Microbiologia

Universidad Tecnológica Nacional Dra. Ivana M.
Aiassa Martínez
Facultad Regional Córdoba
CRECIMIENTO
MICROBIANO
Crecimiento de poblaciones
 Aumento de número.
 Multiplicación bacteriana:
fisión simple o binaria
 Elongación
 Auto duplicación de ADN
cromosómico
 Tabicado central
 Invaginación membrana celular
 Síntesis de pared
Universidad Tecnológica Nacional Dra. Ivana M. Aiassa Martínez
 Es el aumento en el Nº de células de una población.
 Velocidad de crecimiento es el cambio en el Nº de

células o en la masa celular por unidad de tiempo.
 Durante el ciclo de división celular, todos los

componentes se duplican.
 Tiempo de generación: es el tiempo necesario para la

duplicación celular. Es variable.
Ej: 1 a 3 horas, 10 min, o varios días.
Curva de crecimiento bacteriano

Fase 1: Adaptación o latencia
El crecimiento de la población no inicia inmediatamente,

sino después de cierto periodo de tiempo, el cual puede
ser breve o largo, dependiendo de varios factores.
El número de microorganismos no varía.

Fase 2: Crecimiento exponencial
Es la consecuencia del hecho de que cada célula se

divide en dos.
 Relación casi lineal entre el tiempo y el número de

elementos.
 Actividad metabólica incrementada (estado óptimo).
 Depende del tiempo de generación de cada bacteria.
 Los antimicrobianos son mas activos.
 Su velocidad esta influenciada por temperatura,
nutrientes.
Estimación del Tiempo de generación (g)
t = Tiempo de crecimiento exponencial

g = Tiempo de generación
n = Nº de generaciones que han
ocurrido durante el período de fase
exponencial
n
N = N0 2 N = N0 2n
log N = log N0 + n log 2
N = Nº final de células
N0 = Nº inicial de células log N - log N0 = n log 2
n = Nº de generaciones (log N - log N0 ) /log 2 = n
que han ocurrido durante
el período de fase (log N - log N0 ) /0,301 = n
exponencial
Estimación del Tiempo de generación (g)
n = (log N - log No) /0,301 t =2h

n=1
n = (log 108 - log 5 107) /0,301 g=2h
n=1
t = Tiempo de crecimiento exponencial

g = Tiempo de generación
n = Nº de generaciones que han ocurrido durante el
período de fase exponencial
Fase 3: Estacionaria
El medio de cultivo no se renueva, comienzan a acumularse

metabolitos tóxicos, se modifica el pH, los nutrientes se
agotan, la velocidad de multiplicación se retrasa y hay un
equilibrio entre bacterias vivas y muertas.
 La población no aumenta.
 Actividad metabólica mas lenta.
 Producción de metabolitos secundarios: Antibióticos,
toxinas.
Fase 4: Muerte
Cuando continua el crecimiento en el medio de cultivo viejo

se produce una inversión numérica con respecto a la fase
exponencial.
 La población no aumenta.
 Recuento de células disminuye sensiblemente.
 Acumulación de productos tóxicos.
 Disminución de nutrientes.
 La velocidad de muerte celular es menor que la del
crecimiento exponencial.
Medición del crecimiento
Recuento de células totales: Microscopía
Recuento de células viables: Recuento de colonias
Medición de masa celular

Recuento de células totales: Microscopía
Se utiliza una cámara de recuento especial que se observa al microscopio

óptico para estimar el número total de células en el cultivo.
12 cél x 25 cuadrados = 300 cél
0,02 mm3 …….. 300 cél

1 mm3 ………x = 15.000 cél
El espacio entre el cubre y el porta 1 mm3 ……… 15.000 cél

es de 0,02 mm. La rejilla tiene 25 1x103 mm3……. x = 1,5x107 cél
cuadrados. (1cm3)
Área de 1 mm2 y un volumen de

0,02 mm3 1,5x107 células /mL
El método no sirve para cultivos poco densos, células móviles.

Frecuentemente es necesario teñir las células.
Recuento de células viables: Recuento de colonias
Siembra por extensión
UFC
UFC: Unidad Formadora de Colonia

193 UFC
El cultivo debe diluirse para obtener 30-300 UFC en cada placa.

Medición de masa celular
 Determinación del peso seco.
 Turbidez: Medición de absorbancia o Densidad Óptica.
 Otras: Producción de Ácido o gas en organismos fermentadores.

