VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS

Pablo Richter

Introducción

La validación de un método analítico tiene como objetivo establecer por medio de estudios científicos, que un método tiene las características de desempeño que son adecuadas para cumplir los requerimientos de las aplicaciones analíticas pretendidas. Una vez validada una metodología analítica, el laboratorio de ensayo deberá fijar los intervalos de aceptabilidad para el control de calidad de cada una de las propiedades analíticas del método. Una metodología, aún cuando tenga el carácter de método estándar u oficial, debería ser validada antes de ser utilizada en forma rutinaria.

Introducción

Las propiedades analíticas que necesariamente deberán ser documentadas en un proceso de validación, son la siguientes: Precisión al nivel de replicabilidad y repetibilidad Exactitud Incertidumbre Intervalo de linealidad Límite de detección del método

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Límite de cuantificación del método

Campo de Aplicación

El presente documento corresponde a una guía técnica que define los términos y los procedimientos relativos a la validación de un método de análisis. En todas las actividades de laboratorio es esencial uniformar las definiciones y los métodos de cálculo para los diferentes términos. En este documento se establecen las definiciones relativas a propiedades de métodos analíticos que se utilizarán en los laboratorios de rutina del país.

Definiciones
 CURVA DE CALIBRACIÓN: Representación gráfica bidimensional, que muestra la variación de la señal analítica con la concentración del analito. Esta última se obtiene al graficar el valor obtenido de la señal analítica (valor absoluto, altura, área, etc.) versus las concentraciones de los estándares respectivos.  SENSIBILIDAD: Propiedad analítica que se define como la capacidad de un método para discriminar entre concentraciones (cantidades) semejantes de analito. La sensibilidad de un método analítico corresponde a la pendiente de la curva de calibración. Algunas veces se expresa informando la razón entre el valor de señal obtenida a una concentración dada de estándar.

basados en el cuociente entre la magnitud de la señal de la medida y el ruido de fondo producido por el instrumento o por el blanco analítico.Definiciones  LIMITE DE DETECCIÓN: Existen distintas formas de definir los límites de detección de un método de acuerdo a criterios estadísticos. . a) Límite de Detección IUPAC: Concentración de analito que origina una señal que puede diferenciarse estadísticamente de un blanco analítico.

Límites de detección y cuantificación ¿Cuál es la menor concentración que podemos detectar o cuantificar con este método de análisis? S= Señal Razón señal ruido S/n LD => S/n = 3 n = ruido LC => S/n = 10 .

un instrumento puede detectar con una fiabilidad definida y que es estadísticamente diferente de la respuesta correspondiente al ruido de fondo obtenido por el instrumento. Esta mínima concentración produce una señal detectable con una fiabilidad definida. incluyendo separaciones y pretratamientos.b) Límite de Detección Instrumental (LDI): Corresponde a la concentración mínima de un compuesto analizado que. sin la presencia de la matriz. Límite de Detección del Método (LDM): Corresponde a la concentración mínima de un compuesto que puede ser detectada en una matriz real. la cual es tratada siguiendo todas las etapas del método completo. estadísticamente diferente a la señal producto del blanco obtenido en las mismas condiciones. c) .

incluyendo separaciones y pretratamientos.Definiciones  LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN DEL MÉTODO (LCM): Corresponde a la concentración mínima de un analito que puede ser cuantificada en una matriz real.  INTERVALO DE LINEALIDAD O DE DETERMINACIÓN: Corresponde al intervalo de concentración más fiable de medida para la determinación analítica del analito. . Este intervalo esta comprendido entre la concentración correspondiente al del LCM y la concentración máxima que entrega el límite de linealidad. Esta mínima concentración produce una señal cuantificable con una nivel de confianza definido. la cual es tratada siguiendo todas las etapas del método empleado.

