AREA DE CIENCIAS DE LA SALUD

HISTOPATOLOGIA

Tema: Materiales Macroscópicos para Histología

Docente: Édgar Paul Dávila López

Autor:

Deyanira Solange Enciso Vargas

Arequipa – Perú

2022
 MATERIALES MACROSCOPICOS PARA HISTOLOGIA
Se define la microscopía como la observación de objetos muy pequeños bajo grandes aumentos.
Los aparatos que se usan para ello se denominan microscopios. Se usan la microscopía
especialmente para analizar tejidos, células, componentes sanguíneos y microorganismos.
Normalmente hay varios trabajos que preceden la observación de un material bajo el microscopio
que permiten una mejor observación, como puede ser la estructura de una célula. Los microscopios
convencionales, microscopía de luz, se consigue un gran aumento del objeto a investigar a través de
un procedimiento de proyección en dos niveles. En este tipo de microscopía el microscopio produce
primeramente una imagen invertida real aumentada del objeto iluminado mediante el objetivo. En
un segundo paso se aumenta nuevamente esta imagen mediante el ocular. Los aumentos parciales
del objetivo y el ocular producen el aumento total. Cuando se requiere un gran aumento, o cuando
se analizan objetos muy pequeños, se usa un objetivo de inmersión. Además, se suele aplicar una
gota de aceite sobre el objeto a investigar para rellenar el espacio entre el objeto y el objetivo, lo
que optimiza la capacidad de resolución. Con esta técnica se pueden hacer visibles objetos hasta
200 nm.

MATERIALES:

 MACROSCOPIA:

CUCHILLAS Las cuchillas de vidrio se

utilizan para preparar
secciones para
microscopía de luz y
para cortar secciones
muy delgadas para
microscopía
electrónica. Existe una
máquina especial para
cortar las cuchillas de
vidrio y estas tengan el
tamaño, grosor y filo
para poder realizar los
cortes ya que son muy
delicados.
BANDEJAS Bandeja porta objeto
Frascos
Tapers

CASSETTES Sirven para la inclusión

y la identificación de
muestras de tejido
durante los pasos de
procesamiento,
inclusión, corte y
archivo. Área de
escritura es de 45
grados. Fabricados de
polimer de alta
densidad.
PINZAS Las pinzas, soportes y
fijaciones de
laboratorio se emplean
de forma
combinada para sujetar
y fijar otros elementos
del instrumental, como
el material de vidrio,
tubos, termómetros,
probetas, columnas,
embudos y agitadores
de varillas
TINTAS
VERDE Técnica de tinción de
espora bacteriana con
verde malaquita en
Laboratorio. Este
colorante verde
activo tiñe las esporas
cuando se
permeabilizan las capas
con calor. Algunos
géneros bacterianos
producen en su interior
formas de resistencia
denominadas
endosporas.
 NARANJA La eosina tiñe de rosa
anaranjado o rojizo el
citoplasma, la pared
celular, el colágeno, el
tejido conjuntivo y
otras estructuras que
rodean y sostienen la
célula

ROJO Toluidina o rojo básico,

se utiliza como
colorante de contraste
en tinciones generales.
Se puede emplear
como colorante vital
puesto que las células
animales lo incorporan
en los lisosomas, los
macrófagos además en
sus gránulos, y las
vegetales en las
vacuolas. Tiñe núcleos y
lisosomas de color rojo.

 METODOLOGIA:

RECOGIDA DE LA MUESTRA: Recogida del tejido de interés del paciente para su estudio, ya
sea una biopsia en la que obtenemos la muestra de un individuo vivo, o un estudio
histopatológico donde se realiza un muestreo de varios o todos los órganos después de una
necropsia previa.

FIJACIÓN: Las muestras son habitualmente fijadas con unas soluciones líquidas
denominadas fijadores, las cuales se usan para mantener las estructuras celulares y
moleculares inalterables durante el procesamiento posterior y con una organización lo más
parecida posible a como se encontraban en la muestra viva.
RECEPCIÓN Y REGISTRO DE LA MUESTRA: Cuando llega la muestra, se le asigna un
número interno del laboratorio y se registra.

