Universidad Mariano Gálvez de Guatemala

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Diciembre, 2021 Diciembre, 2021 Mes, año de autorización

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Práctica No. 3 Preparación de soluciones buffer

(Práctica adaptada para educación a distancia)
(Tiempo para el cual está diseñada la práctica: 180 min)
Introducción

Los procesos que se dan dentro de un sistema vivo frecuentemente requieren de un

medio ambiente altamente regulado. Uno de los factores que debe regularse de manera
muy cercana es el pH. Las moléculas involucradas en un proceso dado usualmente
tienen grupos cargados que cumplen funciones clave, que puede cambiar drásticamente
en un ambiente de pH distinto. Para lograr controlar esto, los organismos poseen
sistemas de soluciones buffer, o amortiguadoras, que permiten que el pH del ambiente
cambie muy poco, logrando llevar a cabo los procesos biológicos sin contratiempos.

El estudio de estos procesos puede requerir reproducir una solución buffer, o un

sistema buffer, dentro del laboratorio. Para ello es necesario preparar soluciones que
cumplan con el requisito de soportar adiciones de ácidos o bases fuertes, en cantidades
razonables, sin experimentar un cambio en el pH de la solución. En esta práctica, el
estudiante calculará las cantidades de reactivos requeridos para la preparación de
soluciones buffer, o amortiguadoras, específicas.

Objetivos/Competencias

Mediante la práctica, investigación y observación, el estudiante será capaz de:

1. Describir el comportamiento químico de un sistema buffer o amortiguador que le

permite moderar los cambios del pH.
2. Considerar la concentración total de las especies dentro de un sistema buffer o
amortiguador como parte de sus propiedades clave.
3. Enumerar y describir los principales sistemas buffer o amortiguador en el cuerpo
humano, y describir las funciones que desempeñan.
4. Valorar la contribución de los diferentes sistemas buffer o amortiguador dentro del
organismo a los procesos bioquímicos del mismo.
5. Determinar las concentraciones de los compuestos requeridos dentro de un
sistema buffer o amortiguador aplicando la fórmula de Henderson Hasselbach.
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Antecedentes

Casi todos los procesos biológicos dependen del pH del entorno en el que se dan. Un
pequeño cambio en el pH puede producir grandes cambios en la velocidad de los
procesos. Esto se debe, no necesariamente a que el ion H+ esté involucrado
directamente, si no que las moléculas involucradas tienen grupos ionizables con valores
de pKa característicos y con un papel característico en el proceso en cuestión. Es por
ello por lo que el control del pH en el ambiente en el cual ocurre el proceso debe
controlarse estrictamente. Las células y los organismos suelen mantener un pH en el
citosol celular muy cerca de 7, manteniendo a las moléculas en su estado iónico óptimo
para sus funciones. El fluido extracelular también debe tener un pH regulado, lo cual se
logra por medio de las soluciones amortiguadoras biológicas.(Nelson et al., 2021)

Una solución amortiguadora puede definirse como aquella que se resiste a cambios
en pH ante la adición de pequeñas cantidades de ácido o base fuerte. Usualmente, un
sistema amortiguador, también llamado buffer o tampón, es una mezcla de un ácido débil
con su baje conjugada. La acción amortiguadora se da debido a dos reacciones en
equilibrio que se da, con presencia tanto de un donador de protones como de su aceptor
correspondiente. Al añadir protones o iones hidronio, la razón de las concentraciones
entre el ácido débil y su base conjugada cambia muy poco, dando como resultado un
cambio muy leve en el pH de la solución. (Nelson et al., 2021)

La capacidad de amortiguación se da gracias al equilibrio de dos reacciones

reversibles ocurriendo dentro de una solución, con casi igual concentración de donantes
de protones y su aceptor de protones conjugado, como se muestra en la Figura 1. En el
momento que se agregan iones hidronio o hidroxilo a la solución amortiguadora, el
resultado es un pequeño cambio en la razón de las concentraciones relativas del ácido
débil y su anión, provocando un cambio pequeño en el pH. Cada par conjugado posee
una zona característica de pH dentro del cual es un amortiguador eficiente. (Nelson et al.,
2021)

Figura 1. Sistema buffer del ácido acético y acetato. El sistema es capaz de absorber tanto iones H +
como OH- a través de la reversibilidad de la disociación del ácido acético. Adaptado de (Nelson et al.,
2021)
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Considere la siguiente reacción en equilibrio entre un par conjugado de ácido y base.

El cambio de concentración de cualquier componente en una reacción en equilibrio
requiere un cambio de concentración del resto de componentes para mantener el
equilibrio, expresado en su constante de equilibrio, Keq. (Devlin, 2011)

Ácido conjugado ⇌ base conjugada + H+

[𝐻 +][𝑏𝑎𝑠𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑗𝑢𝑔𝑎𝑑𝑎]
𝐾𝑒𝑞 = 𝑬𝒄𝒖𝒂𝒄𝒊ó𝒏 𝟏
[á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝑐𝑜𝑛𝑗𝑢𝑔𝑎𝑑𝑜]

Si ambos lados de la Ecuación 1 se divide entre el término [H+]Keq, se obtiene:

1 1 [𝑏𝑎𝑠𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑗𝑢𝑔𝑎𝑑𝑎]
∗
= ∗ 𝑬𝒄𝒖𝒂𝒄𝒊ó𝒏 𝟐
[𝐻 ] 𝐾𝑒𝑞 [á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝑐𝑜𝑛𝑗𝑢𝑔𝑎𝑑𝑜]

Si se toma el logaritmo de cada lado, resulta:

1 1 [𝑏𝑎𝑠𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑗𝑢𝑔𝑎𝑑𝑎]
𝑙𝑜𝑔 = 𝑙𝑜𝑔 + 𝑙𝑜𝑔 𝑬𝒄𝒖𝒂𝒄𝒊ó𝒏 𝟑
[𝐻 +] 𝐾𝑒𝑞 [á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝑐𝑜𝑛𝑗𝑢𝑔𝑎𝑑𝑜]

Dado que pH = log 1/[H+] y pK = log 1/Keq, entonces la ecuación se convierte en:

[𝑏𝑎𝑠𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑗𝑢𝑔𝑎𝑑𝑎]
𝑝𝐻 = 𝑝𝐾 + 𝑙𝑜𝑔 𝑬𝒄𝒖𝒂𝒄𝒊ó𝒏 𝟒
[á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝑐𝑜𝑛𝑗𝑢𝑔𝑎𝑑𝑜]

La Ecuación 4 se conoce como la Ecuación de Henderson-Hasselbach, y es una forma

conveniente de relacionar el pH de una solución con las cantidades relativas de los
componentes en una solución amortiguadora. Es de hacerse notar que cuando la razón
entre las concentraciones de la base y el ácido conjugados se acerca a 1:1, el pH se
acerca al pK de la reacción en cuestión. (Devlin, 2011)

La capacidad amortiguadora de una solución también depende de las concentraciones

tanto del ácido como de la base conjugados. A mayor concentración de base conjugada,
más iones hidronio puede absorberse, y mientras más ácido conjugado haya presente,
mayor cantidad de iones hidronio puede absorberse. (Devlin, 2011)

Pre-laboratorio
1. ¿A qué se refieren los términos ácido conjugado y base conjugada?
2. ¿Qué es el pKa?
3. Considerando la ecuación de Henderson Hasselbach, ¿por qué el pH de mejor
amortiguación de un par conjugado es alrededor de su pKa?
4. ¿Qué es la capacidad amortiguadora de un sistema buffer?
5. ¿Por qué es importante tomar en cuenta la capacidad amortiguadora en el
funcionamiento de un sistema amortiguador?
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Materiales y equipo
Recursos Educativos
• Singleton, T. L. (2018). Preparation of Solutions and Reagents.
Schizosaccharomyces Pombe, 1–7. doi:10.1007/978-1-4939-7546-4_1
• Video “Buffers”, MIT OpenCourseWare. Disponible en
https://www.youtube.com/watch?v=XR_0k8JIawY
Procedimiento
Primera Parte: Preparación de soluciones
1. Lea el artículo Preparation of Solutions and Reagents, que se le facilitará.
(Singleton, 2018)
2. Responda las siguientes preguntas en su reporte
a. ¿Por qué es importante practicar la preparación de soluciones en el
laboratorio? ¿Qué implicaciones tiene la preparación imprecisa de las
soluciones?
b. Defina el término molaridad. ¿Por qué debe considerarse cada soluto por
separado?
c. ¿Qué es el peso fórmula?
d. Describa la preparación de una solución al 2% de cloruro de sodio. ¿Qué
ventaja tiene esta preparación sobre la molar? ¿Desventaja?
e. Indique las diferentes formas en que puede expresarse la concentración en
relación con masa/volumen. ¿Dónde ha visto usted que se usan?
f. ¿Qué significa el factor X cuando se trata de la concentración de una solución?
g. Defina el término de solución madre, e indique por qué es útil usarlas.
Segunda Parte: Soluciones buffer
Observe el video de MIT OpenCourseWare sobre soluciones amortiguadoras en el
enlace que se facilita. Tome en cuenta que el video está en inglés, así que tome su
tiempo. (MIT OpenCourseWare, 2014)
1. Enlace: https://www.youtube.com/watch?v=XR_0k8JIawY
2. Haga un resumen de la explicación que brindan en el video, usando el
experimento que realizan como ejemplo.
3. Concluya: ¿Cómo funciona la solución amortiguadora para soportar los cambios
de pH por adición de ácido o base fuerte?
Post-laboratorio

Resuelva la hoja de trabajo que se le facilita.

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Bibliografía
Devlin, T. M. (Ed.). (2011). Textbook of biochemistry: With clinical correlations (7th
ed). John Wiley & Sons.
MIT OpenCourseWare. (2014). Buffers.
https://www.youtube.com/watch?v=XR_0k8JIawY
Nelson, D. L., Cox, M. M., & Hoskins, A. A. (2021). Lehninger Principles of
Biochemistry (8th Ed). McMillan Learning.
Singleton, T. L. (2018). Preparation of Solutions and Reagents. En T. L. Singleton
(Ed.), Schizosaccharomyces pombe (Vol. 1721, pp. 1-7). Springer New York.
https://doi.org/10.1007/978-1-4939-7546-4_1
Anexo

Describa al menos tres sistemas amortiguadores, orgánicos o inorgánicos, que

funcionan en el organismo, indicando el tejido de funcionamiento.