Manual de procedimientos de electroforesis para proteínas y ADN

SECCIÓN 4

PROCEDIMIENTOS PARA LA ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS

4.1 OBJETIVO

Realizar el proceso de electroforesis vertical discontinua denaturante de proteínas.

4.2 MATERIALES

4.2.1 Cámara de electroforesis vertical y accesorios.

4.2.2 Micropipetas de 20, 200 y 1000 µL.

4.2.3 Vaso de precipitación de 500 mL de capacidad.

4.2.4 Flotadores para microtubos de 1,5 mL.

4.2.5 Lámina extensible de parafina.

4.2.6 Gradillas de plástico.

4.2.7 Puntas descartables de polipropileno con capacidad para 20, 200 y 1000 µL.

4.2.8 Solución de poliacrilamida al 30% (Anexo A).

4.2.9 Buffer Tris-HCL 1,5 M pH= 8,8 (Anexo A).

4.2.10 Buffer Tris-HCL 0,5M pH= 6,8 (Anexo A).

4.2.11 Dodecilsulfato de sodio (SDS) al 10% (Anexo A).

4.2.12 Persulfato de amonio (APS) al 10% recién preparado (Anexo A).

4.2.13 N,N,N',N'-Tetrametiletilendiamina (TEMED solución stock).

4.2.14 Agua bidestilada.

4.2.15 Buffer de resolución Tris-Glicina (Anexo A).

4.2.16 Butanol-agua (Anexo A).

4.3 ENSAMBLAJE DE LA CÁMARA DE ELECTROFORÉSIS

4.3.1 El procedimiento para el ensamblaje de la cámara de electroforesis varía de acuerdo al modelo del
equipo, en consecuencia el investigador deberá seguir las instrucciones que recomienda el fabricante.

4.3.2 Debido a que la mayoría de las cámaras de electroforesis parten del mismo principio técnico, hemos
representado gráficamente un modelo que permite orientar al investigador en el ensamblaje de este
equipo (Figuras N° 1-4).

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4.3.3 En general, una cámara de electroforesis vertical puede tener los siguientes componentes:

4.3.3.1 Dos placas de vidrio del mismo grosor y anchura, de acuerdo al fabricante. En algunos modelos, la
altitud de los vidrios es diferente (uno con mayor altitud que el otro). En general, el tamaño de los
vidrios es variable, dependiendo de la dimensión de la cámara.

4.3.3.2 Dos espaciadores, que son dos placas largas de iguales dimensiones hechas de un material flexible
pero resistente (generalmente poliestireno o teflón). La función de los espaciadores es determinar el
grosor del gel.

4.3.3.3 Un peine, cuyos dientes pueden variar en número, tamaño y grosor. Tiene el mismo grosor de los
espaciadores y está confeccionado del mismo material. Sirve para moldear los pocillos donde se
colocarán las muestras

4.3.3.4 Un soporte o base: dispositivo que sirve para permitir el ensamblaje de los vidrios con los espaciadores,
a través de unas serie de prensas que ejercen presión y mantiene fijo todo el sistema

4.3.3.5 El tanque de electroforesis: recipiente que contiene el buffer de corrida superior e inferior. En algunos
sistemas, este tanque contiene electrodos permanentes a lo largo de sus bases listos para ser
conectados. En otras cámaras existe una tapa que contiene los electrodos, de tal manera que el
investigador ya no tiene contacto directo con el buffer durante el proceso de electroforesis.

4.3.3.6 Fuente de poder: aparato que tiene por función proveer de energía eléctrica a la cámara de
electroforesis. El voltaje, el amperaje y el tiempo, pueden ser regulados de acuerdo a las necesidades
del investigador.

Es importante señalar que la cámara de electroforesis ya ensamblada deberá estar ubicada sobre
una superficie totalmente plana y nivelada. Este paso es importante en el momento en el que se
vierte la solución del gel dentro de la cámara, ya que se evita el derrame de la solución y la generación
de matriz desnivelada. Esta última podría generar la distorsión del perfil de las bandas de las proteínas
al final de la electroforesis.

