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U.T. 2 ÁCIDOS NUCLEICOS Y ENZIMAS ASOCIADAS

1. LOS ÁCIDOS NUCLEICOS

Los ácidos nucleicos son macromoléculas poliméricas encargadas de almacenar, transmitir

y expresar la información genética de los seres vivos.

Nos encontramos dos formas:

- ADN (ácido desoxirribonucleico): almacena la información hereditaria y controla

su transmisión a la descendencia.

- ARN (ácido ribonucleico): expresa la información mediante la síntesis de

proteínas (y otras funciones).

• PROTEÍNAS y ácidos nucleicos:

Como enzimas, intervienen en:

▫ La síntesis, transcripción y traducción desde los ácidos nucleicos

Como moléculas estructurales:

▫ Colaboran en el empaquetamiento del ADN nuclear

▫ Son responsables de la formación de los cromosomas

Su conocimiento ha ayudado en la puesta a punto de las técnicas de biología

molecular en el laboratorio

El ADN y ARN están formados por largas cadenas de monómeros llamadas nucleótidos.

Los nucleótidos son las unidades estructurales que se repiten en los ácidos nucleicos y que
van a intervenir en el mecanismo molecular que hace posible la transmisión de la
información genética.

Nucleótidos:

• Unidades monoméricas constituidas por:

una base nitrogenada,

una pentosa (glúcido de cinco átomos de carbono)

una molécula de ácido fosfórico

• Tanto la base nitrogenada como el grupo fosfato están unidos a la pentosa.

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Bases nitrogenadas:

Son compuestos heterocíclicos planos de carbono y nitrógeno con diferentes radicales:

Bases púricas (derivan de la purina)

▫ ADENINA

▫ GUANINA

Bases pirimidínicas (derivan de la pirimidina)

▫ TIMINA

▫ CITOSINA

▫ URACILO

En ADN están presentes A, G, C, T

En ARN están presentes A, G, C ,U

• Una pentosa, es un Glúcido de 5 átomos de carbono que forma parte de la estructura

de un nucleótido:

D-ribosa, en los nucleótidos del ARN

2-desoxi-D-ribosa en los nucleótidos del ADN

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(Grupo fosfato)

• Ácido fosfórico o grupo fosfato, El grupo fosfato o anión fosfato PO4 -3:

Tiene carga negativa y es el responsable de la carga neta negativo de los ácidos

nucleicos

Tiene una estructura tetraédrica con 4 átomos de oxígeno y el átomo de fósforo en

posición central.

• Nucleósidos:

Son la unión de una base nitrogenada con una pentosa. Pueden ser:

Ribonucleósidos (base nitrogenada + D-ribosa) En el ARN

Desoxirribonucleósidos (base nitrogenada + 2- desoxi-D-ribosa) En el ADN

La unión de una base nitrogenada con la pentosa se realiza entre:

Los nucleósidos se nombran añadiendo a la base nitrogenada:

La terminación -osina en el caso de las bases púricas.

La terminación -idina en el caso de las bases pirimidínicas.

Si la pentosa es la desoxirribosa, se añade el prefijo desoxi- al nombre

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Seguimos con los nucleótidos…

• La unión de un nucleósido con una molécula de ácido fosfórico en forma de anión

fosfato mediante un enlace éster, forma los nucleotidos.

• Pueden ser:

Desoxirribonucleótidos (ADN)

Ribonucleótidos (ARN)

SE FORMAN AÑADIENDO LA TERMINACIÓN 5´-FOSFATO (el fosfato se une a la

pentosa por el carbono 5)

Formación de los ácidos nucleicos:

Formación de la Timidina (Nucleósido) Formación de Timidina 5´fosfato

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Nucleótidos, oligonucleótidos y polinucleótidos:

Cuando varios nucleótidos se unen entre sí dan lugar a :

Polinucleótidos o ácidos nucleicos.

Oligonucleótidos (si el número de nucleótidos no es muy grande)

Formación de los ácidos nucleicos

Propiedades físico químicas de los ácidos nucleicos:

• Fuertemente ácidos en solución acuosa (grupo fosfato muy ácido)

• Elevada viscosidad

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• Pico de absorción de luz UV a 260 nm de longitud de onda (útil para medir absorbancia
y determinar concentraciones de ácidos nucleicos, midiendo la absorbancia de una
solución a 260 nm podremos determinar su concentración en ácidos nucleicos)

2. EL ADN

Almacena la información genética de un individuo, la transmite a los descendientes y

dirige la síntesis de proteínas:

- En células eucariotas, se encuentra en núcleo, mitocondrias y cloroplastos.

