Laboratorio

Farmacéutico y
Técnicas de
Esterilización

MSc. Eileen Castillo Q.

Octubre 2022
 Nomas de buena manufactura
Locales y equipos
Las normas de buena manufactura guían a la industria farmacéutica en el diseño de las salas criticas en las cuales se
desarrollaran formas farmacéuticas cuyas características ya sea de fabricación y/o embazado necesiten de un control
mayor

Objetivos
➢ Minimizar riesgos de contaminación.
➢ Minimizar errores.
➢ Facilitar la limpieza.
➢ Facilitar la validación de los procesos.

Infraestructura de paredes, suelos y techos

➢Fácil lavado y desinfección: resistir agua a presión y agentes sanitizantes.
➢Sin grietas, ni ranuras.
➢Materiales que no desprendan partículas.
➢Materiales que no acumulen cargas electrostáticas. NCF europeas (EU GMP´s) Federal STD. 209
Normas ISO: 14644, 14698
ISPE (International Society of Pharmaceutical Engineers)
Diseño de plantas HVAC (“Heated and Ventilated Air Conditioned”)
 Planificación y diseño
➢Normas de ingeniería (ISPE).
➢Mínimo riesgo y costo óptimo:
➢Facilitar flujos de procesos y personal.
➢Establecer condiciones ambientales y de servicios adecuadas a los procesos.
➢Delimitar zonas auxiliares y salidas de emergencia.
➢Establecer relación adecuada con instalaciones externas.
➢Facilitar regímenes de limpieza y de mantención de salas y equipos.
 Planificación y diseño
Planificación y diseño
 Criterios de clasificación de salas
Área Gris
• ZONAS NO CRITICAS
• Almacenes
• Sala de envasado secundario
• Uso de vestuario general
• Circulación restringida de
personal
• Productos no expuestos al
ambiente (Envases cerrados)
Área Gris/Blanca Área Blanca
• ZONAS SEMICRITICAS • ZONAS CRITICAS
• Pasillos • Salas de fabricación
• Esclusas • Sala de pesadas
• Cambio de vestuario (Fraccionamiento)
para acceso a zona • Salas de envasado
crítica primario
• Productos a granel que • Deben ser lo más
circulan entre áreas reducidas posible,
deben estar protegidos garantizando la
en contenedores operatividad
cerrados • Circulación de personal
• Se debe controlar y materias primas debe
circulación entre zonas ser altamente restringida
críticas y no críticas • PRESION - / +
• PRESION - / +
 Criterios de clasificación de salas

Área Gris Área Gris/Blanca Área Blanca

 Área biolimpia
FEDERAL STANDARD 209 D a ISO…..
"Una habitación donde la concentración de partículas en el aire está
controlado por límites especificados".

BRITISH STANDARD 5295

"Una habitación con control de partículas contaminantes, construida y
empleada para minimizar la introducción, generación y retención de
partículas y donde la temperatura, humedad y presión es controlada según necesidades".

Espacio o lugar delimitado en donde la contaminación ambiental, en

términos de partículas y microorganismos, así como la carga
microbiana en superficies (murallas, cielos, pisos y equipos) y la
carga microbiana sobre el personal (ropa, mascarillas, gorros y
guantes) se encuentran dentro de límites especificados.
 Área biolimpia
Principales
Libre de
contaminantes
 Área biolimpia
Obtención
Se debe construir de acuerdo a las normas internacionales y se debe sanitizar de acuerdo a lo siguiente:

Remover la suciedad mediante lavado adecuado.

2. Destruir y eliminar MO con agentes sanitizantes. La efectividad depende de…

➢ Concentración del agente sanitizante
➢ Tiempo de contacto adecuado
➢ Modo de aplicación del agente sanitizante
➢ Vehículo del agente sanitizante
➢ Presencia de materia orgánica
➢ pH óptimo del sanitizante
➢ Tipo de microorganismo en el área
 Área biolimpia
Aire
Agentes sanitizantes Control mediante:
➢Hipoclorito de sodio Ataca Metales ➢Aire Filtrado Estéril
➢Amonios Cuaternarios: Cloruro de Benzalconio ➢Flujo Laminar de Aire
➢Etanol 70% ➢Lámparas U.V.
➢Formaldehido o Glutaraldehído
➢Solución de yodo al 4% Muy Corrosivo Tipos de filtros usados
➢HEPA (High Efficiency Particulate Air) (0,3 μM)
Mantención y control
➢ AIRE ➢ULPA (Ultra-Low Particulate Air) (0,12 μM)
➢ PERSONAL
➢ MATERIAS PRIMAS, EQUIPOS Y MATERIALES
 Área biolimpia
Flujo laminar de aire
 Área biolimpia
Flujo laminar de aire
 Área biolimpia
Flujo laminar de aire

Flujo laminar vertical ampliamente utilizado para el

manejo y fabricación de formas farmacéuticas con
ingredientes farmacéuticos activos altamente tóxicos.

