UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA TULA-TEPEJI

T.S.U. Química Industrial

Oscar Obregón Campos

5QI-G3
CUADROS SINÓPTICOS
DE MICROBIOLOGÍA
 Oscar Obregón Campos

Esterilización por calor seco:

Aire caliente (horno), flameado,
Destruye microorganismos por incineración.
oxidación.
Esterilización de materiales

Esterilización:
Método de eliminación total de 1
todo tipo de organismo. Esterilización por calor
y medios de cultivo

humedo:
Vapor a presión (autoclave).
Afecta la estabilidad de las
estructuras celulares.

Lavar y enjuagar el material de

vidrio. Escurrir exceso de agua y
enjuagar con agua destilada.

Preparar 200 mL de CN en un Preparar agar nutritivo (AN)

matraz Erlenmeyer de 500 mL y agregando 2.7 g a 180 mL de CN
ajustar pH (6.5-7). (15 g/L).

Calentar el medio en una parrilla

Preparación del material de con agitación hasta la ebullición y
vidrio y medios de cultivo. vaciar 5 mL de medio en 4 tubos
con rosca.

Preparar 200 mL de PDA en un

Colocar agitador magnético y
matraz Erlenmeyer de 500 mL y
calentar hasta ebullición.
ajustar pH a 5.6.

Colocar agitador magnético y

Preparar 200 mL de EMB en un calentar hasta ebullición.
matraz Erlenmeyer de 500 mL.

Dr. Víctor Alfredo Nolasco Arizmendi T. S. U. Química Industrial 5QI-G3

 Oscar Obregón Campos Las cajas petri y tubos
envueltos con papel estrasa se
colocan en un horno a 150 °C
durante dos horas. Dejar que el equipo se caliente
hasta 121°C y 15 lbs/in2 y
Esterilización.
mantener estas condiciones
durante 15 min.
Los medios de cultivo se
esterilizan en autoclave. 2
Esterilización de materiales

Apagar autoclave y dejar que

la presión baje a cero.
Cerrar los tubos con un tapón
y medios de cultivo

y colocaros en forma inclinada.

Vertido de los medios en Enfriar los medios de cultivo en Encender mecheros y

cajas petri y solidificación. los matraces hasta 45-50°C. colocarlos a 50 cm.

Verter entre 20 y 25 mL en las

Limpiar la mesa con solución
cajas petri dentro de esta zona
del alcohol.
aséptica.

Abrir una caja petri de AN,

EMB y PDA en zonas no Dejar que los medios se
asépticas durante un minuto y solidifiquen.
etiquetarlas.

Abrir una caja petri de AN,

Prueba de esterilidad de los EMB y PDA en zonas
materiales. asépticas durante un minuto y
etiquetarlas.

Revisar los tubos y las cajas

Colocar los tubos y las cajas
petri para detectar la presencia
petri en una incubadora a 30°C
Dr. Víctor Alfredo Nolasco Arizmendi T. S. U. Química24-48
Industrial de contaminantes y la
5QI-G3
durante hrs.
formación de colonias.
Oscar Obregón Campos
Por suspención de la muestra
en medios líquidos .

Extención de diluciones de un
Existen diferentes técnicas
cultivo en superficie de medios
de siembra. 3
en caja petri.
Técnicas de siembra y aislamiento

Se obtienen las bacterias

Por estria en caja petri y tubos dominantes.
de bacterias y levaduras.

con medios solidificados en

forma inclinada.
Se utilizan medios selectivos
para incrementar la población
del microorganismo de interés.

Dividir cada caja petri en cuatro

Esterilizar el asa con el calor
cuadrantes (por la parte de
del mechero.
atrás).

Dejar enfriar el asa y toma la

muestra de una colonia.

Inocular la muestra haciendo 4

Flamear asa de inoculación y
Técnica de estría cruzada. o 5 estrías simples y muy juntas
hacer girar la caja petri.
de lado a lado.

Abrir la caja y con el asa fría, Realizar el mismo

tocar la superficie de las estrías procedimiento en el tercer y
recien hechas. último cuadrante.

Las cajas con la base hacia

Dr. Víctor Alfredo Nolasco Arizmendi T. arriba se incuban
S. U. Química a 35°C
Industrial 5QI-G3
durante 24-48 horas.
 Oscar Obregón Campos

Despues de la incubación de los

cultivos, seleccionar, de las
Técnicas de siembra y aislamiento
cajas petri con AN, la colonia
mas aislada de cada cepa. 4
de bacterias y levaduras.

Transferir con el asa,

previamente esterilizada y fría.
una pequeña muestra de la
colonia a un tubo de CN.