- En células procariotas, se encuentra en el citoplasma en un solo cromosoma, y en

forma de plásmidos.

- Algunos virus contienen ADN como material genético.

Estructura del ADN

• Polímero formado por cadenas largas de desoxirribonucleótidos de adenina, guanina,

citosina y timina

• Aunque existe ADN monocatenario, su presentación habitual es en forma de dos hebras

complementarias y antiparalelas

• Forma una doble hélice.

• En el ADN de doble hélice

• Las dos cadenas de nucleótidos del ADN se pueden desnaturalizar y

renaturalizar.

• Las dos cadenas de ácidos nucleicos tienen una secuencia de bases

complementarias que se unen entre sí mediante puentes de hidrógeno.

• Tamaño:

• En los cromosomas, gran tamaño (varios millones de pares de bases)

• En los plásmidos y ADN mitocondrial, tamaño menor (miles de pares)

Caracterización de una molécula de ADN / Composición:

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La composición de todas las moléculas de ADN es siempre la misma, los eslabones que
forman los desoxiribonucleótidos:

ADENIN 5´fosfato

GUANINA 5´fosfato

TIMIDIN 5´fosfato

CITOSINA 5´fostato

Los ADN de diferentes especies varían en la proporción que presentan de cada uno de ellos.

Caracterización de una molécula de ADN / Secuencia:

Secuencia de bases nitrogenadas: Los ADN de diferentes especies varían en el orden o

secuencia de las bases nitrogenadas. Esta secuencia característica de cada especie es lo
que conforma la estructura primaria del ADN.

• Secuencia de bases nitrogenadas:

Los ADN de diferentes especies varían en el orden o secuencia de las

bases nitrogenadas.

Esta secuencia característica de cada especie es lo que conforma la estructura primaria

del ADN

Caracterización de una molécula de ADN / Estructura primaria:

La estructura primaria de una molécula de ADN es la secuencia de bases nitrogenadas en

el esqueleto de su cadena de desoxinucleótidos colocadas en dirección 5´-3´

Caracterización de una molécula de ADN bicatenario:

Todas las moléculas de ADN bicatenario, sean del origen que sean, tienen en común (a causa
del principio de complementariedad)

- La misma cantidad de Adenina que de Timina

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- La misma cantidad de Citosina que de Guanina

Principio de complementariedad:

Los nucleótidos de ambas hebras se enfrentan y unen mediante puentes de hidrógeno,

siguiendo este principio , son complementarias:

Adenina y Timina. Se unen mediante dos puentes de hidrógeno. A =T

Citosina y Guanina. Se unen mediante tres puentes de hidrógeno. C ≡ G

La doble hélice:

1953 WATSON Y CRICK: (Rosalyn Franklin) , describieron la estructura del ADN que
explicaba el principio de complementariedad y la doble hélice.

Configuración en doble hélice:

El ADN está formado por dos cadenas que polinucleótidos que forman una doble hélice
alrededor de un eje central. Esto constituye su estructura secundaria.

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Las moléculas de ADN son bicatenarias y cumplen las siguientes condiciones o propiedades:

1. Las dos cadenas son antiparalelas: El extremo 5´ de una se enfrenta al extremo 3´

de la otra. Están orientadas en sentidos opuestos.

2. La Secuencia de bases nitrogenadas complementaria: Si se conoce una cadena se

puede deducir la otra.

3. Ambas cadenas están unidas por puentes de hidrógeno entre las bases
complementarias (A=T, G≡C)

4. Las cadenas unidas forman una doble hélice: Dos cadenas enrolladas alrededor de
un eje imaginario. Enrollamiento dextrógiro y plectonémico (para separar las dos
hebras es necesario desenrollarlas antes, no pueden separarse sin desenrollarse)

5. Las bases nitrogenadas se encuentran en el interior y los fosfatos y la

desoxirribosa en el exterior de la doble hélice.

6. Cada giro de la doble hélice equivale a 10 nucleóticos.Y una vuelta completa de la

hélice contiene 10 pares de bases.

