Tarea 7.

Fluorescencia

1- En algunos métodos fluorimétricos, el amortiguamiento de la fluorescencia es proporcional a la

concentración de las especies deseadas, por ejemplo, el metal X puede suponerse que
amortigua la fluorescencia del ligando L. En una serie de medidas se obtuvieron los siguientes
datos:
Solución Señal fluorescente
L (M) X (M)
Blanco 0.0
5.0x10-6 84.0
5.0x10-6 1.0x10-6 67.2
5.0x10-6 2.0x10-6 50.5
5.0x10-6 3.0x10-6 33.6
5.0x10-6 4.0x10-6 16.9
5.0x10-6 5.0x10-6 0.50
5.0x10-6 6.0x10-6 0.00
Encuentre la concentración de X en una solución, la cual se diluyó 20 veces para después diluirse
2:15, para después tratase en la misma forma, y dio una lectura de 26.8 unidades.

X Y
Concentración Lectura Regresión lineal.
0 84.0
a = 83.92380952
1.0x10-6 67.2
2.0x10-6 50.5 b = -16722857.14
3.0x10-6 33.6
4.0x10-6 16.9 r = -0.999991398
5.0x10-6 0.50
6.0x10-6 0.00
Muestra 26.8
𝑦 = 𝑏𝑥 + 𝑎

𝑦 − 𝑎 26.8 − 83.92380952
𝑥= = = 3.415912068 × 10−6
𝑏 −16722857.14

20 17
3.415912068 × 10−6 ( ) ( ) = 5.8071 × 10−4 𝑀 𝑑𝑒 𝑋
1 2
2- La forma reducida del dinucleótido de nicotinamida y adenina (NADH) es una coenzima
importante y muy fluorescente. Tiene un máximo de absorción de 340 nm y un máximo de
emisión a 465 nm. Las soluciones patrón de esta sustancia generan las siguientes intensidades
de fluorescencia:

Concentración de NADH (µmol/L) Intensidad relativa

0.100 2.24
0.200 4.52
0.300 6.63
0.400 9.01
0.500 10.94
0.600 13.71
0.700 15.49
0.800 17.91
Si una solución de concentración desconocida se diluye 1:4, y después 20 veces, y se obtiene
una fluorescencia relativa de 12.16 ¿Cuál será su concentración de NADH?

X Y
Concentración Lectura
0.100 2.24 Regresión lineal.
0.200 4.52 a = 3.571428572 X 10-4
0.300 6.63
0.400 9.01 b = 22.34642857
0.500 10.94 r = 0.999563581
0.600 13.71
0.700 15.49
0.800 17.91
Muestra 12.16
𝑦 = 𝑏𝑥 + 𝑎

𝑦 − 𝑎 12.16 − 3.571428572 × 10−6

𝑥= = = 0.544158382
𝑏 22.34642857

µ𝑚𝑜𝑙 5 20 µ𝑚𝑜𝑙
0.544158382 ( ) ( ) = 54.4158 𝑑𝑒 𝑁𝐴𝐷𝐻
𝐿 1 1 𝐿
3- A cuatro alícuotas de 10,0 mL de una muestra de agua se adicionaron 0.00, 1.00, 2.00 y 3.00 mL
de una solución estándar de NaF que contenía 1000.0 ppb de F- y se le realizaron dos diluciones:
1:9 y después se tomó 1 mL y se aforó a 10mL. Se adicionaron a cada una 5.00 mL exactos de
una solución que contenía un exceso de complejo de Al con el rojo de Alizarina R, un complejo
fuertemente fluorescente, y las disoluciones se diluyeron a 50.0 mL. De la muestra se tomaron
2mL y se aforaron a 50mL para después realizar una disolución 1 a 5. La intensidad de de
fluorescencia de las cuatro disoluciones y de un blanco fueron las siguientes:
mL de muestra mL de estándar de F- mL de complejo Al-rojo Lectura
Alizarina R
0.00 0.00 5.00 73.0
10.00 0.00 5.00 68.2
10.00 1.00 5.00 55.3
10.00 2.00 5.00 41.3
10.00 3.00 5.00 28.8
-
Determine la concentración molar de F en la muestra.

1 1
1000 𝑝𝑝𝑏 ( ) ( ) = 10 𝑝𝑝𝑏
10 10
0 𝑚𝑙 2 𝑚𝑙
10 𝑝𝑝𝑏 ( ) = 0 𝑝𝑝𝑏 10 𝑝𝑝𝑏 ( ) = 0.4 𝑝𝑝𝑏
50 𝑚𝑙 50 𝑚𝑙
1 𝑚𝑙 3 𝑚𝑙
10 𝑝𝑝𝑏 ( ) = 0.2 𝑝𝑝𝑏 10 𝑝𝑝𝑏 ( ) = 0.6 𝑝𝑝𝑏
50 𝑚𝑙 50 𝑚𝑙
X Y
Concentración Lectura Regresión lineal.
0 ppb 68.2 a = 68.23
0.2 ppb 55.3
0.4 ppb 41.3 b = -66.1
0.6 ppb 28.8 r = -0.999783783
Blanco 73
𝑦 = 𝑏𝑥 + 𝑎

𝑦−𝑎 73 − 68.23
𝑥=| |=| | = 0.072163388 𝑝𝑝𝑏
𝑏 −66.1

0.072163388 µ𝑔 𝐹 − 1𝑔 1 𝑚𝑜𝑙 𝐹 − 50 5 50
( ) ( ) ( ) ( ) ( ) = 2.3738 × 10−6 𝑀 𝐹 −
1𝐿 1 × 106 µ𝑔 19 𝑔 2 1 10