INTRODUCCIÓN A LA BIOLOGÍA

TP Nº2
MATERIAL DE LABORATORIO Y ÓPTICO

INTRODUCCIÓN

El microscopio de luz (u óptico) empleado

corrientemente en los laboratorios corresponde al
microscopio compuesto, el cual está constituido
por un dúo de lentes amplificadoras de la
imagen. El microscopio compuesto, de hecho, es
un sistema de amplificación a dos niveles en el
cual el objeto a observar es amplificado en
primer lugar por un complejo sistema de lentes
del objetivo y de nuevo por una segunda lente
en el ocular.
El microscopio merece su reconocimiento como herramienta indispensable para el estudio del
mundo microscópico gracias a su capacidad de aumentar significativamente el tamaño de lo que
observamos. El microscopio compuesto presenta dos características esenciales: su poder de
amplificación y su poder de resolución. El primero hace referencia al número de veces que es capaz de
amplificar, mientras que el segundo se refiere a la capacidad para diferenciar entre dos puntos o
líneas muy próximas entre sí. La característica más importante es el poder de resolución ya que de
nada serviría un microscopio que permitiera ver los objetos de un gran tamaño si éstos se
observaran borrosos.
Otro tipo de microscopio óptico que se usa habitualmente en el laboratorio para magnificar
la imagen de un objeto de interés es la lupa, también llamada microscopio estereoscópico. La misma
consta de dos microscopios completos, cada uno con su objetivo y ocular en los que, al no coincidir
sus ejes ópticos, las imágenes formadas en los oculares son distintas (lo mismo que ocurre con la
visión ocular), por lo que vemos una imagen en tres dimensiones. No debe confundirse este
instrumento con los microscopios binoculares, ya que en éstos la imagen formada en un único objetivo
es desdoblada en dos imágenes idénticas por un prisma situado entre el objetivo y los dos
oculares.
Además de los microscopios ópticos, también existen los microscopios electrónicos. La
potencia amplificadora de un microscopio óptico está limitada por la longitud de onda de la luz
visible. El microscopio electrónico, en cambio, utiliza electrones para iluminar el objeto. Dado que
los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz pueden mostrar
estructuras mucho más pequeñas. Existen dos tipos de microscopios electrónicos: el microscopio

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electrónico de transmisión (MET o TEM, por Transmission Electron Microscope) y el microscopio

electrónico de barrido (MEB o SEM, por Scanning Electron Microscope). El MET permite la
observación de muestras en cortes ultrafinos. El haz de electrones va hacia el objeto que se desea
aumentar, una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan
formando una imagen aumentada del espécimen. Pueden aumentar un objeto hasta un millón de
veces. El MEB crea una imagen ampliada de la superficie de un objeto y no es necesario cortar el
objeto en capas para observarlo. Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un haz muy
concentrado de electrones, de forma parecida al barrido de un haz de electrones por la pantalla
de un televisor. A medida que el haz de electrones barre la muestra, se presenta toda la imagen
de la misma en el monitor. Pueden ampliar los objetos 200.000 veces o más.

OBJETIVOS

Conocer los materiales que se utilizan de manera corriente en el laboratorio.

Analizar las características y el funcionamiento del microscopio

óptico, la lupa y el microscopio electrónico.
Aprender las normas básicas para el cuidado, manejo y uso del instrumental óptico.

ACTIVIDADES PREVIAS

1) Mencionar 5 materiales o equipamientos de laboratorio e indique su función.

 Mechero Bunsen: quemador de gas con el que se obtiene una llama de gran intensidad
calorífica
 Crisol: se emplea para calentar, fundir, quemar o calcinar sustancias
 Probeta: sirve para medir volúmenes de forma aproximada
 Balanza Analítica: mide con alta precisión la masa de los compuestos quimicos. Esta
encerrada en una vitrina para evitar que las corrientes de viento influyan en el pesaje
 Embudo de Decantación: sirve para separar líquidos que tengan distintos niveles de
densidad

2) ¿Qué es un microscopio óptico y en qué se diferencia de un microscopio

electrónico?
El microscopio óptico es una herramienta que permite observar elementos que no pueden
observarse o son invisibles a simple vista, a través de lentes, visores y rayos de luz, que acercan o
agrandan la imagen en escalas convenientes para su examinación y análisis.
En cambio, el microscopio electrónico, utiliza electrones para iluminar el objeto. Dado que
los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz pueden mostrar
estructuras mucho más pequeñas.

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¿En cuál se pueden observar muestras vivas?

