ESPECTROFOTOMETRÍA AL ULTRAVIOLETA.

PRACTICA DE LABORATORIO 2 y 3.
Espinoza Orozco, Dulce Alejandra.
Fausto Velázquez, German Josué
Franco Rodríguez, Luis Arturo
Miramontes García, Diego Joham
Robledo Flores, Luis Ricardo.

Centro universitario de ciencias exactas e ingenierías. Ciclo 2022-B.

Laboratorio de análisis químico instrumental para ingenieros.
Guadalajara Jalisco, México. 28/sep./2022.
 PRACTICA N°2 :DETERMINACION ESPECTROFOTOMETRICA AL UV DE
MEZCLAS BINARIAS.
PROCEDIMIENTO ANALÍTICO.

1.- Obtuvimos los espectros de absorción para cada compuesto de la mezcla binaria
(Benzoato de Sodio 10 mg/L y Sorbato de potasio 5 mg/L), en un rango de 200 nm a 350 nm.
2.- Seleccionamos la longitud de onda de máxima absorción para cada una de las sustancias
analizadas (Benzoato de Sodio 10 mg/L y Sorbato de Potasio 5 mg/L) con ayuda de los
espectros de absorción obtenidos experimentalmente.
3.- Denominamos las dos longitudes de onda como: 𝝺max1 𝝺max2.
4.- Procedimos para la mezcla problema, igual que en el paso número 1.
5.- Determinamos las Absorbancias experimentales de 1) Benzoato de sodio 10 mg/L, 2)
Sorbato de Potasio 5 mg/L y 3) la muestra problema, a las dos longitudes de onda
seleccionadas en el paso número 3.
6.- Obtuvimos los coeficientes de extinción de Benzoato de Sodio 10 mg/L y Sorbato de
Potasio 5 mg/L a cada longitud de onda (aplicando la ecuación de de Lambert-Beer).
7.- Planteamos con los datos y las lecturas obtenidas, las ecuaciones simultáneas de la
propiedad aditiva de las absorbancias que debería tener la siguiente estructura.
DATOS OBTENIDOS:

ABSORBANCIA ABSORBANCIA
𝝺max1= 230 𝝺max2= 263

Sorbato de Potasio 5 mg/L 0.1058 0.8212

Benzoato de Sodio 10 mg/L 0.6575 0.01070

Mezcla Problema 0.5128 0.3238

Nombre: L

CÁLCULOS REALIZADOS Y DATOS OBTENIDOS:

Ley de Lambert-Beer:

A= εLC εL de Sorbato de Potasio a 230 nm= 0.1058

5 𝑚𝑔/𝐿
= 0. 02116

εL de Benzoato de Sodio a 230 nm= 0.6575

10 𝑚𝑔/𝐿
= 0. 06575

εL de Sorbato de Potasio a 263 nm= 0.8212

5 𝑚𝑔/𝐿
= 0. 16424
 εL de Benzoato de Sodio a 263 nm= 0.01070
10 𝑚𝑔/𝐿
= 1. 07𝑥10
−3

Sistema de ecuaciones para obtener las concentraciones de la muestra problema

0. 5128 = 0. 02116𝑥 + 0. 06575𝑦 x= 1.89709 ppm Sorbato de Potasio.
−3
0. 3238 = 0. 16424𝑥 + 1. 7𝑥10 𝑦 x= 7.1887 ppm Benzoato de Sodio.

INVESTIGAR:
7.1¿Es posible encontrar un valor teórico de la longitud de onda de máxima
absorbancia,conociendo el compuesto y la estructura química?
Se dice que cuando las moléculas interactúan con la energía radiante en la región visible y
ultravioleta,la energía de los electrones de valencia aumenta y se desplaza a niveles
mayores,sin embargo se observa que el espectro de absorción es una función de la estructura
completa de una sustancia,es por ello que es una propiedad altamente específica de la
estructura molecular del material absorbente.
así también sabemos que existen factores que afectan la lectura de los espectros obtenidos,por
ejemplo el solvente,o el ph,que deben ser controlados para el estudio de una sustancia en
particular,dichos factores no nos garantizan una longitud de onda fija para cierta sustancia
considerando también la concentración del analito, aun conociendo la estructura química.
7.2. límite de transparencia de 4 solventes empleados en la región UV.
Cloroformo 360nm
Ciclohexano +360nm
Metanol 280nm
Agua 320nm