4.4 PREPARACIÓN DE LOS GELES DE POLIACRILAMIDA

4.4.1 La electroforesis de proteínas descrito en este manual corresponde al sistema discontinuo denaturante.
Es discontinuo porque está conformado por dos geles de poliacrilamida de resolución y empacamiento
que presentan diferente concentración, composición y pH. Ambos geles se encuentran unidos pero
limitados por una fase de separación visible al trasluz. Debido a que en estado líquido ambos geles
pueden mezclarse fácilmente, deben ser preparados por separado esperando la total polimeración
del primero para continuar con la polimerización del otro. El gel de empacamiento generalmente se
localiza en la parte superior del sistema formando los pocillos donde se depositarán las muestras. El
gel de resolución por su parte forma el cuerpo del gel por donde migrarán y se separarán las proteínas.

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Cátodo Anodo
Vidrio grande

Peine
Vidrio chico
Tanque de electroforesis
vertical

Espaciadores

Soporte Fuente de Poder

Voltímetros

Ganchos o prensas
Reguladores de
voltaje

Base de jebe

Electrodos Interruptor

Figura N° 1. Componentes de una cámara de electroforesis vertical

Peine
Peine

Espaciadores Área para el gel

1 - 5 cm de empacamiento

Vidrio
grande
Área para el gel
Vidrio chico
de resolución

Figura N° 2. Modo de ensamblar los vidrios y los espaciadores de una cámara de electroforesis vertical

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1. Ensamblar vidrios y espaciadores y colocar sobre un

soporte 4. Remover el butanol con agua y añadir gel
de empacamiento
Peine

Ganchos o
prensas

Soporte

Presión

Base de jebe
2. Añadir gel de resolución 5. Colocar peine y dejar polimerizar

Peine

3. Añadir butanol
Dejar gelificando
6. Retirar el peine. Colocar sobre mesa nivelada

Figura N° 3. Procedimiento para el ensamblaje de un modelo de cámara de electroforesis vertical.

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Cátodo Ánodo

Buffer de
electroforesis

Fuente de poder
Tanque de electroforesis
vertical

Figura N° 4. Sistema de electroforesis vertical ensamblado

4.5 PREPARACIÓN DEL GEL DE RESOLUCIÓN

4.5.1 Fundamento teórico

El gel de resolución es la matriz de poliacrilamida donde las moléculas de ADN o proteínas, van a
migrar generando un perfil de bandas o patrón electroforético. Dicho patrón varía de acuerdo al peso
molecular de cada una de las moléculas y a la concentración del gel mismo.

4.5.2 Procedimiento

4.5.2.1 Asegurarse de usar guantes durante la manipulación de las soluciones.

4.5.2.2 Marcar el límite hasta donde la matriz de acrilamida será vertida, trazando una línea horizontal en el
vidrio con un marcador indeleble. Para saber la ubicación exacta de la línea, colocar el peine entre
ambos vidrios y medir entre uno y cinco centímetros (dependiendo del tamaño de la cámara) por
debajo de los dientes del peine (Figura N° 2)

4.5.2.3 Realizar la preparación del gel de resolución a una concentración de acuerdo a las necesidades,
mezclando los componentes en el orden que se indica en el Anexo A.

4.5.2.4 Aproximadamente 5 mL de solución deberán ser preparados en caso de trabajar con geles pequeños
de aproximadamente 8 - 10 cm de ancho por 5 - 7 cm de largo y un espesor de 0,7 - 0,8 mm. La
concentración de poliacrilamida a usar dependerá de las necesidades del operador.

4.5.2.5 Una vez finalizada la preparación de la solución, añadir los catalizadores APS y TEMED uno por uno,
tratando de mezclar cada reactivo de manera uniforme en todo el volumen.

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4.5.2.6 Agregar un volumen de la solución de poliacrilamida entre las placas de vidrio hasta la línea trazada.
Posteriormente, añadir una capa de butanol-agua (aproximadamente 100 µL) sobre la solución de
poliacrilamida para evitar el ingreso de moléculas de oxígeno que retarden la polimerización.

4.5.2.7 Dejar polimerizar a temperatura ambiente por 15 a 30 minutos, usando como control polimerización
la solución de poliacrilamida remanente.

4.5.2.8 Una vez formado el gel, descartar la capa de butanol y lavar la parte superior del gel varias veces con
agua destilada hasta eliminar completamente los restos de acrilamida no polimerizada y butanol.

4.6 PREPARACIÓN DEL GEL DE EMPACAMIENTO

4.6.1 Fundamento teórico

El gel de empacamiento es la matriz de poliacrilamida que tiene como característica retener a las
proteínas manteniéndolas uniformes antes que ellas migren hacia el gel de resolución. Este proceso
permite mejorar la resolución de las proteínas en la electroforesis.

