Transcripción

Organización de la clase

1. Introducción general

2. Transcripción en procariotas

3. Transcripción en eucariotas
Cómo se perpetúan los genes
DNA Replicación

Transcripción

RNA
Traducción

Proteínas
DNA

Transcripción

RNA

Cómo se expresan los genes

Transcripción

Doble hebra de DNA

RNA
Hebra molde
(DNA)
 Replicación vs transcripción Diferencias

✓ Parecidos pero diferentes • Tipo de nucleótido utilizado

• No se utilizan cebadores
Semejanzas • La nueva hebra no permanece

• Separación de la doble hebra asociada al molde

• Por complementariedad, se sintetiza • La precisión de la copia

una hebra de ácido nucleico • La extensión de la copia

• En dicho proceso participan enzimas • El número de copias

• Reacción secuencial • Tamaño de la copia

Nomenclatura de las hebras
✓ Hebra no molde
✓ Positiva
✓ Hebra sentido
✓ Informativa

Doble hebra de DNA

RNA
✓ Hebra molde
✓ Negativa
✓ Hebra antisentido
✓ No informativa
 Terminología

Corriente arriba (upstream) Corriente abajo (downstream)

Hebra no Promotor Región codificante

molde

exón intrón exón intrón exón intrón exón

Terminador
Hebra Sitio de inicio de Sitio de terminación
molde la transcripción de la transcripción

RNA transcripto
DNA corriente DNA corriente
arriba abajo

Iniciación
Complejo cerrado

Complejo abierto

Transcripción inicial

Extensión
Extensión

Terminación
Terminación
1. Introducción general

2. Transcripción en procariotas

3. Transcripción en eucariotas
Transcripción
en procariotas

Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA

RNA polimerasa bacteriana
• Apenas un tipo de RNA polimerasa

Factor sigma
(σ70 en E. coli)
Núcleo de la enzima RNApol Holoenzima
RNA polimerasa bacteriana

• Secuencia consenso: secuencia promedio o representativa de un gran

número de secuencias individuales.
Se obtiene por comparación de diferentes secuencias con la misma
función básica
17 – 19 pb +1
Elemento Elemento
-35 -10
Promotor Región codificante

Segmento de DNA bacteriano

RNA polimerasa bacteriana
• Fuerza del promotor: número de transcritos por unidad de tiempo

Determinada por:
1. Unión entre RNApol y promotor
2. Isomerización
3. Rapidez de escape del promotor
17 – 19 pb +1
Elemento Elemento
-35 -10
Promotor Región codificante

Segmento de DNA bacteriano

RNA polimerasa bacteriana

• Dependiendo de la fuerza del promotor, la expresión de un gen será

mayor o menor

17 – 19 pb +1
Elemento Elemento
-35 -10
Promotor Región codificante

Segmento de DNA bacteriano

 Factor sigma

• El factor sigma se asocia al núcleo de

la RNApol y participa en la unión al Factor sigma
promotor (σ70 en E. coli)
Núcleo de la Holoenzima
enzima RNApol

4 3 2 1
C N

Factor sigma
(estructura primaria de la proteína)
• El factor sigma puede subdividirse en
cuatro regiones
 Factor sigma
Holoenzima

• Buscar función de la región -10

+1

Elemento -35 -10

UP
Segmento de DNA
Segmento de DNA
Transición al complejo abierto
Transición al complejo abierto

• Complejo Cerrado: RNA polimerasa unida al

promotor sin alteración de la doble hebra

• Complejo Abierto: separación de la doble hebra

Transición (formación de una burbuja de transcripción)
La RNApol sufre alteraciones (isomerización)
sin consumo de ATP

-11 +2
Transición al complejo abierto
RNA polimerasa ¿Qué ocurre con la región 1.1
Canal de salida Pinza del factor sigma durante la
del DNA Hebra no molde isomerización de la RNApol?
Canal HNM Canal DNA
doble hebra

Hebra
molde

Canal HM
Pinza
nucleótidos
Canal de salida
del RNA Dirección de la
transcripción
Transcripción inicial y síntesis abortiva
Síntesis abortiva

