Universidad Tecnológica de Panamá.

Facultad de Ingeniería Civil

Licenciatura en Ingeniería Ambiental

Laboratorio:

Demanda Bioquímica de oxigeno (DBO5)

Oxígeno Disuelto

Profesor
Cenobio Cárdenas

Verano

2021
 Demanda Bioquímica de oxígeno (DBO5)
Introducción: La demanda bioquímica de oxígeno (DBO5) es una prueba usada
para la determinación de los requerimientos de oxígeno para la degradación
bioquímica de la materia orgánica en las aguas residuales; su aplicación permite
calcular los efectos de las descargas de los efluentes domésticos e industriales
sobre la calidad de las aguas de los cuerpos receptores. Los datos de la prueba de
la DBO5 se utilizan en ingeniería para diseñar las plantas de tratamiento de aguas
residuales.
La prueba de la DBO es un procedimiento experimental, tipo bioensayo, que mide
el oxígeno requerido por los organismos en sus procesos metabólicos al consumir
la materia orgánica presente en las aguas residuales o naturales. Las condiciones
estándar del ensayo incluyen incubación en la oscuridad a 20ºC por un tiempo
determinado, generalmente cinco días. Las condiciones naturales de temperatura,
población biológica, movimiento del agua, luz solar y la concentración de oxígeno
no pueden ser reproducidas en el laboratorio. Los resultados obtenidos deben tomar
en cuenta los factores anteriores para lograr una adecuada interpretación.
Las muestras de agua residual o una dilución conveniente de las mismas, se
incuban por cinco días a 20ºC en la oscuridad. La disminución de la concentración
de oxígeno disuelto (OD), medida por el método Winkler o una modificación del
mismo, durante el periodo de incubación, produce una medida de la DBO.
Objetivo: Determinar la demanda bioquímica de oxígeno en muestras de aguas
residuales domesticas o industriales.
Discusión: Con el transcurso de los años se han ido desarrollando una serie de
ensayos para determinar el contenido orgánico de las aguas residuales. Los
métodos de laboratorio más utilizados hoy día son el de la demanda bioquímica de
oxígeno (DBO5), demanda química de oxígeno (DQO) y el carbonato orgánico total
(COT).
La DBO5 a los 5 días (DBO5) supone la determinación de la cantidad de oxígeno
disuelto utilizado por los microorganismos en la oxidación bioquímica de materia
orgánica. La medida de la DBO5 es importante en el tratamiento de aguas residuales
y se utiliza para determinar la cantidad aproximada de oxigeno que se requerirá
para estabilizar biológicamente la materia orgánica presente, también para
dimensionar las instalaciones de tratamiento y medir rendimiento de algunos de
estos procesos. Con los datos de la DBO5 podrá asimismo calcularse la velocidad
a la que se requerirá el oxígeno.
A fin de asegurar que los resultados obtenidos sean significativos, la muestra deberá
ser convenientemente diluida con agua de dilución especialmente preparada de
modo que existan nutrientes y oxígeno, disponibles durante el periodo de
incubación. Normalmente, se preparan varias diluciones para cubrir la gama
completa de posibles valores. Ha sido demostrado que la prueba DBO 5 no tiene
significado para concentraciones de oxígeno de 0.5 mg/l o menos, de igual manera
no es estadísticamente confiables basar los valores del DBO 5 en diluciones que
produzcan una disminución del oxígeno menor de 2 mg/l o que tengan una
concentración de oxígeno disuelto menor de 1 mg/l al terminar la prueba.
Los intervalos de DBO5 que pueden medirse con distintas diluciones basadas en
mezclas porcentuales se presentan en la tabla 1.
En ausencia de un conocimiento previo de la demanda bioquímica de oxigeno de la
muestra se recomiendan las siguientes diluciones: 0.1 a 1% para desechos
industriales fuertes, 1 a 5.0% para aguas crudas y aguas servidas sedimentadas,
de 5 a 25% para afluentes tratados biológicamente y 25 a 100% para aguas de ríos
contaminadas.
Ya que la oxidación de la materia orgánica es llevada a cabo por bacterias saprofitas
y otros microorganismos, es necesario asegurar una buena población bacteriana.
Para aguas residuales que contienen una gran población de microorganismos no
es necesario inocular el agua de dilución con cultivo bacteriano (seed) pero para
aguas con poco contenido de bacterias (ejemplo: ciertas aguas industriales) es
necesario practicar un cultivo que haya sido aclimatado, si fuese necesario, a la
materia orgánica presente en el agua.
El periodo de incubación es generalmente de 5 días a 20°C tiempo en el cual se
estima que se ha efectuado la oxidación bioquímica en un 60-70%.
Tabla N°1: DBO5 medible con distintas diluciones de las muestras

