FACULTAD DE CIENCIAS DE LA VIDA

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR

GUÍA N º 3 MICROSCOPIA

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 INTRODUCCIÓN

Las células son las unidades básicas de los seres vivos. La mayoría de ellas son de pequeño tamaño
por lo que es indispensable el uso de instrumentos como los microscopios para su visualización.
Por lo general el poder resolutivo del ojo humano es de 0.2mm (200 µm), o sea la menor distancia
vista o resuelta por el ojo humano es de dos líneas separadas 0,2mm de distancia; si hay dos líneas
a menos de 200 µm de distancia, las veremos como una sola línea. Los microscopios se utilizan
para mejorar la resolución.

El término célula fue usado por primera vez cuando Robert Hooke observó un trozo de corcho en
un microscopio de luz en 1665. Luego, Antony van Leeuwenhoek observó en 1670 varios tipos
de células y finalmente, fue en 1838 cuando Matthias Scleiden y Theodro Schwan propusieron a
partir de sus observaciones microscópicas de diversos tejidos la teoría celular: “Todos los
organismos están compuestos de células, y todas las células provienen de la división de otras
células preexistentes”. Estos descubrimientos dieron así origen al nacimiento de la biología celular
contemporánea.

Las células son muy pequeñas y además son traslúcidas lo que hace imposible su observación por
ojo humano desnudo. Es por eso que el microscopio ha sido y es una de las herramientas más
utilizadas en biología. El progreso en la construcción de nuevos microscopios, así como el
desarrollo y uso de nuevos métodos de fijación, corte y tinción, han permitido una serie de
descubrimientos en los campos de la histología, citología y bacteriología, permitiéndonos entender
cada vez con más claridad la estructura de la célula y su organización, lo que es una importante
ayuda para la comprensión de su funcionamiento.

FIGURA 1. Relación entre el tamaño de diferentes células y sus componentes.

Objetivo del trabajo Práctico:

El objetivo principal de este laboratorio consiste en comprender el funcionamiento de un instrumento
óptico como el microscopio y observar diferentes tipos celulares realizando comparaciones entre
ellas.

2
 EL MICROSCOPIO ÓPTICO Y SUS PARTES.

En términos generales, el microscopio es un sistema de lentes montados en un tubo. La distancia

desde el tubo al objeto que se quiere observar puede regularse por medio de dos botones de ajuste,
y todo el conjunto está dispuesto sobre un robusto soporte. En el soporte también se apoya la platina
sobre la cual se coloca la preparación a observar, y una fuente de luz que se dirige a través del
objeto en estudio.

Las diferentes partes de un microscopio pueden agruparse en 3 sistemas fundamentales:

• El sistema mecánico se compone del pie (en el cual se sustenta el instrumento), de la columna (que
se encuentra fijada al pie y que sostiene las otras partes del microscopio), del cabezal (que sostiene
los oculares), del revolver (que sostiene a los objetivos), de la platina (que soporta a la muestra) y
del sistema de enfoque (compuesto por los tornillos macrométrico para un enfoque aproximado y
micrométrico para un enfoque preciso).
• El sistema óptico se compone de 2 sistemas diferentes de lentes. Los oculares son 2 lentes separados
por un diafragma fijo que tienen la función de aumentar la imagen proyectada por los objetivos.
Los objetivos son 3 o 4 lentes ubicados en el revólver y son los que aumentan la imagen. Éstos
pueden ser secos (hay una capa de aire entre ellos y la muestra) o de inmersión (se coloca una
sustancia especial entre ellos y la muestra lo que permite lograr un aumento mayor).
• El sistema de iluminación se compone de una fuente luminosa, que es generalmente una lámpara
ubicada en el pie o en la base de la columna del microscopio. Si la fuente luminosa es independiente
del microscopio, además se necesita de un espejo que refleje la luz y la desvíe hacia el condensador.
El condensador concentra la luz sobre la muestra, y la cantidad de luz que llega sobre ella se regula
por medio de un diafragma ubicado en su parte inferior. Adicionalmente se puede colocar un filtro,
generalmente azul, para obtener una luz homogénea y parecida a la luz natural.