Dispersión de estos resultados alrededor de su media.Definiciones  PRECISIÓN: Grado de concordancia de un grupo de resultados entre sí. “within run precision”) Repetibilidad (Intermediate precision. “within lab reproducibility”) Reproducibilidad (Reproducibility conditions. “between lab precision”) . Existen tres formas de plantear un estudio de precisión:    Replicabilidad (Repeatability.

en diferentes laboratorios. en el mismo laboratorio. y al menos una de las siguientes condiciones es diferente: analista. en el mismo laboratorio. diferente instrumento. Se define como la dispersión de resultados originados por aplicaciones del mismo método a alícuotas de la misma muestra. en un corto intervalo de tiempo. . igual o diferente día. para determinar el mismo analito. Se define como la dispersión de resultados originados por aplicaciones del mismo método a alícuotas de la misma muestra.   Esta propiedad analítica no se determina de forma rutinaria en un procedimiento de validación. Repetibilidad: Forma de plantear el estudio de precisión. día.Niveles de Precisión  Replicabilidad: Forma de plantear el estudio de precisión. para determinar el mismo analito. Reproducibilidad : Forma de plantear el estudio de precisión. y en las siguientes condiciones: diferente analista. instrumento. Sólo es aplicable a ejercicios de intercomparación. Se define como la dispersión de resultados originados por aplicaciones del mismo método a alícuotas de la misma muestra. para determinar el mismo analito. por el mismo operador y con las mismas herramientas analíticas.

Definiciones  EXACTITUD: Expresa la cercanía entre el valor que es aceptado. La exactitud se expresa en términos de error. generalmente como error relativo (Ver más adelante SESGO). . como un valor de referencia (material de referencia certificado) y el valor encontrado (valor promedio) obtenido al aplicar el procedimiento de análisis un cierto número de veces. dividido por la concentración de sustancia agregada.  RECUPERACIÓN: Corresponde a la diferencia (en porcentaje) entre la concentración medida de un analito en una muestra fortificada (a la que se le ha agregado una cantidad conocida de estándar) y la concentración medida en la misma muestra sin fortificar.

Definiciones  INCERTIDUMBRE: Se puede distinguir entre los siguientes conceptos: Incertidumbre genérica: Duda acerca de la composición química de un objeto o una muestra. Incertidumbre específica: Intervalo de valores en que puede encontrarse un resultado. una media de los mismos y el valor considerado verdadero. SELECTIVIDAD: Capacidad de un método analítico para originar resultados que dependan de forma exclusiva del analito. a) b)  . para su identificación y/o cuantificación. Es lo contrario a información.

5 = 0.8 mg / Kg .9 – 2.8 mg / Kg Valor certificado: 2.Error vs Incertidumbre Resultado de un análisis: 2.4 mg / Kg Incertidumbre: 0.9 ± 0.5 ± 0.2 mg / Kg Error: 2.

PROCEDIMIENTOS .

y . dentro del intervalo de concentraciones en que se estima que estarán las muestras a analizar. Posteriormente determinar la señal analítica que origina cada una de las soluciones.I. Calibración del método 1) Procedimiento para construir una Curva de calibración Preparar una batería de estándares de concentración conocida en el solvente apropiado.

donde C es la masa o la concentración de la sustancia a ser cuantificada y S e Yb la pendiente y ordenada en el origen de la recta. respectivamente. A partir de la curva de calibración estimar la parte lineal. Calcular los coeficientes S. respectivamente. obtener la recta de calibración: Y = S C + Yb.  . descartando los puntos preliminarmente eliminados en la etapa anterior. Yb y r (coeficiente de correlación) para la curva de calibración. graficando los puntos experimentales disponibles y verificando visualmente si existe alguna desviación de la linealidad y aproximadamente a partir de qué valor ésta se manifiesta.05s.95s y LS= 1. Calcular también los límites inferior (LI) y superior (LS) a partir de los cuales los cuocientes (señal / masa) o (señal / concentración) indiquen que un punto está fuera del intervalo lineal LI = 0. Realizar una inspección preliminar.

repetir las etapas de b) a d). el procedimiento está terminado. hasta que ningún valor sea rechazado o considerado para el cálculo de la curva de calibración.  Inclusión o exclusión de nuevos valores en la curva: Si el examen hecho en c) indica que todos los puntos de la curva preliminarmente incluidos (o excluidos) lo han sido correctamente. incluyendo o excluyendo los puntos necesarios. En caso contrario. . si el correspondiente cuociente (señal / masa) o (señal / concentración) es menor que LI o mayor que LS) o si algún punto inicialmente excluido debería de ser considerado para el cálculo de la curva de calibración. Verificar si existe algún punto preliminarmente incluido en la curva de calibración que. por comparación con los límites de corte calculados en b) debería de ser excluido (o sea.

