INTRODUCCIÓN

La oxidación microbiana es una de las principales reacciones que ocurren en los cuerpos de agua
naturales. La determinación de la demanda bioquímica de oxígeno (DBO) es una prueba
empírica en la que se utilizan procedimientos estandarizados de laboratorio para determinar
los requerimientos relativos de oxígeno de las aguas contaminadas, residuales y efluentes.

Esta prueba mide el oxígeno utilizado, a una temperatura determinada, durante un periodo de
incubación especifico, para la degradación bioquímica de materia orgánica (requerimiento de
carbono); puede medir también el oxígeno utilizado para oxidar las formas reducidas de
nitrógeno (requerimiento de nitrógeno) a menos que se impida la oxidación por medio de un
inhibidor, en aguas residuales domésticas, en condiciones normales, la nitrificación se
presenta después del quinto día de incubación, en muestras de aguas residuales se presenta
luego de ocho o diez días, sin embargo en efluentes que contienen una alta concentración de
bacterias nitrificantes, como las plantas de tratamiento biológico, se puede crear una demanda
mayor de oxígeno después de dos días.

En aguas residuales domésticas, el valor de la DBO a cinco días representa en promedio un 65

a 70% del total de la materia orgánica oxidable. La DBO requiere de cuidado especial en su
realización con el fin de obtener valores representativos confiables, al suponer la cantidad de
oxígeno consumido por los microrganismos vivos en la asimilación de la materia orgánica
presente en el agua; es necesario garantizar que durante todo el período del ensayo exista
suficiente oxígeno disuelto para ser usado por los organismos, además debe garantizarse que se
suministran las condiciones ambientales adecuadas para el desarrollo, proporcionando los
nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, tales como N y P y eliminar cualquier
sustancia toxica en la muestra.

También, durante la determinación, es importante que exista una población de microorganismos

en suficiente cantidad y variedad de especies, inoculo, un valor bajo en la población inicial puede
causar variaciones en el resultado de la DBO, al igual que el uso de una población no aclimatada,
por el tiempo adicional que requieren las bacterias para aclimatarse y reproducirse.

En aguas con alto contenido de algas se recomienda determinar la DBO incubando las botellas en
obscuro, puesto que la fotosíntesis provocada por las algas podría aumentar la cantidad de oxígeno
disuelto, y por tanto dar un resultado menor, e incluso negativo en la DBO, y se debe tener en cuenta
que los valores obtenidos en la obscuridad son mayores que los que ocurrirían fuera del laboratorio.

PRINCIPIO
 El método consiste en llenar con muestra hasta rebosar un frasco hermético de tamaño
especifico e incubarlo a temperatura controlada durante 5 días. El oxígeno disuelto (OD) se
mide antes y después de la incubación, la DBO5 se calcula mediante la diferencia entre el
oxígeno disuelto inicial y el final. Debido a que el oxígeno disuelto se determina
inmediatamente después de hacer la dilución, toda la captación de oxígeno, incluida la que
ocurre durante los primeros 15 minutos se incluye en la determinación de la DBO5.
.
RECOLECCIÓN, PRESERVACION Y ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS

En el caso de aguas naturales debe tomarse un mínimo de 1 L de muestra en un envase de

polietileno o vidrio. En el caso de aguas residuales deben tomarse mínimo 100 mL. No se debe
agregar ningún preservador a las muestras. Solo deben conservarse a 4ºC hasta su análisis. El
tiempo máximo de almacenamiento previo al análisis es de 24 h.

OBJETIVO

Determinar la demanda bioquímica de oxígeno en una muestra de agua residual.

MATERIAL Y EQUIPO UTILIZADO

- 1 Equipo de aireación
- 1 Medidor de oxígeno disuelto
- 1 Vaso de precipitados 1L
- 3 Botellas Winkler
- 1 Pipeta volumétricas de 1 Ml
- 1 Pipeta volumétricas de 2 mL
- 1 Pipeta volumétricas de 5 mL
- 1 Pipeta volumétricas de 10 mL
- 1 Pipeta graduada de 10 mL
- 2 Pipetas graduadas de 5 mL

REACTIVO
1. Solución amortiguadora de fosfatos
2. Solución de sulfato de magnesio
3. Solución de cloruro de calcio
4. Solución de ácido sulfúrico 0.1N.
5. Solución de NaOH 0.1N.
6. Reactivo Inhibidor de nitrificación 2-cloro-6-(triclorometil) piridina.

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES
1. Solución amortiguadora de fosfatos.
a. Pesar 8.5g de KH2PO4,
b. Pesar 33.4g de Na2HPO4·7 H2O,
c. Pesar 21.75g de K2HPO4
d. Pesar 1.7g de NH4Cl
e. Disolver los cuatro reactivos en 500 mL de agua
f. Aforar a 1L

2. Solución de sulfato de magnesio.

a. Disolver 22.5g MgSO4·7H2O en agua destilada y
b. Aforar a un litro

3. Solución de cloruro de calcio.

a. Disolver en agua destilada 27.5g de cloruro de calcio (CaCl2)
b. Aforar a 1L
4. Solución de cloruro férrico.
a. Disolver en agua destilada 0.25g de FeCl3·6H2O y
b. Aforar a 1L.

Preparación del agua de dilución. Adicionar 1 mL de cada uno de los reactivos 1, 2, 3 y 4 por
litro de agua previamente saturada de aire.