% de Mezcla
Intervalo de DBO5 (mg/l)
0.01 20000 - 70000
0.02 10000 - 35000
0.05 4000 - 14000
0.10 2000 - 7000
0.20 1000 - 3500
0.50
400 - 1400
1.0
200 – 700
2.0
100 - 350
5.0
40 - 140
10.0
20 - 70
20.0
10 – 35
50.0
4 - 14
100.0 Menor de 8
Equipos y Reactivos:
1- Botellas de incubación de 300 ml de capacidad.

2- Incubadora de control de temperatura de 20°C ± 1°C.

3- Dispositivos para aerear la muestra.
4- Probeta de 250 ml.
5- Pipetas graduadas de 5, 10, 25 y 50 ml.

6- Todos los equipos y reactivos para la determinación del Oxígeno Disuelto.

7- Agua destilada.

8- Solución buffer de fosfatos, pH = 7.2.

9- Solución de sulfato de magnesio.
10- Solución de cloruro de calcio.
 11- Solución de cloruro férrico.

12- Solución 1N de ácido clorhídrico e hidróxido de sodio.

Procedimiento
Nota: Este procedimiento es para aguas que no requieren “seed”
1- Acondicione la muestra para el análisis de DBO 5 (agua de dilución aereada,
nutrientes, etc).

2- Tome dos botellas de DBO5, anótele el número y agrégueles agua de dilución

hasta la mitad.
3- Adicione los mililitros del agua de muestra a cada botella para la dilución que
está preparando.

4- Adicione a cada botella un mililitro de cada uno de los siguientes nutrientes

(buffer de fosfatos, cloruro férrico, cloruro de calcio y sulfato de magnesio).

5- Mezclar y terminar de llenar la botella con agua de dilución hasta que apenas
se comience a derramarse.

6- Tape las botellas. A una de ellas cúbralas con papel de aluminio o plástico
adherible cuidando de mantener el exceso de agua que impide se escape
oxígeno. Llévela a la incubadora (20°C) por 5 días.
 7- A la segunda botella bótele el exceso de agua y determine el oxígeno disuelto
antes de que hayan transcurrido 15 minutos. Este valor corresponde al
oxígeno disuelto inicial.
8- Transcurrido los 5 días de incubación determine el oxígeno disuelto de la
primera botella. Este valor corresponde al oxígeno disuelto final.
9- Repita los pasos del 3 al 10 para cada una de las demás diluciones a
preparar.
Cálculos
Para el cálculo del DBO5 escoja aquellas diluciones que hayan tenido un consumo
de oxígeno entre el 50-60%, o que hayan ejercido una demanda mayor de 2 mg/l y
que tengan por lo menos 1 mg/l de oxígeno disuelto presente.
Oxígeno Disuelto Inicial−Oxígeno Disuelto Final
mg/l de DBO5 = Fracción Decimal de Dilución