En los microscopios electrónicos, las muestras no están vivas.

3) ¿Qué dos tipos de microscopio óptico conoce y en qué se diferencian?

¿Cómo debe ser la muestra que se puede observar en cada uno?
Por un lado se encuentran el microscopio compuesto, el cual está constituido por un dúo de
lentes amplificadoras de la imagen. Este es un sistema de amplificación a dos niveles en el cual el
objeto a observar es amplificado en primer lugar por un complejo sistema de lentes del objetivo y
de nuevo por una segunda lente en el ocular. A su vez, presenta dos características esenciales: su
poder de amplificación y su poder de resolución. El primero hace referencia al número de veces que es
capaz de amplificar, mientras que el segundo se refiere a la capacidad para diferenciar entre dos
puntos o líneas muy próximas entre sí.
Luego encontramos a los microscopios estereoscópicos o, también llamados lupa. La misma
consta de dos microscopios completos, cada uno con su objetivo y ocular en los que, al no coincidir
sus ejes ópticos, las imágenes formadas en los oculares son distintas (lo mismo que ocurre con la
visión ocular), por lo que vemos una imagen en tres dimensiones.
En ambos casos, las muestras que se pueden observar son células vivas, cultivos celulares,
plancton marino y de aguas dulces, tejidos vivos y cortes semifinos no coloreados. Lo que hace
posible observar a las células llevando a cabo sus comportamientos normales (por ejemplo, migrar
o dividirse).

4) ¿A qué se denomina distancia frontal y cómo varía entre lupa y microscopio?

Se denomina distancia frontal, a la distancia que existe en el objetivo y el lente ocular. En el

microscopio de luz, la lente está prácticamente pegada al objetivo y, en su aumento máximo se
debe utilizar un aceite de inmersión para poder disipar el haz de luces. En cambio, la lupa, tiene
una distancia frontal mayor

ACTIVIDADES DE ANÁLISIS

1) En una bandeja se le proveerá de los principales materiales comúnmente utilizados en el

laboratorio. En grupo, identifiquen de qué material se trata y mencionen la función de cada uno. Ver
el Anexo 1 de la guía.

2) En base a los materiales de laboratorio que han reconocido en el TP, les proponemos que en
grupo analicen cuáles de ellos deben utilizar para preparar las siguientes soluciones: Almidón 1% y
Cloruro de Sodio 10%, Etanol 30%. Una vez establecido esto, procedan a realizar las soluciones.

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3) El microscopio óptico consta de las siguientes partes:

Parte Función
Oculares Están formados por dos lentes que proporcionan aumentos,
una lente frontal que es la más cercana al ojo y una lente de
campo que es la lente inferior que se encuentra en el interior
del tubo.
Objetivos Conjunto de lentes con distintos aumentos. El objetivo de
menor aumento generalmente es el 5X y el de mayor
aumento el de 100X (también llamado de inmersión).
Tornillos de enfoque Son dos, el tornillo macrométrico, que permite grandes
desplazamientos y el tornillo micrométrico que permite los
Menores desplazamientos.
Revólver Sostiene y permite el desplazamiento de los objetivos.

Fuente de luz Emite el haz de luz que ilumina el preparado.

Condensador Permite que la luz se concentre en un punto e ilumine al
preparado.
Diafragma Regula la cantidad de luz que debe pasar a través del
preparado.
Brazo o columna Sostiene las partes anteriormente mencionadas.
Base o pie Pieza robusta y pesada sobre la que se inserta la columna y
que da soporte al instrumento.
Platina Es una lámina horizontal compuesta por pinzas que sostienen
el preparado y tornillos que permiten su desplazamiento.

4) Identificar las partes en el siguiente esquema:

Ocular

Revolver
Brazo
Objetivo

Platina sobre donde se

pone la muestra

Tornillo macrometrico
Diafragma

Tornillo micrometrico
Condensador

Iluminador o fuente de luz

Base o Pie
4) La lupa consta de las siguientes partes:

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Parte Función
Oculares Son dos grupos de lentes que proporcionan aumentos, están
montadas sobre sendos tubos que pueden desplazarse para
ajustar su posición a la distancia interpupilar del observador y
conseguir una buena visión estereoscópica.
Ajuste del ocular Permite un ajuste fino del foco en cada ocular.
Objetivo Sistema de lentes que proporciona aumentos.
Tornillo de ajuste de aumentos Permite intercambiar los aumentos
Tornillo de enfoque Permite el enfoque sobre diferentes zonas de la muestra al

mover los grupos ópticos mediante un sistema de arrastre por

cremallera.
Brazo Pieza encajada en una columna, que desliza sobre la misma y
soporta los grupos ópticos
Base Pieza robusta y pesada sobre la que se inserta la columna y
que da soporte al instrumento.
Platina Placa sobre la que se coloca la muestra. Puede sustituirse por
otras de diferentes colores para mejorar la observación por
contraste.
Pinzas Dispuestas sobre la platina, permiten sujetar la muestra