03 32.5 9.8 y 10.5 6. mM 0.EJEMPLO – Curva calibrado     Los siguientes datos son las áreas máximas relativas en cromatogramas de disoluciones patrón de metil vinil cetona (MVK): Determine la recta por el método de los mínimos cuadrados Una muestra dio una señal para MVK con un área relativa de 10.5 15.5 3.5 5.00 50. 10.5 1.5 Área relativa 3.00 44. Calcule la concentración de MVK en la muestra.02 9.03 21.00 2.97 39.5 4.20 . Conc.42 27.20 47.3. MVK. Calcule la precisión de esta determinación.1.5 8. Dos evaluaciones adicionales de la muestra dieron como resultado las siguientes áreas.5 7.

I. en este caso se mantiene constante la cantidad de muestra sintética y se agregan cantidades variables del estándar. (curva en presencia de matriz) . utilizar el método de la adición estándar de acuerdo a los siguientes procedimientos alternativos. luego enriquecer con estándar a diferentes niveles de concentración. a) Con muestra sintética: Utilizar una mezcla preparada en el laboratorio de todos los componentes de la matriz de la muestra sin el principio activo a determinar. se determine que hay interferencia de la matriz. Calibración del método 2) Adición de estándares Cuando en el proceso de calibración del método. Para preparar las soluciones.

9997 Área Curva Calibración Ác.00 300.00 y = 19162x + 4564.9982 Área 10000000 5000000 0 0.4 R2 = 0.00 100.00 Conc: (ng/ml) 50.00 200. Oxolínico en Matriz 5000000 4000000 3000000 2000000 1000000 0 0.7 R2 = 0.00 100. (ng/g) .00 150.00 200.Ácido oxolínico  Curva de Calibración de Estándar de ácido Oxolínico  Curva de Calibración de ácido Oxolínico en matriz Curva Oxolínico 15000000 y = 42084x .00 400.00 Conc.9036.

 . proceder a enriquecer las muestras con estándar a diferentes niveles de concentración. con el método a validar. en este caso se mantiene constante la cantidad de muestra tomada y se agregan cantidades variables del estándar.I. Calibración del método 2) Adición de estándares b) Con muestra: Cuando no es posible contar con una muestra sintética (o matriz blanco). Para preparar las soluciones. La ICH (International Conference Harmonization). recomienda preparar muestras independientes por triplicado a cada nivel de concentración. Determinar por duplicado la señal promedio del analito en la muestra. una vez conocida la señal promedio. trabajar directamente con una muestra real.

Enseguida en tres matraces de aforo de 10 ml se agrega una alícuta de 5 ml de muestra y respectivamente se agrega un volumen de 1.1 6.15 7.05 ejemplo adicion estándar.05 µA. Cu. Determinar la concentración de cobre en la muestra.EJEMPLO – Adición estándar  En una muestra de agua de mar se determina cobre por voltamperometría de redisolución anódica (ASV). 7. µA 4.99 10.15 µA. 6.xls . Las señales respectivamente obtenidas son: 4.99 µA y 10. 2 y 3 ml de solución estándar del analito de 10 µg/l.11 µA. Una alícuota de 5 ml de muestra es diluida en un matraz de 10 ml con agua destilada. µg/l 0 1 2 3 Señal.

Las propiedades cromatográficas del estándar interno deben ser tales que eluya muy cerca del analito pero aún así. o durante los procedimientos de derivatización. y la irreproducibilidad debida a las técnicas de transferencia y de inyección. a la pérdida durante la extracción.I.  Calibración del método 3) Uso de estándar interno Siempre que sea posible. debe emplearse un estándar interno (explicar diferencia con estándar subrrogate). puesto que esto minimiza los errores debidos a la adsorción en superficies. un homólogo del analito. se elegirá un compuesto que posea propiedades físicoquímicas similares a las del analito. particularmente en cromatografía. completamente resuelto de cualquier otra sustancia presente. idealmente. Si esto no es posible.  . Los estándares internos deben ser. a las pérdidas durante la evaporación del solvente.