En los modelos de flujo vertical, el aire filtrado

atraviesa luego la cámara principal de la cabina en
una corriente de aire laminar vertical
(unidireccional) antes de ser expulsado por la
abertura frontal de la cabina
 Área biolimpia
PRECAUCIONES:
➢ Generación de turbulencias
➢ Flujo de aire en contacto con objetos
➢ Movimientos mecánicos y humanos
 Área biolimpia
Mantención y control

Personal, debe Materias primas con

cumplir con: riesgo
• Las Normas GMP. • Agua y red de distribución.
• Ser prolijo, ordenado, confiable y • Materias Primas de origen
capacitado. natural.
• Vestir el uniforme • Equipos empleados.
• adecuado.
Clasificación de áreas asépticas
 Clasificación de áreas asépticas
Controles
https://www.youtube.com/watch?v=uvhaPu1-fdE
https://www.youtube.com/watch?v=tMAbWukbaCY
Esterilización
 Esterilización
Es un conjunto de procedimientos físicos y químicos o combinaciones de ambos para destruir o
eliminar microorganismos vivos o muertos desde formas farmacéuticas estériles, como colirios,
parenterales, ungüentos oftálmicos, materiales de curación, aire y ambiente.

Equipos

Ambiente de
Envases
trabajo

Materias Fuentes
Personal
primas contaminantes
 Esterilización
Por que esterilizar ?
➢Evitar contaminación del preparado durante su fabricación
➢Impedir una contaminación posterior de la FF
➢Aumentar la estabilidad de la FF
➢Evitar la transmisión de enfermedades a través de la FF

Como ?
Agentes que • Bacteriostático
detienen el
crecimiento • Fungistático
microbiano

Agentes que • Bactericida

destruyen los • Fungicida
MO • Esporicida
 Esterilización
Existe una gran variedad de métodos tanto químicos como físicos con los cuales es factible esterilizar las FF. Estos
permiten la destrucción de las bacterias en su forma vegetativa sin mayores problemas, sin embargo en su
forma latente (esporas) se genera una mayor resistencia al proceso

Método

Esterilización por Esterilización por Esterilización por Esterilización

Filtración
calor seco calor húmedo radiación química

Estufas
Ionizante Oxido de etileno
Túneles Autoclaves Vapor de H2O2
Membranas
No ionizante
continuos
 Esterilización
Para comprobar que el proceso de esterilización fue efectuado de forma correcta existen INDICADORES
BIOLÓGICOS que evalúan la efectividad del proceso.

➢Corresponden a esporas bacterianas altamente resistentes.

➢Son más resistentes que la contaminación habitual del producto a esterilizar.
➢Existen en el mercado variedades útiles para evaluar un determinado método de esterilización.

Método de Especie bacteriana

esterilización
Calor seco Bacillus Subtilis
Calor húmedo Bacillus Stearothermophilus
Radiación Bacillus pumilus
Bacillus stearothermophilus
Bacillus Subtilis
Oxido de etileno Bacillus stearothermophilus
 Esterilización
Calor
El calor es el método de esterilización mas utilizado debido principalmente a que cumple con tres características de
gran importancia

1.- Fácil de controlar Beneficioso para la

2.- Bajo costo industria farmacéutica
3.- Bajo riesgo de contaminación

El proceso de esterilización realizado a través de el calor puede ser desarrollado ya sea aplicando calor seco o calor
húmedo, este ultimo genera un mayor intercambio de calor pero a una menor temperatura si es comparado con el
calor seco . La efectividad de ambos procesos estará dada por :

➢Grado de calor
➢Tiempo de exposición
➢Humedad presente
 Esterilización
Aspectos cinéticos de la destrucción microbiana
La destrucción, por la acción del calor, de los microorganismos presentes en un producto, no es instantánea, sino que es
progresiva y sigue cinéticas de orden uno respecto del tiempo. Ello implica que, si el producto tiene una población
microbiana inicial de N0 gérmenes, al cabo de un tiempo t esta se habrá reducido a un valor Nt, de modo que:

