AUTOMATIZACION

TM PATRICIA TOLEDO RODRIGUEZ

OBTENCION DE LAS MUESTRAS

 FIJACION
CONDICIONES IDEALES
• Actuar con rapidez
• Poder de penetración • Permitir y facilitar la
• Insolubilizar componentes aplicación de
celulares procedimientos posteriores.
• Conservar detalles • Ser económico, estable,
estructurales . fácil manejo y baja
• Consistencia. toxicidad.
• Impedir la formación de
estructuras artificiales

FORMALDEHIDO
• Concentración 4%
• Tamponada
• Penetración
• Fijación
 DESHIDRATANTE
• eliminación completa del agua de la
muestra para que se pueda embeber
adecuadamente en los medios de
inclusión no hidrosolubles
posteriores

DESHIDRATACION
CONDICIONES IDEALES
1. No debe alterar las 1. Lo mínimo de peligrosidad
estructuras tisulares intrínsica (vapores)
2. Debe poder mezclarse con 2. Mínimo riesgo de
el reactivo intermediario o incendio/explosión
agente aclarante.
3. Rápido
4. Producir un
endurecimiento aceptable
 DESALCOHOLIZAR
• Se trata de un proceso por el cual se
consigue la sustitución del agente
deshidratante por una sustancia miscible
con el medio de inclusión que va a
utilizarse.

1. Rapidez para eliminar el deshidratante

2. Acciones nocivas sobre los tejidos y células
3. Adecuación del aclarante sobre el
deshidratante
4. Adecuación del aclarante sobre el medio de
inclusión
5. Toxicidad /Peligrosidad
6. costo
 IMPREGNACION
• Es el proceso de tiene por objeto rellenar
o infiltrar completamente la muestra con
el medio que se va a utilizar para la
imbibición del tejido. El fundamento del
proceso radica en la ocupación completa
con el medio de los espacios intra y
extraceculares inicialmente llenos con
agua

PARAFINAS
mezcla de hidrocarburos saturados de cadena
larga que se obtiene como un subproducto
incoloro e inodoro de la industria
petroquímica. A temperatura ambiente es
sólida. Existen diferentes tipos de parafina,
variando en punto de fisión (40 a 70°c).

PUNTO DE PLASTICIDAD
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS

PROCESAMIENTO DE MUESTRAS
INCLUSION

INCLUIR
 CORTAR
Microtomo minot criostato
SECADO DE LAMINAS
LEICA AUTOSTAINER XL

LEICA AUTOSTAINER XL
LEICA AUTOSTAINER XL

MEDIOS ADHESIVOS

TM PATRICIA TOLEDO RODRIGUEZ

 MEDIOS ADHESIVOS
• Se utilizan entre el corte histológico y el
portaobjetos, tiene como finalidad
asegurar la permanencia e integridad del
corte histológico obtenido, permitir
realizar los procedimientos posteriores
sin producir el desprendimiento de la
muestra.
1. Albumina de Mayer
2. Albumina seca
3. Gelatina Cromoalumbre
4. Gelatina formalina
5. Film de celoidina
6. Colafría
7. Silanizados
8. Limpios

PUENTE CALICANTO
 ALBUMINA DE MAYER
Clara de huevo (ml/grs)
Glicerina
Timol
La mezcla filtrada se extiende sobre los
portaobjetos limpios .
La albúmina coagula con el calor al secar los
cortes, de manera que logra adhesión al
portaobjetos.
 ALBUMINA DE MAYER
V: barata, la mezcla es de larga duración.
D: engorroso su filtrado, requiere timol, si la
aplicación es excesiva se tiñe con eosina

ALBUMINA SECA
• Albúmina en polvo 5g.
Cloruro de sodio 0,5g
Agua destilada 100 ml
• Filtrar a través de un embudo Buchener al
vacío o a través de gasa doble. A 50 ml de
filtrado agregar 50 ml de glicerina.
• Adicionar a la mezcla final un grano de timol.
 Exceso de albúmina

GELATINA CROMOALUMBRE
• SOLUCION A:
• Gelatina molida 4,5grs
• Agua destilada 1000ml
• Calentar progresivamente hasta 75° en agitación continua,
una vez completa la disolución bajar temperatura a 50°
• SOLUCION B
• Alumbre de cromo al 4% 38,5 ml
• Ftalato de dibutilo 1 ml
• Merthiolate 0,1 g
• Mezclar ambas soluciones.
 GELATINA CROMOALUMBRE
Existe una variante a esta preparación:
• Gelatina en polvo 5g
• Cromoalumbre 0,5g
• Agua destilada 1000ml
Agregar timol para preservar la solución.
Guardar refrigerada. Filtrar antes de usar.

GELATINA CROMOALUMBRE
PROCEDIMIENTO:

• Sumergir los portaobjetos en la solución con

el fin de que se forme una delgada película.
Dejar escurrir. Colocar a secar en la estufa a
37°c.
 GELATINA FORMALINA
• La formalina endurece la proteína contenida
en la gelatina y en la albúmina del huevo
asegurando una unión más forme entre el
corte y el portaobjetos.
• Aplicar a los portaobjetos la gelatina o la
albúmina de mayer.