4.6.2 Procedimiento

4.6.2.1 Asegurarse de usar guantes durante la manipulación de las soluciones.

4.6.2.2 Mezclar los componentes del gel (Anexo A).

4.6.2.3 Una vez finalizada la preparación de la solución, agitar moderadamente sin hacer burbujas a fin de
asegurar que el TEMED y el APS se distribuyan uniformemente en todo el volumen de la solución.

4.6.2.4 Agregar la poliacrilamida entre los vidrios de la cámara y sobre el gel de resolución ya polimerizado.
Inmediatamente después, colocar el peine entre ambos vidrios secando con papel toalla los restos
de poliacrilamida que lleguen a derramarse.

4.6.2.5 Dejar polimerizar la poliacrilamida a temperatura ambiente por 15 a 30 minutos usando como control
de la polimerización la solución de poliacrilamida que quedó remanente en el tubo.

4.6.2.6 Una vez formado el gel, retirar el peine cuidadosamente y lavar todos los pocillos ya formados con
chorro suave de agua destilada.

4.7 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA BIOLÓGICA

4.7.1 Objetivo

Someter las muestras de proteínas a procesos químicos y físicos que permitan su óptimo
fraccionamiento en la electroforesis vertical.

4.7.2 Materiales

4.7.2.1 Micropipetas para volúmenes de 20 µL, 200 µL y 1000 µL.

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4.7.2.2 Tubos de polipropileno de 1,5 mL y 15 mL de capacidad.

4.7.2.3 Guantes.

4.7.2.4 Cocinilla de asbesto.

4.7.2.5 Vaso de precipitación de 500 mL.

4.7.2.6 Gradilla para tubos de 1,5 mL.

4.7.2.7 Buffer de la muestra (Anexo A).

4.7.2.8 Puntas de 20 µL, 200 µL y 1000 µL.

4.7.3 Principio del procedimiento

La preparación de la proteína consiste en un proceso fisico-químico, en el cual se rompen enlaces

peptídicos y puentes disulfuro gracias a la acción de detergentes iónicos, reactivos reductores y altas
temperaturas, los que en conjunto consiguen desnaturalizar la proteína hasta su estructura
primaria.

4.7.4 Procedimiento

4.7.4.1 Mezclar la proteína con el buffer de la muestra concentrada por cuatro veces (4x) en proporción 3:1
(tres partes de la muestra y una de buffer).

4.7.4.2 Asegurar la tapa de los tubos con lámina extensible de parafina y someter la muestra a una temperatura
de 100° C durante 5 minutos. Para tal efecto colocar los viales en una gradilla para microtubos dentro
de un recipiente o vaso de precipitación con agua hirviendo.

4.7.4.3 Controlar la temperatura con un termómetro adecuado.

4.7.4.4 Finalizado el procedimiento, retirar los tubos del vaso de precipitación y centrifugarlos por diez segundos
a 12 000 rpm. Mantenerlos en una gradilla para microtubos dentro de un recipiente con hielo hasta
el proceso de electroforesis.

4.8 ELECTROFORESIS

4.8.1 Objetivo

Fraccionar las proteínas de acuerdo a su peso molecular en una matriz de poliacrilamida usando un
campo eléctrico.

4.8.2 Materiales

4.8.2.1 Micropipetas para volúmenes de 20 µL.

4.8.2.2 Cámara de electroforesis vertical y accesorios.

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4.8.2.3 Fuente de poder.

4.8.2.4 Buffer de electroforesis para proteínas (Anexo A).

4.8.2.5 Guantes.

4.8.2.6 Gradilla para tubos de 1,5 mL.

4.8.2.7 Puntas para micropipeta de 20 µL.

4.8.2.8 Envase con lejía al 10% para descarte de puntas.

4.8.3 Principio del procedimiento

En el proceso de la electroforesis se realizará la separación de las proteínas a analizar, de acuerdo a

su peso molecular. Dicha distribución dependerá de la concentración del gel de resolución con el
que se esté trabajando.

4.8.4 Procedimiento

4.8.4.1 Todo el procedimiento requiere el uso de guantes a fin de evitar la degradación de las moléculas por
la acción de las proteasas presentes en la mano.