FIGURA 2. Esquema de un microscopio óptico en el cual se indican sus partes.

3
FORMACIÓN DE LA IMAGEN

La luz posee una naturaleza dual, y puede ser entendida al mismo tiempo como una partícula y
como una onda. La comprensión de este comportamiento, así como de algunas características de la
luz, es importante para entender el proceso de formación de la imagen en un microscopio y cómo
manejando ciertos parámetros físicos podemos obtener imágenes más nítidas y de mayores
aumentos.

La luz posee una determinada longitud de onda y viaja en el espacio con una determinada velocidad.
Cuando la luz llega a una superficie que separa dos medios transparentes una parte de ella se refleja
volviendo por el mismo medio en que se propagaba, y otra parte en cambio es refractada, penetra
en el segundo medio y cambia su dirección y velocidad. Esto ocurre cuando la luz llega por ejemplo
a una lente. Si ésta es convergente, los rayos se juntan en un punto, el que corresponde al foco, la
distancia entre ese punto y el centro de la lente es la llamada distancia focal.

Como ya vimos, la velocidad de la luz es diferente en el vacío que en otros medios. Esta diferencia
de velocidad puede compararse mediante el índice de refracción, que corresponde al cociente entre
la velocidad de la luz en el vacío y la velocidad de la luz en un medio determinado en el que ésta
incide.

Mientras más se acerca un objeto al ojo, más detalles de él pueden ser distinguidos, pero hay una
distancia límite a la que se pueden acercar los objetos y sobre esa distancia ya no se distinguen los
objetos con claridad y se hace necesario el uso de lentes o lupas para aumentar el objeto en estudio.
El aumento de una lente está dado por el límite de cercanía a la que pueden llevar los objetos en el
ojo humano y por su distancia focal. Si se quiere aumentar aún más una imagen, se pueden colocar
dos lentes en serie (objetivo y ocular en el caso de microscopios compuestos), y el aumento final
logrado será entonces el producto del aumento de cada uno de ellos.
Si tiene en un microscopio un objeto a observar, los rayos de luz reflejados o emitidos por el objeto
que se sitúa fuera de la distancia focal de un lente (objetivo), al pasar por el objeto son refractados
y enfocados en un plano que se ubica más allá de la cara opuesta de la lente obteniéndose una
imagen real que es invertida y de tamaño distinto (mayor) al del objeto original. A medida que el
objeto se acerca al foco la imagen obtenida es más grande.

Lente

Plano

FIGURA 3. Formación de la imagen en una lente simple.

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 FIGURA 4. Formación de una imagen en un microscopio. La segunda lente (ocular) aumenta la primera imagen
obtenida. La imagen final es una imagen virtual y aumentada.

El poder de resolución de un microscopio depende también de la apertura numérica, capacidad de

una lente para aprovechar la mayor cantidad de rayos para formar la imagen. Ésta puede aumentarse
poniendo una sustancia con un índice de refracción mayor al del aire entre el objetivo y el objeto a
observar. Para esto se usan los llamados aceites de inmersión. Así, al aumentar la apertura
numérica se obtienen mayores aumentos. Este tipo de aceites se usan solamente con objetivos
especiales quese llaman lentes de inmersión.

PODERES DEL MICROSCOPIO

El microscopio posee varias características o poderes que determinan en forma importante su

utilidad como herramienta de estudio. Estos son:

Poder de aumento: Es la razón entre el tamaño de la imagen que produce el microscopio y el

tamaño original del objeto en observación. Este aumento se logra a través del ocular y de los
objetivos y, ya que cada uno es capaz de amplificar la imagen, el aumento total logrado se obtiene
al multiplicar estos dos valores de aumento.

Poder de definición: Es la capacidad del microscopio para formar imágenes nítidas y bordes
definidos.

Poder de penetración: Es la capacidad para visualizar los diferentes planos de una preparación y
está dado por el ajuste de precisión que se logra con el tornillo micrométrico.