* Solamente existe ADN monocatenario en el material genético de algunos virus (ADNss)

STRAND es hebra en inglés

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La longitud de la cadena de ADN se expresa siempre en pares de bases (pb) 1 kpb o kb

(kilobase) equivale a 1000 pb (pares de bases).

1 Mpb o Mb (mega base) = 106 pb.

1 Gpb o Gb (Gigabase) = 109 pb.

Niveles de organización del ADN

a) En virus

b) En organismos procariotas

c) En organismos eucariotas

d) ADN copia

a) ADN en los virus:

• Los virus están formados por un fragmento de material genético (ADN o ARN) y
una cubierta de proteínas. En algunos casos pueden tener envoltura lipídica.

• Los virus que contienen ADN, presentan una única molécula lineal o circular
bicatenaria o monocatenaria.

b) ADN En organismos procariotas:

• Formados por una única célula sin núcleo diferenciado. Son las bacterias y
cianobacterias.

• En los procariotas, el ADN se encuentra en su mayor parte en un solo cromosoma

(bicatenario y circular) situado en el citoplasma y en menor proporción en pequeños
fragmentos (circulares) llamados plásmidos.
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• Cromosama bacteriano

• Contiene varios millones de pares de bases.

• Se encuentra superenrollado

• Al microscopio electrónico se observa el empaquetamiento del ADN, con

aspecto fibrilar (nucleoide)

• Plásmidos: Son pequeñas moléculas circulares bicatenarias de ADN bacteriano.

Características de los plásmidos:

1. Formados por unos pocos miles de pb.

2. Puede haber en una célula un plásmido o varios cientos.

3. Se replican independientemente del cromosoma.

4. Contienen genes de resistencia a los antibióticos y factores de virulencia.

c) ADN en organismos eucariotas:

• Los organismos pluricelulares (animales, plantas, algas y hongos) y algunos

unicelulares (protozoos y algas unicelulares) están formados por células con
membrana, citoplasma con orgánulos y núcleo.

• El ADN se encuentra fundamentalmente en:

el núcleo como parte de los cromosomas

en pequeñas cantidades en las mitocondrias y en los cloroplastos.

ADN cromosómico nuclear (ADNn) (Estructura terciaria):

• En el núcleo en forma de largas moléculas lineales bicatenarias.

• Se encuentra asociado a proteínas básicas:

Histonas, proteínas con función estructural

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No histonas, proteínas muy heterogéneas (estructural, enzimática y

reguladora)

La Cromatina: es una Molécula de ADN asociada a histonas.

• Al microscopio electrónico, una extensión de cromatina tiene el aspecto de un collar

en el que cada cuenta es un nucleosoma

• Un nucleosoma es la estructura cilíndrica formada por un octámero de histonas

sobre la que se enrolla la doble hélice de ADN.

• La molécula de ADN asociada a las histonas se denomina fibra de cromatina.

• La configuración tridimensional de la molécula de ADN formando las fibras de

cromatina representa la estructura terciaria del ADN.

ADN cromosómico nuclear:

La fibra de cromatina se enrolla sobre sí misma formando un SOLENOIDE

ADN cromosómico nuclear: Los cromosomas

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• En el momento de división mitótica las fibras de cromatina se ordenan y sufren varios

niveles de complejidad creciente de superenrollamiento hasta formar CROMOSOMA
METAFÁSICO

• El número de cromosomas que se forman durante la división celular es característico de

cada especie.

ADN mitocondrial (ADNmt)

ADNmt: es Molécula bicatenaria y circular de ADN de miles de pares de bases.

Características del ADN mt:

• Contiene genes que codifican para ARN ribosómico, ARN transferencia y enzimas
empleadas en procesos metabólicos mitocondriales.

• En humanos contiene 37 genes.

• Se replica independientemente al ADN nuclear

• Su número de copias es variable, puede llegar a varios cientos.

ADN cloroplastos

Las células vegetales tienen también ADN en los cloroplastos.

Características del ADN en Cloroplastos:

• La molécula de ADN en cloroplastos es bicatenaria y circular.

• Codifica enzimas específicas de este orgánulo (FOTOSÍNTESIS).

d. ADN copia (ADNc)

• Tipo de ADN especial obtenido “in vitro”.

• No existe como tal en la naturaleza

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• Se obtiene en el laboratorio a partir del ARNm aislado de una célula (mediante uso
de retrotranscriptasa que sintetiza ADN utilizando como molde ARN)

• Esta enzima permite obtener una copia en ADN de todas las moléculas de ARN
presentes en una célula en un momento concreto

• Constituye una herramienta muy útil para estudios de expresión génica.