Identificar las partes en el siguiente esquema:

Ajuste del ocular

Tornillo de Ajustes de
Oculares
Aumentos

Brazo

Tornillo de
Tornillo de Enfoque
Enfoque

Pinzas

Base
Platina

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5) Comparación entre lupa y microscopio:

IMPORTANTE: Cómo enfocar con el microscopio.

Nunca baje el tubo del microscopio sin observar su descenso, ya que puede llegar a romper el
preparado con el objetivo, destruyendo de esta manera un material que puede ser irremplazable, y a
su vez puede causar daños al objetivo. Siempre que se haga una observación al microscopio debe
usarse en primer lugar el objetivo de menor aumento.

– Recortar una letra “e” minúscula pequeña de un papel de diario.

– Colocarla luego en el centro de un portaobjetos. Ponga una gota de agua sobre el papel.
– Después de esperar unos segundos hasta que el agua haya empapado el papel, coloque el
cubreobjetos sobre la preparación. Si quedan algunas burbujas de aire presione ligeramente el
cubreobjetos hasta que desaparezcan.
– Colocar la preparación anterior sobre la platina de tal forma que el
cuadradito de papel quede encima de la abertura y luego fije la lámina
mediante las pinzas que hay en la platina.
– Girar el revólver y ponga el objetivo de menor aumento en posición, y al
mismo tiempo que observe el microscopio lateralmente, permita que el tubo
descienda con la ayuda del tornillo macrométrico hasta que el objetivo de
menor aumento se encuentre a un par de milímetros de la laminilla o hasta
que lo impida el tope que tienen algunos microscopios.
- Girar lentamente el tornillo macrométrico mientras observa por el ocular
hasta visualizar la imagen.
- Aclárela (dele nitidez) con el tornillo micrométrico hasta obtener la mejor
imagen posible. Puede hacer los ajustes necesarios con el diafragma y el
condensador para obtener una iluminación adecuada.

RESPONDER:
a) ¿En qué posición se observa la imagen con respecto a la que se ve desde afuera?
b) Mueva la lámina hacia delante. ¿En qué dirección se mueve la imagen?
c) Mueva la lámina hacia la derecha. ¿En qué dirección se mueve la imagen?
d) Realice un esquema de la imagen observada. Indique el aumento total de la
imagen, para lo cual debe multiplicar los aumentos correspondientes al
objetivo y al ocular.
e) Sin cambiar la posición del tubo, cambie el objetivo de menor aumento
por el siguiente, haciendo rotar el revólver y enfoque cuidadosamente
utilizando el tornillo micrométrico. Indique el aumento total de la imagen.
¿Ha cambiado la posición de la imagen con respecto a la observada a menor

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aumento? ¿Es el campo de observación mayor o menor? ¿Es la iluminación

mayor o menor que con el objetivo de menor aumento? ¿Cómo lo explicaría?
f) Retire la preparación cuidadosamente de la platina y colóquela en la lupa
¿Qué diferencias observa?
g) Compare el funcionamiento de la lupa y el microscopio teniendo en
cuenta el siguiente cuadro comparativo:

Característica Microscopio Lupa

Distancia frontal
(mayor / menor)
Desplazamiento de la imagen
(mismo sentido /sentido opuesto)

Característica del objeto a observar

(macroscópico, microscópico)

6) La unidad de longitud más frecuentemente usada en microscopía es la micra o micrón, cuyo

símbolo es la letra griega “mu” (µ) y que equivale a una milésima de milímetro (1/103 mm). En los
laboratorios de investigación se utiliza un instrumento, el micrómetro o retículo micrométrico, para
determinar las medidas microscópicas. Si no se dispone de un micrómetro es posible estimar el
tamaño de los objetos microscópicos en observación si se conoce el diámetro del campo, veamos como:

a) Colocar un pedazo de papel

milimetrado sobre el portaobjeto de tal manera que al enfocar al microscopio pueda observarlo.
Mida el diámetro del campo correspondiente al objetivo de menor aumento contando el número
de cuadrículas observadas. ¿Cuánto mide el diámetro del campo del objetivo de menor aumento?
En milímetros: En micrones:

b) Con el dato anterior es

posible determinar el diámetro del campo correspondiente al objetivo de mayor aumento. Basta
con dividir el diámetro encontrado por la razón entre las magnificaciones del objetivo de mayor
aumento y de menor aumento. Por ejemplo, si el aumento del objetivo de mayor significación es
de 45X y el otro es de 15X la razón mencionada será 45/15=3; ahora si el campo
correspondiente al objetivo de menor aumento tiene un diámetro de 1500mm, el diámetro de
campo para el objetivo de mayor aumento será 1500/3=500mm. ¿Cuánto mide el diámetro de
campo del objetivo de mayor aumento? En milímetros: En micrones:

c) Tal como se indicó anteriormente, tomar ahora un pedazo de un grabado de una revista, tal
grabado consiste en una multitud de puntos dispuestos de tal forma que la densidad del

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grabado depende del tamaño y número de puntos en las distintas áreas. Las distancias entre
los puntos dependen del cliché o de la máquina impresora. ¿Cuántos puntos se pueden ver en
el campo del objetivo de menor aumento? Este ejercicio proporciona un ejemplo de poder de
resolución. Así con el ojo desnudo sólo podemos ver las variadas densidades del grabado,
mientras que con el microscopio nos es posible distinguir puntos. Lo anterior significa que
hemos resuelto los puntos.

7) ¿Qué tipo de muestra se puede observar a través de un microscopio electrónico? ¿Cuál es

la fuente de iluminación? ¿Cómo es el poder de resolución y amplificación comparado con el de un
microscopio óptico? ¿Por qué?
Cuando se quieren observar estructuras celulares que están por debajo del límite de
resolución del microscopio óptico, como algunos orgánulos, membranas, estructuras citosólicas,
complejos moleculares de la matriz extracelular o virus, se recurre al microscopio electrónico

8) Explicar en qué se diferencia un microscopio electrónico de transmisión (MET) de uno de

barrido (MEB). ¿Cómo se obtiene la imagen en cada caso?
Si bien ambos microscopios electrónicos utilizan como fuente de energía, haz de electrones.
Estos utilizan un sistema de lentes, hecho de electroimanes.
Los MET por un lado, su haz de electrones no atraviesa la muestra. Su imagen se proyecta
por la dispersión de electrones en función del espesor (la muestra debe estar cortada muy
finamente por un macrometro). La imagen es plana y, en blanco y negro, pero también se puede
colorear.
Por su parte en los MEB, su haz de electrones no atraviesa la muestra sino que rebotan en
ella. La imagen que proyecta se forma por el reflejo del haz de electrones al incidir sobre la
superficie de la muestra en función del relieve. Mostrando una tridimensionalidad de la misma.

ACTIVIDADES DE INTEGRACIÓN

1) Explicar detalladamente cada uno de los pasos que seguiría para realizar una observación de
una muestra de levaduras bajo el microscopio óptico. Indique todo el material de laboratorio y
óptico que utilizaría en el proceso. Las levaduras se encuentran en una solución líquida dentro de
un vaso de precipitado.
 Tomar un poco de la solución liquida con levadura con una pipeta (graduada de ser
necesario)
 Poner la misma en un porta objetos y cubrirla;
 Colocar la muestra en la platina del microscopio;
 Girar el revolver para seleccionar el objetivo deseado
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 Por ultimo, utilizar los tornillos (macrométricos y micrométricos) para graduar la muestra

2) Un investigador asegura haber obtenido las imágenes que se muestran usando un

microscopio óptico en el menor aumento (100X). Otros afirman que las imágenes no pudieron
haber sido tomadas con microscopio óptico y mucho menos con ese aumento. ¿Puede Ud.
determinar quién tiene razón? ¿Con qué instrumento piensa que fue tomada cada una de las
imágenes? ¿Qué criterios utilizó para determinarlo?

A: Electrónico de Barrido. Tenia (parasito de mascota)

B: Electrónico de Transmisión. Posiblemente llegue con electrónico óptico con la
resolución pero no con la nitidez
C: Lupa
D: Electrónico de Barrido

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ANEXO 1: MATERIALES DE USO CORRIENTE EN EL LABORATORIO

Estos son los materiales que Ud. normalmente utilizará durante el desarrollo de muchas de las
actividades en los trabajos prácticos de Introducción a la Biología. Mediante los esquemas, podrá
familiarizarse con ellos antes de utilizarlos.

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