13 0.0 10. Como estándar interno se utilizó pireno (C13). ppm Area BP Area estándar interno Area relativa 0.0 1100 5200 18000 59000 95000 8600 8000 12800 9100 7300 0.1 0. Conc.5 1.EJEMPLO – Estándar Interno Los siguientes datos de calibración han sido obtenidos en una determinación de benzopireno (BP) por GC-MS.41 6. BP.01 .65 1.0 5.48 13. Construya la curva de calibrado correspondiente.

00 100. Procedimiento para determinar la sensibilidad Una vez establecida la curva de calibración de acuerdo al procedimiento anterior.9997 Área Curva Calibración Ác.  Curva Oxolínico 15000000 y = 42084x .9982 Área 10000000 5000000 0 0.00 200.00 Conc: (ng/ml) 50.00 Conc.00 100. determinar la pendiente de la curva (S).7 R2 = 0. Oxolínico en Matriz 5000000 4000000 3000000 2000000 1000000 0 0. lo cual define la sensibilidad del método.00 y = 19162x + 4564.00 300.00 400.II.4 R2 = 0.00 200. (ng/g) .9036.00 150.

III. Procedimiento para determinar el límite de detección IUPAC  Medir la respuesta de al menos 10 blancos analíticos independientes. de los que se deduce la media YB y la desviación estándar σB. lo que se consigue por extrapolación gráfica en la curva de calibrado. De acuerdo a la IUPAC. el límite de detección es: YLD = YB + 3 σB  A una señal YLD le corresponde una concentración CLD. YLD Curva de Calibrado CLD El límite de detección debe expresarse en unidades de concentración .

60 3.0 16. se le añaden cantidades crecientes de quinina para preparar 7 muestras artificiales. 0.74. 0. 0. 0.69 y 0.70.71 8.74.71.0 12.73. ug/L Intensidad de Fluorescencia 1. al agua tónica sin quinina.68 10. 0. 0.72. 0.81 Determinar la sensibilidad y límite de detección del método ejemplo Limite deteccion quinina.52 4.0 20.0 2. se realizan 11 medidas repetidas del blanco (agua tónica en ausencia de quinina suministrada por el fabricante) y se obtiene los siguientes datos de intensidad de fluorescencia: 0. En otra serie de experimentos.0 8. En la primera. 0.71.0 4.70.0 6. obteniéndose los siguientes resultados: Quinina.51 2.60 6.xls .73.75.EJEMPLO – LD  Para estudiar la sensibilidad de un método de determinación de quínina en agua tónica se han realizado dos series de experimentos. 0.

catálogo del equipo.).  Procedimiento para la determinación del Límite de Detección Instrumental (LDI) Agregar una alícuota de solución estándar de analito en “agua pura” o en el solvente adecuado. . Se determina la señal analítica Yb y su desviación estándar (σB) de acuerdo a la siguiente expresión: σB = ( (Xi. razón señal / ruido.IV. etc. de manera de obtener una concentración correspondiente a 2-10 veces el LDI estimado (obtener el límite estimado alternativamente de valores reportados en literatura.promedio)2/n-1)1/2  La expresión para calcular el límite de detección instrumental es la siguiente: YLD = 3 σB n ≥10 Después utilizando la curva de calibrado se obtiene la concentración en el límite de detección. Someter esta solución a medición (n replicas independientes de la solución) en el sistema instrumental.

cambiar de muestra. Si por el contrario la concentración es demasiado elevada.V.  Procedimiento para la determinación del Límite de Detección del Método (LDM) Determinar el límite de detección del método en una muestra real. para situarla entre 2 y 10 veces el límite de detección estimado. según el siguiente procedimiento 1) Si la concentración del compuesto analizado se sitúa entre 2 y 10 veces la concentración del límite de detección estimado. 2) Separar a lo menos 10 alícuotas de la muestra utilizada para evaluar el LDM y realizar todas las etapas implicadas en el método analítico. . pasar a la etapa siguiente. Si la concentración es demasiado baja. ajustar mediante la adición de un estándar la concentración del compuesto de interés.