3. EL ARN

El ARN Controla la síntesis de proteínas a partir de la información contenida en el ADN, se

encuentra:

1. En el núcleo (ARN del nucléolo)

2. En el citoplasma (ARN mensajero y transferente)

3. En los ribosomas (ARN ribosómico)

4. Es el único material genético de algunos virus

Estructura del ARN:

• El ARN es un polímero formado por largas cadenas de ribonucleótidos (pentosa es

ribosa)

• No contiene Timina (URACILO)

A=U dos puentes de H

C≡G tres puentes de H

• Casi siempre es monocatenario y lineal, excepto en algunos virus.

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• Algunas zonas del ARN son complementarias entre sí, lo que le permite plegarse y
formar doble hélice en algunas regiones.

• Entre regiones complementarias puede haber regiones no complementarias, es en esas

zonas donde se forma un bucle.

ARN mensajero (ARNm)

• Constituido por moléculas lineales.

• Cada molécula porta la información para la síntesis de una única proteína

(eucariotas).

• Su secuencia es copia exacta de un gen de ADN

• Determina la secuencia ordenada de los aas que constituye una proteína

• Transmite la información genética contenida en el ADN a la maquinaria celular de

síntesis de proteínas (ribosomas)

• 2-5 %

ARN ribosómico (ARNr)

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• Combinado con proteínas forma ribosomas.

• Tiene múltiples regiones complementarias

Estructura secundaria = horquillas y bucles

• Mayoritario 80%.

• Se clasifican según su coeficiente de sedimentación

1. En procariotas (5S,16S,23S)

2. En eucariotas (5S, 5.8S, 18S y 28S)

• Svedberg: unidad de medida del coeficiente de sedimentación

ARN transferencia (ARNt)

• Transporta los aas hasta los ribosomas para su incorporación en la cadena proteica
que se está sintetizando.

• Cadenas cortas (70-90 nucleótidos) con

Estructura secundaria de hoja de trébol (4 horquillas y 3 bucles)

Estructura terciaria en forma de L o bumerán.

• Contienen bases nitrogenadas distintas.

• El extremo 3´siempre termina 5´-CCA-3´

• Tres lazos funcionales:

• Lazo D Contiene dihidrouridina UH2. Es el punto de unión de la enzima que une el aa

en el extremo 3´

• Lazo T Contiene la secuencia T-pseudouridina-C. Es el sitio de unión al ribosoma.

• Lazo anticodón Contiene las tres bases complementarias del codón en el ARNm que
codifican para el aa que portan.

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ARN con función reguladora: ARN interferente pequeño o ARNsi, microARN o ARNmi

• Moléculas pequeñas con secuencias complementarias de regiones del ARNm al cual

se unen

• Moléculas bicatenarias: ARNsi

• Moléculas monocatenarias: micro ARN o ARNmi

• Su función reguladora la realizan:

Bloqueando traducción a proteína

Activando enzimas que degradan ARNm

Otros ARN

ARN heterogéneo nuclear (ARNhn)

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• Moléculas largas precursoras de ARNm (Se encuentra en el núcleo de la célula y

tras la maduración da lugar al ARNm que sale al citoplasma)

ARN pequeño nuclear (ARNsn)

• se unen a proteínas, dando lugar a ribonucleoproteínas con actividad enzimática

• Intervienen en la maduración del ARNm

ARN pequeño nucleolar (ARNsno)

• Precursor de varios ARNr

4. EL FLUJO DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA

El ADN almacena la información genética, la transmite a los descendientes y dirige la

síntesis de proteínas. Para llevar a cabo esta función necesita tres procesos metabólicos:

1. Replicación o duplicación

2. Transcripción

3. Traducción

1. Replicación o duplicación, es el proceso por el cual una molécula de ADN se duplica. Da

lugar a dos moléculas de ADN hijas idénticas, que conservan la misma secuencia de
bases que la molécula inicial. De esta forma transmite a la descendencia.

Características de la replicación:

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• Semiconservativa: Cada molécula hija conserva una cadena de la original y otra

cadena nueva.

• Comienza en un origen de replicación: En eucariotas muchos orígenes de replicación

y en procariotas uno sólo.