PROCEDIMIENTO

1. Neutralizar las muestras a un pH 6.5-7.5 con soluciones de H2SO4 ó NaOH. Si la DBO5 de

la muestra no excede de 7 mg/L no es necesario diluir. Llevar la muestra a 20ºC y
airear durante 30 minutos.
2. Colocar 1, 2 y 3 mL de muestra en 3 botellas Winkler y llenar con agua de dilución
dejando que se derrame.
3. Analizar de inmediato el oxígeno disuelto de una botella. Incubar las botellas a 22ºC
durante 5 días, manteniendo un sello hidráulico.
4. Después de 5 días determinar la cantidad de oxígeno disuelto en las muestras incubadas.
5. Si la DBO5 de la muestra excede 7 mg/L preparar una serie de diluciones de la
muestra con agua de dilución, llenando por cada una de ellas tres botellas Winkler. Para
diluir habrá que medir directamente los volúmenes apropiados de la muestra con una
pipeta volumétrica y llenar las botellas con agua de dilución aireada sin que se derrame,
pero hasta donde el tapón pueda colocarse sin dejar burbujas de aire. La tabla anexa
recomienda los volúmenes de muestra adecuados para diferentes tipos de agua.
6. Continuar con los pasos 3 y 4 de este procedimiento.
7. Cuando la muestra tiene pocos microorganismos como en los casos de muestras cloradas,
elevadas temperaturas o con un pH extremo debe inocularse con agua de dilución a la que
se agrega de 1 a 10 mL de agua residual doméstica por litro de agua de dilución. En
este caso se deberá corregir el valor de DBO5 determinando la DBO5 del agua de dilución
y restándolo a dicho valor.
 Tabla 1 Tabla con los volúmenes de muestra recomendados para diluciones de la
prueba de la DBO5

mL de muestra para una

Tipo de desecho DBO5 (estimada) en mg/l
botella Winkler de 300 mL
Desecho industrial
500-5000 0.2 - 0.5
concentrado
Aguas residuales
100 - 500 0.5 - 5.0
domésticas
Efluentes tratados 20 - 100 5.0 - 40.0
Aguas contaminadas de río 5 - 20 40.0 - 250.0

CÁLCULOS

Dónde:
ODT = Oxígeno disuelto final (incubadas en 5 días) del blanco, mg/L
ODI= oxígeno disuelto inicial, mg/L
ODF= oxígeno disuelto en las muestras incubadas en 5 días, mg/L
Vb = Volumen de la botella Winkler, generalmente 300 mL
Vm = Volumen de muestra, mL

La demanda bioquímica de oxígeno respirométrica (DBO) mide la cantidad de

oxígeno consumido por las bacterias al oxidar la materia orgánica en una muestra de
agua.

MATERIAL Y EQUIPO

- Botellas de DBO

- Probeta graduada

- Tapones herméticos

- Barra agitadora

- BOD Track II

REACTIVOS

- Sobre de solución de nutrientes

- Hidróxido de potasio (KOH)

EQUIPO

- Equipo automático BOD Track II

PROCEDIMIENTO

1. Airear agua destilada durante una hora para saturarla de oxígeno

2. Homogeneizar la muestra a analizar
3. La DBO5 estimada para aguas residuales domésticas es de 100 - 500 mg/L y para efluentes
tratados de 20 - 100 mg/L. Tomar el volumen adecuado de muestra en una probeta de
acuerdo a la concentración esperada, como se indica en la siguiente tabla:

Tabla 2 DBO5 estimada para aguas residuales domésticas

Escala de medición de Volumen de
DBO en mg/L la muestra en mL
0 a 35 420
0 a 70 355
0 a 350 160
0 a 700 95
4. Agregar el contenido de un sobre de solución de nutrientes a la probeta que contiene la
muestra a analizar.
5. Transferir el contenido de la probeta a una botella para DBO.
6. Colocar una barra agitadora dentro de la botella.
7. Introducir el tapón hermético en la botella.
8. Agregar dos comprimidos de hidróxido de potasio en el tapón hermético.
9. Realizar el mismo procedimiento con el resto de las muestras y con el testigo (utilizando
420 ml de agua destilada aireada).
10. Colocar las botellas en el equipo BOD Track II e identificar el número de su posición.
11. Conectar, mediante la manguera con el número correspondiente, cada botella y apretar el
tapón.
12. Encender el instrumento, verificar que la barra agitadora esté girando.
13. Mantener y presionar las dos flechas del equipo al mismo tiempo para ir al menú de
configuración del instrumento, donde aparecen los 6 canales disponibles.
14. Presionar la tecla del número de canal a utilizar para seleccionar el tiempo de duración de
la prueba, que en esta determinación será de 5 días.
15. Presionar OFF para guardar los valores y para salir del menú.
16. Seleccionar el número del canal para cada botella y presionar la tecla ON, elegir con las
flechas el rango de concentración de la prueba (de acuerdo a la tabla anterior).
17. Presionar y mantener la tecla ON para iniciar la prueba. Se desplegará una gráfica que
registrará los valores de la concentración de oxígeno. El equipo requiere de una hora para
iniciar las lecturas de la concentración de oxígeno.
18. Al finalizar el periodo seleccionado de la prueba, se mostrará en la pantalla el mensaje END.
19. Para conocer el resultado de la DBO final, que el equipo da automáticamente, seleccionar el
canal y leer directamente en la pantalla.
CÁLCULOS

El resultado final lo da directamente el equipo.

REFERENCIAS

Norma mexicana NMX-AA-028-SCFI-2001 Análisis de aguas, Determinación de la demanda

bioquímica de oxígeno en aguas naturales, residuales (DBO5) y residuales tratadas.

American Public Health Association, American Water Works Association, Water Environment
Federation (2012). Method 5210. Standard methods for the examination of water and wastewater.
Washington DC, USA, 22th ed.

Manual de usuario BOD Track II, HACH, 02/2010, segunda edición.