Poder de resolución: Permite distinguir como objetos separados dos puntos que se encuentran muy
cercanos entre sí.
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USO DEL MICROSCOPIO

Para un buen uso del microscopio sea cuidadoso y siga atentamente las siguientes instrucciones:

1. Asegúrese de que el microscopio se encuentre en una posición cómoda para usted, tomándolo
siempre de la columna.
2. Encienda la lamparilla.
3. Coloque el objetivo de menor aumento.
4. Coloque su preparación en la platina asegurándose de que ésta se encuentre con el cubreobjeto
hacia arriba.
5. Abra totalmente el diafragma iris y suba el condensador casi hasta el tope.
6. Si su microscopio tiene espejo, céntrelo para que la preparación reciba el máximo posible la
luz.
7. Usando el tornillo macrométrico y mirando directamente la platina, suba la muestra hasta que
esta quede casi en contacto con el objetivo, asegurándose de que la muestra no llegue a tocar
la lente.
8. Mire a través del ocular y usando el tornillo macrométrico aleje lentamente el objetivo de la
preparación, hasta lograr una imagen más o menos nítida. Termine de enfocar usando el
tornillo micrométrico.
9. Una vez enfocada su preparación, regule la cantidad de luz que recibe su muestra cerrando
para ello el diafragma.
10. Si después de realizar todos los pasos anteriores no logra observar su preparación en forma
nítida, verifique que la preparación esté ubicada dentro del campo visual y que el cubreobjetos
se encuentre mirando hacia arriba. Revise también la limpieza de la preparación, oculares,
objetivos, condensador, espejo, y por último, verifique que la iluminación sea la adecuada y
que el objetivo se encuentre en su posición correcta.
11. Para cambiar de objetivo gire el revólver hasta el objetivo del aumento siguiente, y vuelva a
enfocar su preparación utilizando para ello el tornillo micrométrico.
12. Para usar el objetivo de inmersión coloque sobre su preparación una gota de aceite de
inmersión, y luego enfoque su preparación con el objetivo inmerso en el aceite. Una vez
finalizada la observación, limpie cuidadosamente el objetivo eliminando el aceite de
inmersión. Para ello utilice xilol y una hoja de papel para lentes especialmente dispuesto para
ello, pues las pelusas del papel común permanecen en el objetivo y pueden interferir en
observaciones posteriores.
13. Al terminar su trabajo limpie el resto del microscopio con un paño suave, apague la lamparilla,
situé el objetivo de menor aumento en posición de observación, baje la platina, y cubra el
microscopio.

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PREPARACION DEL MATERIAL A SER OBSERVADO EN UN MICROSCOPIO.

Existen dos tipos de preparaciones microscópicas, éstas corresponden a las preparaciones

permanentes y a las preparaciones temporales. Ambas deben ser lo más delgadas posible para dejar
pasar la luz a través de ellas y así lograr una buena observación.

Las preparaciones permanentes son aquellas que se han sometido a un proceso largo de preparación,
el que permite que se mantengan en buenas condiciones para su observación por periodos
prolongados de tiempo. La preparación de estas muestras incluye etapas de fijación del material, el
cual es un método que se utiliza para preservar la morfología y la composición química de las células
que componen una preparación microscópica. Consiste en agregar agentes fijadores a la muestra
como acetona, formaldehído o glutaraldehído, los cuales mantienen las interacciones entre las
moléculas (proteínas, ácidos nucleicos, etc.) y permiten que las preparaciones duren en buen estado
durante meses o años. Posteriormente, viene la etapa de deshidratación, inclusión en parafina, corte
de la muestra en capas muy finas con un micrótomo, colocación de estas capas que contienen la
muestra en un portaobjetos, disolución de la parafina, tinción de la muestra para contrastar las
diferentes estructuras celulares y colocación de un cubre objetos para proteger la preparación.

Las preparaciones temporales corresponden a cortes frescos del material a observar, los que se
realizan en el momento y tienen una corta duración. Una vez realizados los cortes, se coloca una
gota de agua en un portaobjetos, y en ella se ubica un trozo del material a observar, el que debe
quedar completamente cubierto por el agua. Sobre esta preparación se coloca cuidadosamente un
cubreobjeto, evitando la formación de burbujas que interfieren en la observación microscópica.
Finalmente, se elimina exceso de agua. Las preparaciones frescas también pueden teñirse para ser
observada con mayor claridad.