CONCLUSIÓN:
Se puede llegar a la conclusión que aunque se tenga una mezcla multicomponente se puede
saber las concentraciones de ambos a sus longitudes de onda óptimas utilizando la técnica de
análisis de multicomponentes, donde se preparan dos estándares para calcular sus coeficientes
de extinción molar a tales longitudes de onda y así aplicar un sistema de ecuaciones para
resolver a sus absorbancias dadas.
Esta técnica puede ser utilizada para mezclas con muchos componentes, si es que tienen
longitudes de onda diferentes donde no se interfieran unas a las otras.
BIBLIOGRAFÍA:
*Villagomez, L. (2022, 12 marzo). PRACTICA mezclas binarias [Vídeo]. YouTube. Recuperado 29 de

septiembre de 2022, de https://www.youtube.com/watch?v=uCebl_3d31Q&feature=youtu.be

 *Garcia Hernández, P. (2022). Análisis de mezclas binarias de cafeína y AINEs contenidos

en medicamentos comerciales.

PRERREQUISITOS:
1- ¿Cuáles son los propósitos al realizar esta práctica?
Observar la absorción de un compuesto por medio de los rayos UV y comprobar
experimentalmente sus propiedades.
2-¿Qué principio sigue la técnica cuantitativa de análisis de multicomponentes?
La absorbancia total es la suma de las absorbancias de cada componente de la mezcla
3-Define qué es un grupo cromóforo y un auxocromo
Cromóforo: parte de la molécula que absorbe la luz.
Auxocromo: partícula que no absorbe la luz pero modifica la que la absorbe.
4- Para una mezcla binaria ¿qué criterios se sigue para seleccionar las longitudes de
onda de mínima interferencia?
Que uno de los componentes de la mezcla no sea absorbido y el otro sí substancialmente
5-¿Por qué el uso de agua como solvente es limitado en UV?
Ya que no es transparente en la región del espectro de UV y afecta la absorbancia del sistema
6-¿Cómo se plantean las ecuaciones algebráicas simultáneas? ¿Qué ley la fundamenta?
Teniendo dos ecuaciones donde se involucren dos incógnitas. La ley de regresión, se basa en
la Ley de Beer
7-Atendiendo al sistema de ecuaciones ¿qué objetivo tiene su resolución?
Encontrar las concentraciones de cada una de las longitudes de onda.
8-Definir el efecto batocrómico e hipsocrómico
Batocrómico: desplazamiento mayor a longitudes de onda mayores.
Hipocrómico: desplazamiento a longitudes de onda menores
9-Definir el efecto hipercrómico e hipocrómico
Hipercrómico: misma longitud de onda pero aumenta la intensidad
Hipocrómico: misma longitud de onda pero disminuye la intensidad
PRACTICA N°3: DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DE CAFEÍNA
EN BEBIDAS DE COLA.

Procedimiento analítico: práctica 3.

a) Colocamos en un recipiente solución madre de 0.125 mg/mL de cafeína volúmenes

adecuados para preparar una serie de soluciones estándar de 0, 5, 10, 15 y 20
mg/L.Cuyo volumen final sea 25 mL.
b) Desgasificamos un refresco de cola por medio de agitación.
c) Diluimos la muestra del refresco 25 veces.
d) Elaboramos un espectro en la región ultravioleta en un rango de 200 a 350 nm, para la
muestra.
e) Seleccionamos 3 longitudes de onda, mínima, máxima y mínima mediante un
software.
f) Medimos para cada solución estándar y para la muestra, las absorbancias que presenta
a 3 longitudes de onda seleccionadas del espectro ultravioleta de una bebida de cola
diluida
g) Determinamos la absorbancia corregida que le corresponde a cada concentración
mediante la siguiente fórmula:

(𝐴3 − 𝐴1)
𝐴𝑐 = [ (λ3 − λ1)
(λ2 − λ1) + 𝐴1]

En donde:

AC = Absorbancia corregida

A1 = Absorbancia a 245 nm (λ1)

A2 = Absorbancia a 274 nm (λ1)

A3 = Absorbancia a 296 nm (λ1)

Datos obtenidos: práctica 3.

Solución λ1: 245 nm λ2: 274 nm λ3: 296 nm Absorbancia

Absorbancia Absorbancia Absorbancia corregida

0 ppm 0 0 0 0 (calibración)
 5 ppm 0.0806 0.2390 0.0259 0.1895

10 ppm 0.1383 0.4676 0.0540 0.3772

15 ppm 0.1340 0.6690 0.0262 0.5963

20 ppm 0.2486 0.9621 0.0716 0.8141

Bebida diluida 0.3590 0.5101 0.3273 0.1692

Determinar las absorbancias corregidas para cada solución (cálculos):

AC1 = 0.2390 - [(0.0259 - 0.0806)/(296 - 245) nm * (274 - 245) nm + 0.0806] = 0.1895