Transferir de la misma forma

Siembra en tubos y una muestra de la misma colonia
condiciones de incubación. inoculando por estría los tubos
inclinados con AN y PDA.

Incubar los tubos a 35°C durante

24-48 horas.

Dr. Víctor Alfredo Nolasco Arizmendi
Observar la aparición de
colonias y reportar la forma de
crecimiento de los
microorganismos.
T. S. U. Química Industrial 5QI-G3
 Oscar Obregón Campos Un frotis se prepara distribuyendo una
Los microorganismos vivos o activos
pequeña suspensión de los Causará la inactivación o muerte celular
son por lo general incoloros, por lo que
microorganismos sobre una superficie y algunas modificaciones de sus
es necesario fijarlos y teñirlos en un
transparente que se fija a la superficie características.
frotis.
con calor.
Técnicas de tinción simple,

La tinción que se hace con un solo 5

colorante es la simple.
diferencial y selectiva.

Las diferenciales permiten diferenciar

microorganismos con características
Existen diferentes tipos de tinciones:
superficiales distintas.más de un
simple, diferencial y selectiva.
colorante, requieren más de un
colorante.

Poe ejemplo, la tinción de endosporas

Las selectivas permiten observar
permite identificar bacterias de tipo
estructuras especializadas.
Bacillus y Clostridium.

Lavar los portaobjetos, secarlos con

papel y etiquetarlos.

Encender el mechero y esterilizar el asa

en flama hasta que se ponga al rojo
vivo.

Preparación de frotis.

Acercar la caja petri con el cultivo, Colocar la muestra en el centro del

flamear la boca e introducir el asa para portaobjetos, dejar enfriar el frotis al
tomar la muestra. aire.

En caso de cultivos líquidos, se toma la

muestra del tubo, se realiza el
Dr. Víctor Alfredo Nolasco Arizmendi T. S. U. Química Industrial
procedimiento antes descrito. 5QI-G3
 Oscar Obregón Campos
Pasar el portaobjetos
Los medios de cultivo sólidos
rápidamente 2-3 veces por la
se fijarán con calor.
flama del mechero.
Fijación del frotis.
Los frotis de medios líquidos
Se dejarán secar al aire, lejos 6
se fijarán colocando dos gotas
Técnicas de tinción simple,

del mechero.
de etanol.
diferencial y selectiva.

Cubrir el frotis de la muestra

con 1 gota de azul de
metileno, durante 60 seg.
Tinción de simple.
Eliminar el exceso de
colorante con la piceta y dejar
secar al aire.

Cubrir el frotis y de la muestra Lavar el frotis con agua

con 2 gotas de cristal violeta, destilada para eliminar exceso
60 seg. de colorante.

Eliminar exceso de agua y

cubrir el frotis con 2 gotas de Lavar el frotis con agua.
lugol por 30 seg.
Tinción de Gram.
Inclinar el portaobjetos y
aplicar gota a gota el
Lavar de inmediato con agua.
decolorante hasta que no fluya
mas colorante.

Lavar de nuevo con agua,

Aplicar 2 gotas de safranina
quitar el exceso de5QI-G3
agua y
Dr. Víctor Alfredo Nolasco Arizmendi por 30
T. S. U. Química seg.
Industrial
dejar secar al aire.
 Oscar Obregón Campos
Inocular cada cepa en una serie Glucosa, lactosa, sacarosa y
de tubos de caldo rojo fenol con: manitol.

Fermentación de Inocuba los tubos a 35 °C 7

carbohidratos. durante 24-48 hrs.
Pruebas de diferenciación

Determinar si hay crecimiento,

Hacer observaciones en el cambios del color del indicador y
tiempo de incubación. producción de gas en la
campana de Durham.
bioquímica

Inocubar cada cepa en tubos

Los tubos con TSI agar se
con caldo urea, leche
inoculan primero por picadura.
tornasolada.
Utilización de urea, azúcares,
proteínas y producción de
sulfuros.
Incubar los tubos a 35°C durante
24-48 hrs.

Inocular por picadura hasta el

fondo del tubo, cada uno de los
tubos con agar SIM.

Incubar los tubos a 35°C durante

Producción de sulfuros.
24-48 hrs.

Realizar observaciones las 24

hrs.
Dr. Víctor Alfredo Nolasco Arizmendi T. S. U. Química Industrial 5QI-G3
 Oscar Obregón Campos Inocular por picadura en el fondo
del tubo y terminar con estría
simple en la superficie.

Asimilación de citrato como Incubar los tubos a 35°C durante

fuente de carbono. 24-48 hrs. 8
Pruebas de diferenciación

Realizar observaciones durante

ese lapso.