INCLUSIÓN DE LA MUESTRA: Consiste en dar dureza homogénea al tejido para poder ser
cortado posteriormente a una medida de micras mediante el microtomo y poder ser
observado en el microscopio. Esta dureza se consigue mediante la inclusión en un medio
sólido, como la parafina, que es una sustancia cérea que a temperatura ambiente es sólida.
Hay que tener en cuenta que la parafina es hidrófoba, por lo tanto no se va a mezclar bien
con el agua que hay en el tejido ni con el formol (que es una solución acuosa), y hay que
eliminarla. Para conseguirlo se realiza una deshidratación mediante una serie de alcoholes
de gradación creciente (50°C, 70°C, 80°C, 95°C y alcohol absoluto) y un posterior
aclaramiento, en el que sustituimos el agente deshidratante por una sustancia miscible con
la parafina, como es el xileno. A continuación, ya se puede proceder a la infiltración en
parafina de la muestra histopatológica. Todo este proceso se realiza en el procesador
automático de tejidos y tiene una duración aproximada de 12 horas.

CONFECCIÓN DE LOS BLOQUES: Consiste en la obtención de un bloque sólido con la

muestra histopatológica. Para obtenerlo se utiliza un molde previamente rellenado con
parafina líquida donde se coloca el tejido de estudio y se cierra con una de las partes del
casete para que el bloque tenga un soporte cuando se saque el molde. Luego se pone en
 una superficie fría a 4 °C para que el molde se solidifique y ya poder proceder al corte. Es
importante colocar la muestra en la orientación adecuada al tipo de corte que se desea
realizar. El tiempo de elaboración de los bloques va a depender del número de casetes que
se hayan preparado durante el examen macroscópico.

CORTE HISTOLÓGICO – MICROTOMÍA: Tras la inclusión o la congelación se procede a cortar los

tejidos, es decir, obtener secciones. Existen diferentes aparatos de corte que permiten conseguir
secciones de distinto grosor: ultrafinas (del orden de nm), semifinas (de 0,5 a 2 µm), finas (entre
unas 3 y 10 µm) y gruesas (mayores a 10 µm).

TINCIÓN DE LOS CORTES: La microtomía es la técnica mediante la cual se consiguen cortes con
medida de micras utilizando un microtomo. Una vez realizado el corte se coloca en el baño de
flotación (35 – 45 °C) y se coge con el portaobjetos. El tiempo de la realización de los cortes va a
depender del número de bloques que haya.
(Corte del bloque con el microtomo. Los cortes se colocan en el baño de flotación y se recogen con
el portaobjetos)

MONTAJE DE LA PREPARACIÓN HISTOLÓGICA: Las células, por sí mismas, no poseen coloración.

Por tanto, para poder observar la morfología tisular deben «teñirse». Existen muchos tipos de
tinciones para diferenciar las distintas estructuras o sustancias en los tejidos.

La tinción más usada es la de hematoxilina y eosina. La hematoxilina tiñe las sustancias ácidas o
estructuras que las contengan, como el núcleo que contiene ácido desoxirribonucleico (ADN) y la
eosina tiñe las estructuras básicas como el citoplasma y demás orgánulos eosinofílicos de la célula.

OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO Y DIAGNÓSTICO: El proceso de montaje tiene como finalidad que

las muestras que han sido teñidas puedan ser observadas de manera óptima al microscopio y
puedan mantenerse en excelentes condiciones de conservación. Esto se consigue mediante el
medio de montaje, que son resinas sintéticas que ponemos entre el portaobjetos y el cubreobjetos.
Este no es miscible en agua con lo que es necesario volver a deshidratar los tejidos (mediante la
serie de alcoholes de graduación creciente) y un posterior aclarado con xileno, para poder colocar
el medio de montaje, el cubreobjetos y finalmente poder hacer la observación al microscopio.
 CONCLUSIONES:
 La inclusión es el método más común de endurecer el tejido y consiste en infiltrar
la muestra con sustancias líquidas que tras un proceso de polimerización o
enfriamiento se solidifican, sin afectar a las características del tejido. Este
procedimiento se introdujo a mediados del siglo XIX.
 Fijar un tejido es preservar sus características morfológicas y moleculares lo más
parecidas posibles a las que poseía en su estado vivo. O, dicho de otra manera, las
fijaciones disminuyen los cambios en los tejidos desde que se obtienen hasta que
se observan, tanto en organización estructural como en composición química.
 Se denomina TÉCNICA HISTOLOGICA al conjunto de procedimientos aplicados a un
material biológico (animal o vegetal) con la finalidad de prepararlo y conferirle las
condiciones óptimas para poder observar, examinar y analizar sus componentes
morfológicos a través de los microscopios fotónicos y electrónicos.