La citoquímica corresponde a los métodos químicos y físicos por los cuales se logra la visualización
directa de diferentes substancias celulares a través del microscopio. Generalmente se usan diferentes
colorantes que tiñen lípidos, proteínas, carbohidratos o ADN, o sustratos de enzimas específicas que
permiten localizarlas en un sitio celular específico. Algunos ejemplos son:

• Reacción de Millon: Permite reconocer proteínas que contienen residuos de tirosina en sus
cadenas laterales, a través de un reactivo que forma un precipitado rojo.
• Reacción de Diazonio: El agente cromogénico, un hidróxido de diazonio, reacciona con grupos
tirosina, triptofano e histidina de proteínas, formando compuestos coloreados.
• Reactivo de Schiff: Permite la detección de ácidos nucleicos, carbohidratos y lípidos que
contienen grupos aldehídos.
• Reacción de Feulgen nuclear: Es la versión específica para ADN en la que se usa el reactivo de
Schiff.
• Tinción con lugol: tiñe los granos de almidón de color azul-morado
• Tinción con floroglucina: tiñe de rojo violeta las paredes celulares lignificadas
• Tinción con azul de metileno: tiñe el protoplasma y las paredes celulares celulósicas.

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La mayoría de los colorantes de células o tinciones son de naturaleza orgánica y aromática.
Existen dos tipos generales de colorantes: básicos y ácidos. En los básicos, el grupo cromóforo (que
da el color) es básico o catiónico, por ejemplo, el grupo azo (N=N). Los colorantes ácidos poseen
generalmente grupos nitrilo (NO2) o aromáticos. Ejemplos de colorantes ácidos son eosina y azul de
anilina. De colorantes básicos, azul de metileno, cristal violeta y azul de toluidina.

El mecanismo de acción de la mayoría de los colorantes se basa en la propiedad de proteínas, ciertos

polisacáridos y ácidos nucleicos de ionizarse como ácidos o como básicos, lo que les permite
reaccionar con los grupos cromóforos de las tinciones. La carga neta de las moléculas es la que
determina con qué tipo de colorante reacciona, y es lo que permite realizar tinciones específicas para
distintos tipos de moléculas y estructuras celulares.

OTROS TIPOS DE MICROSCOPIOS

El avance tecnológico ha permitido en los últimos años el desarrollo de una serie de microscopios
que con pequeñas modificaciones de los principios básicos del microscopio de luz permiten un mejor
estudio de la célula. Algunos ejemplos son los siguientes:

Microscopio de contraste de fases: El mayor problema de la observación microscópica de muestras

biológicas es el poco contraste que éstas poseen. Las partes invisibles de una preparación son
atravesadas por la luz, sin que cambie su amplitud, pero produciendo un cambio en su fase. En este
tipo de microscopio los cambios de fase de la luz se traducen en cambios de amplitud. Este
microscopio permite examinar objetos vivos, así como el seguimiento en ellos de procesos celulares
como la mitosis.

FIGURA 5. Imagen de células epiteliales enfocadas con un microscopio de contraste de fase con objetivo 20X.

Microscopio de fluorescencia: Algunas moléculas emiten parte de la luz que absorben a longitudes
de onda mayores a las que reciben. Este proceso es llamado fluorescencia y se presenta en forma
natural, por ejemplo, en las clorofilas. Existen numerosos fluorocromos (moléculas capaces de
emitir fluorescencia), los cuales pueden utilizarse para teñir muestras biológicas, cuyas estructuras
se ven después por la fluorescencia de las moléculas unidas a ellas. En este tipo de microscopios la
luz utilizada es de corta longitud de onda, y se logra por el uso de lámparas de mercurio. Esta luz
incide en la muestra, y lo que se observa es la fluorescencia que proviene de ella. Si la unión de estos
compuestos fluorescentes se hace de forma específica se pueden observar estructuras celulares
definidas, como por ejemplo, proteínas marcadoras de diferentes organelos.