V. Procedimiento para la determinación del Límite de Detección del Método (LDM) A partir de los resultados obtenidos. calcular la media y la desviación estándar (σB) de las replicas: La expresión para calcular el límite de detección del método es la misma anterior. 3) .

determinar: a) b) Ordenada en el origen de la línea de regresión: YB Desviación estándar de la regresión (se obtiene con cualquier programa estadístico): σy/x σy/x (yi n ˆ 2 yi) 2 1) 2) Donde: yi: Valor observado del punto en la ordenada ŷi: Valor teórico del punto obtenido por la predicción del modelo de regresión n: Número de puntos de la curva de calibración (n ≥ 4) c) Pendiente de la curva de calibración: S . sobre matriz de muestra. en un intervalo de concentraciones cercano al cero (lo más bajo que pueda ser detectado) (n ≥ 4) . a través de la construcción de una curva de calibración Construir curva de calibración.VI. Procedimiento para la determinación del límite de detección de un método analítico. A partir de la curva.

a través de la construcción de una curva de calibración 3) Calcular Límite de detección: Señal del Límite de detección: yLD = yB + 3 sy/x Concentración del Límite de detección se calcula haciendo uso de la ecuación de la curva de calibración. .VI. Procedimiento para la determinación del límite de detección de un método analítico.

Procedimiento para la determinación del Límite de Cuantificación del Método (LCM)  El límite de cuantificación del método se determina siguiendo el mismo procedimiento que el usado para el LDM pero finalmente en la expresiones respectivas el factor 3 se sustituye por 10.VII. .

a través de la construcción de una curva de calibración  El límite de cuantificación del método. pero finalmente la expresión que debe considerarse es: Señal del Límite de cuantificación: yLCM = yB + 10 sy/x Concentración del límite de cuantificación a través de la curva de calibración . Ej: Procedimiento para la determinación del límite de cuantificación de un método analítico. se determina siguiendo el mismo procedimiento que el usado para el LDM.VIII. a través de una curva de calibración.

Para realizar los cálculos que requiere el método e informar los resultados. utilizar las unidades apropiadas y el número de cifras significativas necesarias. mismo instrumento y mismo día. separar 10 alícuotas de una muestra y aplicarles el método completo.  . La replicabilidad se expresa como la desviación estándar relativa o coeficiente de variación (CV). Procedimiento para calcular replicabilidad (Precisión) la  Dentro del intervalo de 2 a 10 veces el límite de cuantificación del método. respetando las siguientes condiciones: mismo analista.IX.

Procedimiento para calcular repetibilidad (Precisión) la  Dentro del intervalo de 2 a 10 veces el límite de cuantificación del método. separar 10 alícuotas de una muestra y aplicarles el método completo.X. Para realizar los cálculos que requiere el método e informar los resultados. utilizar las unidades apropiadas y el número de cifras significativas necesarias. Los resultados se expresan como desviación estándar relativa o coeficiente de variación (CV).  . cambiando al menos una de las siguientes condiciones: el analista. el instrumento o el día.

utilizando el test de varianzas homogéneas . puede ser necesario hacer el cálculo estadístico para la equivalencia con el material de referencia. %). Vo = media de los valores obtenidos aplicado el método. aplicar el método analítico completo “n” veces (n = 3-10 replicas) a una muestra en la cual el parámetro a medir esté certificado por un organismo reconocido (material de referencia certificado). aplique la siguiente ecuación: E(%) (Vo Vc) 100 Vc  Vc = Valor certificado.XI.  Procedimiento para determinar la exactitud Dentro del intervalo de determinación. Para determinar el error relativo del método (E.  Además.

en un caso entre 2 y 10 veces el LCM y en el otro. Recuperación en una matriz real con 2 niveles de concentración distintos. la determinación de la exactitud puede llevarse a cabo de acuerdo a una de las siguientes posibilidades. Procedimiento para determinar la exactitud Si no existe o no está disponible el material de referencia. entre 20 y 30 veces el LCM. ya sea éste de referencia o validado previamente. con un método absoluto Comparar el método con un método independiente. a lo menos 2 laboratorios que utilicen 2) 3) 4) . Los niveles de concentración deben estar.XI. Intercomparación entre metodologías validadas. y en siguiente orden de prioridad: 1) Comparación del método en la misma muestra.

