PROCESAMIENTO Y CONGELACION DE SEMEN

EQUIPOS Y MATERIALES UTILIZADOS

Materiales
o Electro eyaculador
o Tubos falco graduado de 15ml
o Pajillas de 0.5ml
o Jeringas de 20ml
o Tijera
o Matraces
o Probetas graduadas
o Tubos eppendorf
o Laminas porta y cubre objetos
o Termo
o Platina térmica
o Pipetas de 10 y 100 ul.
o Platina para tubos eppendorf
o Tips
o Dilutor optixcell
o Agua bidestilada
o Detergente enzimático
o Alcohol

Equipos
o Refrigeradora
o Baño maría
o Estufa de desecación
o Microscopio de contraste de fases
o Tanque criogénico de almacenamiento de pajillas
PROCESO DE PREPARACIÓN DEL DILUTOR

El dilutor con el que trabaja el laboratorio de biotecnología animal es optixcell

De la marca IMV ,dicha preparación se realiza de acuerdo a especificaciones
técnicas del producto.
La dilución es 1 en 3 (250ml de dilutor + 500 de agua bidestilada)
El orden al momento de preparar el dilutor es de suma importancia para la
conservación optima del semen ,en dicho producto nos indica que primero se
agrega el agua y posteriormente el dilutor, se homogeniza y se deja reposar en
baño maría a 34°C y ya está listo para ser utilizado .
PROCESO DE EVALUACIÓN DE SEMEN

EVALUACIONES MACROSCÓPICAS

VOLUMEN

Dicha evaluación se realiza en el mismo tubo de colecta que en

en promedio por toro es de 7,5ml por eyaculado.
COLOR

En general el semen es de color blanco cremoso, en relación con la cantidad

de espermatozoides contenidos.
Tambien puede ser blanco grisáceo o también puede tener una coloración
blanquecina o ligeramente amarillenta y su opacidad se halla en función de la
concentración espermática.
El color translúcido acuoso es un indicativo de un semen es de mala calidad
tanto por la contaminación con la orina o líquido preseminal y también por baja
concentración y motilidad.
OLOR

EVALUACIONES MICROSCÓPICAS

CONCENTRACIÓN

Dicha evaluación se realiza por el método de fotometría , el laboratorio cuenta

con un equipo llamado fotómetro de la marca minitube en el cual se agrega la
muestra de semen sin diluir a través de una micro cubeta y posteriormente
realiza la lectura de manera automática en millones de espermatozoides por
ml.
MOTILIDAD MASAL

Dicha evaluación se realiza con semen sin diluir y se evalúa los movimientos
en masa de los espermatozoides generalmente son en forma de ondas rápidas
o remolinos,dicho laboratorio evalúa en escala de 1 a 4.

MOTILIDAD INDIVIDUAL PROGRESIVA

Para realizar dicha evaluación se realiza una predilución 1:1 y se deja por un
intervalo de tiempo de 10 minutos para que la muestra se estandarice con el
dilutor.
La evaluación es de manera subjetiva y se requiere de mucha experiencia por
parte del especialista encargado y es expresada en porcentajes de 0-100%.
La motilidad mínima que debe tener la muestra es de un 70% para que pueda
pasar a congelación debido a que en la congelación mueren en promedio el
30%.
Posteriormente realizado la evaluación de motilidad individual se realiza las
formulas correspondientes para agregar la dilución final.
El cual considera lo siguiente:
Volumen:
Concentración:
Motilidad individual:

Copiar la formula alonsooooo

Una vez realizada la dilución final se deja reposar por 10 minutos a
temperatura ambiente para que se acondicione a la t°.

EMPAJILLADO
posteriormente se realiza el almacenado en pajillas de 0.5ml a través de un
equipo integrado de empajillado sellado y rotulado el cual funciona en conjunto
con un software
en la pajilla va el número de registro y nombre del toro, fecha de colecta y el
nombre de la institución o proyecto.
REFRIGERADO
una vez terminado el proceso de empajillado se deja en refrigeración
temperatura de 5°C con un mínimo 4 horas para que pueda equilibrar dicha
temperatura y posteriormente realizar el proceso de congelación.
CONGELACIÓN
Previo a la congelación se realiza la evaluación de motilidad individual el cual
consiste en sacar una pajilla al azar y se coloca en un tubo ependorf rotulado
con el nombre de cada toro en la platina térmica a 37°C si dicha muestra esta
por debajo de los 70% de motilidad individual progresiva se descarta y no pasa
al proceso de congelación .
Posteriormente a través de un equipo de congelación semiautomático se llena
de nitrógeno líquido dicha medición ya viene señalado en el equipo y se pone
las rejillas en el nitrógeno por unos 10 segundos ,con la finalidad de enfriar y
posterior a ellos se colocan las pajillas en dichas rejillas.
Se procede a encender el equipo el cual tiene que descender 20 grados por
minuto,dicho tiempo se trabaja en función a la resistencia el cual se controla
manualmente ,la temperatura final al cual debe descendear es de -140°C ,todo
el proceso de congelado dura un aproximado de 7 minutos.
CRIOPRESERVACIÓN en nitrógeno liquido
Luego de la congelación ,se realiza la sgte evaluación de motilidad
ind.progresiva y como mínimo debe de tener 30% para que sea almacenado en
dichos taqnues ;esto se debe a que al momento de la congelación el
espermatozoide sufre un show térmico y mueren entre 40% a 50%
Posterior a ellos se almacenan las pajillas en los tanques el cual van estar
criopreservados a una temperatura de -196°c.