Inocular cepa por picadura en los

tubos con gelatina nutritiva y por
bioquímica

estría simple en las cajas petri

con agar almidón.

Incubar los tubos a 35°C durante Observar la aparición de zonas

Actividades hidrolíticas.
24-48 hrs. claras o turbidez en el medio.

En tubos de agar gelatina

Observar la actividad de amilasas
observar si hubo licuefacción del
en la caja de agar almidón por
medio y agregar 2 gotas de
crecimiento de colonias.
solución de ácido tricloroacético.

Preparar en una gota de agua

Agregar unas gotas de lugor y
sobre un portaobjetos una
localizar zonas claras cerca de
suspención de una colonia
las colonias.
obtenida del medio agar almidón.
Actividad catalasa.
Observar la formación de
Agregar unas gotas de peróxido
burbujas que indican la prueba
Dr. Víctor Alfredo Nolasco Arizmendi T. S. de hidrógeno
U. Química al 30%.
Industrial catalasa. 5QI-G3
Oscar Obregón Campos
De mayor tamaño y complejidad
que las bacterias.

9
Los hongos son organismos Eucariontes: animales, por ser
eucariotas. moviles.
Cultivo y morfología de
hongos filamentosos
Halgas y plantas: por carecer de
pigmentos fotosintéticos.

Las levaduras (unicelulares) son

de forma esférica, se reproducen
de manera asexual.
Se encuentran formas
unicelulares y pluricelulares.
Los hongos filamentosos
(pluricelulares) tienen estructura
vegetativa denominada hifa.

Lavar y preparar todo el material

para esterilizar.
Preparación de materiales e
inoculación.
Preparar medio PDA, esteriliar a
15 lb/in2 a 121°C durante 15 min.
Dr. Víctor Alfredo Nolasco Arizmendi T. S. U. Química Industrial 5QI-G3
 Oscar Obregón Campos
Se separa parte del micelio de
los hongos proporcionados con
asa de siembra.

Se coloca el micelio en el centro

Siembra de hongos
de una caja petri con medio por 10
filamentosos.
inoculación por piquete.
Cultivo y morfología de
hongos filamentosos

Se incuban las cajas petri en

forma invertida, envueltas en
plástico a 30°C por 3-5 días.

Observar: forma, tamaño, tipo de

colonia, aspecto del micelio,
Descripción macroscópica.
color de micelio y cambios en el
medio de cultivo.

Colocar una gota de azul de

lactofenol en el centro de un
portaobjetos.

Cortar una tira de 5 cm de cinta

transparente, con pinzas de
disección doblar la cinta en U.
Descripción microscópica en
montaje con cinta adhesiva.
Abrir la caja petri cerca del
mechero y presionar la cinta
sobre la periferia de la colonia.

Hacer observaciones en el
Dejar resposar por 5 minutos.
Dr. Víctor Alfredo Nolasco Arizmendi T. S. U. Química Industrial microscopio y localizar hifas.
5QI-G3
Oscar Obregón Campos
Se encuentran en casi todos
los ambientes iluminados.
Microalgas
organismos eucariotas,
acuáticos y fotosintéticos
Cultivo y morfología de
Existen más de 3000 especies. 11

A un matraz agregar 0.4 g de

NaNO3, los 50 restantes se
colocan en un erlenmeyer de
Preparar 350 mL de medio 125 mL.
algas

mineral, vaciar 150 mL de

medio en 2 matraces de 250
mL.
Esterilizar los medios.
En condiciones asépticas
inocular 2 matraces con 15 mL
de cultivo de Chorella.

Homogeneizar el cultivo
agitando suavemente y tomar
2 mL de muestra de cada
matraz.
Preparación de materiales e
inoculación
Leer la densidad óptica a 660 nm
calibrando el espectrofotómetro
con medio de cultivo estéril.

Hacer preparaciones en fresco de

las muestras y observar en el
microscopio.

