Código: PT-11 1

Revisión 05
Vigencia: 03 – 05 – 2021

Recuento de bacterias lácticas y Lactobacillus spp.

1. OBJETIVOS

Realizar recuento de unidades formadoras de colonias de bacterias lácticas y Lactobacillus

spp. mediante la técnica de siembra en placa con agar Man-Rogosa-Sharpe (MRS).

2. ALCANCE Y CAMPO DE APLICACIÓN

2.1 Se aplica a todos los alimentos recibidos por el laboratorio de servicios de alimentos.

3. REFRERENCIAS

3.1 Compendium of Methods for the Microbiological Examination of foods, 4 th edition,

capther 51.542.

4. PRINCIPIOS

No aplica

5. TERMINOS Y DEFINICIONES

No aplica

6. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

6.1 Estufa de incubación regulada a 35°± 1°C.

6.2 Agitador de tubos
6.3 Puntas estériles.
6.4 Micropipetas
6.5 Stomacher.
6.6 Bolsas para Stomacher estériles.
6.7 Balanza.
6.8 Etiquetas (identificación de muestras).
6.9 Campana de flujo laminar.
6.10 Mechero.
6.11 Contador de colonias o equivalente.
6.12 Agar MRS
6.13 Placas petri
6.14 Baño termorregulado con capacidad de mantener a 47 ± 2 ºC.

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7. PROCEDIMIENTO
DESCRIPCION DE LA ACTIVIDAD
7.1 Dilución: Pesar y preparar la muestra según lo indicado en el instructivo IT01 de
preparación de muestras para análisis microbiológicos.
A partir de la muestra homogeneizada correspondiente a la dilución 10 -2 , preparar
diluciones decimales 10-2, 10-3, etc.
Para ello trasferir 1ml a un tubo con 9ml de agua peptonada. Agitar y proceder de igual
forma para las diluciones siguientes.
7.2 Siembra: Identificar las placas petri a utilizar con el número de muestra y dilución a
sembrar.
Agregar 1ml de la dilución en el centro de la placa petri.
Sembrar mínimo dos diluciones consecutivas.
7.3 Incorporación del medio

Verter en placa 15ml aproximadamente del agar

MRS mantenido a una temperatura aproximada de
47 ± 2 ºC. Mezclar el inoculo con el agar. Una vez Analista de
No aplica
solidificado el agar con el inoculo, añadir una laboratorio
segunda capa con 4 a 5ml del mismo agar. Dejar
solidificar.
Incubar las placas invertidas a 35°C ±1°C. Durante
72 a 96 horas. (bacterias lácticas). Analista de
Incubación RIT-01-01
Para el caso de Lactobacillus spp. incubar las placas laboratorio
en condiciones de anaerobiosis.
Recuento de Analista de
Contar las colonias típicas con forma lenticular. RPT-11-01
colonias laboratorio
Los recuentos se informarán con 2 dígitos. Cuando el
Calculo e tercer dígito es 5, agregar una unidad al segundo
dígito si éste es impar y mantener el segundo dígito Analista de
informe de RPT-11-01
si éste es par. Usar ceros para los demás dígitos laboratorio
resultados
hacia la derecha.
Se informará como UFC/ g. o UFC/ml si la muestra
corresponde a un producto líquido y se ha sembrado
en forma directa.
Calculo e
En el caso de alimentos, registrar el numero de Analista de
informe de RPT-11-01
colonias de cada dilución y multiplicar por el laboratorio
resultados
reciproco de la dilución.

ETAPA ACTIVIDAD RESPONSABLE REGISTRO

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Recuento de bacterias lácticas y Lactobacillus spp.

En caso de recuentos incontables se registrará como
Muy Numeroso Para Contar (MNPC). Y Se informará
como >5700 (57 diámetro de la placa x100), por
Calculo e mayor dilución sembrada.
Analista de
informe de En caso de no obtener desarrollo en las placas se RPT-11-01
laboratorio
resultados debe informar de acuerdo al límite de detección de la
técnica.
Ejemplo: < 10 UFC / g (Muestras en dilución 10-1)

8. ANEXO

Registro de resultados recuento de lactobacillus. RPT- 11-01

Fecha de vigencia: Cód.: PT- 11

22/02/2018
Área: Laboratorio
Página Revisión:
Sistema de Gestión de la Calidad Servicio de alimentos
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Recuento de bacterias lácticas y Elaborado por:
Revisado y Aprobado
Supervisor
Lactobacillus spp. Microbiología
por:
Jefe Calidad

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