4.8.4.2 Sumergir el sistema contiendo los geles polimerizados en un tanque conteniendo buffer de
electroforesis o de resolución para proteínas 1X. Dicho tanque lleva dos electrodos: uno positivo y
otro negativo (frecuentemente representados por colores rojo y negro, respectivamente) que serán
conectados a una fuente poder (Figuras N° 1 y 5). Al momento de sumergir los geles en el tanque,
asegurarse que los pocillos del gel estén totalmente cubiertos por el buffer.

4.8.4.3 Mediante el uso de puntas de hasta 20 µL y 30 µL de capacidad proceder a depositar cuidadosamente

la muestra en los pocillos evitando la contaminación del pocillo contiguo.

4.8.4.4 Considerar el uso de un marcador estándar de proteínas para la medición del peso molecular de la
muestra. Dicho marcador debe ser sometido a los mismos tratamientos de la proteína, excepto cuando
se trate de un marcador previamente teñido en que el que se obviará el uso del buffer de la
muestra.

4.8.4.5 Una vez finalizada la colocación de las proteínas en cada pocito del gel, cubrir el tanque con la tapa
y conectar los cables correspondientes de los electrodos en la fuente de poder.

4.8.4.6 Encender la fuente de poder y proceder a seleccionar el voltaje y amperaje correspondientes.

4.8.4.7 Para el cálculo del voltaje es importante conocer la distancia en centímetros del gel desde la parte
superior hasta la parte inferior de la matriz. La distancia multiplicada por voltios (8V - 15 V) permitirá
determinar el voltaje total. El voltaje óptimo dependerá de la naturaleza de la molécula de ADN que
se piensa separar, en consecuencia, se recomienda estandarizar este procedimiento.

4.8.4.8 El valor del amperaje o corriente eléctrica (medida en amperios o miliamperios) dependerá de la
fuerza iónica del buffer. En el caso de trabajar con buffer Tris-Glicina 1X (Ver solución stock, Anexo A),
el valor recomendado es de 25 a 30 miliamperios.

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4.8.4.9 Realizar la electroforesis hasta que el frente de corrida (visualizado como una línea azul por el colorante
del buffer) haya llegado a los límites de la parte inferior del gel.

4.8.4.10 Finalizada la electroforesis proceder al desmontaje del equipo empezando con desconectar los
electrodos de la fuente de poder ya apagada y removiendo el sistema que contiene el gel de
poliacrilamida.

4.8.4.11 Levantar lentamente uno de los espaciadores de tal manera que se vaya realizando la separación de
los vidrios que contienen el gel.

4.8.4.12 Separar el gel de empacamiento del gel de resolución realizando un corte transversal.

4.8.4.13 Hacer una pequeña muesca en una de las esquinas del gel, a fin de que sirva de orientación para
ubicar el orden en que fueron cargadas las muestras.

4.8.4.14 Remover el gel. Para realizar este proceso se requiere de mucho cuidado pues el gel es muy frágil
y puede romperse con facilidad especialmente cuando se seca o es de baja concentración. Para
desprender el gel del vidrio remojarlo nuevamente con buffer de electroforesis o agua destilada y
usar uno de los espaciadores a manera de espátula para levantarlo por una de las puntas. Coger el
gel cuidadosamente (usar guantes) y luego sumergirlo en un envase conteniendo el colorante azul
brillante de coomasie.

4.8.4.15 El buffer de electroforesis puede ser devuelto a su frasco original para su posterior uso, pudiendo ser
reciclado hasta cinco veces, después de los cuales se deberá preparar una nueva solución dado que
puede afectar el tiempo de corrida de la prueba.

4.8.4.16 Los vidrios, los espaciadores y el tanque deberán ser lavados con abundante agua y detergentes
especiales que puedan ser fácilmente removidos. Posteriormente, enjuagarlos con agua destilada y
secarlos a temperatura ambiente o en una estufa a 37°C.

CÁTODO ÁNODO
e- e-
e- e-

a
Buffer de
resolución
c Gel de
b d empacamiento
e
e- Gel de
e- resolución

Buffer de
resolución
e- e- e- e- e- e- e- e- e-

e-

Figura N° 5. Interior de una cámara de electroforesis vertical en operación: a) Durante la colocación de la muestra en el pocillo del
gel, b) Después de aplicar un voltaje determinado el cual genera el empacamiento uniforme de las proteínas, c, d y e) las proteínas
migran hacia el ánodo y se distribuyen en el gel a manera de bandas.
(e-)= electrones

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4.9 COLORACIÓN Y VISUALIZACIÓN DE LAS PROTEÍNAS USANDO AZUL BRILLANTE DE

COOMASIE

4.9.1 Objetivo

Visualizar las proteínas en el gel de poliacrilamida.

