Examen del tablero de descenso y observación del orificio de entrada

Los primeros hallazgos patológicos se pueden identificar durante la observación del tablero de
descanso y el orificio de entrada. La masa de abejas que entran y salen, dependiendo de la
temperatura, el clima, la hora del día y el estado de desarrollo de la colonia, brinda una
primera impresión sobre la fuerza de una colonia. Frente a la entrada se pueden encontrar
tanto abejas muertas como abejas y larvas con alteraciones del fenotipo, sacadas de la
colmena. El veterinario y el apicultor deben tomarse su tiempo para observar cuidadosamente
el orificio de entrada (Figura 3A, B). La forma en que las abejas vuelan, la forma de aterrizar
y el comportamiento de las abejas protectoras ofrecen mucha información, porque el
comportamiento inusual de vuelo puede ser un síntoma neurológico de enfermedades virales.
Además, se debe investigar el suelo frente a la colmena en busca de desechos, heces. , abejas
muertas y momias de larvas [7]. Estas observaciones, junto con una evaluación del entorno y
la colmena desde el exterior, permiten una primera evaluación del estado de la colonia

Examen clínico del superorganismo "Colonia de abejas" y observaciones de abejas vivas

El examen clínico “interno” de la colonia de abejas y de las abejas individuales son los
próximos pasos. Es importante observar las abejas adultas de todas las castas (obreras,
zánganos y la reina), así como las crías en diferentes etapas y el material de la colmena. Las
abejas melíferas son insectos sociales que pueden sobrevivir dentro de la colonia únicamente
como un superorganismo. La colonia es funcional si cada individuo realiza sus tareas. A
continuación, nos centraremos en los hallazgos clínicos en abejas adultas. El examen clínico
de las abejas y los marcos debe realizarse junto con el apicultor. De esta manera, es posible
analizar las operaciones del apicultor mientras manipula las abejas [7] . Las características
generales a evaluar después de abrir la colmena son el comportamiento de la colonia, el olor y
la fuerza de la colonia [7,31]. Normalmente, una colonia de abejas huele a cera. Si se percibe
vinagre o mal olor, es probable que haya una enfermedad. Los espacios entre los panales,
donde se ven las abejas, se pueden contar para dar una primera idea del tamaño de la colonia.
Esto podría confirmarse más adelante estimando el número de abejas, celdas de cría y
alimento, por ejemplo, usando el método de Liebefeld [32,33]. Las abejas se examinan
cuidadosamente para encontrar deformidades corporales, anomalías en las alas como alas en
V o alas en K, cambios de color y tamaño, varroamitas foréticas, así como síntomas
conductuales, neurológicos, sociales o digestivos. Los signos de la enfermedad CBPV son
abejas negras sin pelo y/o síntomas neurológicos como temblores, círculos o parálisis [23,24].
Se muestran la posición y la forma del ala anormales en el caso de CBPV o DWV. Varroa
forética indica una tasa de infestación intensa con el ácaro. Los cambios de fenotipo, por
ejemplo, abejas lisiadas, alta mortalidad y síntomas de parálisis, también pueden ser un signo
de intoxicación. La Tabla 2 enumera diferentes cambios de fenotipo en las abejas, que
también se pueden ver en una muestra de abejas muertas, y sus posibles causas. Mientras se
examinan las abejas, se evalúan los marcos: el color y el brillo de la cera corresponden a la
edad de los panales. La cera vieja, que se ha utilizado en varios ciclos de cría, es mucho más
oscura que la cera recién producida. Los marcos en sí pueden estar limpios o mostrar manchas
fecales en caso de problemas digestivos [34]. Se evalúan las reservas de polen y miel para
tener una idea de la alimentación de la colonia. Es recomendable observar la facilidad con que
el apicultor puede sacar los marcos de la colmena. Si no son fáciles de eliminar, la causa
puede ser la actividad forrajera de los propóleos o una vigilancia insuficiente por parte del
apicultor [7]. De todos los síntomas se determina si afectan a un número reducido de
individuos oa numerosas abejas, lo que indicaría un problema grave. Además, es relevante
qué castas de abejas muestran los síntomas.
Examen de abejas muertas