Preguntas
1- ¿Por qué se ha escogido el término de 5 días como el valor más
frecuente para la determinación del DBO5?
2- ¿Qué cuidados hay que observar en la toma y transporte de la muestra?
 Oxígeno Disuelto
Introducción:
En un cuerpo de agua se produce y a la vez se consume oxígeno. La producción de
oxígeno está relacionada con la fotosíntesis, mientras el consumo dependerá de la
respiración, descomposición de sustancias orgánicas y otras reacciones químicas.
También puede intercambiarse oxígeno con la atmósfera por difusión o mezcla
turbulenta. La concentración total de oxígeno disuelto dependerá del balance entre
todos estos fenómenos. En este laboratorio determinaremos el oxigeno disuelto en
una muestra.
Objetivo: Determinar la concentración de oxígeno disueltas en muestras de aguas
superficiales, potable, industriales y residuales.
Discusión: Históricamente el oxígeno disuelto ha sido uno de los constituyentes
que ha presentado mayor interés en las investigaciones de la calidad del agua.
La calidad estética del agua requiere la presencia de suficiente oxigeno disuelto
para evitar que se presenten condiciones sépticas con la consiguiente producción
de malos olores.
En los cuerpos de agua destinados para uso municipal la presencia de oxigeno
disuelto es un indicador de una calidad de agua satisfactoria en lo que se refiere a
un bajo residual de materia orgánica biológicamente disponible.
Por otro lado, la desventaja que presentan concentraciones muy elevadas de
oxígeno disuelto en las aguas que son utilizadas con abastecimiento municipal es
el aumento en la velocidad de corrosión de las superficies metálicas ya sea en la
planta de tratamiento o en el sistema de distribución. Además del daño directo
causado, tal corrosión aumenta la concentración del hierro y otros metales que
pueden introducir sabor en agua y crear problemas de manchas en la ropa o equipo
de plomería.
La determinación del oxígeno disuelto sirve como base para la prueba de 𝐷𝐵𝑂5 que
es la prueba más importante utilizada para evaluar la fuerza polucional de desechos
doméstico o industriales.
Todos los procesos de tratamiento aeróbicos dependen de la presencia de oxígeno
disuelto y su determinación es indispensable como medio de controlar la velocidad
de aireación y asegurar que se están administrando las cantidades adecuadas de
aire para mantener las condiciones anaeróbicas y poder prevenir el uso excesivo
del mismo.
Métodos para la determinación del oxígeno disuelto:}
1. Método de Winkler o método iodo métrico y sus modificaciones.
2. Método electrométrico (electrodos para el oxígeno disuelto).
El método de Winkler se aprovecha del hecho del que el oxígeno disuelto oxida al
𝑀𝑛+2
A un estado de oxidación suprior bajo condiciones alcalinas. Y el Mn en este estado
de oxidación es capaz de oxidar el 𝐼 (yoduro) a 𝐼2 (yodo libre) bajo condiciones
ácidas. La cantidad de yodo así liberada es equivalente a la cantidad de oxígeno
disuelto que estaba presente originalmente. Inicialmente se determina el yodo
liberado (𝐼2 ) como una solución estándar de tiosulfato de sodio y se presenta en
términos de oxígeno disuelto.
Las reacciones consideradas son:
Mn+2 +2OH + ½ O2 --------------------------------- MnO2 + H2O
La oxidación del Mn+4 se conoce como fijación del oxígeno. Ya que esta reacción
no ocurre instantáneamente es necesario agitar el frasco de reacción para remover
el material floculento y asegurar así que todo el oxígeno reaccione.
Después que el floculo se asiente se adiciona acido sulfúrico concentrado. Bajo las
condiciones de pH que se obtiene en el Mn+4 ( en el MnO2 oxida al yoduro ( I- ) para
liberar yoduro molecular ( I2).
MnO2 +2 I- +4 H+ ----------------------------- Mn+2 + I2 + 2H2O
El yoduro liberado se titula con tiosulfato de sodio:
2S2O3-2 + I2 -------------------------- S4O6-2 +2I-
Equipos y Reactivos:
1-Botellas de incubación de 300 ml de capacidad.
2.Incubadora de control de temperatura de 20°C ± 1°C.
3,Dispositivos para aerear la muestra.
4,Probeta de 250 ml.
5,Pipetas graduadas de 5, 10, 25 y 50 ml.

6.Todos los equipos y reactivos para la determinación del Oxígeno Disuelto.

7. Agua destilada.

8. Solución buffer de fosfatos, pH = 7.2.

9. Solución de sulfato de magnesio.
10. Solución de cloruro de calcio.
11. Solución de cloruro férrico.
 12. Solución 1N de ácido clorhídrico e hidróxido de sodio.

