Realice los cálculos para determinar el volumen de transferencia en la actividad 2.

2. ¿Cuál es el cambio de coloración de ocurre después de la reacción de la glucosa con el reactivo

enzimático?

Estas muestras tienen un cambio de incolora a un rosa bastante intenso y a medida de que se va
diluyendo la muestra, el color va disminuyendo lográndose ver una diferencia en las tonalidades.

¿A qué se debe el cambio de coloración?

El cambio de coloración se debe a que la glucosa que es incolora hace una reacción con el reactivo
enzimático y se determinó que la oxidorreductasa que es la encima glucosa oxidasa, forma
peróxido de hidrogeno y lactona ya que cataliza la oxidación de la glucosa. Seguido a esto la
producción de 4-aminoantipirina al reaccionar con fenol en presencia de peróxido da un resultado
que es la quinonaimina, es decir, se puede observar con esa coloración intensa, en este caso rosa.

3. Presente el espectro de absorción del blanco y una de las muestras de reacción de la glucosa
con el reactivo enzimático. ¿Cuál es la longitud de onda de máxima absorción del producto de la
reacción?

R/ punto de absorción máximo 500nm

¿A qué se debe la absorción del producto de la reacción en el espectro de luz visible?

4. Presente el gráfico de calibración de la concentración vs absorbancia de las diluciones de

glucosa. Recuerde incluir las barras de error de cada punto del gráfico. ¿Cuál es la formula de la
línea de regresión? ¿Cuál es el coeficiente de correlación R2?

5. ¿Cuál es la concentración de glucosa en las muestras problema? ¿Cuál es el error del valor real
vs el calculado experimentalmente? ¿Explique a que se debe el error?

6. Investigue otros métodos no colorimétricos usados para determinar la concentración de

glucosa en diferentes matrices biológicas (ej. fluidos corporales).
Existen varios métodos no colorimétricos utilizados para determinar la concentración de glucosa
en diferentes matrices biológicas, entre ellos se encuentran:

Método de la hexoquinasa: Es el método de referencia y consiste en dos reacciones acopladas

En la primera reacción (específica), catalizada por la enzima hexoquinasa, se fosforila la glucosa

formándose glucosa 6-fosfato. La glucosa 6-fosfato, en una reacción posterior (reacción
indicadora), se transforma en 6- fosfogluconato produciéndose NADPH (1 mol por cada molécula
de glucosa). La producción de NADPH origina un aumento de absorbancia a 340nm. El incremento
de absorbancia a esta longitud de onda será directamente proporcional a la concentración de
glucosa.

Método enzimático: Este método utiliza una enzima llamada glucosa oxidasa para catalizar la
oxidación de la glucosa a ácido glucónico y peróxido de hidrógeno. La cantidad de peróxido de
hidrógeno producido se mide utilizando un electrodo de platino.

Biosensores: estos dispositivos utilizan enzimas para catalizar la reacción entre la glucosa y un
sustrato, generando una señal eléctrica o óptica que es proporcional a la concentración de glucosa
en la muestra.

método de la O-toluidina, cuyas bondades mencionadas en la literatura lo señalan como

método de elección para cualquier laboratorio. La utilización de la O-toluidina en la
determinación de aldosacáridos en un medio de ácido acético, fue establecido como
método rutinario por Hultman, procedimiento que ha sido modificado por varios autores
y utilizado en métodos manuales y automáticos. Se fundamenta el procedimiento en una
reacción de condensación de la glucosa y aminas aromáticas primarias en un medio de
ácido acético glacial, según la siguiente secuencia de reacciones:

El producto coloreado final es el resultado de la reacción de la O-to1uidina con

la glucosa, formándose gIucosilamina y la correspondiente base de Schiff. Este
producto coloreado tiene un máximo de absorción de 625 a 635 nm (1), cuya
densidad óptica se incrementa proporcionalmente de acuerdo con la ley de
Beer-Lambert entre una amplia gama de concentraciones (O a 500 mg/dl en
nuestro laboratorio), sin embargo, se recomienda leer el producto coloreado
final entre 0.1 a 1.0 de absorbancia.