4.9.2 Materiales

4.9.2.1 Frasco oscuro de 1 L para el colorante azul brillante de coomasie.

4.9.2.2 Recipiente para colorear el gel.

4.9.2.3 Solución de trabajo de azul brillante de coomasie R-250 (Anexo A).

4.9.2.4 Solución de decoloración rápida (Anexo A).

4.9.2.5 Solución de decoloración lenta (Anexo A).

4.9.2.6 Solución glicerol-metanol (Anexo A).

4.9.2.7 Agua destilada.

4.9.2.8 Guantes.

4.9.3 Principio del procedimiento

El proceso de coloración se basa en la atracción electrostática del enlace peptídico de las proteínas
sobre grupos de ácido sulfónico que son los que tiñen la proteína de color azul. Asimismo, las fuerzas
de Van der Waals y las interacciones hidrofóbicas participan en este proceso de unión mecánica.
Este paso permite la visualización de proteínas en un rango de sensibilidad entre 0,5 µg y 2 µg.

4.9.4 Procedimiento

4.9.4.1 Todo el procedimiento requiere el uso de guantes a fin de evitar algún tipo de contacto con los
reactivos.

4.9.4.2 Sumergir el gel de poliacrilamida en un envase de vidrio o teflón, conteniendo solución de trabajo de
azul brillante de coomasie en un volumen que permita cubrir completamente el gel. Dejar incubando
con un suave movimiento rotatorio por 15 a 20 minutos. Es importante precisar que el tiempo de
incubación dependerá del grado de sensibilidad requerida en la prueba, de la concentración del gel y
de la sensibilidad del azul brillante de coomasie propiamente dicho. En ese sentido, una máxima
sensibilidad de coloración puede ser obtenida incubando por ejemplo un gel al 5% en 1 hora y un gel
al 10% por 2 horas.

4.9.4.3 Evitar la coloración del gel por más de dos horas, debido a que el colorante puede quedar retenido
fuertemente en el gel generando un fondo oscuro por sobretinción que impediría la visualización de
las proteínas.

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4.9.4.4 Culminado el tiempo de incubación, depositar el colorante en su frasco original.

4.9.4.5 Cubrir el gel teñido con solución de decoloración rápida e incubar por 30 minutos. Eliminar la solución
decolorante rápida y añadir un segundo volumen de la misma solución hasta apreciar las primeras
bandas. Acto seguido, eliminar la solución de decoloración rápida y añadir la solución decolorante
lenta. Dejar destiñendo a movimiento constante por lo menos una hora, cambiando la solución por
una nueva cuantas veces sea necesario. Seguir destiñendo hasta que las bandas de las proteínas
puedan ser apreciadas claramente.

4.9.4.6 Finalizada la remoción del azul de coomasie, descartar el decolorante usado y lavar el gel. Para
poder analizar los resultados es recomendable secar el gel usando un equipo secador a vacío o
manualmente.

4.9.5 Secado manual de geles de poliacrilamida

4.9.5.1 Remojar el gel teñido en el reactivo glicerol-metanol por 2 horas con un movimiento de rotación
suave.

4.9.5.2 Posteriormente, remojar una lámina de celofán de aproximadamente 15 x 15 cm en agua y colocarlo

encima de un bastidor cuyo tamaño dependerá del tamaño del gel. Seguidamente, colocar el gel
sobre el celofán y observar que no se formen burbujas.

4.9.5.3 Cubrir el gel con un segundo celofán previamente remojado en agua y presionar el sistema tipo
"sandwich" con grapas en todos los lados. Dejar secar por 2 días.

4.9.5.4 Remover las grapas y desprender de la placa de vidrio el celofán que contiene el gel.

4.9.5.5 Cortar y guardar el exceso de celofán.

Nota importante: el celofán debe ser hidrofílico y no plastificado

4.10 Interpretación de resultados

4.10.1 Las proteínas fijadas en geles de poliacrilamida y teñidas con azul brillante de coomasie se observan
como bandas azules de diferentes pesos moleculares.