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 FIGURA 6. Células epiteliales, triple coloración: núcleo (azul), microtubulos (verdes), actina(rojo). 200X (izq.) y
1000X (der.).

Microscopio electrónico: La luz se reemplaza por un haz de electrones que se obtienen al calentar
un filamento en un tubo al vacío. Estos electrones son desviados en un campo electromagnético
que cumple la función de condensador, y concentrados en el plano donde se coloca el objeto. Al
pasar a través del objeto, los electrones son parcialmente deflectados; el grado de deflección de
ellos depende de la densidad electrónica de la muestra. Debido a la baja densidad electrónica de las
muestras biológicas, para aumentar el contraste de las muestras se usan metales pesados que
aumentan la interacción de ésta con los electrones incidentes. Después de pasar por la muestra los
electrones se colectan en un objetivo donde se forma la imagen, la que se ve finalmente sobre una
pantalla fluorescente o en una placa fotográfica.

Las imágenes logradas en este tipo de microscopio son siempre en blanco y negro y las zonas más
oscuras corresponden a zonas de mayor densidad electrónica en la muestra. Su poder de resolución
es del orden de 4 Aº, y permite lograr aumentos de hasta 1.000.000 de veces. Sin embargo, una
desventaja es que se necesitan cortes extremadamente finos, y las muestras deben someterse a
procesos de preparación (deshidratación) antes de ser colocadas al vacío para ser observadas.

FIGURA 7. Esquema con los diferentes tipos de microscopios.

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 ACTIVIDADES PRÁCTICAS

ACTIVIDAD Nº1: Cálculo del aumento y límite de resolución del microscopio.

La función principal del microscopio es aumentar la resolución, la cual nos permite observar detalles
de los objetos que no es posible ver con el ojo humano. Al aumentar la magnificación, el tamaño
observado del objeto, también debe aumentar la resolución; de otro modo, veríamos sólo una imagen
de gran tamaño, pero sin nitidez.

El poder de resolución de un microscopio se define como la capacidad que permite hacer perceptible
por separado, dos puntos situados muy próximos entre sí en el objeto. Esta capacidad está
determinada por la apertura numérica (NA) de la lente, siendo directamente proporcional a ésta, e
inversamente proporcional a la longitud de onda de la luz utilizada (λ).

Poder de resolución = NA

0,61*λ

El recíproco del poder de resolución corresponde al límite de resolución, la distancia mínima que debe
existir entre dos puntos para poder distinguirlos por separado.

Límite de resolución = 0,61*λ

NA

Características de los Objetivos del Microscopio Óptico

Cada objetivo posee un factor de aumento y una apertura numérica (A.N.) que se encuentran rotulados
en ellos (figura 8). Además, poseen una línea de color característico que indica el factor de aumento
de cada uno.

FIGURA 8. Rotulación de las características de un objetivo del Microscopio Óptico.

10
 Los objetivos que usamos en el Microscopio Óptico son los siguientes (Figura 9):

4X (línea roja)
10X (línea amarilla)
40X (línea celeste)
100X (línea blanca y negra, inmersión en aceite)

FIGURA 9. Lentes Objetivos del Microscopio Óptico.

Teniendo claros estos conceptos, podemos comenzar el estudio de los componentes del microscopio,
para llegar a calcular el aumento de las imágenes y la distancia mínima que podemos distinguir al
realizar una observación en un microscopio compuesto.

Procedimientos y observaciones

1. A partir de la figura 9, extraer la información del Aumento (X) de cada lente objetivo y su
respectiva apertura numérica (NA).

2. Anote el poder de aumento y apertura numérica de los lentes objetivos mostrados en la figura
9. Estos valores se encuentran en la parte cilíndrica o “cañón” de los lentes.
Aumento (X) Apertura Numérica (NA)

11
3. Anote el aumento y la apertura numérica de el o los lentes oculares.