• Bidireccional y secuencial: A partir del origen de replicación, las dos cadenas de

ADN molde se separan y la síntesis de las nuevas cadenas se produce en ambas
direcciones, lo que da lugar a dos horquillas de replicación, y de forma secuencial
complementaria.

• Semidiscontinua: Una de las nuevas cadenas se sintetiza de manera continúa (hebra

conductora) y la otra de forma discontinua (hebra retardada)

Las enzimas del proceso de replicación

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• Helicasa: desenrolla y separa las dos cadenas de la doble hélice. Empieza en el

origen de replicación y continúa en ambos sentidos a medida que avanzan las
horquillas de replicación.

• Proteínas de unión a cadena sencilla (SSBP): se unen a las cadenas desenrolladas

evitando que se vuelva a formar la doble hélice.

• Girasa y topoisomerasa: La separación de las dos cadenas de ADN en la burbuja de

replicación genera un superenrollamiento en el resto de la doble hélice. Estas dos
enzimas relajan la tensión de la doble hélice mediante cortes y empalmes.

• ADN polimerasa :

• Es la responsable de la síntesis de la nueva cadena, añadiendo desoxinucleótidos al

extremo 3’ de una cadena en crecimiento.

• La ADN polimerasa no puede iniciar una cadena, sólo puede elongar una
preexistente de ADN o ARN, añadiendo desoxinucleótidos a la posición 3’ libre.

• La secuencia de desoxinucleótidos que incorpora es complementaria de la secuencia

de la cadena molde que se está leyendo.

• Tres pipos en procariotas:

• ADN polimerasa I, ADN polimerasa II, ADN polimerasa III

• Cinco tipos en eucariotas:

• ADN α, ADN β, ADN γ, ADN δ, ADN ε

• Las DNA polimerasas también tienen actividad EXONUCLEASA:

• Pueden eliminar nucleótidos uno a uno desde un extremo de la

cadena. Esta actividad es muy útil para corregir y reparar errores.

• Primasa:

• Enzima con función ARN polimerasa que sintetiza cortos fragmentos de

ARN (aproximadamente 10 nucleótidos) denominados cebadores o primers

• Son complementarios de zonas concretas de la cadena de ADN que se está

replicando

• Sobre la cadena molde se forman cortas regiones de híbridos ARN-ADN

que son reconocidas por la ADN polimerasa para iniciar su función de
elongación.

• Para la síntesis de la hebra conductora se requiere un único cebador en el

origen de la replicación.

• En la hebra retardada, por el contrario, se requiere un cebador para cada

fragmento de Okazaki.

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• Ligasa: es la enzima responsable de unir los fragmentos de Okazaki entre sí y con

la hebra conductora para conseguir la continuidad de la cadena de nueva síntesis.

Replicación del ADN

• Orígenes de replicación múltiples y simultáneos

• Cinco tipos de ADN polimerasas con funciones de :

a) Elongación

b) Eliminación de cebadores

c) Corrección de errores.

• ADN eucariótico unido a histonas, durante la replicación se estructuran los

nucleosomas.

La replicación se puede dividir en fases y participan múltiples enzimas:

Proteínas específicas reconocen el origen de la replicación.

1. Fase de iniciación

a) Esta unión activa helicasas que rompen puentes de H y separan las dos
cadenas de ADN.

b) Se forma la burbuja de replicación que se extiende hacia ambos sentidos

formando Y (extremos=horquillas)

c) En las horquillas es donde se sintetiza ADN.

d) Las proteínas SSBP(unión a cadena sencilla) se unen a las cadenas separadas

impidiendo que se vuelva a formar la doble hélice.

e) Se activan las girasas y toposiomerasas que relajan la tensión de la zona

próxima a la burbuja de replicación.

2. Fase de elongación

a) La primasa (ARNpolimerasa) sintetiza los cebadores en dirección 5´-3

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- Sintetiza un solo cebador para la hebra continúa

- Sintetiza sucesivos cebadores para la hebra retardada, tantos como fragmentos de

Okazaki.

b) La ADN polimerasa (actividad exonucleasa) elimina cebadores 5´-3´y los

sustituye por ADN (actividad polimerasa)

c) La ligasa une los fragmentos de Okazaki, dando continuidad a la hebra

retardada.

d) La ADN polimerasa corrige posibles errores. Más frecuentes en la hebra

retardada.