La RNApol sintetiza moléculas

cortas de RNA (10 bases)

Estos transcritos son liberados

sin ser finalizados

Annual Review of Biochemistry Volume 77, 2008 Herbert, pp 149-176

 Excursiones breves
Síntesis abortiva
❶
¿Cómo la enzima se comporta
durante estos ciclos abortivos?
Oruga
❷ Tres modelos son propuestos

Triturador
❸
Escape del promotor y extensión
 Luego de varias “tentativas
Escape del promotor abortivas”, la enzima escapa del
promotor e inicia la fase de
extensión (síntesis > 10 nucleótidos)

¿Cuál es la posible participación de

la región 3.2 del factor sigma
durante el periodo de síntesis
abortiva?
Fase de extensión
Terminación de la
transcripción
1. Introducción general

2. Transcripción en procariotas

3. Transcripción en eucariotas
Transcripción
en eucariotas

Créditos Chirawan Somsanuk

Procariotas Eucariotas
• ≥3 polimerasas: RNApol I,
• Apenas una polimerasa RNApol II, RNApol III (plantas: I,
con 5 subunidades II, III, IV, V). 10-20 subunidades

• Factor sigma • Varios factores generales de

transcripción
Promotor eucariota 17 – 19 pb +1

-35 -10

Promotor bacteriano Región codificante

Formación del complejo de pre inicio ❶

In vitro
❷
1. TFIID (a través de TBP) se une a secuencia TATA

2. Posteriormente, TFIIA y TFIIB ❸

3. A continuación, TFIIF ligada a la RNApol

❹
4. Por último, TFIIE y TFIIH (desnaturalización de la complejo de
pre inicio
doble hebra)
(Orden: DABFEH)
❺

5. Escape del promotor

Factores generales de transcripción
Nombre Función
TFIID Reconoce la secuencia TATA
Subunidad TBP Reconoce otras secuencias de DNA próximas al punto de inicio de la
Subunidad TAF transcripción
Regula la unión al DNA por la TBP

TFIIB Reconoce el elemento BRE

Posiciona a la polimerasa en el sitio exacto de inicio de la transcripción

TFIIF Estabiliza la interacción de la RNApol con TBP y TFIIB

Participa en la unión de TFIIE y TFIIH

TFIIE Atrae al TFIIH

TFIIH Desnaturaliza el DNA en el sitio de inicio de la transcripción

Fosforila CTD
Libera RNApol del promotor

Resumen de las pag 394-395

Formación del complejo de pre inicio
In vivo

Se requieren proteínas adicionales, entre ellas

B
el complejo Mediador A D F E H

In vivo, el DNA se encuentra compactado en

forma de cromatina
Escape del promotor ❶

• Síntesis abortiva previa (igual que

en procariotas)
❸

• Fosforilación de la polimerasa en la
porción CTD (diferente a
procariotas)
❹

• Liberación de los TFII y avance la ❺

RNApol
Fase de extensión

• Factores de extensión se unen a la

porción CTD de la RNApol

• P-TEFb quinasa, SPT5, THIIS

 Procariotas
Procesamiento del RNA
Transcripción

Eucariotas Traducción

Intrones Exones

Unidad de transcripción
Transcripción
Transcripto primario

Capuchón 5´ Procesamiento • Incluye modificaciones en el RNA

Poliadenilación 3’ del RNA
Capuchón Splicing

Exportación • Éstas ocurren en el núcleo antes de la

traducción en el citoplasma
Traducción
Adición del capuchón 5’

• Una guanina se adiciona al extremo 5’

del RNA

• Enlace inusual 5’ – 5’ con 3 fosfatos

• Ocurre al inicio de la transcripción

Poliadenilación del extremo 3´

• Mediada por la enzima poli-A

polimerasa

• Son añadidos aprox 200 A al extremo 3’

del mRNA sin necesidad de un molde
Splicing

Promotor Terminador
exón intrón exón intrón exón intrón exón DNA

Transcripción

Transcripto
primario de RNA

Splicing

mRNA maduro

Exportación al citoplasma
Bibliografía
Biología Molecular del
Gen de James Watson