XII. . Procedimiento para determinar la recuperación  Analizar una muestra real y en paralelo analizar la misma muestra a la que se ha agregado una concentración dada de estándar. La concentración final debe estar dentro del rango de determinación del método. Calcular la recuperación de acuerdo a la siguiente expresión: (Cs C) 100 Ca Recuperación (%) Cs = concentración de la muestra fortificada C = concentración en la muestra no fortificada Ca= concentración agregada.

el grupo de expertos en calidad y metrología de “Nordtest (2004)” ha propuesto el modelo para el cálculo de la incertidumbre en el que la repetibilidad (P. que en algunos casos esta metodología subestima la incertidumbre de las mediciones. Este enfoque puede resultar muy útil cuando se estudia o cuantifica componentes de incertidumbres individuales. Procedimiento para el cálculo de la incertidumbre Cuantificación de los componentes de incertidumbre. intermedia) de las mediciones se combina con la estimación del sesgo del método. dado que es difícil poder incluir todas las posibles contribuciones de incertidumbre en tal enfoque. Sesgo: Diferencia entre el valor medio medido a partir de una serie de resultados de ensayo y un valor de referencia aceptado (un valor certificado o nominal). usando el control de calidad existente y los datos obtenidos en la validación del método analítico. la probabilidad de incluir todas las contribuciones de incertidumbre se maximiza. • En este contexto. sin embargo. . • Una forma común de presentar las diferentes contribuciones a la incertidumbre de la medición total es usar los diagramas de causa y efecto. • Se ha demostrado.XIII. Así.

participación en rondas interlaboratorios o ensayos de recuperación. La manera más común de estimar los componentes del sesgo son: el uso de material de referencia certificado. Procedimiento para el cálculo de la incertidumbre En este plano. . Intermedia) del método (urep) y la incertidumbre derivada del sesgo (usesgo).XIII. un laboratorio puede combinar dichos componentes individuales en 2 tipos de incertidumbre: incertidumbre derivada de la repetibilidad (P.

n = número de datos. t = Coeficiente de student para un 95% de nivel de confianza. Para realizar el cálculo de U.XIII. Cálculo de incertidumbre repetibilidad del método (urep): urep = *t (0. Procedimiento para el cálculo de la incertidumbre Cálculo de Incertidumbre Expandida (U). . n 1) n Donde: = Desviación estándar al nivel de repetibilidad. se deben determinar previamente las dos incertidumbres estándares antes expuestas.95.

participación en rondas interlaboratorios o ensayos de recuperación .XIII. Procedimiento para el cálculo de la incertidumbre Cálculo de incertidumbre derivada del sesgo (usesgo): usesgo = Donde: (sesgo) 2 (uCER) 2 sesgo = el valor puede ser determinado alternativamente por medio del análisis de un material de referencia certificado. u(CER) = Incertidumbre del material de referencia certificado o del patrón de referencia (valor certificado) utilizado en el ensayo de recuperación .

Una Incertidumbre expandida (U) se calcula de una incertidumbre estándar combinada (u) y un factor de cobertura k usando: U = k x u. . considerando un factor de recubrimiento igual a 2: U= 2 (urep) 2 (usesgo) 2 Incertidumbre Expandida (U): Cantidad que define un intervalo alrededor del resultado de una medición que se espera que abarque una gran parte de la distribución de valores que se podrían atribuir razonablemente al mensurando. Procedimiento para el cálculo de la incertidumbre Finalmente la incertidumbre expandida (U) del proceso analítico. se expresa combinando ambas incertidumbres antes mencionadas. para un cierto nivel de confianza.XIII.

El sesgo del método fue determinado a través de un ensayo de recuperación. tolueno.5%. o) en una muestra de agua.0 o-XIL µg/g O 11.2 Tolueno µg/g O 9.0 R 11.0 .0 R 11.5 (m+p)-XIL µg/g O 25. con los siguientes datos (O: valor promedio obtenido.0 R 11. El estándar de calibración corresponde a una solución en metanol que certifica que las concentraciones de los compuestos son las nominales ± 0.1 R 11. etilbenceno y xilenos (m+p.EJEMPLO – Calculo incertidumbre  Determinación de BTEX Se lleva a cabo una determinación de benceno.0 R 11.9 E-Bz µg/g O 11. R: valor de referencia): Benceno µg/g O 10.

