DISEÑO DE PEÑ UELAS GUTIÉ RREZ FERNANDA

BIOPELÍCULA

Trabajar en REALIZAR
condiciones de PREPARACIÓN UN
esterilidad. DÍA ANTES DE LA
PRÁCTICA

Desinfectar el área de trabajo con

alcohol al 70% o cloro al .1%

1 PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO AL 2X

Realizar una preparación de caldo Mueller-Hinton o Luria Bertani de acuerdo a las
inctrucciones del fabricante. CONSIDERAR 200 microlitros para los pocillos como total.

2 PREPARACIÓN DE INOCULO
Realizar la preparación de alicuota bacteriana de E.coli ajustando a una
densidad óptica de .5 a 600 nm. Será una concentración aproximada
de 2x10^7 UFC/mL.

Trabajar en
condiciones de
esterilidad.
3 INOCULACIÓN
Colocar 20 µL de alicuota en cada pocillo de la placa. Considerar que se
debe dejar un control sin inocular. EVITAR GOTEO EN OTRAS ZONAS
DE LA PLACA.

SI ¿Se coloco la alicuota de manera correcta? NO

4 Etiquetar e incubar las placas durante 24 hrs a 37 ºC. Al terminar el

tiempo, tomar lectura de absorbancia a 630nm en un lector de microplacas.

5 Eliminar el caldo de los pocillos con ayuda de una micropipeta y agregar 6 Secar la placa a
agua destilada estéril. temperatura ambiente y
Retirar el agua de nuevo con micropipeta. EL LAVADO SE DEBE DE enseguida agregar 200 µL
HACER CON CUIDADO PARA NO ARRUINAR LA FORMACIÓN DE LA de cristal violeta al 0.1% e
BIOPELÍCULA. incubar a 37ºC por 15 min.

8 Secar la placa a temperatura

7 Retirar el cristal violeta con ayuda de una
ambiente y resuspender colorante
micropipeta y lavar la placa 5 veces con agua
embebido agregando 200 µL de
destilada.
NOTal cual en el paso 5. LAVADO SE DEBE
etanol absoluto a 96ºC dejando
DE HACER CON CUIDADO PARA NO ARRUINAR
reposar 5 min a 37ºC.
LA FORMACIÓN DE LA BIOPELÍCULA.

Tomar lectura a 570 nm en el lector de

microplacas.
Analizar
resultados.