AC2 = 0.4676 - [(0.0540 - 0.1383)/(296 - 245) nm * (274 - 245) nm + 0.1383] = 0.3772

AC3 = 0.6690 - [(0.0262 - 0.1340)/(296 - 245) nm * (274 - 245) nm + 0.1340] = 0.5963

AC4 = 0.9621 - [(0.0716 - 0.2486)/(296 - 245) nm * (274 - 245) nm + 0.2486] = 0.8141

AC5 = 0.5101 - [(0.3273 - 0.3590)/(296 - 245) nm * (274 - 245) nm + 0.3590] = 0.1692

Concentración (ppm) Absorbancia corregida

0 0

5 0.1845

10 0.3772

15 0.5963

20 0.8141

Mediante regresión lineal, tenemos:

a = -0.0116

b = 0.0407

r = 0.9992
Posteriormente, determinamos la concentración de la cafeína por medio de la “χ” (obtenida
de la regresión lineal) en conjunto con la absorbancia corregida del refresco diluido. De la
siguiente manera:

0.1692χ = 4.442 mg/mL cafeína.

Investigación:

¿Cómo sería el resultado si se empleara el Método Tradicional De Medición de

Absorbancia? (Demostrarlo con cálculos)

Se utilizarán los datos obtenidos a la longitud de onda donde la absorbancia sea la mayor, que
en este caso es la de 274 nm y con estas se harán una regresión lineal para saber el valor de la
concentración a tal absorbancia:

Concentración (ppm) Absorbancia

0 0

5 0.2390

10 0.4676
 15 0.6690

20 0.9621

Muestra 0.5101

Regresión Lineal:

a = -0.0033

b = 0.047084

r = 0.9984

Ahora metiendo el valor de la absorbancia de la muestra (0.5101) dentro de nuestra ecuación

de la recta nos da una concentración de:

C = 10.9039 ppm

Como podemos ver, comparando con el resultado de la absorbancia corregida, la diferencia es

bastante considerable; se puede decir que sin corregir la absorbancia y midiendo con la
interferencia tenemos una concentración de casi el doble de valor. Por lo que podemos decir
con confianza que el cálculo de la absorbancia corregida es mucho más preciso.

Conclusión: los resultados en la realización de esta práctica nos hizo darnos cuenta de
manera gráfica las interferencias presente en la lectura de diversas sustancias como la cafeína
o la vainilla,confirmando así que en lugar de utilizar una técnica que disminuya dichas
interferencias podemos hacer el uso práctico de la absorbancia corregida.

Observamos una linealidad en el gráfico realizado de absorbancia vs

concentración,confirmando que,después de la aplicación de la fórmula de absorbancia
corregida,se obedece la ley de lambert-beer.

BIBLIOGRAFÍAS:

*Villagomez, L. (2022b, marzo 30). CAFEINA EN BEBIDAS DE COLA [Vídeo]. YouTube.

Recuperado 29 de septiembre de 2022, de
https://www.youtube.com/watch?v=waiJxL6TOMo&feature=youtu.be.
Prerrequisitos: práctica 3

1-¿Cuál es el objetivo de ésta sesión experimental?

Aplicar técnicas de corrección de interferencia para encontrar cafeína en una solución
mediante UV

2-¿Qué característica especial tiene la gráfica de calibración y principalmente el proceso

de medición de la absorbancia de la muestra?

Se calcula para cada estándar, tomando en cuenta la absorbancia y longitud de onda en 3

puntos

3-¿Por qué se realizan las modificaciones mencionadas en el punto anterior?

Para hacer una corrección y sean más precisos los datos

4-Definir el término de absorbancia corregida

Modificación de la absorbancia para obtener una modificación

5-Considerando linealidad entre las concentración y la absorbancia corregida ¿qué

modificaciones deben de hacerse a la ley de Beer-Lambert para aplicarse?

Tomar esas dos variables como una sola y aplicar 𝐴𝑐 = ε𝑙

6-¿Cuáles estrategias adicionales son aplicadas para disminuir el efecto de las

interferencias en las mediciones espectrofotométricas?

Espectroscopia de absorción atómica, controlar las fuentes de contaminación como el uso de

guantes, pipetas y pureza de ácidos.

7-¿Podría ser empleado el método de esta práctica para determinar cafeína en café
soluble?

Sí

8- Algunos químicos han sugerido eliminar el color por un proceso de adsorción con
carbón activado y luego cuantificar la cafeína por método tradicional (absorbancia
absoluta o total) ¿Qué opinas?

Que si el carbón activado no afecta en la medición de espectroscopía está bien su uso.

(Después de las bibliografías se añaden las fotos de los prerrequisitos firmados)