96 13.14 31.19 12.xls .67 43.17 31.33 43.14 32.59 13.Determinación de BTEX En la validación del método analizaron separadamente 8 alícuotas de una muestra real obteniéndose las siguientes concentraciones: Nº µg/g BEN µg/g TOL µg/g ET-BEN µg/g (m+p)-XIL µg/g o-XIL 1 2 3 4 5 6 7 8 43.15 44.17 42.20 48.21 31.27 48.91 12.64 44.80 31.15 13.62 48.03 14.63 47.42 43.41 48.91 31.57 42.07 13.70 32.22 44.67 45.36 31.68 44.61 43.80 Ejemplo incertidumbre.60 43.25 44.29 48.52 43.41 43.44 48.06 12.56 47.

.

39. (c) Determine el límite de detección del método. Para la determinación analítica de nitrofurantoína en formas farmacéuticas se añaden cantidades crecientes de la droga de la droga en dimetilformamida (DMF). 0. 251. 249.11 (a)Determine la Sensibilidad del método.12 1. Las respuestas instrumental obtenidas son: 0. gelatina etc. 0.5 Respuesta Instrumental 0.015.010. 0.89 1. (b) Determine la exactitud del método (error relativo) e indique si hay interferencia por parte de los excipientes de la formulación.012.11 0. 250. Una porción de 10 mg de muestra artificial se agrega en un matraz de aforo de 1 litro y se afora con DMF. 0. al no disponer de un material de referencia certificado. En seguida se mide la respuesta instrumental (señal analítica) de cada solución y se obtienen los siguientes datos: CONCENTRACIÓN mg/l 0 0. A la solución resultante se le determina su respuesta instrumental dando un valor de 0. 0. 250.445 0.012.058 1 2 4 6 8 10 0. 249.272.05.010.225 0.67 0. . 0. 248.009. 0. Por otra parte.08 12 15 20 1.01 0.99.015.98. (d) Determine la precisión del método (desviación estándar relativa). talco. almidon.008.35. colorante.44. 10 muestras que contienen sólo la mezcla de excipientes (sin nitrofurantoína) son analizadas independientemente por el método. 250.00.015.36.) y 250 mg de nitrofurantoina pura. 0.1.98.010. 248. se prepara una muestra artificial de tableta que contiene 750 mg de excipientes comunes (estereato de magnesio. 10 porciones de una muestra real de tabletas de nitrofurantoína se analizan independientemente por el método analítico y se obtienen los siguientes resultados (mg): 250. 0.98. 250.1 1.

.Rechazo de datos dudosos   Un dato dudoso difiere excesivamente de la media. xq es el valor dudoso. Primero se calcula un valor de Qexp y se rechaza el dato cuando el valor es mayor que el valor estadístico (Qcrit)  Qexp xq xn xm ax xm in . La prueba estadística Q se utiliza para decidir si un dato debe retenerse o rechazarse. xn es el valor más cercanoal valor dudoso.

Valores de Qcrit Número de Datos 3 4 5 Qcrit a 90% de probabilidad 0.829 0.941 0.642 Qcrit a 95% de probabilidad 0.710 6 0.765 0.560 0.625 .970 0.

5 (x)=15.61 9. .5 Qcrit Qexp Qexp 0.5 Qcrit .25 (x2)=48.642 para 5 valores y a 90% de probabilid ad.1 0. 2.25 9.3 2.1 3.89 6.61 Para las mediciones replicadas que aparecen al lado.60 3.1 3.5 3. 3.5 3. aplique la prueba Q para el valor 2.5 2.Ejemplo: Prueba Q Valor (x)  x2 12. se retiene el valor.61 10.5. Use un Qcrit a 90% de confianza.