2. Transcripción del ADN al ARN:

Es el proceso por el cual se sintetiza una molécula de ARN utilizando como molde una
cadena de ADN. Se requiere la enzima ARN polimerasa-ADN dependiente o transcriptasa.
Existen tres tipos:

3. ARN polimerasa I, sintetiza la mayor parte del ARNr

4. ARN polimerasa II, sintetiza el ARN m

5. ARN polimerasa III, sintetiza ARNt y subunidad 5S del ARNr.

Fases de la transcripción

La transcripción del ADN a ARN tiene tres fases:

1. Fase de iniciación

a) La transcripción la inicia la ARN polimerasa cuando reconoce al gen

promotor (zona de una molécula de ADN con secuencia específica) y se une
a la cadena.

b) Las dos cadenas de ADN se separan y se van incorporando nucleótidos a la

nueva cadena de ARN.

2. Fase de elongación

a) Adicción secuencial de ribonucleótidos (catalizada por ARN polimerasa)

b) Sólo se transcribe una cadena de ADN (llamada molde)

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c) La ARN polimerasa se desplaza leyendo el ADN en sentido 3´-5´,

seleccionando los ribonucleótidos complementarios e incorporándolos a la
hebra de ARN que crece en dirección 5´-3´

3. Fase de terminación, la síntesis se termina cuando la ARN polimerasa alcanza la

secuencia de terminación (rica en GCT), pierde afinidad , se separa y ADN recupera
doble hélice.

Maduración del ARN en eucariotas

La maduración del ARNt y del ARNr es similar en eucariotas y procariotas, pero el ARNm
requiere mayor complejidad en eucariotas. El ARN sintetizado en el núcleo mediante
transcripción se denomina ARN heterogéneo nuclear (ARNhn) o pre-ARNm, que contiene :

Exones: secuencias que transcriben y traducen

Intrones:Secuencias que transcriben pero no traducen (no codifican) y hay que

eliminarlos.

Fases de la maduración del ARNm en eucariotas

1. Adición de la caperuza en 5´.Consiste en la incorporación de 7-metilguanosina-

trifosfato (PPP-mG) que protege de la degradación al ARN.

2. Adición de una cola de Poli-A en 3´. La poli-A polimerasa añade molécula poli-A en 3
´ lo que permite al ARNm maduro salir del núcleo a través de un poro hacia el
citoplasma.

3. Eliminación de intrones. Corte y empalme (splicing). Intervienen las

ribonucleoproteínas pequeñas nucleares (RNPsn) que forman espliceosoma (bucle)
con los intrones que se cortan y empalman.

Splicing en eucariotas

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3. Traducción de ARN mensajero

• Es el proceso por el cual a partir de una molécula de ARNm se sintetiza una proteína.

• Durante la misma, los aminoácidos se van uniendo secuencialmente según el código

presentado por el ARNm (su secuencia de bases nitrogenadas)

• Hay que pasar de un “lenguaje” de 4 letras a un lenguaje de 20 “palabras”

• De A, U, C y G a los 20 aas que forman las proteínas

Código genético

• El código genético es el “diccionario” que permite traducir una secuencia de bases

nitrogenadas a una secuencia de aminoácidos.

• Se basa en que una secuencia de tres bases nitrogenadas (triplete o codón),

codifica un aminoácido.

• La combinación de las 4 letras (BN) tomadas de 3 en 3, da como resultado 64

codones

• Sólo hay 20 aas en las proteínas:

Hay codones de regulación del procesos (3 codones)

Hay aas que responden a varios codones (CÓDIGO ABERRANTE)

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Características del código genético

• Es universal, es el mismo para todos los organismos (virus, procariotas,

eucariotas)

• Una excepción es el código genético mitocondrial, en el que algunos codones

concretos codifican un aminoácido distinto.

• No es ambiguo. Cada codón codifica un único aminoácido.

• Es degenerado. Dado que hay 20 aminoácidos y 61 codones codificantes, tiene

redundancia.

• Los distintos codones que codifican un mismo aminoácido se denominan codones

sinónimos.

• Es continuo y no solapado: en la cadena de ARNm, los codones se disponen de

manera secuencial uno a continuación de otro, sin espacios ni comas y sin compartir
ninguna base.

• Existen codones de iniciación y finalización

• Todas las secuencias de ARNm que se van a traducir empiezan con el codón
de inicio AUG, que codifica para metionina.

• Los codones UAA, UAG y UGA son codones de terminación.

