Departamento de Ciencias de la Salud Química analítica I

PRÁCTICA #6. Preparación de un buffer y su acción

amortiguadora

Un sistema tampón es una mezcla de un ácido débil o

Objetivo
Preparar una solución buffer
y observar su acción
amortiguadora en material
biológico.
Referencia
3 The Preparation of Buffers
at Desired pH
Reactivos
Fosfato monopotásico,
Fosfato dipotásico
No son sustancias o mezclas
peligrosas.
una base débil y su sal (base conjugada o ácido
conjugado, respectivamente) que permite soluciones
para resistir grandes cambios de pH a la adición de
pequeñas cantidades de iones hidrógeno (H+) o iones
hidróxido (OH-). ¿Qué significa esto? Significa que un
tampón ayuda a mantener un pH casi constante a la
adición de pequeñas cantidades de H+ o OH- a una
solución.
En la definición de un sistema tampón, debe tenerse
en cuenta que se hace referencia a ácidos débiles y
bases. ¿Cuál es la distinción entre un ácido débil y
fuerte o una base? Los ácidos fuertes (por ejemplo,
HCl) y bases (por ejemplo, NaOH) casi completamente
se ionizan en agua:

Albúmina de huevo Muchos ácidos y bases, sin embargo, no sufren

Hidróxido de sodio
Ácido clorhídrico
ionización completa en agua. Estos compuestos,
entonces, se llaman ácidos y bases débiles. Muchos
ácidos orgánicos son ácidos débiles. Los ácidos
débiles no se disocian completamente en el agua. La
disociación de un ácido orgánico se describe
mediante la siguiente reacción:

Obsérvese que el producto no protonado de la

reacción de disociación ácida se denomina una base conjugada. Recordemos la
definición de ácidos y bases de Bronsted-Lowry. Un ácido se define como un donador de
protones (H+), mientras que la base es el aceptor H+. En un conjugado ácido/par de
bases tal como el indicado anteriormente, el ácido débil siempre tiene un H+ mayor que

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su base conjugada. Del mismo modo, una base débil tendrá un H+ menor que su ácido
conjugado.

Se puede analizar la fuerza de un ácido débil. Esto significa que se puede determinar la
cantidad de ion de hidrógeno liberado. Para ello, se puede utilizar la siguiente expresión:

Ka se define como la constante de disociación

Entre mas alto el valor de Ka, mas fuerte es el ácido. Debido a que los valores de Ka varían
en un amplio rango, usualmente se expresan usando una escala logarítmica:

El ion hidrógeno es uno de los iones más importantes en los sistemas biológicos. La
concentración de este ion afecta a la mayoría de los procesos celulares. Por ejemplo, la
estructura y función de la mayoría de las macromoléculas biológicas y las tasas de la
mayoría de las reacciones bioquímicas están fuertemente afectadas por [H+]. La escala de
pH se ha ideado como un método conveniente para expresar la concentración de iones
hidrógeno. El pH se ha definido como el logaritmo negativo de la concentración de iones
de hidrógeno:

La ecuación de Henderson-Hasselbalch proporciona una manera conveniente de pensar

sobre los tampones y el pH:

Si uno estuviera examinando la disociación del ácido acético, la relación Henderson-

Hasselbalch, entonces, sería:

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La ecuación de Henderson-Hasselbalch puede usarse para determinar si una solución

acuosa de un par conjugado ácido/ bases funciona como un tampón. Si la concentración
del ácido débil es igual a la de su base conjugada, la relación de estos dos componentes
es una. Cuando este es el caso, la ecuación de Henderson-Hasselbalch se reduce a

porque el log (1) es igual a cero.

Cuando el pH de la solución es igual al pKa del grupo ionizante, la solución está
funcionando a una capacidad amortiguadora máxima (mejor buffer). Una solución acuosa
de un par conjugado ácido/bases funciona como un buen buffer cuando la relación de la
base conjugada a ácido débil oscila entre 1:9 y 9:1. Sustituyendo estas proporciones en la
ecuación de Henderson-Hasselbalch, se encuentra que esta solución acuosa funciona
como un buen tampón cuando el pH de la solución está dentro de aproximadamente una
unidad de pH del pKa del grupo ionizante.

porque el registro (1/9) es -0.999 y el registro de (9/1) es +0.999.

