tema 4: aplicaciones de las tinciones generales

Conceptos
Colorante: sustancia química que aumenta el contraste entre diferentes zonas de un tejido. Formado
por un cromóforo y un grupo auxocromo.
Cromóforo: conjunto de átomos de una molécula responsable de su color. Son sustancias/grupos
funcionales que tiene electrones capaces de absorber energía y excitarse, a diferentes longitudes de
onda.
- Dobles y triples enlaces de carbono
- Sistemas aromáticos
- Grupos Imino: NH=C
- Diazo N=N

Auxocromo: grupos que intensifican la acción del cromóforo, pueden unirse a ella posteriormente
- Metilos -CH2
- Halógenos: F, Cl, Br, I, At (astato), Ts (Teneso)
- Amino –NH2
Acidofilas: afinidad por lo ácido
Basófilas: afinidad por lo básico
Mordiente: fijadores del color

1. Clasificación de los colorantes.

1.1 Según su naturaleza química:
Naturales: Hematoxilina, carmín, safranina…
Artificiales: Eosina, derivados de anilina (aminobenceno) azul de metileno.
1.2 Según el color que da a la muestra:
Ortocromático: si tiñe de su mismo color
Metacromático: si tiñe de otro color (naranja de acridina ADNbc: verde ARN:rojo)
1.3 Según derivados del cromóforo

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1.4 Segun la naturaleza del auxocromo
Básicos: sales cuya base es la que aporta el color. Tiñen estructuras ácidas. P.e Azul de toluidina, azul
de metileno, hematoxilina
Ácidos: sal cuya parte ácida es la que aporta el color. Tiñen estructuras básicas (citoplasma, colágeno)
p.e eosina, fucsina
Neutros: la parte ácida y la básica pueden aportar color
Indiferentes: no se unen por afinidad química sino que se disuelven p.e negro sudan para lípidos

2. Mecanismos generales de tincion

2.1 Físico
Se relaciona con la solubilidad del colorante y la capacidad del tejido de adsorción
2.2 Histoquímico
Hay una reacción química entre el colorante y el tejido formándose un nuevo cromógeno de forma que
se forma un cromógeno.
2.3 Fisicoquímico
Formación de interacciones electrostáticas ( moléculas cargadas que se unen entre ellas), tensión
superficial…

3. Tinciones histológicas de conjunto

Hematoxilina-eosina: Barata, Buen contraste y Fácil de realizar
3.1 Preparacion del tejido
Fijación: Sirve cualquier fijador excepto los tetróxido de osmio
Desparafinar:
- Estufa 60º 3’
- Tres Baños en xilol agitando 2’
Rehidratar
- Etanol absoluto 2’ (x2)
- Etanol 96º 2’ (x2)
- Etanol 70º 2’ (x2) (opcional)
- Agua del grifo 2’
Tinción de nuestra elección
3.2 Hematoxilina-Eosina
Hematoxilina es básica con carga positiva tiñe el núcleo
Eosina es ácida con carga negativa tiñe el citoplasma
Hematoxilina: Palo azul de Centroamérica
- Debe ser oxidada: hemateína (natural o inducida)
- H de Harri: óxido de mercurio
- H de Mayer: yoduro sódica
- H de Carazzi: yodato potásico
- H fosfotungstica: permanganato potásico
- H Regaurd, ehrlich: se dejan oxidar/madurar 20-30 días sin producto
Aumentar su capacidad de tinción se le añaden sales metálicas

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3.3 Montaje
- Deshidratar en cubetas con alcohol creciente
- Xilol
- Medio resinoso (eukit…)
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- Se pone un cubreobjetos sin que queden burbujas