Cultivo continuo: Biorreactor
 Aparato que se utiliza para obtener un cultivo

continuo en medio renovado y permite mantener
poblaciones de células en crecimiento exponencial por
largos períodos de tiempo.
 Permite el control de la densidad de población y la

velocidad de crecimiento de un cultivo. Variando:
 La velocidad de dilución
 La concentración de un nutriente limitante

ESQUEMA DE UN
CULTIVO CONTINUO
Oxígeno
Los microorganismos son muy variables en cuanto a la

necesidad del oxígeno.
Aerobios estrictos
Requieren O2 como aceptor terminal de electrones, no
proliferan en su ausencia. Ej. Mycobacterium bovis.
Microaerofilos
Utilizan O2 a niveles muy bajos (12%). Aire: 21%.
Ej. Haemophillus suis
Anaerobios estrictos
No emplean oxígeno para su metabolismo sino reacciones
fermentativas. Incapaces de eliminar productos tóxicos del
oxígeno. Ej. Clostridium tetani
Anaerobios aerotolerantes
Pueden crecer en presencia o ausencia de oxígeno, pero

la energía la obtienen por fermentación. Ej. Bacterias
acidolacticas.
Anaerobios facultativos
Obtienen energía mediante utilizando oxígeno como aceptor

terminal de electrones o empleando reacciones de
fermentación. Ej. Streptococcus, E. coli
CALDO TIOGLICOLATO
El tioglicolato
reduce el O2 a H2O
Resazurina
Aerobios
estrictos Anaerobios aerotolerantes
Anaerobios estrictos Microaerofilos

Anaerobios facultativos
Facultad Regional Córdoba Análisis Microbiológico
FORMAS TÓXICAS DEL OXÍGENO
Se producen durante la respiración cuando el O2 se reduce a H2O
Anión superóxido: Altamente reactivo y puede oxidar

O2- cualquier compuesto orgánico dentro de la célula.
O2 H2O2 Peróxido de Hidrógeno: Dañan los componentes

celulares.
Radical Hidroxilo: Es la forma más tóxica y se

HO• produce por exposición a radiaciones ionizantes.
Facultad Regional Córdoba Análisis Microbiológico
ENZIMAS QUE DESTRUYEN FORMAS TOXICAS DEL OXÍGENO
CATALASA 2 H2O2 →2H O+ 2 O2
PEROXIDASA H2O2 + NADH + H+ → 2 H O + NAD

2
+
SUPERÓXIDO DISMUTASA 2 O2- + 2 H+ →2H O 2 2 + O2
La SOD es indispensable para los aerobios
La SOD no está presente en anaerobios

Temperatura
 La temperatura es un factor ambiental importante

en el control de crecimiento microbiano.
 Los MO pueden agruparse según los márgenes de

temperatura que requieren.
 Se distinguen 4 grupos:
1. Psicrófilos 2. Mesófilos
3. Termófilos 4. Hipertermófilos
Psicrófilos
 Requieren bajas temperaturas.
 15 – 20 ºC.
 La mínima puede ser muy baja.
 Bacterias en el fondo del mar y en los polos.

Mesófilos
 Rango de temperaturas: 25 – 40 ºC.
 Temperatura óptima: (37 ± 1) ºC
 Agentes que afectan al hombre y los animales.

Termófilos
 Toleran altas temperaturas.
 Temperatura óptima: 55 ºC.
 Temperatura máxima: 80 ºC o más.

Clase de MO según la temperatura
Tipo Rango de Temperatura MO

Temperatura Óptima
Psicrófilo 0 - 20 15 Algas
Mesófilo 20 – 40 38 E. coli
Termófilo 40 – 70 60 Bacillus
stearothermophillus
Hipertermófilo 90 – 115 106 Thermus acuaticus
pH
 La acidez o alcalinidad de un medio tiene una

gran importancia sobre el crecimiento
microbiano. La mayoría de MO. Crecen a un pH
entre 6 y 8.
 El pH intracelular debe permanecer próximo a la

neutralidad.
Presión Osmótica
 Los solutos (sales y azúcares) disueltos se desplazan
a zonas de menor concentración. El agua se desplaza
a zonas de mayor concentración de solutos
 Una presión osmótica alta causa pérdida de agua y

plasmólisis de la célula
 Halófilas: bacterias que toleran altas concentraciones

salinas. Ej: estafilococos
 Halófilas facultativas : toleran hasta un 2 % de sales

MEDIOS DE
CULTIVO
Mezcla de sustancias nutritivas.
Desarrollo y multiplicación de las bacterias.
Sustancias fundamentales para la síntesis y el

mantenimiento celular.
Fuente de energía.
Para el cultivo correcto de una bacteria es

necesario conocer sus exigencias nutritivas.
Clasificación de los medios de cultivo
Líquidos
Consistencia Sólidos
Semisólidos
Mínimos Agua, NaCl, glúcidos, aminoácidos
Medios mínimos que poseen el agregado de componentes

Composición Sintéticos en cantidad y calidad conocidos. Contienen compuestos
minerales, fuentes de carbono, nitrógeno, vitaminas,
factores de crecimiento, aminoácidos, etc.
Complejos Enriquecidos con extracto de carne, glucosa, NaCl y agua.