GELATINA FORMALINA
• Montar los cortes y secarlos durante 30 a 60
segundos
• Colocar los portaobjetos en un borrel que contenga
aproximadamente 5 ml de formalina concentrada,
de modo tal que la solución no esté en contacto con
los cortes de tejido. Los bórreles herméticamente
cerrados se colocan en la estufa a 60° por 1 hora.
• Secar los cortes del borrel y secar en la forma
convencional.
•
 COLAFRIA
• Solución al 1% de colafría en agua destilada.
Sumergir los portaobjetos limpios, y dejar
secar toda la noche.

V: no se tiñe, barata, fácil de preparar, no se

descompone.
D:requiere preparar los portaobjetos
 PORTAOBJETOS LIMPIOS

V: la más barata de todas, fácil, no requiere

preparación.
D: no sirve para todas las tinciones posteriores,
requiere secado a 60° x 25 minutos

SILANIZADO
• 1.- Limpiar uno a uno los portaobjetos con
Alcohol de 70, cuidar de no dejar pelusas en
los portaobjetos.
• 2.- Sumergir el canasto en una solución de
acetona PA con Silano al 1%. Dejar 5 minutos.
• 3.- Lavar en dos baños sucesivos de acetona
nueva PA por 2 minutos cada uno.
• 4.- Dejar secar por 18 horas a 60°
 SILANIZADO

V: soporta recuperaciones en temperatura y pH

extremos. (100° pH alcalinos)

D: tóxico, irritante e inflamable. No permite

reubicar el corte. No usar material de vidrio
PORTAOBJETOS
 IDENTIFICACION DE
PORTAOBJETOS

• LAPIZ DIAMANTE
• LAPIZ GRAFITO
• LAPIZ PERMANENTE
 IDENTIFICACION DE
PORTAOBJETOS
Lápiz permanente Lápiz diamante

PORTAOBJETOS CON LAPIZ

DIAMANTE
 OTROS PROCEDIMIENTOS
• Posterior a la obtención del corte,
identificación, secar,
desparafinación, hidratación y
anterior al proceso de tinción,
existen procedimientos derivados de
fijador utilizado.

ELIMINACION PIG. FORMOLADO

• Desparafinar y llevar los cortes hasta agua
destilada
• Colocar los cortes en un borrel con una
solución de acido pícrico al 6. - 8% en alcohol
absoluto durante 10 minutos a 2 horas
• Lavar en abundante agua corriente
• Continuar con la técnica.
 Pigmento Formolado

ELIMINACION PIG. BICLORURO

MERCURIO
• Utiliza una Solución de Lugol o de Alcohol
yodado
• Colocar las muestras en lugol o alcohol
yodado durante 10 minutos
• Lavar en agua destilada
• Pasar por sulfito de sodio al 0,25% hasta que
los cortes pierdan el color amarillo del yodo
• Lavar en abundante agua destilada
 ELIMINACION DEL ACIDO PICRICO

• Se busca eliminar el color amarillo

característico de este reactivo, se realiza
colocando las láminas en una solución de
carbonato de litio al 0,2% por 10 a 20
minutos.

MEDIOS DE MONTAJE

TM PATRICIA TOLEDO RODRIGUEZ

• Es un medio que se coloca entre
el portaobjetos con el tejido y el
cubreobjetos
 IMAGEN PORTA Y CUBRE

OBJETIVOS
• Permitir hacer más duraderas las
preparaciones.
• Facilitar su manipulación
• No interferir con la observación microscópica
 INDICE DE REFRACCION
• Es una medida que determina la reducción de
la velocidad de la luz al propagarse desde un
medio homogéneo. Se busca medios de
montaje con un IR cercano a 1, el que es el IR
del aire.
• IR AIRE : 1.00029
• IR AGUA : 1.333
• IR VIDRIO : 1.52

INDICE DE REFRACCION
MEDIO ORIGEN IR SOLUCION IR SOLIDO
•
BALSAMO DE NATURAL 1.523 1.544
CANADA

EUPARAL MIXTO 1.477 1.517

PERMOUNT SINTETICO 1.514 1.528

• HIDROFILOS:
HIDRO= AGUA
FILOS =AMIGO

•HIDROFOBOS

HIDROFILOS

1.Gelatina de Kaiser
2.Gelatina
3.Jarabe de Von Apathy
4.Jarabe de Lillie y Ashburn
 HIDROFOBOS

1. Resinas Naturales: Balsamo de canadá

2. Resinas Mixtas:Euparal
3. Resinas sintéticas: Flotex, Eukilt

GELATINA DE KAISER
Agua
Gelatina
Glicerina
Fenol
Hidratar la gelatina, agregar glicerina, calentar
10 min. A menos de 75°c. Mantener
refrigerada. Calentar antes de usar.
 GELATINA DE KAISER
• V: excelente medio hidrófilo.
• D: tiende a formar burbujas, cuidado con la
temperatura (metagelatina), requiere calentar
antes de usar.

BALSAMO DE CANADA

Se encuentra en el comercio.
V: esta preparado, se usa directo.
D: secado lento (días), en preparaciones
antiguas el bálsamo se seca y resquebraja
bajo el cubreobjetos.
Fuera de uso
 RESINAS SINTETICAS
Se venden con diferentes nombre comerciales y
fórmulas secretas.
Flotex, Entellan, etc.

V: se compra listo para usar, seca rápido,

preparaciones de larga duración.

D: Fórmula desconocida, contienen xilol.

MEDIOS DE MONTAJE
BALSAMO DE CANADA EUKITT
CUBREOBJETOS

PINZA PATO
MONTAJE MANUAL

MONTAJE MANUAL
 MONTAJE MANUAL

MONTAJE AUTOMATICO