Se examinan las abejas muertas y se describe su fenotipo. Se pueden clasificar según su

tamaño y síntomas: las abejas pueden ser más pequeñas de lo normal y mostrar abdómenes
más cortos (Figura 4A) cuando están infectadas con varios virus, por ejemplo, el virus de las
alas deformadas (DWV). Más indicativo de DWV, asociado con una carga severa de
infestación de Varroa, son las alas mutiladas en abejas melíferas recién nacidas (Figura 4B).
Williams et al. describen una clasificación en seis categorías, según la gravedad de las
anomalías de las alas [36]. Se observan abdómenes negros sin pelo en caso de una infección
por CBPV [24] o como resultado de la genética, la alimentación dentro del período de flujo de
melaza o por razones mecánicas. El robo y las peleas, así como la maduración de los
inforagers, pueden resultar en roturas de pelos y abdómenes negros, lo que, sin embargo, solo
afecta a los individuos, mientras que la genética, la alimentación y el CBPV afectan a toda la
colonia. Si los abdómenes de varias abejas parecen estar hinchados, la presión sobre el
abdomen puede provocar que un líquido de color marrón claro se escape del intestino. En
tales casos, el tracto gastrointestinal de la abeja se puede extraer para una mayor
investigación. A menudo, se observa una probóscide extendida (Figura 4A), que es un signo
más inespecífico y no necesariamente evidencia de una intoxicación. En la Tabla 2 anterior se
incluye un resumen de los cambios de fenotipo
Examen de escombros

Se coloca un cajón de plástico debajo de la colmena para tomar muestras de los desechos. El
examen de los desechos proporciona información importante sobre la salud, el estado de
desarrollo y la fuerza de una colonia de abejas. Se pueden encontrar materiales de
construcción como escamas de cera, tapas de celdas y gotas de propóleo, así como
componentes celulares como polen, cristales de azúcar y melicitosa o gotas de alimento
diluido [37] (Figura 5). Las cantidades respectivas de estos componentes son indicadores de la
fuerza de la colonia.
Además, se pueden ver rastros de depredadores: Partes de abejas son un signo de avispas o
ratones en la colmena (Figura 5B). Los ratones dejan heces de 3 a 8 mm de largo en el cajón.
Las heces más pequeñas de color marrón oscuro pertenecen a la polilla de la cera mayor,
Galleria mellonella, que también se puede detectar por sus larvas de color blanco cremoso a
gris [7]. También se pueden encontrar astillas de madera o paja del comedero o agua de
condensación. Examen de escombros se utiliza adicionalmente para el control de la
infestación de Varroa. El ácaro se puede ver a simple vista. Su número, contado después de
que el cajón estuvo debajo de la colmena durante un tiempo definido, puede usarse para
cuantificar la infestación [7]. La validez de la información recopilada de los escombros
depende del clima, la estación y el tiempo que el cajón estuvo debajo de la colmena [ 37]. En
relación con estas condiciones, constituye una parte importante del examen.

Diagnóstico de laboratorio
PCR para detectar virus

Enfermedades Este paso debe ajustarse a las observaciones clínicas de cada caso especificado.
Los virus de las abejas se detectan principalmente mediante la reacción en cadena de la
polimerasa (PCR) con transcripción inversa (RT) en tiempo real. A continuación, se describen
los métodos para CBPV, ABPV y DWV en la forma en que se realizan en el Instituto
Friedrich-Loeffler, el Instituto Federal de Investigación para la Salud Animal. Una muestra de
50 abejas sintomáticas es un tamaño de muestra apropiado para enviar al laboratorio. De cada
muestra de abeja, se homogeneizan diez abejas usando el GentleMACSTMDissociator. El
ARN total se purifica a partir de 150 μl de homogeneizado de abeja clarificado utilizando el
kit RNeasy Mini (Qiagen, Venlo, NL) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Para
cada uno de los virus, se realiza posteriormente una RT-PCR en tiempo real de un paso por
duplicado utilizando el AgPathIDTMOne-Step RT-PCR Kit (Applied BiosystemsTM,
Waltham, MA, EE. UU.) en una placa de reacción de 96 pocillos con 2,5 μL ARN en un
volumen final de 12,5 Μl

