son bombeados
otros dos iones de H+, después de eso los electrones pasan a la citocroma(C) la
cual los transporta al complejo 4 donde otra vez son bombeados 2 iones de H+. Los
dos electrones son atraídos por un oxígeno, el cual después atrae a dos iones de
hidrógeno creando así una molécula de agua; debido a la gran concentración de H
en el espacio intermembrana, los hidrógenos pasan por la ATP sintasa. Debido a
que el NADH produce 6 iones de H, terminaremos con 3 moléculas de ATP.
- Para el FADH es muy diferente, ya que los electrones pasan de frente al complejo 2
y de ahi se pasan directamente a la ubiquinona(Q) la cual los transporta al complejo
3 donde se bombean dos iones de H+, después los electrones pasan al citocroma(C)
donde son transportados hacia el complejo 4 donde son bombeados otros dos iones
de H+; los electrones son atraídos por un oxígeno el cual atrae a dos hidrógenos
convirtiéndose en una molécula de [Link] a la concentración de H en el
espacio intermembrana, estos iones pasan por la ATP sintasa y al proceso de la
FADH se producen 4 iones de H haciendo así que terminemos con dos moléculas de
ATP.
2) Explique el fundamento de la Teoría quimiosmótica de Mitchel?
El bioquímico Peter Mitchel, sostuvo que las membranas que pueden sintetizar ATP
tienen conductores de electrones y ATP sintasa posicionados en un lugar específico
de la membrana, dirigiendo la conducción de electrones a un solo lado de la
membrana, almacenandolos y de esta manera originando una fuerza protón motriz
capaz de estimular la síntesis de ATP con la ayuda de la ATP sintasa.
La membrana posibilita el flujo de electrones de un lugar a otro a favor del gradiente
electroquímico mediante un poro de membrana que está unido a la enzima
encargada de fosforilar ATP. El paso de electrones promueve el mecanismo que
hace posible la liberación de ATP en la matriz mitocondrial (u otro sitio adecuado).
Todas las membranas aptas para transformar energía tienen dos bombas protónicas,
una bomba se encarga de producir el gradiente electroquímico de protones y la otra
bomba de estimular la síntesis de ATP. Los complejos I, III y IV se comportan como
bombas de protones.
La fuerza protón motriz producida logra emplearse para vías de transporte activo
secundario, síntesis de ATP o NADP, producir calor o estimular el movimiento de las
bacterias.
3) Fundamente porque se usó el succinato de sodio en la práctica. Explique los
mecanismos de inhibición.
El ácido Succínico es un ácido dicarboxílico importante en el ciclo del ácido cítrico,
es un subproducto de la fermentación del azúcar.
En el laboratorio se usó el succinato de sodio como un agente intermediario
metabólico este con la enzima succinato deshidrogenasa produce fumarato en el
complejo II en la cadena de transporte de electrones , se produce una molécula de
señalización que reflecta el estado metabólico celular, cumpliendo la función de
sustrato.
4) Explique el funcionamiento de fosforilación oxidativa y cómo actúan los
desacopladores.
La fosforilación oxidativa es un proceso por el cual se genera la mayor cantidad de
ATP en células procariotas y eucariotas . En la etapa oxidativa ocurre reacciones de
transferencia de electrones , recibiendo el nombre de cadena respiratoria donde
recibe a los electrones que vienen en forma de NADH y FADH2 de esta forma los
electrones son aceptados y transferidos a complejos proteicos que están anclados
en la membrana interna de la mitocondria, finalmente los electrones son aceptados
por el oxígeno y se reduce en [Link] principales complejos proteicos que se
encargan de transportar a los electrones son Flavina munonucleótido (FMN) , la
coenzima Q y citocromos. En la etapa fosforilante participa la enzima ATP sintetasa
que no forma parte de la cadena respiratoria dado que se encarga de fosforilar al
ATP en ADP + Pi y producir ATP, siendo un proceso endergónico ya que hay una
formación de enlaces químicos donde se produce 34 moléculas de ATP .
los complejos I, III y IV actúan como bombas de protones que crean un gradiente de
protones(H+) a través de la membrana interna mitocondrial.
El desacoplamiento es cualquier incremento en la fuga de protones a través de la
membrana mitocondrial interna se compensa con el aumento de flujo a través del
transporte de electrones, a fin de proteger o la fuerza motriz de [Link]
incremento del flujo de electrones y todas las reacciones del ciclo de Krebs y las
reacciones anapleróticas que lo respaldan, no se traduce en un aumento de la
re-síntesis ATP,presentando un gasto de energía. El aumento en el consumo de ATP
con una limitada capacidad de re-síntesis puede resultar en un aumento de la
producción de Adenosín monofosfato (AMP),vía adenilato quinasa, en donde se
puede activar la Proteín Quinasa Activada por Monofosfato de Adenina (AMPK) sin
disminuciones marcadas en los niveles de ATP. El aumento del flujo de electrones a
través de la cadena de transporte estimulado por desacoplamiento,protege contra la
generación de radicales libres asociada con bajo flujo y alto potencial de membrana
mitocondria.