Aumento (X) Apertura Numérica (NA)

10 18

4. Anote ahora la apertura numérica del condensador:

Apertura Numérica (NA)

0,25

5. La resolución máxima de su microscopio depende de la apertura numérica efectiva máxima que

posea. Este valor máximo corresponde normalmente al lente 100x o lente de inmersión. Observe
ahora los siguientes valores:

Apertura del lente 100x:

Apertura numérica del condensador

Apertura numérica de la interfase de aire 1,0

Apertura numérica de la interfase de aceite 1,3-1,5

La apertura numérica efectiva máxima es el valor más bajo de los anteriores. Utilizando este valor
menor de apertura numérica de trabajo, calcule el límite de resolución y la resolución de su
microscopio asumiendo un λ=400 nm, correspondiente a la luz visible.

Unidades de medida usadas en microscopía

mm (milímetro) = 10-3 m

um (micrómetro) = 10-6 m

nm (nanómetro) = 10-9 m

Aº (Angström) = 10-10 m

12
 Tener en cuenta que:

1um equivale a 1000nm

1mm equivale a 1000um
1cm equivale a 10mm

ACTIVIDAD Nº 2: Manejo del microscopio y Formación de la imagen.

Procedimientos y observaciones

- Utilizando el lente objetivo 10x observe la preparación con una letra impresa con tinta.
Considerar la siguiente imagen como referencia:

- Tenga presentes las instrucciones para el manejo correcto del microscopio que se encuentran
en la Introducción de la presente guía.
- Compare la orientación de la letra en su portaobjetos (preparación) y en su campo visual (lo que
observa a través del ocular del microscopio). ¿A qué se debe la diferencia observada?
- Rote el revólver portaobjetivo hasta llegar al lente 40x y colóquelo en posición. Centre y
enfoque la preparación con la letra. ¿Hay algún cambio en la orientación de la letra?
- Dibuje la imagen observada de la letra con el objetivo 10x.

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 ACTIVIDAD Nº3: Observación de preparaciones biológicas permanentes: Frotis de sangre.

La fijación es un método que se utiliza para preservar la morfología y la composición química de las
células que componen una preparación microscópica. Consiste en agregar agentes fijadores a la
muestra como acetona, formaldehído o glutaraldehído, los cuales mantienen las interacciones entre
las moléculas (proteínas, ácidos nucleicos, etc.) y permiten que las preparaciones duren en buen
estado durante meses o años.
Uno de los métodos más utilizados para realizar preparaciones permanentes consiste en fijar el
material de interés en una solución FAA (formaldehído-alcohol- ácido acético) y finalmente
embeberlo en parafina para obtener bloques que puedan ser cortados en secciones muy finas utilizando
un micrómetro.
Estas secciones que contienen material fijado y desecado se colocan cuidadosamente
en un portaobjetos, y se disuelve la parafina con un solvente orgánico como xilol. Una vez hecho esto,
la muestra se tiñe para contrarrestar las distintas estructuras celulares y se protege con un cubreobjeto
montado sobre una sustancia sellante.

Procedimientos y observaciones

• Observar la preparación entregada por su profesor y realice un dibujo teniendo presente las
siguientes recomendaciones:
• Los dibujos deben realizarse siempre a lápiz mina, evitando borrones y colores oscuros. La
utilización de lápices de colores es opcional, pero el colorear su dibujo le puede ayudar a
diferenciar con mayor claridad las estructuras observadas.
El dibujo debe ser realizado dentro de un círculo de 8 cm de diámetro, indicando a un costado de éste,
título de muestra; tipo de muestra (temporal o permanente); tinción; aumento objetivo; aumento total y
observaciones. Anote los nombres de las estructuras identificadas en su observación.

ACTIVIDAD Nº 4: Observación de preparaciones frescas con y sin tinción: tejido vegetal de Allium
cepa (L.) (catáfilo de cebolla), Elodea sp. y muestra líquida fresca de Protozoos.

La mayoría de los colorantes de células o tinciones son de naturaleza orgánica y aromática.