Expresión en la que k es la constante de velocidad de destrucción, que es una medida de la eficacia del tratamiento de
esterilización aplicado.
 Esterilización
Una representación del logaritmo de número de
Aspectos cinéticos de la destrucción microbiana microorganismos supervivientes frente al tiempo
Tiempo de reducción al décimo (D). Es el tiempo necesario para reducir al 10 sigue un trazado rectilíneo de pendiente negativa
% la población microbiana inicial. El valor de D es inversamente proporcional e igual a k o de la que se puede obtener el valor
de k
a la constante de velocidad de destrucción (k).

Factor de inactivación (FI). Los resultados de aplicar un determinado ciclo de

esterilización, en términos de la reducción que experimenta la población
microbiana inicial, se expresan a través del factor de inactivación que
corresponde al cociente entre el número inicial y el número final de
microorganismos. Cinética de degradación de microorganismos

El factor de inactivación permite poner de manifiesto la

importancia de la contaminación inicial
del producto y el concepto de probabilidad de que en el
producto esterilizado permanezcan microorganismos
viables.
 Esterilización
Aspectos cinéticos de la destrucción microbiana

Factor Z. Este parámetro permite relacionar la eficacia de los procesos de esterilización por calor con la temperatura. En concreto, se
define Z como el salto térmico que produce una reducción de 10 veces en el tiempo de esterilización necesario para producir un
determinado grado de reducción en la población microbiana.

Existe una relación lineal entre log D y temperatura

Factor F. Es un índice de letalidad que permite estandarizar la capacidad esterilizante de cualquier ciclo de esterilización. El valor de F es el
tiempo equivalente de esterilización, a una temperatura de referencia, de cualquier ciclo de esterilización llevado a cabo a cualquier
temperatura.

Donde
t es el tiempo
T la temperatura de esterilización del ciclo que se pretende estandarizar
 Esterilización
Calor Húmedo

Características Mecanismo de acción Ventajas Inconvenientes

➢Eficacia depende de
temperatura, tiempo y
presencia o no de agua en el
medio.
Se recomienda para
fluidos acuosos
termoestables
Coagulación y ➢De elección para fluidos ➢Condiciones deben ser
desnaturalización de acuosos termoestables. ajustadas para cada producto
proteínas esenciales ➢Tiempos y temperaturas de y carga utilizada.
para los MO funcionamiento menores a NO ASEGURA
Calor seco DESPIROGENIZACIÓN

Importante
➢NO PUEDE SER USADO EN FLUIDOS NO ACUOSOS !!!!!!!

➢Precaución durante la transferencia de T° entre el autoclave y zonas con T° ambiente

(Explosiones) y también entre diferencias de presión.

Calor Húmedo: Etapas
Fase de
calentamiento
• Aumento de T° y P hasta
valores preestablecidos.
• El aire se renueva por una
bomba de alto vacío desde
la cámara.
• La disposición del material
es crítica para lograr el
objetivo.
Esterilización
Fase de Fase de
esterilización enfriamiento
• Exposición del producto a T°
• Disminución de T° y P a
por el tiempo determinado.
• El tiempo se calcula con cepa
niveles ambientales.
• Etapa crítica para
control para autoclave y carga
determinada. funcionalidad e integridad
• Se agrega un tiempo de del material utilizado.
seguridad (generalmente es la
mitad del tiempo d exposición).
 Esterilización
Calor Húmedo: Controles

➢Sensores de T°

➢Sondas calibradas a ± 0,1 °C a T°<120°C

± 0,4 °C a T°<300°C.
➢Sensores de presión Capacidad para
Error < 5% para P < 2 bar. mantener T y P cte.
Mínimo 10 sondas
➢Integridad de los filtros de aire distribuidas

➢Bioindicadores (B. stearothermophilus)

Reducción de al menos 10-6 carga microbiana.