Procedimiento
1. Llene la botella con agua potable hasta que se desborde. No deje que
queden burbujas atrapadas, ya que producirá error en los resultados.

2. Quite el tapón del frasco de muestra y agregue 2ml de sulfato de magnesio

II. La punta de la pipeta se introduce bajo la superficie del agua para
permitir que la solución pesada fluya sin quedar en contacto con el aire.

3. Se agregan del mismo modo 2ml de solución de álcali-yoduro. Coloque el

tapón de manera que no queden atrapadas burbujas de aire.

4. Agite por 3 minutos aproximadamente.

5. Permítase que sedimente el precipitado resultante hasta la mitad del frasco.

6. Repítase el paso 3 y 4 nuevamente.

7. Quite el tapón y agregue 2ml de acido sulfúrico concentrado. Tape evitando
el acceso de are al frasco.

8. Lave el exterior del frasco con agua corriente.

9. Mezcle varias veces por inversión hasta que el precipitado se disuelva
completamente y el color café o amarrillo quede distribuido uniformemente.

10. Transfiera 200 ml de concentrado de la botella de DBO5 a in Erlenmeyer.

11. Titule con la solución de tiosulfato de sodio 0.025 N hasta la aparición de un

color amarillo pálido.
 12. Agregue 1ml de la solución indicadora de almidón. La muestra toma un
color azul.

13. Titule nuevamente con tiosulfato de sodio 0.025N lentamente hasta que
desaparezca el color azul. Obtenga la concentración del oxigeno disuelto
por lectura directa de la bureta.
Cálculos:

𝑚𝑔 𝑚𝑙(𝑁𝑎2𝑆2𝑂3) × 𝑁( 𝑁𝑎2𝑆2𝑂3) × 8000

⁄𝑙 𝑑𝑒 𝑂. 𝐷 =
𝑚𝑙 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
Cuando se utiliza tiosulfato de sodio Na2S2O3 0.025N el equivalente de 200ml de
𝑚𝑔
⁄𝑙 𝑑𝑒 𝑂. 𝐷 = 𝑚𝑙 𝑁𝑎2𝑆2𝑂3 utilizado.

Preguntas:
1. ¿Qué precauciones debe observarse a la hora de tomar las muestras
para la determinación del oxígeno disuelto?
2. Enumere dos razones por las cuales la fijación del oxigeno debe
realizarse inmediatamente después de la toma de la muestra.

Tabla de resultados:
ml % Dilución Oxígeno Oxígeno Oxígeno % DBO5
disuelto disuelto Consumido Consumo (mg/L)
inicial(D1) final(D2)
3 1.0 8.2 4.7
6 2.0 8.3 3.5
9 3.0 7.6 1.9
15 5.0 7.0 1.5

Formulas:
 % Consumido= D1 -D2
𝐷1−𝐷2
% Consumo= × 100
𝐷1
𝐷1−𝐷2
DBO5= 𝑃
% 𝐷𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛
P= 100

ml agua residual
P= --------------------------
300 ml

Conclusión: Para escoger la DBO5 correcta: Primero se busca en la tabla de

resultados el porcentaje de consumo debe estar entre 40% y 60%. Si no hay
este porcentaje, la segunda opción sería buscar la dilución que tenga un
oxígeno consumido de 2 mg/l.

Bibliografía
• APHA, AWWA, WPCF: Standard Methods for the Examination of
Water and Wastewater. 15th Edition, Amercam Public Health
Association, Washington D.C, 1998.
• Sawyer and McCarthy: Chemistry for Environmental Engineering,
Third Edition, McGraw.Hill Book Company, Nueva York, 1978.
• PROCEDIMIENTOS Simplificados para el Examen de Aguas, 1978.

Anexo

Muestra estudiada
con DBO5 = 0
Muestra en la que a sido
fijado de oxígeno.

Proceso de titulación de
la muestra

https://www.youtube.com/watch?v=EN5HDXRyHWE&t=136s
Determinación de
DBO https://www.youtube.com/watch?v=tws1J4lCOts&t=655s