Las condiciones del ciclo térmico son 10 min a 45◦C (RT=transcripción inversa), 10 min a
95◦C (RT inactivación, desnaturalización inicial, activación de la ADN polimerasa), seguido
de 41 ciclos de amplificación a 94◦C durante 15 s y 60 ◦C durante 45 s. Los resultados se
expresan como la media de las dos réplicas de cada reacción. La figura 6 muestra un diagrama
de amplificación para evaluación. El ensayo se combina con un ensayo de control interno en
una RT-PCR dúplex en tiempo real, con la excepción de la detección de DWV-B. Esto se
lleva a cabo como un enfoque simple, ya que otra combinación de cebador y sonda interfiere
con el enfoque de PCR y dificulta o previene la amplificación del fragmento de virus. Por lo
tanto, DWV-B se detecta en paralelo con el virus DWV-A estrechamente relacionado, que
también ayuda a diferenciar la enfermedad DWV. Los controles internos realizados son, por
un lado, un sistema de control interno universal basado en IC2-RNA [41] y, por otro lado, la
detección de β-actina en las muestras extraídas [42]. Ambos controles internos monitorizan
que el La extracción de ARN fue exitosa en todas las muestras (y controles de extracción),
además de confirmar su transcripción en ADNc y la amplificación de aquellos durante
Seguimiento de la infestación de Varroa

La varroamita es uno de los principales factores de estrés, probablemente “la mayor amenaza”
a nivel mundial para las colonias de abejas melíferas.
Si no hay control, las colonias con una alta carga de ácaros se debilitan hasta colapsar.
Además, Varroa destructor sirve como vector mecánico y biológico para varios virus de
abejas y suprime la respuesta inmune de las abejas
Por lo tanto, debe ser monitoreado cuidadosamente.
Para evaluar la carga de ácaros en una colonia, se describen diferentes métodos en la
literatura.
Es posible examinar los desechos, las crías y las abejas adultas.
La cría de zánganos se puede investigar quitando las tapas de las celdas y estudiando las
larvas y los panales individualmente
En caso de un número mayor de muestras, las celdas de cría se pueden lavar en un sistema de
tamiz donde los ácaros y la cría se juntan separados entre sí.

Monitoreo de la infestación de Varroa

La varroamita es uno de los principales factores de estrés, probablemente “la mayor amenaza”
[7] a nivel mundial para las colonias de abejas melíferas. Si no hay control, las colonias con
una alta carga de ácaros se van debilitando hasta colapsar. Además, Varroa destructor sirve
como vector mecánico y biológico para varios virus de abejas y suprime la respuesta inmune
de las abejas [43]. Por lo tanto, debe ser monitoreado cuidadosamente. Para evaluar la carga
de ácaros en una colonia, en la literatura se describen diferentes métodos. Es posible examinar
los desechos, las crías y las abejas adultas. La cría de zánganos se puede investigar quitando
las tapas de las celdas y estudiando las larvas y los panales individualmente (Figura 7A). En el
caso de un mayor número de muestras, las celdas de cría se pueden lavar en un sistema de
tamiz donde los ácaros y la cría se juntan por separado.
Control de resultados

Una colonia de abejas infectadas debe ser monitoreada de cerca durante el manejo de la
enfermedad para reconocer los problemas y el éxito lo antes posible e intervenir en caso de
complicaciones. Es recomendable utilizar un libro de registro para registrar información
detallada sobre cada colonia durante el manejo de la enfermedad, así como durante toda la
temporada. Los veterinarios están familiarizados con el manejo y la interpretación de los
registros de los pacientes, así como con la extracción de conclusiones a partir de ellos. Un
libro de registro detallado es importante para obtener información básica para elegir y aplicar
los conceptos de terapia apropiados para el control de la enfermedad. El punto principal para
prevenir la infección y la enfermedad de DWV, así como otras enfermedades asociadas con la
varroa, es controlar la infestación de varroamita. Los estudios adicionales deben mostrar
medidas terapéuticas recomendables para controlar otras enfermedades virales, por ejemplo,
CBPV en colonias de abejas con infecciones manifiestas