EXTRACCIÓN DE ADN BACTERIANO….

Guerrero, Alisson; Ojeda Saytel

Práctica de laboratorio N°1; Carrera de Ingeniería en Biotecnología; Facultad de Ingeniería y
Ciencias Aplicadas; Cátedra de Biología Molecular 1; Quito, Ecuador.
07 de noviembre del 2022

Introducción
La metodología de biología molecular para lograr una identificación de
microorganismos se realiza a través de técnicas moleculares como la implementación de
kits comerciales de aislamiento, los cuales optimizan la pureza, rendimiento y logran
minimizar la degradación del ADN; también deben ser apropiado s para la obtención de
la muestra de extracción seleccionada y sobre todo limitar la generación de residuos
peligrosos, cabe recalcar que dichos de kits deben reducir el costo, tiempo, suministros
y personal de investigación. El método de extracción de ADN bacteriano tiene como
finalidad realizar una combinación de digestión enzimática del ADN del huésped
empleado, producir lisis celular, es decir, la rotura de la membrana celular; aspectos que
favorecen en lograr identificar el ADN bacteriano (1); para la obtención de ADN
bacteriano de la presente practica se empleó el kit de aislamiento genómico PowerSoil,
el cual ayuda a la obtención y amplificación de PCR principalmente para suelos como
compost, sedimento o estiércol, sin embargo, también se lo puede emplear para
organismos como bacterias, hongos, algas y actinomicetos; se debe tomar en cuenta que
el kit de aislamiento PowerSoil no dispone el efecto de homogeneización, motivo por el
cual se debe adicionar un vórtice o batidor de perlas en caso de necesitar la extracción
de ADN de microorganismos(2).
La información genética de los organismos unicelulares se encuentra en la molécula de
ácido desoxirribonucleico (ADN), el cual se encuentra estructurado por una doble
cadena circular; la estructura de las bacterias se constituye a partir de la pared celular en
la cual se encuentran situados los citoplasmas, ribosomas y genomas bacteriano(3). Los
organismos bacterianos intercambian su material genético a través del mecanismo
DOGA molecular, en la fase de transformación la bacteria introduce varios fragmentos
de ADN de distintas bacterias las cuales se encuentran esparcidas en su medio de
origen, en la fase transducción el ADN es transferido desde una bacteria a otra a través
de la intervención de un virus, y por último en la fase de conjugación el agente
transmisor (virus) se encargan de transportar fragmentos de ADN a partir de la última
bacteria parasitada hacia la bacteria receptora(4). A partir del ADN bacteriano se puede
realizar una identificación molecular de géneros fototípicos, morfológicos o
fisiológicos. El ADN bacteriano es sensible ante la detección de PCR, debido a la
cantidad de ADN aislado y la visualización de ADN bacteriano se lo obtiene al
implementar la técnica de electroforesis en gel de agarosa, en el cual se debe adicionar
un agente intercalante y un voltaje adecuado para determinar la cuantificación
resultante(5).
La técnica de electroforesis se implementa para realizar una separación de moléculas;
técnica que es aplicada por lo general en gel de agarosa como material de soporte, eso
sucede porque la agarosa es un polímero natural, es decir, un polisacárido constituido
por galactosa α y β; el gel de agarosa es soluble en agua, siempre y cuando se encuentre
a 65ª C. La polimerización depende de la concentración de agarosa donde se forma una
red tridimensional con poros, la movilidad de las moléculas presentes en el gel migran
dependiendo de su tamaño, velocidad que es determinada por varios factores
importantes; el primer factor es el paso del ADN, donde las moléculas de ADN lineal de
doble cadena se desplazan a través el gel con una velocidad inversamente proporcional
a la disposición de su número de bases, el gel crea una fricción donde las moléculas
pequeñas migran más rápido que las moléculas grandes; el segundo factor es la
concentración de agarosa y dependiendo del mismo las moléculas migran con facilidad
o dificultad dentro del gel; se debe realizar un medio con una concentración adecuada
para lograr una resolución adecuada de las bandas; el tercer factor es la conformación
del ADN, donde el ADN circular de doble cadena migra a mayor velocidad en el gel de
agarosa; el siguiente factor es el voltaje aplicado, aquí se refleja la velocidad de
migración de los fragmentos lineales, dependiendo de la fuerza del campo eléctrico
aumenta el peso molecular de las moléculas de ADN; el último factor es el Buffer de
electroforesis, donde la migración de ADN es afectada debido a la conformación y
fuerza iónica del Buffer(6).
Por tal motivo el objetivo de la práctica es implementar los principios de la técnica
molecular de extracción de ADN bacteriano empleando el kit comercial PowerSoil, para
obtener una visualización en bandas de los ácidos desoxirribonucleicos bacterianos.
 Referencias Bibliográficas

1. Manta FS de N, Leal-Calvo T, Moreira SJM, Marques BLC, Ribeiro-Alves M, Rosa PS, et al. Ultra-
sensitive detection of mycobacterium leprae: DNA extraction and PCR assays. PLoS Negl Trop
Dis. 2020 May 1;14(5):1–15.

2. PowerSoil ® DNA Isolation Kit.

3. caeme. Virus y bacterias: qué son y en qué se diferencian. Virus y bacterias: qué son y en qué
se diferencian. 2020.

4. Universidad Autónoma del Estado de Hidalgo. Genética Bacteriana Microbiología y

Parasitología. Genética Bacteriana Microbiología y Parasitología. 2011.

5. Suárez Contreras LY, Yañez Meneses LF. Extracción de ADN de bacterias conservadas en el
banco de cepas de la Universidad Francisco de Paula Santander sede Campos Elíseos.
Respuestas. 2018 Jul 1;23(S1):24–8.

6. Luz Gómez, Alejandra Pérez. Electroforesis de ácido desoxirribonucleico (ADN) en gel de

agarosa. 2018 [cited 2022 Nov 2]; Available from:
https://dspace.tdea.edu.co/bitstream/handle/tdea/1468/Electroforesis%20de%20%c3%a1cido
%20desoxirribonucleico%20%28ADN%29%20en%20gel%20de%20agarosa.pdf?
sequence=1&isAllowed=y