Favorecen el crecimiento de ciertas bacterias e inhiben el

Selectivos crecimiento de otras.
Mezcla de distintos nutrientes que estimula el desarrollo

de especies minoritarias (patógenas) y suprime el de
otras especies mayoritarias.
De enriquecimiento Un ejemplo es el caldo selenito que inhibe el crecimiento
de bacterias intestinales Coliformes y Enterococos.
Salmonella, Proteus y Pseudomonas no son inhibidas
Utilidad
Sangre, extracto de levadura, bilis, etc. Crecimiento de

Enriquecidos bacterias exigentes.
Permiten distinguir morfológicamente las colonias de algunos

Diferenciales microorganismos que poseen ciertas características metabólicas.
AGAR EMB (Levine)
Es un medio selectivo y diferencial. Desarrollan en este medio bacilos Gram

negativos. Las bacterias Gram positivas resultan inhibidas en su crecimiento gracias a
los colorantes presentes en la formulación (eosina y azul de metileno). Los
microorganismos que fermentan la lactosa producen un cambio de pH, virando el
indicador ácido-base (eosina).
AGAR MANITOL SALADO
El agar manitol salado (medio de Chapman) posee una alta concentración de sal,
permitiendo solamente el crecimiento de microorganismos tolerantes a ella, lo que lo
hace un medio selectivo. Desarrollan en este medio las bacterias halófilas
(estafilococos). La degradación del manitol, con formación de ácido es indicativa de la
presencia de Staphylococcus aureus por lo que es un medio diferencial .
Staphylococcus epidermidis no fermenta el manitol.
AGAR CLDE (Cistina, lactosa deficiente en electrolitos)
Posee lactosa, cistina y un indicador, el azul de bromotimol. Permite el desarrollo de

bacterias Gram negativas y Gram positivas. La fermentación de lactosa se pone de
manifiesto por el viraje del indicador (vira a amarillo). La deficiencia en electrolitos inhibe
la invasividad del Proteus.

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Universidad Tecnológica Nacional Dra. Ivana M.

 Es el aumento en el Nº de células de una población.

 Velocidad de crecimiento es el cambio en el Nº de

 Durante el ciclo de división celular, todos los

 Tiempo de generación: es el tiempo necesario para la

Curva de crecimiento bacteriano

Fase 1: Adaptación o latencia

El crecimiento de la población no inicia inmediatamente,

El número de microorganismos no varía.

Fase 2: Crecimiento exponencial

Es la consecuencia del hecho de que cada célula se

 Relación casi lineal entre el tiempo y el número de

Estimación del Tiempo de generación (g)

t = Tiempo de crecimiento exponencial

Estimación del Tiempo de generación (g)

n = (log N - log No) /0,301 t =2h

t = Tiempo de crecimiento exponencial

El medio de cultivo no se renueva, comienzan a acumularse

Cuando continua el crecimiento en el medio de cultivo viejo

Medición del crecimiento

Recuento de células totales: Microscopía

Recuento de células viables: Recuento de colonias

Medición de masa celular

Recuento de células totales: Microscopía

Se utiliza una cámara de recuento especial que se observa al microscopio

12 cél x 25 cuadrados = 300 cél

0,02 mm3 …….. 300 cél

El espacio entre el cubre y el porta 1 mm3 ……… 15.000 cél

Área de 1 mm2 y un volumen de

El método no sirve para cultivos poco densos, células móviles.

Recuento de células viables: Recuento de colonias

Siembra por extensión

UFC: Unidad Formadora de Colonia

El cultivo debe diluirse para obtener 30-300 UFC en cada placa.

Medición de masa celular

 Determinación del peso seco.

 Turbidez: Medición de absorbancia o Densidad Óptica.

 Otras: Producción de Ácido o gas en organismos fermentadores.

Cultivo continuo: Biorreactor

 Aparato que se utiliza para obtener un cultivo

 Permite el control de la densidad de población y la

 La concentración de un nutriente limitante

Los microorganismos son muy variables en cuanto a la

Pueden crecer en presencia o ausencia de oxígeno, pero

Obtienen energía mediante utilizando oxígeno como aceptor

Anaerobios estrictos Microaerofilos

FORMAS TÓXICAS DEL OXÍGENO

Se producen durante la respiración cuando el O2 se reduce a H2O

Anión superóxido: Altamente reactivo y puede oxidar

O2 H2O2 Peróxido de Hidrógeno: Dañan los componentes

Radical Hidroxilo: Es la forma más tóxica y se

ENZIMAS QUE DESTRUYEN FORMAS TOXICAS DEL OXÍGENO

CATALASA 2 H2O2 →2H O+ 2 O2

PEROXIDASA H2O2 + NADH + H+ → 2 H O + NAD

SUPERÓXIDO DISMUTASA 2 O2- + 2 H+ →2H O 2 2 + O2

La SOD es indispensable para los aerobios

La SOD no está presente en anaerobios

 La temperatura es un factor ambiental importante

 Los MO pueden agruparse según los márgenes de

 Requieren bajas temperaturas.

 La mínima puede ser muy baja.

 Bacterias en el fondo del mar y en los polos.

 Rango de temperaturas: 25 – 40 ºC.

 Temperatura óptima: (37 ± 1) ºC