1.98. 2. 3. Al analizar esta muestra diez veces de manera independiente se obtuvieron los siguientes valores en ng/ml: 2. llevan a un par de jugadores para hacer la prueba del doping. 2. cuál es la exactitud y precisión del método que utiliza el laboratorio.09. Previamente el laboratorio que hizo el análisis validó su método con muestras certificadas de efedrina en orina.xls .08 ng/ml.01.464)    ejemplo prueba Q. 2. Indique: cuál es el objeto. 2.14.05 ± 0.09.21. 2. 2.05. En la orina se determinan si hay substancias prohibidas (en este caso efedrina). al final de cada partido. Qcrit (tabla (n=10) 0.EJEMPLO – Dato dudoso En el mundial de fútbol de Alemania 2006. Esta tenía un contenido certificado de 2.08.99.91. el analito y la muestra para el análisis. 1.

xls . de forma tal que el comportamiento del método en el tiempo pueda ser trazable.Cartas de Control  Una vez que ha sido validada una metodología y se comienza con su aplicación en análisis de rutina. EJEMPLO carta control turbiedad. todos los controles de calidad relacionados con las propiedades analíticas deben ser documentadas a través de la construcción de Cartas de Control.

GLOSARIO .

que no contiene el analito. generalmente artificial. Proceso de medición con fines cualitativos. a partir de los resultados analíticos  . toda partícula o todo factor que afecte el resultado generado por un método analítico Determinación (cuantificación): proceso para conocer la cantidad /concentración de un analito (o familia) de una muestra que es analizada Detectar: Acción de un instrumento para producir una señal y transducirla en una magnitud física fácilmente medible. El blanco analítico es un elemento de control de calidad utilizado en la rutina analítica el que se procesa como una muestra más en un análisis Interferente: Todo compuesto.        Identificar: proceso analítico cualitativo que implica un reconocimiento del analito. a través de las características químicas o fisicoquímicas del mismo o de su producto de reacción Caracterizar: acción de establecer los aspectos diferenciales de un objeto o sistema. Teóricamente no debería originar señal. todo elemento. Alícuota: porción bien definida (masa. volumen) de la muestra Muestra: es la parte (alícuota) del objeto que contiene los analitos Análisis: someter una muestra a un proceso analítico para conocer información química sobre la misma Blanco analítico: Muestra. si lo hace ésta se denomina “señal blanco”.

asignación de valores a materiales o evaluación de métodos analíticos Material de referencia certificado: son materiales de referencia que tienen certificados uno o varios valores de sus propiedades (con sus incertidumbres específicas) obtenidos por procedimientos especiales (Ejemplo: ejercicio de intercomparación) bajo la responsabilidad de un organismo competente e independiente Ejercicio de intercomparación: conjunto de procesos de medida (método) llevados a acabo por diferentes laboratorios. Técnica: principio científico que se utiliza para extraer información analítica. Implica el empleo de un técnica (instrumento)   Método absoluto: es aquel método de cuantificación calculable que no se basa en el empleo de estándares analíticos Procedimiento: descripción pormenorizada de una metodología analítica Material de referencia: Material o sustancia. que se emplean para calibración. Es un conjunto de operaciones especificas para caracterizar cuali y/o cuantitativamente a un analito (o familia) en una determinada muestra. homogéneas y estables. bajo la coordinación de un ente competente. para analizar alícuotas de la misma muestra para determinar los mismos analitos     . en el cual una o más de sus propiedades están suficientemente bien establecidas. Implica el empleo de un instrumento Método Analítico: corresponde a la Adaptación específica de una técnica analítica para un propósito de medición seleccionado.

M.Miller. 115-118. 3rd edition. Miller and J.N. Nordtest Report 537. Protocole pour la validation d'une méthode d'analyse en chimie DR-12-VMC. Statistic for Analytical Chemistry. España.C. Spectrochim. Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. Edition 2000-03-01 . IUPAC. A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics. Springer-Verlag Ibérica. EURACHEM Guide. 1978. LGC. Barcelona. Acta 33 B.         Norma ISO 9000: 2000. Centre d'expertise en analyse environnementale du Québec. England. Norma IRAM 301:2000-Norma ISO/IEC 17025: 1999. 2004. Guide EURACHEM.Referencias  J. 1993. pag. Ellis Horwood Limited edition. Editor: H. Chichester. 242. Holcombe.CITAC Guide: 2000. Handbook for Calculation of Measurement Uncertainty in Environmental Laboratories. 1999. The Fitness for Purpose of Analytical Methods. Teddington: 1998. Valcarcel. Limit of Detection. Principios de Química Analítica.

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