➢Indicadores químicos (Tiras reactivas)

 Esterilización
Calor Seco
Características Mecanismo de Ventajas Representantes
acción
➢Aplicable a productos sensibles a la Degradación y Esteriliza y ➢Flameado (Uso acotado)
humedad, pero termoestables. carbonización de los ➢ Horno o estufa de calor seco
➢ Aplicable a productos impermeables al lípidos y proteínas de
despirogeniza
➢ Túnel de esterilización y/o
agua. los MO.
DE ELECCION PARA FLUIDOS
despirogenización
NO CUOSOS TERMOESTABLES
(ceras, aceites, parafinas, glicerol, etc.)
 Esterilización
Calor Seco: Estufa de calor seco

➢Transferencia de calor por convención.

➢El aire debe circular en el material dentro del dispositivo.
➢Ciclos se diseñan excediendo el tiempo y la T° mínimos, para asegurar la esterilidad y
despirogenización.
➢Temperatura: 180 – 300°C
➢Tiempo del ciclo: 3 horas

Fase de secado Fase de Fase de esterilización Fase de enfriamiento

Entra aire por filtro HEPA, que
se humedece con el material y
se
extrae al exterior.
calentamiento
Se re-circula aire caliente a
través de los filtros HEPA
Se alcanza T y se mantiene Se enfría aire hasta que el
recirculación por el tiempo material pueda ser manipulado.
necesario
para el proceso.

Calor Seco:Túnel de esterilización
Túnel de convección forzada
➢Genera calor por medio de resistencias
eléctricas.
➢El material de vidrio es calentado en la
zona de calentamiento y de mantención del
túnel a 250 - 450°C, y gradualmente enfriado
mediante aire filtrado (HEPA).
➢Tiempo de convección forzada: 40 – 60
min.
Esterilización
Túnel infrarrojo
Calor generado por resistencia
eléctrica o tubos de cuarzo.
Túnel de flameado
➢Usa la convección y la conducción para la
transferencia de calor.
➢Puede procesar hasta 10000 ampollas
/hora.
➢Son calentadas a 425°C por 1 minuto
➢Enfriamiento por aire filtrado.
 Esterilización
Calor Seco: Controles

➢Sistemas de filtración:
Filtros HEPA.

➢Sensores de temperatura

➢Velocidad del aire

Túneles de esterilización

➢Control de partículas

➢Bioindicadores:
Bacillus subtilis var. Niger.
Reducción microbiana de al menos 10-6
 Esterilización
Radiación
Tipo Mecanismo de acción Aplicaciones Desventajas

Radiación UV Altera moléculas esenciales de
ácidos nucléicos celulares
(ADN y ARN)
acción germicida
Reducción de carga microbiana
en:
Aire - Agua
Superficies de procesamiento de
productos farmacéuticos
Menor eficacia que rayos γ y β.
Bajo poder de penetración.
Efecto letal sólo sobre MO expuestos
en forma directa.
Riesgo de proliferación Alteración de
p.a.

Radiación ionizante Ionizan moléculas de ADN de Elección para principios activos Puede afectar vidrio y algunos plásticos
los MO. Partículas β (Electrones termolábiles (vitaminas, (Cambios de color y fragilidad)
Impide la acelerados) esteroides, Alto costo de producción e
multiplicación Interacción directa con e- de hormonas) instalaciones complejas
celular ADN Equipamiento médico que no
Rayos γ Diferentes mecanismos soporta esterilización térmica NO DESTRUYE PIROGENOS
que producen expulsión de e- (jeringas, agujas, catéteres,
desde prótesis, placas de petri, suturas e
ADN. implantes quirúrgicos).

Lámpara de Hg (λ = 253,7 nm) ADN y ARN absorben fuertemente a λ = 253,7 nm

 Esterilización
Radiación UV
 Esterilización
Radiación Ionizante

Ventajas de la radiación ionizante

➢Sólo produce un ligero aumento de T° con la misma eficacia letal
que tratamientos térmicos.
➢Proceso fácil de controlar
➢Acoplable a sistemas de producción continua
 Esterilización
Radiación Ionizante

➢Fuente de irradiación: Co60 o Cesio137.

➢Blindaje biológico: debe evitar daño a las personas y medioambiental. Lo forma una
celda de irradiación.
➢Los materiales hacen un recorrido alrededor de una fuente de irradiación.
➢Dosis mínima requerida: depende del tipo de contaminación y carga microbiana.

Sensibilidad microbiana
Bacterias > hongos > levaduras > virus > esporas
 Esterilización
Filtración
Operación farmacéutica en la cual se separan las partículas sólidas del fluido dónde están contenidas al hacerlas
pasar a través de un material poroso llamado
filtro. Es un tamizaje físico, es decir, un proceso mecánico, retiene partículas del tamaño de los m.o. (bacterias,
levaduras y hongos).