Fases de la traducción (síntesis de proteínas)

• El ARNm contiene la información de la secuencia de aminoácidos.

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• La síntesis se lleva a cabo en los ribosomas

• Actúan, además, los ARNt (que portan en anticodon complementario) y una enzima
encargada (peptidil transferasa) de llevar a cabo la unión de los aas a la cadena
polipeptídica

• Se produce en tres fases:

Iniciación

Elongación y

Terminación

5.ENZIMAS EMPLEADAS EN BIOLOGÍA MOLECULAR

Las técnicas de biología molecular implican manipulaciones de ácidos nucleicos:

• Amplificación.

• Degradación.

• Corte.

• Unión

• Marcaje

• Secuenciación

Se necesitan la acción catalizadora de las enzimas capaces de llevar a cabo las reacciones
implicadas.

Enzimas más empleadas:

• Nucleasas

• Endonucleasas de restricción

• ADN polimerasas

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• Retrotranscriptasas o transcriptasas inversas

• Desoxinucleotidil transferasa terminal

• Ligasas

• Topoisomerasas.

Nucleasas, son enzimas que cortan y degradan los ácidos nucleicos mediante hidrólisis del
enlace fosfodiéster entre dos nucleótidos.

Clasificación de las nucleasas:

Según el tipo de ácido nucleico:

A. Nucleasas de ARN (ARNasa o ribonucleasa), capaces de romper enlaces

fosfodiéster entre ribonucleótidos.

B. Nucleasas de ADN (ADNasa o desoxirribonucleasa), capaces de romper enlaces

fosfodiéster entre desoxirribonucleótidos.

Según el tipo de cadena:

A. Nucleasas que atacan moléculas bicatenarias

B. Nucleasas que sólo atacan moléculas monocatenarias.

Según el punto de corte:

A. Exonucleasas, eliminan nucleótidos uno a uno desde un extremo (en cualquier

dirección)

B. Endonucleasas, cortan en puntos medios de la molécula.

Según la especificidad del corte:

A. Nucleasas que cortan aleatoriamente, eliminan nucleótidos uno a uno desde un

extremo (en cualquier dirección)

B. Nucleasas que cortan en sitios concretos, se unen a una secuencia específica y la

cortan, son las ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN.

Endonucleasas de restricción
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Son endonucleasas bacterianas que reconocen secuencias cortas de ADN bicatenario (4-8
pb) y producen un corte en la doble cadena en esa secuencia o cerca de ella. Las secuencias
de ADN específicas que cortan se denominan dianas de restricción. (En las bacterias son
un sistema de defensa porque se utilizan para degradar ADN ajeno).

Tipos de enzimas de restricción

Hay tres tipos de enzimas de restricción:

• Tipo I: La enzima reconoce su diana de restricción y efectúa un corte en la región

anterior o posterior a distancia aleatoria.

• Tipo II: La enzima reconoce la diana de restricción y corta en puntos específicos,

generan patrones específicos. Se llaman tijeras moleculares y son de gran utilidad.

• Tipo III: La enzima reconoce secuencias invertidas y corta fuera de la diana de

restricción pero a corta distancia (25-30pb)

Nomenclatura de las enzimas de restricción

• Las enzimas de restricción se nombran normalmente con tres letras en cursiva

(género y especie de la bacteria) y un número romano (orden en que se ha aislado en
la misma especie).

• PvuR II es el nombre de la segunda enzima de restricción aislada de Proteus

vulgaris.

• EcoR I es el nombre de la primera enzima de restricción aislada de Escherichia Coli

Tipos de corte

Extremos romos: El corte se produce en el mismo punto en las dos cadenas en el centro de
la diana.

Extremos cohesivos: El corte se produce en puntos distintos de ambas cadenas (en los
extremos de las dianas)genera en cada extremo regiones monocatenarias cortas y
complementarias (muy reactivas para unirse a fragmentos de ADN complementarios)

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Aplicaciones en biología molecular

Las enzimas de restricción son herramientas imprescindibles en biología molecular, tienen

dos aplicaciones de especial importancia:

A. Permite crear moléculas de ADN recombinante (obtención de plásmido QUIMERA):

1. Se cortan dos moléculas distintas de ADN con la misma enzima de

restricción

2. Los extremos cohesivos de ambas se unen por complementariedad de bases

en las regiones monocatenarias generadas por la enzima de restricción.