Existen dos tipos generales de colorantes: básicos y ácidos. En los básicos, el grupo cromóforo (que
da el color) es básico o catiónico, por ejemplo, el grupo azo (N=N). Los colorantes ácidos poseen
generalmente grupos nitrilo (NO2) o aromáticos. Ejemplos de colorantes ácidos son eosina y azul
de anilina. De colorantes básicos, azul de metileno, cristal violeta y azul de toluidina.
El mecanismo de acción de la mayoría de los colorantes se basa en la propiedad de proteínas, ciertos
polisacáridos y ácidos nucleicos de ionizarse como ácidos o como básicos, lo que les permite
reaccionar con los grupos cromóforos de las tinciones.
La carga neta de las moléculas es la que determina con qué tipo de colorante reacciona, y es lo que
permite realizar tinciones específicas para distintos tipos de moléculas y estructuras celulares.

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 Procedimientos y observaciones

1- Observación de catáfilo de cebolla

• Tome el trozo de cebolla que le ha sido entregado, y con una hoja de Gillette limpia realice
un pequeño corte en forma transversal al tejido. Levante cuidadosamente el epitelio de la
cebolla y tire de él hasta obtener un trozo adecuado de tejido que le permita realizar una
buena observación microscópica. Si el trozo que usted cortó es demasiado grande, córtelo
para darle un tamaño adecuado.
• Coloque una gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio, utilizando una pipeta Pasteur
con gotario o una piseta.
• Sobre la gota ubique un trozo de catáfilo de cebolla de tamaño adecuado para que pueda ser
cubierto posteriormente por el cubreobjetos. Su muestra debe quedar completamente cubierta
por el agua.
• Ponga una gota de la tinción a utilizar a un lado de su muestra e incline el portaobjetos
de tal modo que el colorante baje por capilaridad hasta atravesar el tejido. Limpie el exceso de
colorante con un papel absorbente.
• Tome cuidadosamente un cubreobjetos (sin dejar marcas de huellas dactilares) y colóquelo en
un ángulo de 45º sobre el portaobjetos. Deslícelo hasta ponerlo en contacto con la muestra
de catafilo de cebolla y déjelo caer gradual y lentamente sobre ella. Trate de evitar la formación
de burbujas de aire pues interferirán con su observación.
• Limpie el exceso de agua con un trozo de papel absorbente, cuidando de no dejar pelusas
sobre el cubreobjetos.
• Comience la observación microscópica de su preparación en el objetivo10x y prosiga
aumentando gradualmente el aumento.
• Realice en su informe un dibujo esquemático del tejido de la cebolla antes y después de la
tinción, describiendo brevemente lo observado.

2- Observación de Elodea sp

• Sobre un portaobjetos deposite unas hojas de Elodea sp, cubra con un cubreobjetos y observe
al microscopio.
• Comiéncela observación microscópica de su preparación en el objetivo 10x y prosiga
aumentando gradualmente el aumento.
• ¿Qué estructura logra distinguir? Esquematice.

3- Observación de Protozoos.

• Coloque una gota de la muestra real líquida en el centro de un portaobjetos limpio, utilizando
una pipeta Pasteur con gotario.
• Tome cuidadosamente un cubreobjetos (sin dejar marcas de huellas dactilares) y colóquelo en
un ángulo de 45º sobre el portaobjetos. Deslícelo hasta ponerlo en contacto con la gota de agua
y déjelo caer gradual y lentamente sobre ella. Trate de evitar la formación de burbujas de aire
pues interferirán con su observación.
• Limpie el exceso de agua con un trozo de papel absorbente, cuidando de no dejar pelusas sobre
el cubreobjetos.

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 • Comience la observación microscópica de su preparación en el objetivo 10x y prosiga
aumentando gradualmente el aumento.
• Realice un dibujo de los organismos que observe. Descríbalos en forma clara y breve.

Bibliografía:
• Introducción a la biología celular 2a. ed. Alberts, Bruce, 1938. 2006
• Biología celular y molecular 4a. ed. Lodish, Harvey. 2002.
• Biología celular y molecular de De Robertis. De Robertis, Eduardo M. F; 2000

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