Para describir un sistema amortiguador se requieren dos parámetros:
1.- El pH de la solución amortiguadora: El cual indica la región de concentración
del ión hidrógeno en el cual se realiza el efecto amortiguador (alrededor de +/-
una unidad de pH amortiguador).
2.- La capacidad Amortiguadora: Es decir, la capacidad de resistir la adición de
ácido o base con poco cambio de pH, lo que se relaciona de manera directa con la
concentración de todos los constituyentes del amortiguador.

Procedimiento
I. Preparación de solución amortiguadora: Se trata de un sistema tampón de dos
componentes que significa que el ácido débil y su base conjugada se añaden por
separado. ¿Cómo se preparan 100 ml de un tampón fosfato 0,01 M, pH 7,40, a partir
de soluciones madre de 0,10 M de KH2PO4 y 0,25 M de K2HPO4? pKa de
KH2PO4=7,20.
1. Utilice la ecuación de Henderson Hasselbalch para encontrar la relación de A- a HA.
pH = pKa + log [A-] / [HA]
7.40 = 7.20 + log [A-] / [HA]
0.20 = log [A-] / [HA]

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1.58 = [A-] / [HA]

* Ya que [A-] / [HA] = 1.58, podemos decir que [A-] / [HA] = 1.58/1. En este caso [A-] =
1.58; [HA] = 1.
2. Calcule la fracción decimal (parte/total) de cada componente del búffer.
A-= 1,58 / (1,00+1,58) = 1,58 / 2,58 = 0,61 HA = 1.00 / 2.58 = 0.38
3. Encuentre la molaridad (M) de cada componente en el tampón simplemente
multiplicando la molaridad del tampón por la fracción decimal de cada
componente.
M A- = 0,01 M x 0,61 = 0,0061 M M HA = 0,01 M x 0,38 = 0,0038 M
4. Calcular los moles de cada componente en el buffer. Moles= Molaridad x Litros de
tampón
A-= 0,0061M x 0,1L = 6,11 x 10-4 moles HA = 0.0038M x 0.1L = 3.86 x 10-4 moles
5. Calcular el volumen de cada solución madre requerida para hacer el buffer
Litros de soln madre = moles del componente tampón / Molaridad del soln madre
LA- = 6.11x10-4 moles / 0,25M = 2.45x10-3 L = 2.45 mL
LHA = 3,86x10-4 moles / 0,10 M = 3,86x10-3 L = 3.87 mL
6. Para preparar este tampón, se utilizarían pipetas de tamaño apropiado para medir y
transferir cada componente a un matraz aforado de 100 ml y llevar la solución al
volumen con H2O.

II. Acción amortiguadora del buffer preparado y un buffer biológico: Poner en una
gradilla dos series de tubos numerados del 1 al 6, seguir con las indicaciones dadas por
la siguiente tabla:
1. Realizar primero la medición del pH de las soluciones que se indican en el tubo 1 al
6 antes de agregar el HCl y el NaOH.
2. Después con el mismo potenciómetro determinar la capacidad amortiguadora de
cada solución midiendo el pH final después de la adición del ácido y la base fuerte.

# Tubo Solución pH inicial Adicionar pH final

1 10 ml agua destilada 4 gotas de HCl 0.1N
2 10 ml de buffer preparado 4 gotas de HCl 0.1N
3 10 ml de albúmina de huevo 4 gotas de HCl 0.1N
4 10 ml de agua destilada 4 gotas de NaOH 0.1N
5 10 ml de buffer preparado 4 gotas de NaOH 0.1N
6 10 ml de albúmina de huevo 4 gotas de NaOH 0.1N

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Cuestionario
1. ¿Por qué el agua destilada observa mayor alteración de pH?.
2. ¿Por qué considera que la albúmina de huevo debe tener propiedades
amortiguadoras?.
3. Qué sucede cuando en un sistema amortiguador la concentración molar de la sal y el
ácido que integran la solución son iguales?

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