B. Permiten crear patrones de restricción

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1. Cada enzima de restricción genera pocos fragmentos de ADN de distinto

tamaño.

2. Los fragmentos se pueden separar por electroforesis en gel.

3. Se obtiene patrón de restricción (conjunto de bandas que es único para un

ADN particular)

4. Aplicación en estudios filogenéticos, detección de anomalías en diagnóstico

prenatal, detección de mutaciones.

ADN polimerasas

Las ADN polimerasas permiten realizar copias de moléculas de ADN mediante replicación.
La mayor parte de las técnicas de análisis de ácidos nucleicos requiere una fase previa de
amplificación. La técnica básica en biología molecular es la PCR que permite obtener
millones de copias de una secuencia de interés.

Las ADN polimerasas más usadas son del tipo I y III. Para realizar su función requieren en
el medio de reacción:

• Cuatro desoxinucleótidos trifosfato (ATP, TTP, GTP, CTP)

• ADN molde

• Cebadores (PRIMERS)

• Mg+2 como cofactor.

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Tipos ADN polimerasas, los distintos tipos de ADN polimerasas se diferencian en:

• Velocidad de polimerización

• Fidelidad de replicación (%errores)

• Termoestabilidad

• Procesividad (nº nucleóticos que es capaz de procesar antes de separarse de la

cadena)

• Presencia o ausencia de actividad exonucleasa además de la actividad polimerasa.

Aplicaciones ADN polimerasas

Según el tipo de ADN polimerasa se utilizan en distintas técnicas:

• En la PCR, interesa trabajar con ADN polimerasas de gran termoestabilidad,

procesividad, velocidad y fidelidad.

• En los marcajes con sonda, por técnica de desplazamiento de mella (Nick). Esta técnica
utiliza ADN polimerasa con actividad exonucleasa en dirección 3´-5´ y polimerasa en 5
´-3´. Se utilizan nucleótidos marcados.

• No necesita gran termoestabilidad, ni procesividad (las sondas son cortas), ni elevada

velocidad de polimerización (técnica a tiempo final, sin ciclos)

• Si requiere alta fidelidad en la polimerización para que no cometa errores y la sonda no

pierda su especificidad y sea capaz de utilizar nucleótidos marcados.

Retrotranscriptasas:

Las retrotranscriptasas o transcriptasas inversas son ADN polimerasas-ARN dependientes

(sintetizan moléculas de ADN utilizando ARN como molde). El ADN obtenido se denomina
ADN copia (ADNc)

Aplicaciones retrotranscriptasas:

• Realizar estudios masivos de ARN.

• Ha posibilitado la creación de genotecas de ADNc, reflejo de la expresión génica de

una célula en un momento metabólico determinado.

• Amplificación de ARN. Existe una RT-PCR que amplifica ARN, obteniendo del mismo,
ADNc y amplificando por PCR convencional.

• Realizar estudios masivos de ARN.

• Ha posibilitado la creación de genotecas de ADNc, reflejo de la expresión génica de

una célula en un momento metabólico determinado.

• Amplificación de ARN. Existe una RT-PCR que amplifica ARN, obteniendo del mismo,
ADNc y amplificando por PCR convencional.

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Desoxinucleotidil transferasa terminal (TDT)

Es una ADN polimerasa que cataliza la incorporación de desoxinucleótidos al extremo 3´de

una molécula de ADN.

No requiere cebador

Sintetiza colas de ADN monocatenarias en ambos extremos 3´

Se han aislado de células linfoides inmaduras y de células de ciertos linfomas y

leucemias.

Útil para el marcado de sondas complementarias de ADN

Ligasas:

Unen dos moléculas de ADN mediante formación de enlaces fosfodiéster entre los
extremos 3´de una molécula y 5´de otra. También reparan mellas (nicks) en una cadena de
ADN mediante enlace fosfodiéster.

Aplicación:

• Tecnología del ADN recombinante, para unir fragmentos de ADN de distinta

procedencia cortados por la misma enzima de restricción.

• Ligasas de ARN, permiten circularizar moleculas monocatenarias.

Topoisomerasas

Relajan la tensión de la doble hélice de ADN próximas a las burbujas de replicación o

transcripción.

Aplicación: Se utilizan para relajar estructuras superenrolladas de ADN, como paso

previo a la aplicación de otras técnicas de biología molecular.

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