Incubar los matraces a 28°C en Leer la densidad óptica a 660 rpm

agitador orbital a 100rpm, con y observar la morfología de las
Dr. Víctor Alfredo Nolasco Arizmendi T. S. U. Química
iluminación Industrial
durante una semana. microalgas. 5QI-G3
Oscar Obregón Campos
Definición.
microorganismos
Cuantificación de
Técnica de dilución y siembra
en placa.
Técnica de cuenta directa en
cámara Neubauer.
Dr. Víctor Alfredo Nolasco Arizmendi
Aumento del número de
microorganismos en un periodo
de tiempo.
Pipetear 1 mL de cultivo y Esta correspondera a la
depositarla en un erlenmeyer dilución 10-2, hacer diluciones
con 99 mL de SSI. decimales del cultivo hasta 10-7 12
Depositar 0.1 mL de ambas Distriburir el inóculo en toda la
diluciones. superficie de la caja.
Dejar absorber el líquido
durante 10 min.
Incubar las cajas en forma
invertida a 30°C por 72 hrs y
contar colonias.
Mezclar y dejar en reposo
durante 10 min.
Colocar 1 mL del cultivo
microbiano en un tubo y
agregar 1 gota de azul de
metileno.
Lavar la cámara Neubauer.
Homogeneizar la muestra en
vórtex, tomar una alícuota con
pipeta y depositar una gota en
la cámara.
En el microscopio observar el
objetivo seco.
Reposar durante 5 min.
Observar que las celulas que
se tiñen de azul son las no
T. S. U. Química Industrial viables. 5QI-G3
 Oscar Obregón Campos

Preparar 120 mL de CN con

Ajustar al pH del medio a pH=5 o
0.1% de extracto de levadura en
pH= 7, según corresponda.
un matraz de 250 mL.
13
Efecto de los factores ambientales

Preparación de material y Colocar en tubos 10 mL del

medios de cultivo. mismo medio.
en la curva de crecimiento

Esterilizar en autoclave las

pipetas, medios de cultivo y
tubos de ensaye vacíos.

Inocular 10 mL de cultivo en un
matraz de 250 mL con 100 mL de
CN.

Homogeneizar el cultivo agitando Con una pipeta, tomar 3 mL y

suavemente.
Inoculación de matraces y
tratamiento de muestras.
Colocar el matraz en un agitador
orbital a 100 rpm inocubando a
temp correspondiente.
pasar a un tubo de ensaye.
Tomar muestras de 3 mL cada
30 min hasta completar 4 hrs de
incubación.

Leer la densidad óptica (D.O.) de Cuando las muestras reporten

cada muestra en un una D.O. igual o mayor a 8 se
espectrofotómetro a 560 nm. prepararán diluciones con CN .

Dr. Víctor Alfredo Nolasco Arizmendi T. S. U. Química Industrial 5QI-G3

Oscar Obregón Campos
Preparación y esterilización
de medios de cultivo.
sobre el crecimiento microbiano
Efecto de la actividad del agua
Inoculación de
microorganismos.
Observación y medición del
crecimiento.
Dr. Víctor Alfredo Nolasco Arizmendi
Preparar 200 mL de AN con
NaCl .5 y 10%
Esterilizar los medios en
autoclave. 14
Vaciar en cada caja petri 25 mL Dejar que los medios se enfrien
de medio. y solidifiquen.
Etiquetar las cajas.
Dividir cada caja en cuatro
cuadrantes e indicar el nombre
de cada microorganismo.
Con el asa inocular en linea el
microorganismo Inocular las cepas de la caja
correspondiente al cuadrante de con diferentes medios.
cada caja.
Incubar las cajas en forma
invertida a 30°C durante 48 hrs
y observar crecimiento.
El ancho de las líneas crecidas
Medir el ancho promedio de
en las cajas con 0% de
cada linea inoculada y
sacarosa serán el control de
registrarla.
crecimiento.
Describir la morfología de un
microorganismo de cada tipo.
T. S. U. Química Industrial 5QI-G3
Oscar Obregón Campos
Son compuestos que se Afectan el crecimiento
Definición: obtienen a partir de bacterias, microbiano en diferentes
hongos o levaduras. niveles y etapas.

Soluciones de ampicilina, Soluciones de desinfectante

Preparación de soluciones. penicilina con 100 y 1500 comercial de verduras o
15
mg/mL . limpieza.

Preparar 350 mL de AN en un
Esterilizar en autoclave.
matraz de 500 mL.
Evaluación de agentes

Preparación de medios de
cultivo.
antimicrobianos

Preparar 12 cajas petri con 25

mL de AN.

Dividir la caja en cuatro

cuadrantes y rotular cada
cuadrante.

Introducir un hisopo en la Utilizar la cepa correspondiente

suspención de la cepa y
sembrar las placas.
Inoculación de
microorganismos.
Con las pinzas de disección
tomar un disco de papel filtro,
sumergir en agua destilada y
dejar escurrir.
arrastrando el hisopo sobre
toda la superficie.
Colocarlo en el centro del
cuadrante "control",
asegurando el contacto del
disco con el agar.

Realizar esto para cada cepa y

De la misma forma se
diluciones corespondientes de
sumergen discos de papel en
cada agente. Dejar incubar a
las diferentes concentraciones.
37°C x 24hrs.

Retirar con la pinza los discos y

Observación y medición del
medir el diámetro de las zonas
efecto.
Dr. Víctor Alfredo Nolasco Arizmendi de inhibición.
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