4.10.2 El peso molecular de una proteína se mide en kilodaltons (Equivalente a 1 000 Daltons) y puede ser
determinado comparando la banda con un patrón de proteínas estándar de peso conocido denominado
marcador de peso molecular.

4.10.3 La distribución de las proteínas depende de la concentración del gel, por lo tanto, el operador deberá
seleccionar el marcador de peso molecular más adecuado.

4.10.4 Algunas proteínas suelen migrar anómalamente y muchas veces aparecen con un mayor peso del
esperado; ello se debe a que algunas de ellas presentan modificaciones postraduccionales en su
estructura como residuos de glicosilación, fosforilación y acetlización, las cuales podrían retardar la
migración de las muestras.

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4.10.5 Las proteínas degradadas (desnaturalización de las proteínas por causa de un agente químico
catalizador, ejm: proteasas) suelen dejar manchas difusas en todo el frente de corrida y a veces
suelen confundirse con proteínas de menor peso molecular (Figuras N° 6 y 7)

1 2 3 4 5 6 7

Figura N° 6. Electroforesis de proteínas totales del virus de la fiebre amarilla en geles de poliacrilamida al 10%. Carril 1 al 5:
concentraciones de 1, 2, 3, 4 y 5 µg de proteína. Carriles 6 y 7: proteínas degradadas.

1 2 3 4 5
97,4 -
66 -

45 -

31 -

21,5 -

Figura N° 7. Electroforesis de proteínas purificadas (Carriles 2 y 4) y proteínas totales de Leishmania brazilensis.

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4.11 FACTORES QUE AFECTAN LA MIGRACIÓN DE LAS PROTEÍNAS

Los principales factores que afectan la migración de las proteínas durante la electroforesis son las
siguientes:

4.11.1 Fuerza del campo eléctrico (E)

Es la fuerza que determina el movimiento o migración de la proteína a través del campo eléctrico. Su
unidad de medición es voltios/cm y es por esa razón que la tasa de migración de una proteína puede
ser alterada cambiando tanto la distancia comprendida entre los electrodos (cm) como el potencial
eléctrico del sistema (Voltaje). Del mismo modo, los valores de E dependen de la fuerza direccional
(Fa) y de la carga neta de la molécula (Q). Puede ser calculada a través de la siguiente fórmula:

E = Fa/Q
E= v/d
Donde:
Fa = Fuerza direccional.
v = voltios.
d = distancia de los electrodos (en centímetros)
Q = carga en (coulomb)

4.11.2 Temperatura

Depende básicamente del voltaje de la electroforesis, la concentración de sales (poder de

conductancia) del buffer y del pH. Un aumento en la temperatura del buffer genera el efecto "sonrisa"
o smiling (Figura Nº 8).

Figura Nº 8. Gel de electroforesis en SDS-PAGE para proteínas mostrando el efecto "sonrisa" o smiling. Figura extraída de Internet.
(http://www.cas.vanderbilt.edu/bsci11a/protein-electro/protein-electro.htm).

4.11.3 Carga neta de la molécula

La presencia de aminoácidos de diferentes grupos bioquímicos otorga a una determinada proteína

una carga neta totalmente diferente a otra, compuesta por diferentes grupos de aminoácidos. Debido

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a que en la electroforesis, las muestras son sometidas a un determinado campo eléctrico, la migración
de las proteínas en el gel dependerá básicamente de su carga y no de su peso molecular. Para evitar
este efecto, es importante igualar la carga neta de todas las proteínas aprovechando sus propiedades
anfotéricas. En ese sentido, el SDS evita el efecto de diferencias de carga entre las proteínas, a fin de
favorecer la separación de ésta únicamente por su peso molecular.

4.11.4 Tamaño y forma de la molécula

4.11.4.1 Las proteínas tienen características moleculares que actúan como factores intrínsecos durante la
electroforesis alterando su migración y generando bandas de diferentes tamaños, que no
necesariamente van acorde al peso molecular real del polipéptido. Ciertas modificaciones
postraduccionales, multimerización y formación de complejos con otro tipo de moléculas generan
modificaciones en el tamaño de la proteína dando pesos moleculares aparentes en el momento del
análisis.

4.11.4.2 Debido a la dificultad de reconocer la naturaleza bioquímica de una proteína no caracterizada,

perviamente deberá estandarizarse diversas condiciones experimentales a fin de optimizar el análisis
de la proteína por electroforesis.

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