Aplicaciones
➢Líquidos con productos termolábiles (proteínas, plasmas, soluciones de
anticuerpos)
➢Filtración de aire en zonas de procesamiento aséptico (zonas limpias,
biolimpias y cámaras de flujo laminar).
 Esterilización
Tipos de Filtración
Filtros de profundidad:
➢Estructura de vidrio, porcelana o materiales fibrosos.
➢Mecanismo: adsorción por fuerzas electrostáticas o retención en matriz del filtro.
➢Permiten bajos niveles de flujo.
➢Requieren PREFILTRACION debido a las partículas de gran tamaño.

Filtros de membrana:
➢Estructura polimérica homogénea, con poro definido (0,45; 0,22 o 0,12 μm).
➢Materiales: ésteres de celulosa, fluoruro de vinilideno, teflón, PVC.
➢EL FILTRO DEBE SER ESTERILIZADO!
 Esterilización
Selección del tipo de filtro
➢Tipo de fluido:
Gases
Parenterales acuosos u oleosos

➢Tipo de contaminante esperado

Tamaño de poro menor al contaminante

➢ Volumen a filtrar

➢Componentes del fluido

No se lleva a cabo sobre el producto envasado (no es esterilización terminal)

En general, no es aceptado como una opción de bajo costo.
 Esterilización
Efectividad del sistema de filtración
➢Composición (Membrana o profundidad)
➢ Porosidad
Volumen de poros respecto al total:
40 a 80 % para líquidos
85 % para gases
➢Velocidad de flujo Capacidad de retención
➢Capacidad biológica
➢Prueba de retención bacteriana (Validación de filtros)
Filtro 0,22 μm Pseudomona diminuta
Filtro 0,45 μm Serratia marcescens
➢Resistencia Esterilizable con vapor de agua.
➢Compatibilidad
No debe desprender contaminantes.
Con el API o FF a esterilizar y con el solvente
➢Capacidad de adsorción
 Esterilización
Filtros HEPA
Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air) filtros de alta eficiencia capaces de retener partículas ≥ 0,3 μm con una
eficiencia mínima del 99,97%.

Cuando todo el aire que entra a la zona de trabajo es filtrado a través de los filtros HEPA se produce un flujo
unidireccional, ya que el aire se mueve a través del área de trabajo con una velocidad uniforme a lo largo de líneas
paralelas logrando un barrido o eliminación de las partículas presentes en el mismo

Agentes Químicos
Características
➢Su espectro de acción varia
desde bacterias en estado
vegetativo
➢ Hongos y levaduras
relativamente resistentes
Esterilización
Mecanismo de acción Ventajas Inconvenientes
Alquilación de ADN, ARN ➢Alternativa a la esterilización por ➢Ciclos de esterilización largos y
(adenina, guanina), enzimas y calor complejos
cofactores enzimáticos (ácido ➢Instalaciones más sencillas y de ➢ Elevada toxicidad del oxido de
fólico,piridoxal, PABA) que menor costo que esterilización por etileno
contienen grupos –OH, NH2 y - calor ➢ Vesicante en contacto con la
COOH piel, inflamable
USAR VESTUARIO
ADECUADO!!!

Importante
➢Penetra rápidamente materiales porosos o productos en polvo
➢Se elimina por exposición al aire
➢Químicamente inerte ante materiales sólidos
 Esterilización
Agentes Químicos

Representantes Efectividad
➢Óxido de etileno ➢Concentración del gas
➢Formaldehído ➢Temperatura
➢Betapropiolactona ➢Contenido de agua del microorganismo
➢Óxido de propileno ➢Estado del MO (vegetativo o esporulado)
➢Dióxido de cloro ➢Tiempo de exposición
➢Bromuro de metilo ➢Naturaleza del material a esterilizar
 Esterilización
Agentes Químicos: Cámaras de oxido de etileno

Indicadores de Esterilización:
➢Fisicoquímicos: tiras o discos que indican contacto
➢Biológicos: Bacillus subtilis variedad niger.

Ciclos de Utilización y parámetros

Variables Intervalo de valores

Concentración de EtO (mg/L) 450 – 1000
Temperatura (°C) 30 – 50
Humedad (%) 20 – 65
Tiempo de exposición (Horas) 1 – 30
Periodo de aireación (Horas) 20 – 500